透射电镜制样流程

透射电镜制样流程透射电镜（Transmission Electron Microscopy，TEM）制样是指通过一系列的化学和物理方法来制取透射电镜所需的样品。

透射电镜是一种高分辨率的显微镜，可以在纳米尺度下观察材料的原子结构和微观形态。

为了获取高质量的TEM图像，制样过程非常关键。

下面将详细介绍透射电镜制样的流程。

1.样品制备：样品可以是纳米颗粒、薄膜、纤维或生物样品等。

首先，准备适宜的基底材料，如碳膜覆盖的铜网格或碳膜覆盖的铜刀片。

样品通常需要制成非常薄的切片，通常在50到100纳米的厚度范围内。

制备方法包括机械切割、电解石蠟切片、离子切割或电离蚀刻等。

2.固定和固化：对于生物样品，需要先进行固定处理，以保持样品的形态和结构。

常用的固定剂包括戊二醛、酸性醛或重金属盐。

然后，固定的样品需要进一步处理以固化，如用过氧化物、树脂或聚合物进行浸渍，以增加样品的稳定性。

3.切割和悬浮：将固化的样品切割成适当的尺寸和形状。

使用超微切割机、离子切割仪或其他切割工具进行切割。

切割后，样品通常会悬浮在水或有机溶液中，以便进一步处理。

4.脱水和对比染色：脱水是将样品从水中逐渐转移到有机溶剂中的过程。

这种处理可以控制样品的体积，以减少对比染色和观察中的伪影。

脱水通常通过渗透固定液逐渐转移，然后通过有机溶剂（如醋酸乙酯、丙酮或丙二醇）进行交换。

5.嵌入：将样品嵌入到透明的聚合物或树脂中。

嵌入过程中，通常采用逐渐增加浓度的树脂混合物，以确保样品得到完全浸透。

然后，将样品与树脂进行硬化，通常在高温下进行。

6.超薄切片：将固化的样品切割成非常薄的切片。

使用超薄切片机和钻磨刀片进行切割。

切割后的切片应尽快收集并转移到透明的铜网格或铜刀片上。

7.超薄切片处理：超薄切片通常需要进行后继处理以增强对比度和解决其他问题。

这可能包括染色、胶层增强或薄膜剥离等方法。

8.观察：将制备好的样品放入透射电镜中进行观察。

在观察前，样品需要在真空中或过氮气中去除气泡和其他杂质。

透射电镜生物样品制作过程透射电镜生物样品制作过程大致经过取材、固定、脱水、浸透、包埋、切片及染色等步骤。

一. 取材取材时要注意的要点是：快、小、冷、净、准、避免机械损伤。

取材方法：将固定液滴在冰台上的卡片上，在麻醉后的动物身上快速用剪刀剪取一块组织，用预冷的过的缓冲液将剪下的组织洗净，迅速放到卡片上的固定液中，用刀片切去被镊子夹到和剪刀剪过的组织，后按实验的目的将组织切成0.5~1mm2的立方或横截面为1mm2的长方体。

用牙签将切好的组织块转移到装有固定液的小瓶中，贴好标签并置于4℃的冰箱中。

二．固定以下操作尽可能在4℃的环境下，使用的溶液也要保存在4℃的冰箱中。

1、戊二醛固定：用镊子轻轻的将组织块从固定液中取出，放在卡片上的固定液中，利用双面刀片把组织块切成小块状，放进盛有1~1.5ml的0.1%的戊二醛的固定液的细管中，将吸管放进真空箱中，将大气压抽到760托后取出，使组织块在戊二醛溶液中固定1小时。

2、漂洗：经戊二醛固定的组织块要用1~1.5ml的0.1%PBS缓冲溶液漂洗，漂洗的次数为5次，在漂洗到第四次时可以将组织留在PBS漂洗液中过夜，放入4℃的冰箱中。

第二天早晨再进行第五次漂洗。

3、四氧化锇固定：向漂洗过的组织中加入0.5ml的0.1%四氧化锇固定液，固定时间为2个小时。

由于四氧化锇具有毒性，因此操作在通风橱里进行。

4、漂洗四氧化锇：用0.1%PBS缓冲溶液漂洗剩余的四氧化锇，然后再漂洗两次，其时间间隔为10min。

三．脱水为了保证包埋介质完全渗入组织内部，必须事先将组织内的水分驱除干净，即用一种和水及包埋剂均能相混溶的液体来取代水，常用的脱水剂是乙醇和丙酮。

1、酒精脱水:用浓度梯度依次为30%、50%、70%、90%的酒精，依次浸泡组织，其浸泡的时间一般为10min。

当在70%梯度的酒精时，样品可以放置过夜。

2、丙酮脱水：用浓度梯度为90%、100%的丙酮浸泡组织，在纯丙酮中浸泡三次。

透射电镜制样步骤以及注意事项透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是目前最常用的高分辨率电子显微镜，可以用于观察物质的微观结构。

