巨噬细胞和MMP_9对肺成纤维细胞增生及合成_型胶原的作用_宋良文
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肿瘤相关成纤维细胞 巨噬细胞极化
肿瘤相关成纤维细胞巨噬细胞极化随着医学研究的不断深入，人们对肿瘤的认识也越来越深刻。
作为一种复杂的疾病，肿瘤的发生和发展涉及到许多细胞和因素的相互作用。
其中，成纤维细胞和巨噬细胞的极化现象备受关注，因为它们在肿瘤微环境中扮演着重要的角色。
本文将探讨肿瘤相关成纤维细胞和巨噬细胞极化的相关机制和意义。
一、成纤维细胞1. 肿瘤相关成纤维细胞的概念成纤维细胞是一种具有分泌纤维蛋白、胶原蛋白和其他细胞外基质分子能力的细胞，广泛存在于各种组织中。
在肿瘤的微环境中，成纤维细胞不仅可以促进肿瘤细胞的增殖和侵袭，还能够调节免疫应答和药物抵抗。
2. 肿瘤相关成纤维细胞的来源和识别肿瘤相关成纤维细胞通常来自于局部组织中的活化或转化的成纤维细胞、间质细胞和骨髓间充质干细胞。
它们被识别为CD90、α平滑肌肌动蛋白和胶原蛋白I等标志物阳性细胞，和具有趋化性和趋化因子的等特殊功能。
3. 肿瘤相关成纤维细胞的功能和机制肿瘤相关成纤维细胞通过分泌细胞因子、细胞外基质分子和表观遗传学调控等多种途径影响肿瘤细胞和肿瘤免疫应答。
它们在肿瘤的发生、发展和治疗过程中起到了重要的调节作用。
二、巨噬细胞1. 肿瘤相关巨噬细胞的概念巨噬细胞是一种重要的免疫细胞，在肿瘤微环境中扮演着重要的双重作用。
与成纤维细胞相比，巨噬细胞的极化现象对肿瘤的病理生理过程有着更加显著的影响。
2. 肿瘤相关巨噬细胞的来源和识别肿瘤相关巨噬细胞可以来自于局部组织中的巨噬细胞前体细胞、外周血单核细胞、骨髓细胞和肿瘤细胞本身。
它们通常被识别为CD68、CD163和CD206等标志物阳性细胞，以及具有吞噬、分泌和抗原呈递等特殊功能。
3. 肿瘤相关巨噬细胞的功能和机制肿瘤相关巨噬细胞在肿瘤微环境中可以通过不同的极化状态（M1型和M2型）对肿瘤细胞、肿瘤微环境和免疫应答产生显著的影响。
它们参与了肿瘤的发生、发展和治疗，并成为了肿瘤免疫治疗的重要靶点。
三、成纤维细胞和巨噬细胞的相互作用1. 成纤维细胞和巨噬细胞在肿瘤微环境中的相互作用肿瘤相关成纤维细胞和巨噬细胞之间存在着复杂的相互作用。
巨噬细胞与成纤维细胞作用的研究套路
巨噬细胞与成纤维细胞作用的研究套路巨噬细胞与成纤维细胞作用的研究套路可以包括以下几个步骤：
1. 巨噬细胞与成纤维细胞的分离和培养：通过适当的分离方法，将巨噬细胞和成纤维细胞从组织中分离出来，并在适当的条件下进行培养。
2. 观察巨噬细胞与成纤维细胞的相互作用：可以通过共培养、荧光染色、免疫荧光染色等技术观察巨噬细胞与成纤维细胞之间的相互作用。
3. 检测巨噬细胞与成纤维细胞之间的信号转导：通过检测相关的信号分子、激酶活性等，研究巨噬细胞与成纤维细胞之间的信号转导机制。
4. 基因敲除或药物干预：通过基因敲除技术或药物干预手段，研究特定基因或药物对巨噬细胞与成纤维细胞相互作用的影响。
5. 动物模型验证：将分离培养的巨噬细胞与成纤维细胞注入动物模型中，观察其在体内的相互作用和效果。
6. 临床样本分析：收集临床样本，通过免疫组化、qPCR、Western blot等技术分析巨噬细胞与成纤维细胞的相关指标，进一步验证研究结果。
7. 总结与展望：对整个研究过程进行总结，分析结果，并针对不足之处提出展望，为未来的研究提供思路和方向。
