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高效毛细管电泳法测定虫草制品中核苷类化合物汪泰初;张和禹;李瑞雪【期刊名称】《中国蚕业》【年(卷),期】2010(31)3【摘要】建立了用高效毛细管电泳技术测定虫草中核苷类化合物的方法,比较了冬虫夏草、人工培养的蚕蛹虫草、人工液体发酵的虫草菌丝及市售虫草制品中核苷类化合物的含量.采用熔融石英毛细管及Beckman P/ACE毛细管电泳仪,在硼砂-磷酸缓冲液(pH8.9),检测波长254 nm,分离电压20 kv的条件下,4种虫草水提液中的核苷类化合物(虫草素、腺苷、腺嘌呤、尿嘧啶和次黄嘌呤)获得了基线分离,并具有良好的精密度和重现性.检测结果表明:蚕蛹虫草中核苷类化合物含量丰富,虫草素和腺苷含量均高于冬虫夏草,液体发酵的虫草茵丝也可以达到替代野生虫草的效果.【总页数】3页(P10-12)【作者】汪泰初;张和禹;李瑞雪【作者单位】安徽省农业科学院蚕桑研究所,安徽合肥,230061;安徽农业大学生命科学学院,安徽合肥,230036;安徽省农业科学院蚕桑研究所,安徽合肥,230061【正文语种】中文【中图分类】S881.2【相关文献】1.反相高效液相色谱法测定虫草制剂中核苷类化合物的含量 [J], 杨光照;汪宇;马艳;柳惠玲2.HPCE法测定蛹虫草及其培养物中核苷类化合物的含量 [J], 汪宇;于荣敏;杨光照;姜铁夫;佟志清3.高效液相色谱法测定蛹虫草人工固体培养物中核苷类化合物的含量 [J], 汪宇;于荣敏;杨光照;佟志清;宾文;张旭4.高效毛细管电泳法测定羊肚菌(Morchella sextelata)菌丝中单核苷类化合物含量的研究 [J], 马晓颖;吕立涛;曹君;李跃;王红5.高效毛细管电泳法测定四维灵芝液中核苷类成分的含量 [J], 戴敬;鲁静;林瑞超;刘文英因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
摘要目的：建立用HPLC 法测定冬虫夏草及含片中腺苷的含量。
方法：C18(4.6mm× 250mm,5um)色谱柱，0.05mol L·-1磷酸二氢钾+甲醇(90+10)为流动相，流速为 1.0ml·min-1 检测波长260nm，柱温为35℃。
结果：腺苷含量在0.005～0.2ug(r=0.9998)范围内呈良好的线性关系。
平均回收率为99.49%，RSD=1.47%。
结论：方法准确可靠、、结果稳定、重现性好，分析速度快，可有效控制制剂的质量。
关键字：HPLC；冬虫夏草菌粉；含片；腺苷；DADAbstractObjective: to determine the content of adenosine Cordyceps powder andtablets by HPLC method. Methods: kromasil--C18 ( 4.6mm × 250mm ,5um) column, using methanol two hydrogen 0.5mol ? L-1 phosphoric acid (90:10) as mobile phase, thef low rate was 1.0ml ? min-1, the detection wavelength was 260nm, the column temperature was 35℃. Results: adenosine in 0.005 ~ 0.2ug (r=09998) showed a good linear relationship in the range of. The average recovery was 101.16%, RSD=1.47%. Conclusion: the method isConclusion: the method is accurate and reliable, strong specificity, results stability, good reproducibility, which can effectively control the quality of the preparation. Keywords: Cordyceps sinensis powder; tablet; adenosine; HPLC目录摘要 (I)Abstract ................................................................. I.I. ..1. 前言 (2)1.1仪器与试药..............................................2...2. 实验条件 (2)2.1供试品提取溶剂的选择.................................... 2...2.2检测波长的选择.......................................... 2...2.3流动相的选择............................................3...3. 试验方法与结果.............................................. 3...3.1分析溶液 (3)3.1.1 ..................................................................................................... 对照品溶液制备 ............................................ 3...3.1.2 ..................................................................................................... 供试品溶液制备 ............................................ 3...3.2色谱条件 (3)3.3分析方法学考察.......................................... 