制备TEM样品的过程非常重要，下面将详细介绍TEM制样的步骤以及需要注意的事项。

制备TEM样品的步骤一般包括样品的选择、固定与固化、切片、薄化、网格制备和贴膜等。

第一步是样品的选择，样品应具有研究价值且适合观察。

例如，生物样品可以是细胞、组织或器官的薄片，金属样品可以是扁平的块状、粉末或薄膜等。

第二步是固定与固化。

对于生物样品，常用的固定方法包括浸泡法、灌注法和切片冷冻法；对于无机样品，可以使用固定剂将样品固定在固定剂中。

第三步是切片。

将固定好的样品切割成薄片，一般要求薄片的厚度在100 nm以下，通常使用超薄切片机来进行切割。

第四步是薄化。

将切割好的样品进行薄化处理，使其达到TEM观察所需的薄度。

常见的薄化方法有机械薄化、电化学薄化和离子薄化等。

第五步是网格制备。

将薄化好的样品放置在铜网格上，网格的选取应该根据所研究样品的性质和需要进行选择。

最后一步是贴膜。

将组织切片或带有样品的网格进行贴膜，以保护样品并提高图像的对比度。

在以上步骤中，需要注意的事项有：1.样品在制备过程中要避免受到污染或氧化，尽量在纯净无尘的环境中进行操作。

2.固定剂的选择要合理，不同的样品可能需要使用不同的固定剂，应根据需要进行选择。

3.切片时要注意刀片的尖锐度和切割角度，以免对样品造成损伤或变形。

4.薄化过程中要控制好加工参数，以保证样品的均匀薄化。

5.制作网格时应选择合适的网格尺寸和类型，以适应观察需求。

6.贴膜时要使薄膜均匀平整，并避免出现气泡或杂质。

总之，TEM制样是一项复杂而关键的过程，要保证样品的质量和可观察性，需要仔细选择方法、控制操作参数、注意样品的保护与处理。

合理的样品制备能够获得高质量的TEM图像，并提供准确的实验数据和结论。

透射电镜样品制备步骤透射电镜是一种重要的材料表征技术，它利用电子的波动性和微粒性来观察材料的结构和性质。

为了能够使用透射电镜观察样品，首先需要对样品进行制备。

透射电镜样品制备步骤如下：1.选择合适的样品：透射电镜样品可以是固体、液体、薄膜或纳米颗粒等。

根据研究目的和样品性质选择合适的样品。

2.样品预处理：根据样品性质的不同，进行必要的预处理。

例如，对于固体样品，可以选择切割、抛光或电解抛光等方法来得到平滑的表面。

3.样品固定：将样品固定到透射电镜样品架上。

不同的样品有不同的固定方法。

例如，对于固体样品，可以使用导电胶将其固定在样品架上。

4.薄层制备：对于厚度过大的样品，需要将其制备成透明的薄层以便透射电镜观察。

常用的方法有机械研磨、电子束刻蚀或离子束刻蚀等。

5.样品清洁：将样品放入超声波清洗机中进行清洗，以去除可能附着在样品表面的杂质或污染物。

6.特殊处理：如果需要对样品进行特殊处理，例如加热、冷冻处理或受到特定环境气氛的影响等，根据需要进行相应的处理。

7.样品干燥：将样品放入真空或氮气环境中，以确保样品干燥。

避免样品受到水汽的污染。

8.获得薄片：使用切片机将固态样品切割成适当厚度的薄片。

为了获得高质量的薄片，可以选择特殊的切片工具和技术，例如离子束切片或低速钻磨切片。

9.薄片形状整理：使用不同的研磨和抛光方法，将薄片的形状和表面进行调整，以确保样品的平滑度和一致性。

10.网格制备：将薄片粘贴在透射电镜网格上。

网格可以增强样品的稳定性和保护，同时提供用于定位和标识的标记。

11.后续处理：根据研究目的和透射电镜分析的要求，可以对样品进行进一步处理。

例如，可以进行染色、脱膜、溅射或腐蚀等处理。

以上是透射电镜样品制备的一般步骤。

不同样品和研究目的可能会有所不同。

因此，根据具体的研究需求和样品特点，制备过程可以做相应的调整和优化。

