NK细胞与NK抗衰老

免疫系统与机体衰老丛秀丽(综述);赵启明(审校)【摘要】Human aging is a highly complex process that is characterized by an increase in age-associated diseases such as cancer, type 2 diabetes mellitus, autoimmunity, infections, cerebrovascular and cardiovascular disease. One of the common denominators of age-related morbidities is the process of immunosenescence. The aging of the immune system impairs protective immunity against malignant cells and pathogens, but paradoxically increases the risk for autoimmunity to a state of chronic inlfammation. Over the last decade, the proportion of the developed world’s population over the age of 65 years has increased by more than 10%. Furthermore, it is projected to increase further to over 20% by 2030. Immune cell therapy has an obvious effect in the elimination of senescent cells and in the treatment of cancer, and provides an effective method in the prevention and treatment of age-related diseases.%人类的衰老是一个复杂的生理过程，伴随着衰老相关性疾病的发生，譬如癌症、II型糖尿病、自身免疫性疾病、感染、心脑血管疾病等。

NK细胞免疫治疗恶性肿瘤的研究进展曹腾宇;孙莉萍;于洋【期刊名称】《临床输血与检验》【年(卷),期】2024(26)2【摘要】细胞免疫治疗是针对自身免疫细胞能力低下的恶性肿瘤患者进行的一种新型补充疗法,包括基于T细胞的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗法、肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)疗法,基于NK细胞的嵌合抗原受体NK细胞(CAR-NK)疗法和自体细胞免疫疗法(CIK),还有基于其他免疫细胞如单核吞噬细胞,包括树突状细胞和巨噬细胞的输注治疗。

其中,自然杀伤细胞(nature killer cell,NK细胞)作为机体天然免疫的重要细胞,在机体抗肿瘤、抗病毒感染、免疫调节中发挥着重要作用。

它可以像T细胞一样通过工程化改造后靶向治疗肿瘤,还能够进行同种异体来源的NK细胞输注治疗,弥补了T细胞自体来源受限和异体免疫排斥的缺点。

研究证实,输注异体NK细胞的患者不会发生严重的移植物抗宿主病(graft versus hostdisease,GVHD)。

NK细胞不仅扩大了用于细胞免疫治疗的细胞种类,还为形成较低成本的细胞免疫治疗产品提供了广阔应用前景。

但是目前仍存在NK细胞质量不稳定,制备流程缺乏统一质量标准等问题,虽有部分NK细胞免疫治疗产品已经获得了美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration,FDA)或国家药品监督管理局(National Medical Products Administration,NMPA)的批准,但仍然没有明确公开的NK细胞免疫治疗产品的规范生产体系。

本文从NK细胞独特的免疫调节作用机制出发,综合近年研究者利用NK细胞在恶性肿瘤治疗上应用的治疗策略和临床前研究及临床试验的最新进展,最终落脚于NK细胞的体外扩增办法及活性功能维持的研究进展上,表明NK细胞有望形成质量统一的细胞免疫治疗产品。

【总页数】8页(P267-274)【作者】曹腾宇;孙莉萍;于洋【作者单位】解放军医学院;中国人民解放军总医院第一医学中心输血医学科【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.NK细胞免疫治疗在恶性肿瘤治疗中的应用与护理2.细胞因子诱导的NK细胞过继免疫治疗恶性肿瘤的初步应用3.NK 细胞基因修饰在细胞过继免疫治疗中的应用研究进展4.NK细胞抗肿瘤机制及肿瘤免疫治疗的研究进展5.NK细胞免疫治疗恶性肿瘤新进展因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