通过以上研究套路，可以深入探究巨噬细胞与成纤维细胞之间的相互作用及其在疾病中的作用，为相关疾病的诊断和治疗提供新的思路和方法。
巨噬细胞在肺纤维化的发病机制研究进展
巨噬细胞在肺纤维化的发病机制研究进展黄雁超【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2015(044)021【总页数】4页(P2999-3002)【关键词】巨噬细胞;肺纤维化;巨噬细胞分类【作者】黄雁超【作者单位】北京中医药大学基础医学院 100029【正文语种】中文【中图分类】R563.1巨噬细胞由组织中能增殖的巨噬细胞、造血干细胞、血液中的单核细胞增殖分化而来。
传统观点认为，巨噬细胞作为机体防御系统的一部分防止外来入侵，但过去几十年研究表明巨噬细胞通过各种途径参与发育过程和维持组织稳态[1]。
巨噬细胞在肺纤维化的发病机理中起重要作用，参与肺纤维化中组织异常的调节修复，本文对巨噬细胞在肺纤维化中的作用作一综述。
根据体外研究巨噬细胞表型及功能，可以将其分为M1与M2两种：M1巨噬细胞由IFN-γ和TNF-α诱导活化；M2巨噬细胞由IL-4和IL-13激活，具有M2a、M2b、M2c 3种亚型。
由于缺乏特异性的分子标记，很难将组织巨噬细胞按照这种分类方法进行分类。
根据巨噬细胞在肺部分布情况分为两个亚群：肺泡巨噬细胞(AMs)和间质巨噬细胞(IMs)；AMs排列在肺泡的表面，IMs存在于肺泡上皮细胞与血管上皮细胞之间[2]。
AMs并非直接来源于血液单核细胞，而是由IM分化而来。
IM是单核细胞与AMs之间的一种过渡类型。
尽管IM与AMs存在功能差异，但他们都是维持肺组织稳态，对抗病原物的一线卫士。
在不影响正常气体交换的情况下，他们的表型能够随周围组织环境而改变，能够快速处理病原物。
肺纤维化时，巨噬细胞数量和表型都会发生改变。
肺纤维化是由细胞外基质过度沉积导致的肺部疾病。
细胞外基质形成是肺损伤后组织修复的一个重要过程；持续损伤会导致异常修复，从而导致纤维化。
纤维化病灶可局部存在于肺部，例如在肺结核和真菌感染之后。
弥漫性纤维化，如结节病、特发性肺纤维化(IPF)、纤维化过程则弥漫贯穿整个肺部[6]。
为了更好阐明肺纤维化发病机制与巨噬细胞的作用，将组织损伤修复分为4个阶段：急性修复的凝血阶段；炎症阶段；永久修复的瘢痕形成，组织纤维化阶段；瘢痕组织分离，组织稳态恢复阶段。
肺纤维化的发病机制及关键靶点
作者单位I 1O O O 21北京9中国协和医科大学中国医学科学院实验动物研究所病理室通讯作者I 秦川肺纤维化的发病机制及关键靶点孔 琪 秦 川肺纤维化<p u l m o n a r y fi b r o s i s 9P F >是由多种原因引起的弥漫性肺部炎性疾病9病变主要累及肺间质9也可累及肺泡上皮细胞及肺血管o 现在有观点认为9细胞损害和成纤维细胞的活化都是早期病变9肺纤维化不是单纯的损伤修复过程9在病变早期就可以观察到胶原纤维形成[1]o 近年来人们对上皮损伤在肺纤维化中的作用进行了广泛研究9取得了大量的研究成果o1 发病原因P F 比较明确的病因有吸入无机粉尘\有机粉尘\气体\病毒\细菌\真菌\寄生虫\药物及放射性损伤等o 有很多肺纤维化病因不明9称之为特发性肺纤维化<I P F >o 肺纤维化有家族聚集性9提示遗传因素在肺纤维化的发生过程中也起到一定的作用o 其它如自身免疫疾病和血管胶原性疾病等均可引起肺部纤维化病灶的出现o 在S A R S 患者中9肺纤维化也是一个重要的临床表现和后遗症o 不同病种的肺间质纤维化改变都从肺泡炎开始9在发展和修复过程中导致肺纤维化的倾向有共同之处[2]o2 