透射电镜纳米颗粒样品制备流程下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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在样品制备过程中，应注意保持清洁，避免污染样品。同时，样品制备的过 程中需要使用一些有毒的化学试剂，应当注意防护。
样品制备是射电镜观察的关键环节，如果样品不足够细腻或有杂质，就无法 得到清晰的观察结果。因此，在制备样品时需要注意以下几点：
样品必须保证足够薄：射电镜的观察效果与样品的薄度成会使用不同的设备和工具。例如，生物样品制备可能 需要使用切片机、真空干燥炉等设备；材料样品制备可能需要使用打磨机、拉丝 机等设备。
在进行射电镜样品制备时，应根据所要观察的样品的性质和结构选择合适的 流程和设备，以便获得清晰的观察结果。
在进行射电镜样品制备时，应注意避免样品污染。样品污染可能会导致观察 结果不准确或无法观察。
射电镜样品制备是在进行射电镜观察前必须进行的一项工作，样品制备的流 程包括以下几个步骤：
采集样品：样品可以是植物、动物或矿物等，需要使用特殊的工具或方法进 行采集。
切割样品：根据所要观察的部位，使用刀具将样品切成较薄的片状。 脱水：将切割好的样品浸泡在溶液中，使其脱去水分。 透明化：将脱水后的样品浸泡在透明化剂中，使其变得透明。 加粘合剂：在样品的表面涂上粘合剂，使其固定在玻片上。 贴装：将样品贴装在射电镜的样品台上，准备进行观察。
样品污染的主要原因有：
样品采集过程中的污染：如果样品采集过程中不注意清洁，可能会导致样品 污染。
样品制备过程中的污染：如果样品制备过程中使用的设备或工具不清洁，也 可能导致样品污染。
周围环境的污染：如果周围环境不清洁，也可能导致样品污染。
为了避免样品污染，应注意保持清洁，使用清洁的设备和工具，并在清洁的 环境中进行样品制备。
样品必须透明：样品必须透明，才能够清晰地观察其内部的结构。 样品必须稳定：在观察过程中，样品必须保持稳定，否则就无法得到清晰的 观察结果。 样品必须无杂质：样品必须保证无杂质，否则就会干扰观察效果。

透射电镜样品制备流程由于透射电镜能观察的样品必须很薄（60～70nm），所以透射电镜的样品准备要求很严格，方法也很单一，仅有一下两种方法：一．负染色技术负染色技术简单快速，可以显示生物大分子、细菌、分离的细胞器以及蛋白晶体等样品的形态、结构、大小以及表面结构的特征。

尤其在病毒学中，负染色技术有着广泛的应用。

样品要求：①样品悬液的纯度不要求很纯，但是如果杂质太多，如大量的细胞碎片，培养基残渣，糖类以及各种盐类结晶的存在都会干扰染色反应和电镜的观察。

尤其是不能有过多的糖类，因为在电子束的轰击下，糖类容易碳化而有碍观察，因此样品要适当提纯。

②样品悬液的浓度要适中，太稀在电镜下很难找到样品，太浓样品堆积影响观察。

操作流程：吸取样品悬液滴到有膜的铜网上，静置数分钟，然后用滤纸吸去多余的液体，滴上负染色液，染色1～2min后滤纸吸去负染色液，待干后用于电镜观察。

二、超薄切片技术超薄切片技术是为透射电镜观察提供薄样品的专门技术，是生物学中研究细胞超微结构最常用的技术。

广泛应用于生物体的各种细胞的超微结构观察。

一般厚度在10～100nm的切片称为超薄切片，制作这种切片的技术叫做超薄切片技术。

超薄切片制作的过程包括取材、固定、脱水、渗透、包埋、聚合、切片和染色等几个环节，和一般光学显微镜的石蜡切片过程相似。

但是，超薄切片切片过程更为细致与复杂，要求更严格，而且所用的试剂比较昂贵、配制复杂、强致癌。

具体操作步骤、注意事项如下：1．取材和前固定：快速的切取大小为0.5～1.0mm3的样品块，一分钟内把组织（样品）块浸入2.5％戊二醛（进口品质）溶液（取样前来平台领取），每个离心管内装20个以上的样品块，作为一个样送到平台。