NK细胞的基本原理1. 引言自然杀伤（Natural Killer，NK）细胞是一类重要的免疫细胞，能够对肿瘤和感染性病原体发起快速、非特异性的攻击。

NK细胞是淋巴细胞的一种，与T细胞和B细胞一起构成了适应性免疫系统。

相比于T和B细胞，NK细胞具有更广泛的抗原识别能力和更快的反应速度。

在人体中，NK细胞主要存在于外周血液、脾脏、骨髓和淋巴组织中。

它们通过识别并杀伤被感染或突变的细胞来保护机体免受肿瘤和感染性病原体的侵害。

NK细胞具有多种杀伤机制，包括直接杀伤、分泌效应分子以及调节其他免疫细胞活性等。

本文将详细解释与NK细胞相关的基本原理，包括NK细胞的识别机制、激活机制以及杀伤机制等。

2. NK 细胞的识别机制NK细胞通过多种方式来识别目标细胞，其中最重要的是通过表面受体与目标细胞上的配体结合。

2.1. KIR 受体KIR（Killer Immunoglobulin-like Receptor）受体是NK细胞表面的一类受体，它们能够与人类白细胞抗原（Human Leukocyte Antigen，HLA）分子结合。

HLA分子是一类在人类细胞表面高度多态性的蛋白质，它们参与了免疫系统中抗原呈递的过程。

KIR受体能够通过与HLA分子结合来判断目标细胞是否正常。

如果目标细胞缺乏或表达异常的HLA分子，KIR受体将不会收到抑制信号，从而激活NK细胞发起攻击。

2.2. NKG2D 受体NKG2D 受体是 NK 细胞表面的另一种重要受体。

它能够与多种配体结合，包括MICA/B 和 ULBP 等。

这些配体通常在感染、肿瘤或应激等情况下被高表达。

当NKG2D 受体与配体结合时，会触发 NK 细胞的激活信号，从而引发 NK 细胞对目标细胞的杀伤。

2.3. 其他受体除了 KIR 和 NKG2D 受体之外，NK 细胞还表达了其他一些受体，如 NKp46、NKp30 和 NKp44 等。

这些受体能够与糖蛋白和神经元特异性糖蛋白等配体结合，参与调节 NK 细胞的活性。

自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)是机体重要的免疫细胞，不仅与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关，而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生。

NK细胞是自然杀伤细胞的缩写。

它不同于T细胞和K细胞。

它不需要特异性抗体来杀死靶细胞，也不需要抗原预敏化。

它主要存在于外周血，脾脏和骨髓中，在淋巴结中含量很少，而在胸腺中则没有。

通常认为，NK细胞来源于骨髓。

它的免疫活性远小于K细胞和T细胞的免疫活性，但要使T细胞致敏才能获得杀伤能力大约需要10天。

K细胞的杀伤作用必须涉及IgG的特异性抗体的参与，而NK细胞则可以立即起靶细胞非特异性杀伤的作用，尤其是对各种肿瘤细胞的快速杀伤和溶解。

因此，NK细胞对癌症的监测功能越来越受到重视。

NK细胞的确切来源尚不清楚。

通常认为它们直接来自骨髓衍生出来的它的发育和成熟取决于骨髓的微环境。

在小鼠和人类中进行的体外实验表明，当在IL-2和其他细胞因子存在下体外培养时，胸腺细胞也可以诱导NK细胞。

在体内IL-3的诱导下，小鼠脾脏可促进NK细胞的分化。

NK细胞主要分布在外周血中，占PBMC的5-10％。

NK活性也存在于淋巴结和骨髓中，但水平低于外周血。

由于NK细胞具有一些T细胞分化抗原，例如80〜90％NK细胞CD2 +，20〜30％NK细胞CD3 +（表达CD3ζ链），30％NK细胞CD8 +（α/α）和75〜90％NK细胞CD38 +此外，NK细胞具有IL-2亲和受体，在IL-2刺激下可发生增殖，活化的NK细胞可产生
IFN-γ。