肺纤维化发生机制2.1 肺泡上皮细胞受损 肺部受感染或损伤后9首先肺泡上皮细胞和<或>血管内皮细胞受损o 肺上皮损伤[3]是引起肺纤维化的重要因素之一9I 型上皮细胞受损9H 型上皮细胞增生o 增生的H 型上皮细胞和受损的血管内皮细胞产生大量的细胞因子9刺激炎症细胞的聚集\活化和一系列的连锁反应o 包括血小板衍生生长因子<P D G F >\转化生长因子<T G F -a \T G F -p >\内皮素-1<E T -1>\前列腺素F 2a <P G F 2a >等参与肺损伤过程o 卢韶华等[4]研究发现在肺纤维化早期大鼠肺泡H 型上皮细胞基因转录水平明显增高9通过释放膜型基质金属蛋白酶-1<m e m b r a n et y p e1-m a t r i x m e t a l l o p r o t e i n a s e 9MT 1-MM P >9催化基质金属蛋白酶-2<MM P -2>9从而引起和<或>加重肺基膜的损伤o 姜莉等[5]研究血管内皮细胞亚型由以血栓调节蛋白<t h r o m b o m o d u l i n 9TM >表达为主型转变为以与因子删相关抗原<v o nW i l l e b r a n d f a c t o r 9v W F >表达为主型的转变9认为v M F 抗原可被认为是内皮细胞损伤的标志物o 李翔[6]认为肺纤维化以肺泡上皮细胞凋亡导致肺泡结构破坏和肺成纤维细胞增生为特征o2.2 巨噬细胞活化 活化的肺泡巨噬细胞<a l v e o l a rm a c r o p h a ge 9AM >释放的细胞因子和炎性递质在早期肺损伤中起主要作用[7]o AM 活化后T G F -p\P D G F 和I G F -1是致纤维化的生长因子9在早期分泌增多9同时启动肺纤维化的过程9形成不可逆性肺损伤o T G F -p 是重要的致纤维化生长因子9能刺激成纤维细胞增殖和胶原合成9促进胶原蛋白\纤维连接蛋白\透明质酸\蛋白聚糖等在细胞外基质中沉积9减少细胞外基质的降解o P D G F 和I G F -1也是重要的致纤维化生长因子9能刺激平滑肌细胞\成纤维细胞增殖和胶原合成o2.3 炎症细胞聚集和活化 在趋化因子的介导下中性粒细胞向着病变部位趋化\聚集和活化9短时间内就可释放氧自由基9弹性硬蛋白酶\组织蛋白酶和胶原酶等损伤肺组织o 淋巴细胞在肺间质纤维化的患者肺间质中经常存在9可释放I L -4\成纤维母细胞趋化因子\单核细胞趋化因子和巨噬细胞趋化因子等o 这些肺实质细胞9炎性细胞之间的相互作用9生成的炎性介质以及生长因子9最后作用于成纤维母细胞9造成成纤维母细胞增生和胶原形成o2.4 纤维细胞增生和胶原产生 正常生理情况下9成纤维细胞生长存在精确的调控9肺内胶原的合成与降解处于平衡状态o P G E -2\I N F -Y \成纤维细胞移动抑制因子等均属于负调节因子o I \皿型胶原的异常表达9主要发生于肺纤维化的中\后期9而w 型胶原的变化在肺纤维化早期就非常突出o 在肺纤维化中存在一种编码P D G F 的C -s i s 基因9与转移性病毒癌基因V -s i s 非常相似o 因此肺纤维化的发生是否代表了成纤维细胞的负调节失效\抑或成纤维细胞的 肿瘤性 增生9是十分饶有兴趣的问题o 近年来9金属蛋白酶<MM P s >和组织型金属蛋白酶抑制剂<T I M P >比例失调在肺纤维化胶原代谢紊乱的作用已引起重视o I P F 患者纤维化病灶内T I M P -2活性增高o2.5 细胞凋亡 