要求：①取材前一定要和工作人员取得电话联系！②取材选择部位要准确可靠，确保每块材料都是要观察的部位。

③所有植物样品一定要抽真空，能够沉底的样品也抽真空15mins，不能沉底的样品一定要抽真空致沉底！④细菌、散在细胞等不能成块的样品，加戊二醛固定液，离心沉淀后送到平台，由平台工作人员处理。

透射电镜常规制样简易流程
1.取样
因戊二醛和锇酸的固定深度有限，样品越小越好，尽量取1mm*1mm*1mm。

2.先固定
戊二醛在3%-6%。

参考：25% 戊二醛（必须买Sigma公司的G5885或者更高浓度的戊二醛）和0.2M PBS 配置为戊二醛5%和0.1M PBS缓冲液的混合工作液；时间：常温4小时后，4度冰箱过夜。

3.清洗
PBS缓冲液冲洗。

一定要洗干净，否则戊二醛和锇酸会产生沉淀。

参考：每15-30分钟更换一次，共4次。

4.后固定
参考:锇酸2%，固定4小时。

剧毒，在通风橱操作。

5.清洗
PBS缓冲液冲洗。

6.梯度脱水
参考：乙醇梯度脱水:30-50-70-90-95-100-100%，每次10-15分钟，无水乙醇中加分子筛或者无水硫酸铜，提前一周配置好备用。

7. 渗透
参考：spurr树脂。

包埋板即可。

8. 包埋聚合
参考：70度，24小时。

10.超薄切片
11.染色
（1）醋酸双氧铀封口膜上染色，染色时间参考：10分钟（铀染）
（2）水清洗
（3）柠檬酸铅因其极易和空气产生铅沉淀，染色时旁边放NaOH颗粒，注意避光。

染色时间参考附件。

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在进行透射电镜样品金相制备之前，充分的准备工作必不可少。

透射电镜样品制备流程由于透射电镜能观察的样品必须很薄（60～70nm），所以透射电镜的样品准备要求很严格，方法也很单一，仅有一下两种方法：一．负染色技术负染色技术简单快速，可以显示生物大分子、细菌、分离的细胞器以及蛋白晶体等样品的形态、结构、大小以及表面结构的特征。

尤其在病毒学中，负染色技术有着广泛的应用。

样品要求：①样品悬液的纯度不要求很纯，但是如果杂质太多，如大量的细胞碎片，培养基残渣，糖类以及各种盐类结晶的存在都会干扰染色反应和电镜的观察。

尤其是不能有过多的糖类，因为在电子束的轰击下，糖类容易碳化而有碍观察，因此样品要适当提纯。

②样品悬液的浓度要适中，太稀在电镜下很难找到样品，太浓样品堆积影响观察。

操作流程：吸取样品悬液滴到有膜的铜网上，静置数分钟，然后用滤纸吸去多余的液体，滴上负染色液，染色1～2min后滤纸吸去负染色液，待干后用于电镜观察。

二、超薄切片技术超薄切片技术是为透射电镜观察提供薄样品的专门技术，是生物学中研究细胞超微结构最常用的技术。

广泛应用于生物体的各种细胞的超微结构观察。

一般厚度在10～100nm的切片称为超薄切片，制作这种切片的技术叫做超薄切片技术。

超薄切片制作的过程包括取材、固定、脱水、渗透、包埋、聚合、切片和染色等几个环节，和一般光学显微镜的石蜡切片过程相似。

但是，超薄切片切片过程更为细致与复杂，要求更严格，而且所用的试剂比较昂贵、配制复杂、强致癌。

具体操作步骤、注意事项如下：1．取材和前固定：快速的切取大小为0.5～1.0mm3的样品块，一分钟内把组织（样品）块浸入2.5％戊二醛（进口品质）溶液（取样前来平台领取），每个离心管内装20个以上的样品块，作为一个样送到平台。

要求：①取材前一定要和工作人员取得电话联系！②取材选择部位要准确可靠，确保每块材料都是要观察的部位。

③所有植物样品一定要抽真空，能够沉底的样品也抽真空15mins，不能沉底的样品一定要抽真空致沉底！④细菌、散在细胞等不能成块的样品，加戊二醛固定液，离心沉淀后送到平台，由平台工作人员处理。