3...3.3.1 ..................................................................................................... 系统适应性试验 ............................................ 3...3.3.2 ..................................................................................................... 标准曲线绘制及线型范围考察 ................................. 4..3.3.3 ..................................................................................................... 精密度试验 ................................................ 4...3.3.4 ..................................................................................................... 重复性试验 ................................................ 4...3.3.5 ..................................................................................................... 稳定性试验 ................................................ 4...3.3.6 ..................................................................................................... 加样回收率试验 ............................................ 4...3.3.7 ..................................................................................................... 样品测定 .................................................. 5...4. 讨论 (5)4.1 (5)4.2 (5)4.3 (5)参考文献： (6)致谢 (7)1. 前言冬虫夏草，仅仅是我国190 多种虫草中的一种，也是中药传统的滋补药材。
虫草产品中腺苷和虫草素含量的测定-UPLC检测雷萍;黄志英;林淼;杨海华;陈玉婷【期刊名称】《食用菌学报》【年(卷),期】2009(16)3【摘要】本实验采用超高压高效液相检测法(UPLC)分离测定了多种虫草产品中腺苷和虫草素的含量.在最优化条件下,以ACQUITY UPLC C18为色谱柱,流动相为乙腈和水,等度洗脱,上述各组分在4 min内可基本实现基线分离.各组分浓度与峰面积在1～17.5 μg/mL范围内呈良好线性,检测下限(S/N=3)分别为0.10 μg/mL和0.12 μg/mL.采用该方法成功测定了多种虫草产品中腺苷和虫草素的含量.【总页数】4页(P63-66)【作者】雷萍;黄志英;林淼;杨海华;陈玉婷【作者单位】上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所,上海201106;上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所,上海201106;上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所,上海201106;上海市饲料行业协会,上海200060;上海仪表电子工业环境监测站,上海201100【正文语种】中文【中图分类】S6【相关文献】1.UPLC法测定人工蛹虫草中腺苷和虫草素含量 [J], 逄世峰;闫梅霞;崔丽丽;李亚丽;郭靖;YANG Jun2.HPLC法同步测定蛹虫草中虫草素及腺苷的含量 [J], 李兵;张文成;王冰嵩;金礼强3.高效液相色谱法(HPLC)测定云南省巧家县野生虫草中虫草素和腺苷含量的试验[J], 蒋发飞4.HILIC MS/MS技术同时检测蛹虫草中虫草素、虫草酸、腺苷和肌苷含量的方法学 [J], 张铭雅;朱志铭;姚迪;陈俏慧;鲍晓文;陈嘉伟;朱健伟;马博5.HPLC法同时测定蛹虫草中虫草素、腺苷和麦角甾醇的含量 [J], 孙志双;姜小天;施溯筠因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
2008年3月M arch 2008色谱Chi n ese Journal of Chro m atographyVo.l 26N o .2160~165收稿日期:2007 11 05通讯联系人:孙毓庆,教授,博士生导师.E m ai:l sunyq @ .基金项目:国家自然科学基金重大研究计划资助课题(No .90612002)和国家药典委员会中药注射剂指纹图谱课题.毛细管电泳指纹图谱及毛细管电泳 质谱联用在中药质量控制中的作用孙毓庆1, 孙国祥1, 金 郁2(1.沈阳药科大学药学院,辽宁沈阳110016;2.中国科学院大连化学物理研究所,辽宁大连116023)摘要:以作者多年从事毛细管电泳、毛细管电泳 质谱联用及其指纹图谱对中药的研究成果为基础,介绍了毛细管电泳实验条件的优化方法、毛细管电泳指纹图谱的研究方法与评价方法及其在中药质量控制中的作用。