因此，通常认为NK细胞和T细胞在发育中更紧密相关。

nk细胞提取及培养方法以nk细胞提取及培养方法为标题，本文将介绍NK细胞的提取和培养方法。

NK细胞（Natural Killer cell）是一种重要的免疫细胞，具有杀伤肿瘤细胞和感染病原体的能力。

NK细胞的提取和培养是进行相关研究和应用的前提，下面将详细介绍相关步骤。

一、NK细胞的提取方法1. 从外周血中提取：外周血中富含NK细胞，因此是提取NK细胞的常用来源。

首先，收集供体的外周血样本，并进行离心，分离出白细胞。

然后，使用比重梯度离心法，将白细胞层分离出来。

最后，使用磁珠或流式细胞术等方法，选择性地富集NK细胞。

2. 从脐带血中提取：脐带血中的NK细胞数量相对较多，因此也是提取NK细胞的常用来源。

提取方法与外周血类似，首先收集脐带血样本，并进行离心，分离出白细胞。

然后，使用比重梯度离心法，将白细胞层分离出来。

最后，使用磁珠或流式细胞术等方法，选择性地富集NK细胞。

二、NK细胞的培养方法1. 培养基的准备：选择适合NK细胞生长的培养基，如RPMI 1640培养基。

将培养基加热至37摄氏度，并加入适量的胎牛血清、抗生素和生长因子等。

2. 细胞的接种和培养：将提取到的NK细胞接种在含有培养基的培养皿中。

细胞密度一般为1-2×10^6个/ml。

将培养皿放入培养箱中，保持37摄氏度和5%二氧化碳的恒定环境。

每2-3天更换新的培养基，以保持细胞的正常生长。

3. 细胞的扩增：为了获得足够数量的NK细胞，可以进行细胞的扩增培养。

在细胞密度达到80%左右时，将细胞进行传代，即将细胞从原来的培养皿中移至新的培养皿中，继续进行培养。

每次传代时，可根据需要调整细胞的密度和培养时间。

4. 细胞的活化：为了增强NK细胞的杀伤能力，可以进行细胞的活化处理。

常用的活化方法包括使用细胞因子（如IL-2、IL-15等）刺激细胞，或使用特定的抗体与细胞表面的激活受体结合。

活化后的NK细胞可以更好地发挥其免疫功能。

三、NK细胞的质量控制1. 细胞形态观察：在培养过程中，定期观察NK细胞的形态变化，如细胞的形状、大小、颜色等。

NK细胞是自然杀伤细胞（Natural Killer cell）的简称，它们是一类免疫系统中重要的淋巴细胞。

NK细胞可以通过直接杀伤肿瘤细胞和感染的细胞来发挥抗肿瘤和抗病毒的作用。

在临床上，对于评估NK细胞功能和活性的指标主要包括以下几个方面：
1. CD56：CD56是NK细胞的表面标志物，也是鉴定NK细胞的关键标记之一。

通常情况下，NK细胞表达CD56，而T细胞则不表达。

2. CD16：CD16又称为FcγRIII，是NK细胞的另一个重要表面标志物。

CD16能够与抗体结合，并介导ADCC（抗体依赖性细胞毒性）反应。

CD16阳性的NK细胞具有更强的细胞毒性。

3. NKG2D：NKG2D是NK细胞表面的活化受体，能够识别并结合病变细胞表面上的NKG2D配体，从而激活NK细胞的杀伤功能。

4. Perforin和Granzyme B：Perforin和Granzyme B是NK细胞用于杀伤靶细胞的两个主要效应分子。

Perforin能够通过孔道形成机制进入靶细胞并引发细胞溶解，而Granzyme B则能够激活细胞内的凋亡程序。

除了上述指标外，还有一些其他的指标可以用来评估NK细胞的功能，如IFN-γ（干扰素γ）、TNF-α（肿瘤坏死因子α）等细胞因子的产生水平。

这些指标的检测可以通过流式细胞术、免疫组化染色等实验方法进行。

但需要注意的是，不同实验室可能会使用不同的方法和参考值范围来评估NK细胞的功能，因此具体的结果解读应该结合临床情况进行综合分析。

1。

《黄帝内经》有云：上医治未病，圣人不治已病治未病。

意思是最好的医生，是让人在没有病的情况下防止得病。

其实我们每个人体内都有一个世界上最好的医生——人体免疫系统，它是人体抵御病原菌侵犯最重要的保卫系统，是生命健康的重要基础。

根据医学研究显示，人体百分之九十以上的疾病与免疫系统失调有关。

人体免疫系统就像一支精密的警察和军队，24小时昼夜不停地保护着我们的健康，如果失去免疫系统的保护，即使最轻微的感染也足以让人丧命。

免疫系统时时刻刻都能协调不计其数、不同职能的免疫部队执行机体保护的复杂任务。

研究表明正常人体每天都将产生上百个癌变细胞，但它们在形成癌症病灶前就已全部被免疫细胞军团消灭。

在这些免疫细胞军团中，自然杀伤细胞（Natural killercell, NK细胞）是天然免疫系统中最重要的细胞，发挥着举足轻重的作用。

NK细胞不需要肿瘤抗原的预先刺激，就可以直接杀伤肿瘤细胞，同时又能通过释放细胞因子诱导细胞凋亡，被医学界公认为抗癌的第一道防线。

免疫细胞是指参与免疫应答或与免疫应答有关的细胞，包括NK细胞、T细胞、B细胞、巨噬细胞等。

人体免疫细胞就好比是保卫身体健康的卫士，其免疫防御功能可以抵挡细菌和病毒的入侵，免疫监视功能可以及时清除病变、癌变细胞，免疫稳定功能可以清除衰老、损伤细胞。

认识NK细胞NK细胞于40年前在外周血中被发现。

他是先天性免疫系统的核心组成部分，也是对抗癌细胞和病毒最强、最有效的免疫细胞，存在于外周血、肝脏、腹膜腔和胎盘中。

NK细胞与我们的日常生活息息相关。

它可以抑制细菌和病毒入侵，清除癌变、病变细胞，并具有延缓机体衰老的功效。

NK细胞对几乎所有常见的癌细胞类型都有杀伤作用，包括肺癌、乳腺癌、肝癌、淋巴癌、食道癌等；对多重耐药肿瘤细胞同样具有杀伤作用。

NK细胞对癌细胞的杀伤作用具有直接、灵敏、反应速度快等特点。

它不需要提前"记住"癌细胞的任何特征，或识别癌细胞表面的特异性蛋白分子，在肿瘤早期或癌细胞很少的情况下即可发挥作用。

NK细胞的培养要点NK细胞（如NK-92细胞）是重要的免疫细胞，并且在体外的培养中需要特别注意以下事项：1. 培养基准备：使用无菌和新鲜配制的培养基，如RPMI-1640。