透射电镜制样方法
透射电镜制样方法主要包括以下步骤：
1. 样品制备：首先需要选择合适的样品，并进行必要的前处理。

根据需要，可以使用传统的金相方法，如切片、打磨和腐蚀等来制备样品；也可以使用更先进的方法，如离子切片、聚焦离子束等来制备样品。

2. 高真空处理：将样品置于高真空环境下进行处理，以去除气体和水分的影响。

这可以通过在真空槽中加热样品、通入惰性气体等方法来实现。

3. 制备薄片：将制备好的样品制备成足够薄的薄片，通常厚度要求在几十纳米至几百纳米之间。

这可以通过使用超薄切片机或聚焦离子束来实现。

4. 电导涂层：为了提高样品的导电性，可以在样品表面涂上金薄层或碳薄层。

这可以通过蒸镀、溅射、离子镀等方法来实现。

5. 透射电镜成像：将制备好的样品放入透射电镜中，调整仪器参数，如加速电压、透镜聚焦等，进行成像。

可以使用像差校正技术、电子衍射等方法来提高成像质量。

需要注意的是，不同样品的制备方法会有一定差异，制备薄片时要注意避免样品的破裂和变形，电导涂层要均匀且致密，成像时要注意样品与探针的相对位置等
细节问题。

此外，透射电镜制样方法还包括一些先进的技术，如原位制备、低温制备、离子减薄等，可以根据需要选择适合的方法进行制备。

透射电镜制样方法
透射电镜制样是实验室中极为重要的一项技术操作，它将不同结构和尺寸的样品细粒度地进行分离，使之适应望远镜进行观察。

目前实验室高等学校科研都广泛运用透射电镜进行材料研究。

透射电镜制样大致可分为以下步骤：
1.准备样品：将细分的材料（如金属、碳、化学物质等）放在石英板上，以保证材料表面光滑。

2.制备标本：用刮子将样品按一定密度均匀地刮到石英板上制备出一个标本，再在标本表面进行抛光，使标本表面光滑，并保证其大小和厚度圆滑兼容。

3.金相分析：将抛光的标本放在金相检测仪上，通过金相范式素材库，自动检测标本的组成成分，较快准确得出有关分析结果。

4.涂覆镜片：将样品夹在两个玻璃挡板间，倒入特殊的样品涂覆液，将两片玻璃挡板缓慢压缩，使涂覆液平稳均匀地涂覆到样品表面，以形成镜片。

5.放入电镜：将涂覆后的样品放入透射电镜，并用调节电源选择对应的廓线调节器，即可通过连续的廓线选择实现不同的形状的样品的聚焦。

6.观察分析：在放大可视屏上观察样品，然后拍照或录制，以便进一步分析。

以上就是透射电镜制样的大致步骤，制备一个完美样品需要仔细操作，技术人员必须熟悉此项技术操作，并结合实际材料和实验步骤多次实践，以达到良好的实验效果。

场发射透射电镜（TEM)测试制样说明测试样品范围：各种材料内部微结构进行观察；粉末、纳米颗粒形貌和粒径观察选区电子衍射和晶体结构分析；金属、陶瓷、半导体、塑料、农作物、细胞等显微结构；配合EDS能谱仪可以对各种元素进行定性和半定量微区分析，元素检测范围：B～U元素。

透射电镜（TEM)测试制样要求：1. 透射电镜能够观察200nm以下的样品；2. 对于粉末和液体样品，要求样品均匀分散在支持膜上并且干燥；3. 块体样品，要求样品大小为直径3mm的圆，厚度为200nm以下；高分辨样品要求厚度在10nm以下；4. 含磁样品需要在委托测试单中重点标识，需要特殊处理，否则不予测试；5. 需要离子减薄的金属、陶瓷样品，需要已预减到150微米以下，否则不予制样和测试。

透射电镜生物样品制备步骤：1．取材：组织块小于1立方毫米2．固定：2.5%戊二醛，磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。