关键词:毛细管电泳;指纹图谱;毛细管电泳 质谱联用;中药中图分类号:O 658 文献标识码:A 文章编号:1000 8713(2008)02 0160 06 栏目类别:中药质量控制专栏Qualit y contro l of trad itional Ch i nese m edicines byt he cap illary electrophoresis fingerprint and cap illaryelectrophoresis m ass spectro m etrySUN Yuq i n g 1,S UN Guoxi a ng 1,JI N Yu2(1.College of Pha r m a cy,Sh e n yan g Pha rm a ceu tica l Un iv er sity,Sheny an g 110016,Chin a;2.Da lian In stit u te of Ch e m ica l Phy sics,the Chin ese A cade m y o f Scie n ces,Da lian 116023,Ch i n a )A bstract :T he qualit y control of traditi o nal Chinese m edici n es by capillary electrophoresis (CE)fingerprint and CE m ass spectro m etry(CE M S)is reviewed .The opti m u m experi m ental conditions of CE,t he research and appraisalm et hods of CE fi n gerpri n t for traditional Chi n esem edicines are also discussed.This review is based on t he authors work .K ey w ords :capillary electrophores is (CE );chro m atographic fi n gerpri n ts ;capillary electro phoresis m ass spectro m etry (CE M S);traditi o nal Chi n ese m edicines (TC M s) 任何药物都必须安全、有效。
HPLC法测定冬虫夏草中核苷类成分的含量陈亚丽;洪妍;李继平;师志强;陈宇;薛志远;刘慧彬;封士兰【摘要】Objective To determine the content of nucleosides (adenosine, uridine, inosine, guanosine and thymidine) in Cordyceps sinensis samples processed using different methods (smoked dry, fresh, dried) by HPLC.Methods The samples were extracted with purified water.The mobile phase was methanol-water, the column temperature was 30 ℃ and the flow rate was 1.0 mL·min-1.Results The calibration curves for the 5 nucleosides in Cordyceps sinensis displayed a good linear relationship with correlation coefficients above 0.999 0.The precision relative standard deviations (RSD) and the repeatability RSD of 5 standards were 0.31%-1.95%(n=5), 0.50%-2.56%(n=5), respectively.The recovery rate was in the range of 99.46%-100.11%.Conclusion This method is sensitive, simple, rapid, accurate and with good reproducibility so it can be used for the determination of the nucleosides in Cordyceps sinensis and provided an experimental basis for evaluating different Cordyceps sinensis more comprehensively.%目的建立用HPLC法测定不同方法(熏干、新鲜和阴干) 处理冬虫夏草样品中核苷类成分(腺苷、尿苷、肌苷、鸟苷和胸苷)含量的方法.方法样品用纯化水超声提取,流动相为甲醇-水,梯度洗脱,柱温:30 ℃,流速:1.0 mL·min-1.结果虫草中含有的5种核苷标准曲线的相关系数均在0.999 0以上,精密度检测RSD 值为0.31%~1.95%(n=5),重复性检测RSD值为0.50%~2.56%(n=5),回收率在99.46%~100.11%之间.结论该方法灵敏、简便、快速、准确、重复性好,能有效测定虫草中核苷类成分的含量,可为评价虫草的质量提供依据.【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2017(032)004【总页数】4页(P403-406)【关键词】冬虫夏草;腺苷;尿苷;高效液相色谱法;含量测定【作者】陈亚丽;洪妍;李继平;师志强;陈宇;薛志远;刘慧彬;封士兰【作者单位】兰州大学药学院,兰州 730000;兰州大学药学院,兰州 730000;兰州大学药学院,兰州 730000;兰州大学药学院,兰州 730000;兰州大学药学院,兰州730000;兰州大学药学院,兰州 730000;甘肃原野农庄农牧科技开发有限公司,兰州730000;兰州大学药学院,兰州 730000【正文语种】中文【中图分类】R927.2冬虫夏草(Cordyceps sinensis)简称虫草，系麦角菌科虫草属真菌冬虫夏草菌寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的真菌子座及幼虫尸体的复合体[1]。