培养基中应添加适量的IL-2，以维持细胞的生长和活力。

IL-2的保存温度一般为-20℃，解冻后放置在4℃冰箱保存。

使用前预热，使用完毕后立即放回4℃冰箱保存，不超过两周。

2. 细胞密度和补液：细胞应保持在适宜的密度范围内，不宜过于密集或过稀。

细胞补液周期一般为2-3天。

可以交替使用半量换液和离心换液法。

半量换液2-3次后，离心全部换液一次。

在补液过程中，也要及时补充适量的IL-2。

3. 观察和处理细胞聚集物：NK-92细胞在培养过程中常常形成细胞团块，这是正常现象。

细胞团块可以适当吹散，但不必刻意将其分散成单颗细胞。

过度吹散会导致细胞损伤和细胞死亡。

对于过于庞大的细胞团块，可进行分散处理，以确保细胞的均匀生长。

4. 细胞传代：细胞传代是保持细胞活力和增殖的重要步骤。

传代时，应使用适当的酶消化液，如trypsin，轻轻松弛细胞团块，并进行细胞计数和分配。

传代后的细胞应补充适量的新鲜培养基和IL-2。

5. 细胞冻存：对于长期保存和备份细胞，冻存是必要的。

在冻存前，细胞应处于健康和活跃的状态。

推荐使用合适的冻存液（如90% FBS和10% DMSO 的混合液），将细胞分装至冻存管中，并按照标准的冻存程序进行冷冻保存。

注意控制冻存速度和温度。

6. 细胞复苏：细胞从冻存状态复苏时，应谨慎操作。

将冻存管放入37℃水浴中，迅速退冰，并将细胞悬液转移到新鲜的培养基中。

注意在复苏过程中避免过度吸吮和吹打，以减少细胞损伤。

NK细胞的培养需要严格注意培养基的配制和细胞处理的细节，以确保细胞的健康生长和活性。

在培养中遵循标准的操作流程，并进行定期的细胞观察和细胞传代，有助于获得高质量和可重复的实验结果。

我们的实验室仪器类产品包括多种类型的实验室培养箱，如CO2培养箱、CO2摇床、全温振荡培养箱、恒温恒湿培养箱、生化培养箱、霉菌培养箱、BOD培养箱、低温培养箱等。

阿达帕林与多西他赛联用能有效激活前列腺癌细胞衰老、增强NK细胞抗肿瘤活性《海南医学》编辑部(翻译\整理)【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2024(35)7【摘要】前列腺癌(prostate cancer,PCa)是全球男性肿瘤相关死亡的第二大原因。

标准化疗并不能显著提高患者的总体生存率。

有研究证明,促衰老治疗可以抑制肿瘤生长。

肿瘤细胞衰老后表现为衰老相关分泌表型(senescence-associated-secretory phenotype,SASP),即在肿瘤微环境中保持代谢活跃并分泌多种细胞因子和炎症因子。

肿瘤细胞SASP是一把双刃剑。

它一方面可以激活免疫反应清除衰老细胞而抑制肿瘤生长(肿瘤抑制型SASP,tumor-suppressive SASP),另一方面则会刺激肿瘤细胞生长,血管生成、转移和治疗抵抗(肿瘤促进型SASP,tumor-promoting SASP)。

如果肿瘤免疫反应不能清除衰老的肿瘤细胞,那么这些持续存在的衰老肿瘤细胞可能会导致肿瘤复发。

因此,开发安全可靠的促衰老疗法、营造肿瘤抑制型SASP对抗肿瘤治疗至关重要。

【总页数】2页(PF0004)【作者】《海南医学》编辑部(翻译\整理)【作者单位】不详【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.榄香烯对肝癌腹水瘤细胞系Hca-F25／CL-16A3的抗肿瘤作用机理研究——Ⅰ．对小鼠NK细胞毒性、巨噬细胞活性及脾细胞增殖的影响2.抑制STAT3表达增强多西他赛对人前列腺癌细胞的抗肿瘤作用3.Hsp90靶向抑制多肽P7与多西他赛联用对肺腺癌细胞系A549的协同抗肿瘤作用4.NK与淋巴因子激活的NK细胞的抗肿瘤作用与杀伤机制研究5.NK与淋巴因子激活的NK细胞的抗肿瘤作用与杀伤机制研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。