用0.1M磷酸漂洗液漂洗15分三次1%锇酸固定液固定2-3小时用0.1M磷酸漂洗液漂洗15分三次3．脱水：50%乙醇15-20分70%乙醇15-20分90%乙醇15-20分90%乙醇90%丙酮（1：1）15-20分90%丙酮15-20分以上在4度冰箱内进行100%丙酮室温15-20分三次4．包埋：纯丙酮+包埋液（2：1）室温3-4小时纯丙酮+包埋液（1：2）室温过夜纯包埋液37度2-3小时5．固化：37度烘箱内过夜45度烘箱内12小时60度烘箱内24小时6．超薄切片机切片70 nm7．醋酸铀-柠檬酸铅双染色负染色的操作方法用一根细滴吸管吸一滴样品悬液滴在有膜的铜网上，滴样时要防止铜网被液体吸到管上来或翻转而被污染。

如果用Formvar膜时，在制好膜后，可以直接在粘于滤纸上的铜网进行负染色操作。

如果用碳膜时，要用镊子夹着铜网，滴液后静置数分钟，然后用滤纸从铜网边缘吸去多余的液体，滴上负染色液，染色1～2分钟用滤纸吸去负染色液，再用蒸馏水滴在铜网上洗1～2次，用滤纸吸去水，待干后可用于电镜观察。

透射电镜样品制备方法透射电镜的样品制备方法，需要经过取材、固定、脱水、渗透、包埋聚合、切片及染色等步骤。

一．取材的基本要求组织从生物活体取下后，如果不立即进行适当处理，会由于细胞内部的各种酶作用，出现细胞器自溶现象。

因此，为了细胞结构尽可能保持天然状态，必须做到快、小、准、冷。

（1）动作迅速，组织从活体取下后应在最短的时间内（1分钟内）投入2.5%戊二醛固定液。

（2）所取组织的体积要小，一般不超过1mm*1mm，取样形状为牙签状。

也可将组织修成1mm*1mm*2-5mm大小长条形。

因为固定剂的渗透能力较弱，组织块如果太大，块的内部将不能得到良好的固定。

（3）机械损伤要小，解剖器械应锋利，操作宜轻，避免牵拉、挫伤与挤压。

推荐使用手术刀或双面刀片。

（4）操作最好在低温（0℃—4℃）下进行，以降低酶的活性，防止细胞自溶。

（5）取材部位要准确。

切片窗小于1mm*1mm，如取样带有太多的多余组织，可能造成你需要的部分刚好被修掉。

二．取材方法（按照自己的样品类型检索）1.动物及人体组织的取材（在冰浴上进行）动物组织的取材，应麻醉（1%戊巴比铵5 ml/kg体重腹腔注射）或断头急性处死，解剖出所需器官。

用手术刀切割取一小块组织，放在干净的硬质板上（例如培养皿底部），滴一滴冷却的固定液。

用新的、无油污的锋利双面刀片将材料切成大约1 mm宽，3~5 mm长的小块并从中选出受损伤较小的小条（牵拉损伤将直接破坏组织，切取时刀片下压，不要来回拉锯），用牙签将这些小块逐一放入盛有预冷的、新鲜固定液的1.5 ml管内，放入冰箱冷藏室低温固定（0~4℃）4小时或以上。

*固定结束后，将固定液用磷酸盐缓冲液稀释三倍，样品于该溶液中在4℃冰箱保存。

送样前请用磷酸盐缓冲液于4度冰箱浸泡清洗15 min，共3次，做好标记送至电镜室。

送样请使用2 ml离心管，用记号笔在离心管管壁上写好编号，用透明胶带缠绕。

后续管子会接触丙酮和乙醇，一定要用透明胶带缠绕，以防记号被洗掉。

• 对复型材料的主要要求： • ①复型材料本身必须是“无结构”或非晶态的； • ②有足够的强度和刚度，良好的导电、导热和耐电子束轰击性能。 • ③复型材料的分子尺寸应尽量小，以利于提高复型的分辨率，更深入地揭示表面
形貌的细节特征。 • 常用的复型材料是对电子束透明的薄膜——非晶碳膜、各种塑料薄膜和氧化物薄
膜）。
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三、间接样品(复型)的制备
• 在电镜中易起变化的样品和难以制成薄膜的试样采用此方法. • 表面显微组织浮雕的复型膜，只能进行形貌观察和研究，不能研究试样的成分
分布和内部结构。
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复型的种类
• 按复型的制备方法，复型主要分为：
•
一级复型
•
二级复型
•
萃取复型（半直接样品）
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电解双喷 1 。 电 解 双 喷 时 ， 一 般 要 进 行 冷 却 ， 常 用 液 氮 加 酒 精 的 方 法 来 冷 却 ， 尤 其 是 钢 铁 材 料 ， 必 须 冷 却 ， 而 且
最好用液氮。 2。电解双喷时，要调好电流和电压的值，只有电流和电压的值处于电解抛光的平台时，才能制造出好
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粉末（纤维）样品的断面
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2. 晶体薄膜样品
• 块状材料多采用此方法。 • 通过减薄制成对电子束透明的薄膜样品。 • 薄膜样品制备方法要求： ①薄膜样品的组织结构必须和大块样品相同，且制备过程中不引起材料组织的变
化。 ② 薄，相对电子束而言必须有足够的“透明度”，且避免薄膜内不同层次图像的
重叠，干扰分析。 ③ 具有一定的强度。
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晶体薄膜法
• 薄膜样品制备步骤： ① 切取：切取薄块（厚度<0.5mm） ② 预减薄：用机械研磨、 Dimpling、化学抛光等减薄成“薄片”（0.1mm） ③ 终减薄：用电解抛光、离子轰击减薄成“薄膜”（<500nm）（视材料而