山东蚕业2009年第2期高效液相色谱法测定虫草中虫草素和腺苷含量的研究*施新琴 顾寅钰 张亚平 刘志斐 李化秀(山东省蚕业研究所)虫草历来为传统名贵中药,其中最著名的有冬虫夏草C.sinensis(Ber kely)Sacc和蛹虫草Cordyceps m ilitaris(L.exFr.)L i n k2种,虫草中所特有的虫草素、虫草腺苷和虫草多糖等活性物质一直是专家学者争相研究的热点。
虫草素因其能干扰细胞RNA和DNA的合成,抑制不正常细胞(癌细胞)的分裂并能作为区别细胞中不同的RNA聚合酶的工具,具有抗肿瘤、抗病毒等方面的作用,由此引起医学界的高度重视。
虫草腺苷则在抗病毒,抗菌,预防治疗脑血栓、脑溢血,抑制血小板积聚,防止血栓形成,消除面斑和抗衰防皱等方面效果较佳。
虫草中虫草素和虫草腺苷含量均偏低,提纯其活性成分可以更好的开发利用虫草,因此快速、准确的检测虫草素和虫草腺苷含量至关重要。
陈千良、孙诗清、汪宇和张莉等人分别作了相关的研究,但普遍存在分离效果不佳、可靠性不够理想以及目标峰保留时间太长等缺点,故在应用普及方面受到了较大限制。
为此,我们在借鉴夏敏等方法的基础上进一步优化色谱条件,建立了新的反相高效液相色谱法测定虫草素和虫草腺苷,并用该方法测定了北虫草的虫草素和虫草腺苷的含量,取得了较为理想的效果。
1 材料与方法1.1 材料及主要试剂和仪器材料:本研究室培育的蚕虫草样品,经80 烘干,粉碎,过80目筛后,-20 冷冻保存待测。
试剂:虫草素标样(SI GMA),虫草腺苷(常州大康);四氢呋喃(色谱纯),甲醇(色谱纯); KH2PO4,K2H P O4、乙醇均为分析纯,试验用水为自制双蒸水。
仪器:高效液相色谱仪(大连依利特), WATERS NOVPAK-C18色谱柱(5 m 40c m);超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司生产);格兰仕微波炉;0.2 m滤膜,25 L 微量进样器。
1.2 方法1.2.1 虫草素和虫草腺苷的提取:准确称取虫草样品0.1g,加入双蒸水1mL,涡流1m i n,微波中高火提取1m i n,静置得虫草素、虫草腺8*资助项目:山东省农业科学院青年基金项目(编号2007YQN023)2009年第2期山东蚕业苷提取液,过0.2 m 滤膜得待测液。
十八．虫草素和腺苷的测定(高效液相色谱测定方法)本方法适合食品中虫草素和腺苷的含量的测定本方法检测限：食品中虫草素和腺苷为6.0mg/kg。
（一）方法提要试样中的虫草素和腺苷经提取后在ODS色谱柱上分离，根据保留时间定性，用二极管阵列检测器来测定虫草素和腺苷的含量。
（二）仪器1. 高效液相色谱仪带二极管阵列检测器。
2. 超声清洗仪。
3. 天平（精确到0.001g和0.0001g）。
4. 微孔滤膜（PVDF 0.45 μm）。
（三）试剂1. 色谱用水（Millipore纯水器制备）。
2. 甲醇（色谱纯）。
3. 提取液：蒸馏水+甲醇=50+50(V+V）。
4. 虫草素和腺苷对照品，Sigma公司(纯度≥99%)。
5. 虫草素标准溶液和腺苷混合标准溶液（25.0µg/mL）：精确称取25mg虫草素和25mg腺苷,用提取液定容至100.00mL，即得虫草素和腺苷标准储备溶液。
稀释10倍后得虫草素标准溶液和腺苷混合标准溶液。
（四）测定步骤1. 样品处理：①固体样品：称取0.2g(精确到0.1mg)于50mL容量瓶中，加入40 mL提取液，超声30min，取出，冷却后用提取液定容到50 mL，摇匀经0.45µm滤膜过滤，清液待分析。
②液体样品：取均匀试样10mL(精确到0.1 mL)置于50 ml容量瓶中，加入甲醇10 mL，混匀，超声30min，取出，冷却后用提取液定容到50 mL摇匀经0.45µm滤膜过滤，清液待分析。
2. 标准工作曲线制作。
精密吸取虫草素和腺苷混合标准溶液（25.0µg/mL）1.0 mL，10.0 mL分别置于100mL容量瓶中，用提取液定容到100mL，摇匀，得到0.25µg/mL，2.50µg/mL虫草素和腺苷混合标准溶液。
分别取10μL0.25µg/mL，2.50µg/mL，25.0µg/mL 标准工作系列溶液进样分析，以测得的虫草素和腺苷的峰面积，分别对虫草素和腺苷的浓度绘制标准曲线。
冬虫夏草中各种化学成分的检测方法作者：侯芳菲来源：《农业工程技术·农产品加工》2013年第03期摘要：阐述近五年来冬虫夏草中核苷类、甘露醇、多种氨基酸等成分的检测方法，其中包括高效液相色谱法、毛细管电泳法、分光光度法等方法。
关键词：冬虫夏草化学成分检测冬虫夏草具有抗炎、抗肿瘤、降血糖、免疫调节、保护受损肝肾、镇静和抗疲劳等作用，冬虫夏草的化学成分复杂，近五年有关冬虫夏草化学成分测定方法的研究对象主要为核苷类、甘露醇、多种氨基酸、甾醇类及无机元素等。
1 核苷类物质的测定核苷类物质为冬虫夏草的主要活性成分之一，具有广泛的生理功能，其中以虫草素、腺苷等具有明显的药理作用。
近五年的测定方法主要为高效液相色谱法和毛细管电泳法。
1.1 HPLC方法测定中药成分非常复杂，HPLC因其具有各种分析柱、高选择性和高灵敏度的检测器，所以具备分离效能高、分析速度快、灵敏度高和适用范围广等优点，所以成为中药研究的最重要的分析方法。
郑永彪[1]等建立了冷冻保鲜冬虫夏草中尿苷和腺苷的HPLC测定方法。
采用Waters sunfire色谱柱（4.6mm×250mm，4.6μm），流动相系统为乙腈和水的比例和体积流量的梯度洗脱程序，柱温35℃，检测波长260nm。
结果尿苷和腺苷的线性范围分别为0.0340～0.340μg，0.00494～0.0494μg，平均加样回收率分别为98.70%（RSD为0.48%）、97.39%（RSD为1.6%）。
该方法简便快捷、准确精密、重复性好，能用于冷冻保鲜冬虫夏草中腺苷和尿苷的同时测定。
周伟平[2]等建立了采用Agilent EclipseXDB-C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱同时测定西藏产冬虫夏草中尿苷及腺苷的含量的方法，检测波长为260nm，以甲醇-水为流动相梯度洗脱，流速1.0mL/min，柱温33℃。
尿苷及腺苷的线性范围为32.95～439.3μg/mL（r=0.9999）和3.486～46.48μg/mL（r=0.9999），平均回收率分别为98.5%、95.6%，RSD值分别为1.8%和2.4%（n=6）。
