植物生理学模块实验指导
李玲主编
科学出版社
茶多酚含量的测定方法（分光光度计法）
【实验目的】
学习用酒石酸铁比色法测定茶多酚含量的方法，了解茶多酚在植物抗氧化活性中的作用。
【实验原理】
茶多酚是一类儿茶素为主体的类黄酮化合物，具有C6—C3—C6碳骨架结构，是一种重要的天然抗氧化性物质。它是超氧阴离子自由基和羟自由基的强捕获剂，能清除自由基。本实验介绍用酒石酸铁比色法测定植物组织中的茶多酚含量。
【器材与试剂】
1.实验仪器与用具
分光光度计、离心机、研钵、水浴锅、移液管、烘箱、具塞三角瓶
2.实验试剂
0.1mol/L磷酸缓冲液（pH6.8）
100μg/ml儿茶素标准液：称取10mg儿茶素，用蒸馏水定容至100ml。
1.5%酒石酸钾铁
3.实验材料
同抗坏血酸。
【实验操作】
1. 称取1g样品，研磨成粉末。用50ml沸蒸馏水将粉末洗入三角瓶，于沸水浴中浸提20min，过滤，滤渣用50ml蒸馏水同样提取一次，合并上清液，5000g离心15min，取上清液待用。
2.将儿茶素标准溶液稀释成0、20、40、60、80、100μg/ml，分别吸取1ml，加0.1mol/L 磷酸缓冲液3ml，混匀，加1.5%酒石酸钾铁1ml，用分光光度计测定540nm处的OD值，并绘制浓度-OD标准曲线。
3.取样品提取液1ml，按上述同意方法测定540nm处的OD值。
【实验作业】
根据公式，计算植物幼叶和成熟叶中茶多酚的含量，分析原因。
茶多酚含量（μg/g鲜重）=C×（提取液总体积×体积稀释倍数）
式中，C为从标准曲线中查得提取液中茶多酚含量（μg/ml）。
【注意事项】
提取时间过长，所提的茶多酚会发生氧化反应，转化成其他物质，致使一部分茶多酚丢失。提取时间在1~2h对茶多酚含量的影响不大。
【实验扩展】
1.可以从提取容积的选择以及萃取环节等方面，优化从植物组织高效率提取茶多酚含量的方法。
2.根据茶多酚易溶于水、乙醇、乙酸乙酯等性质，本实验用溶剂萃取法从茶叶制备多酚标准品，其方法是：取茶叶粉末，加6倍量沸水提取30min，不断搅拌，过滤。滤液加适量三氯化铁，边搅拌边滴加1mol/L NaHCO3，以滴入NaHCO3不再出现出现沉淀为止。离心，收集沉淀，用5mol/L盐酸（1ml浓盐酸加水1ml）溶解，加入等体积乙酸乙酯萃取，浓缩，真空干燥，则得到近白色的茶多酚。