透射电镜的制样方法一、超薄切片法。

1.1 取材。

这可是制样的头一遭，就像盖房子打地基一样重要。

取材的时候得特别小心，要选取咱们感兴趣的部位。

这部位得有代表性啊，不能瞎取。

比如说研究细胞结构的，就得找到细胞长得好、特征明显的那块组织。

而且动作要快，就像抢红包似的，手慢无。

为啥呢？因为组织一旦离开生物体，就开始发生变化了。

1.2 固定。

固定这一步可不能含糊。

就像给组织“定个型”，让它保持生前的状态。

通常会用到化学固定剂，像戊二醛啥的。

把组织泡在里面，就像把东西放在保险柜里一样，稳稳当当的。

这一步要是没做好，后面的观察就全乱套了，那可就是“一着不慎，满盘皆输”。

1.3 脱水。

脱水就像给组织“脱衣服”，把水分一点一点去掉。

用的是一系列不同浓度的乙醇或者丙酮。

这个过程得循序渐进，不能操之过急，不然组织就会被破坏。

这就好比爬山，得一步一个脚印，急不得。

1.4 浸透与包埋。

浸透呢，就是让包埋剂慢慢渗到组织里。

包埋就像给组织做个“小房子”，把它保护起来。

常用的包埋剂有环氧树脂之类的。

这一步就像给宝贝裹上一层保护膜，得仔仔细细的。

1.5 超薄切片。

这可是个精细活，切片要薄得像蝉翼一样。

用超薄切片机来切，切的时候得全神贯注，稍有不慎就会前功尽弃。

切出来的片子就像一片片小雪花，又薄又脆弱。

二、负染法。

2.1 样品准备。

先把要观察的样品处理好，比如说提纯之类的。

这就像把菜洗干净，准备下锅一样。

得把杂质去掉，让咱们想看的东西“干干净净”地呈现出来。

2.2 负染。

用重金属盐溶液来进行负染。

这就像给样品穿上一件深色的“衣服”，让它在电镜下更明显。

染的时候要控制好量，多了少了都不行，就像炒菜放盐，得恰到好处。

三、冷冻制样法。

3.1 冷冻固定。

直接把样品快速冷冻，让它瞬间定格。

这就像给样品来了个“急冻魔法”。

这样能最大程度地保持样品的原始状态，避免化学固定带来的一些变化。

3.2 冷冻超薄切片。

在冷冻的状态下进行超薄切片。

这可不容易，就像在冰上雕刻一样，需要特殊的设备和技术。

透射电镜生物样品制备步骤
一．取材：
组织块小于1立方毫米
二．固定：
%戊二醛，磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。

用磷酸漂洗液漂洗15分三次
1%锇酸固定液固定2-3小时
用磷酸漂洗液漂洗15分三次
三．脱水：
50%乙醇15-20分
70%乙醇15-20分
90%乙醇15-20分
90%乙醇90%丙酮（1：1）15-20分
90%丙酮15-20分
以上在4度冰箱内进行
100%丙酮室温15-20分三次四．包埋：
纯丙酮+包埋液（2：1）室温3-4小时
纯丙酮+包埋液（1：2）室温过夜
纯包埋液37度2-3小时
五．固化：
37度烘箱内过夜
45度烘箱内12小时
60度烘箱内48小时
六．超薄切片机切片70 nm
七．3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色
八．透射电镜JEOL JEM-1230（80KV）观察。

拍片。