已经有大量的实验结果显示9细胞凋亡在肺纤维化中起着重要的作用o F a s\级联酶\-133-国外医学呼吸系统分册 2O O 5年 第25卷 第5期 S e c tR e s p i r S y sF o r e i g n M e dS c i 9M a y 2O O 59V o l .25.N o .5T N F-a活性氧自由基R O S N O血管紧张素转换酶A C E T G F-p p53和p21I L-6都可促进F A S 介导的凋亡F a s-F a s L诱发的凋亡促进I L-1b e t a 分泌中性粒细胞聚集和上皮细胞的缺失在肺部疾病模型中炎症和纤维化可以通过干扰F a s-F a s L 的相互作用或下调级联反应而控制提示F a s-F a s L 信号传导途径可能是治疗肺纤维化的新靶点83细胞因子在肺纤维化发病中的作用及机制细胞因子在肺纤维化中的作用是目前研究的热点大量细胞因子之间及其与炎症细胞肺脏组织细胞之间可以相互作用发生一系列复杂的反应加重肺组织炎症或免疫损伤刺激纤维母细胞分裂增殖促进细胞外基质的产生和沉积肺纤维化的发生是以细胞因子网络调控失衡导致大量趋化因子释放从而引起炎性细胞聚集活化为基础3.1生长因子T G F-p是一种多效性的细胞因子是目前的肺纤维化研究热点和重要的药物作用靶点T G F-p对成纤维细胞作用主要表现在两大方面一方面它能刺激成纤维细胞合成细胞外基质成分另一方面抑制对新合成的基质蛋白产生的酶解作用还具有抑制肺泡上皮细胞a l v e o l a re p i t h e l i a l c e l l A C E s增殖的作用T G F-p能诱导肺脏高水平表达结缔组织生长因子C T G F人血清和糖皮质激素依赖激酶h S G K-1和MM P-2而加速肺纤维化的发生Z h a n g等9研究发现T G F-p可活化蛋白激酶C-6P K C-6用特定的s i R N A阻断P K C-6可以恢复T G F-p诱导的S m a d-7的水平并能减少T G F-p介导的胶原纤维的合成因此P K C-6可能在肺纤维化发生中起关键性作用T G F-p1通过受体T p R I T p R I I作用于肌成纤维细胞炎症细胞免疫细胞和结构细胞该受体表达增加则提高肺组织对T G F-p1的反应性加速肺纤维化形成1Ob F G F因可以促进成纤维细胞的增生和胶原纤维的合成而被认为是另一个与肺纤维化有关的细胞因子目前认为肺内的I G F-1是重要的致肺纤维化因子之一其含量增高与肺纤维化的严重程度成正比I G F-1与大鼠成纤维细胞I G F-1R受体结合后通过G R B2S O S还激活r a s基因的蛋白产物p21诱导细胞内D N A合成而发挥作用113.2白介素动物实验证实I L-1受体拮抗剂I L -1r a可明显减轻博莱霉素B L M或二氧化硅诱发的肺纤维化I L-4是C D4+T细胞中H型辅助性T 细胞T h2和C D8+T C2细胞等分泌的一种有多种生物学活性的淋巴因子具有使肺表面活性物质S P-D表达增加促进成纤维细胞增生胶原基因表达以及胶原合成功能12当I L-4表达增加将会导致H 型细胞因子活性过度增加和I型细胞因子反应的抑制I L-8水平的增高可趋化大量中性粒细胞聚集在肺内具有放大炎症反应及促进肺成纤维细胞增殖的作用I L-1O可以抑制T h1细胞的增殖促进B 细胞的增殖M C H类抗原表达以及I g的分泌当以I L-1O表达为主的T h2细胞因子占优势时纤维化就可能发生24I L-12基因敲除的小鼠与对照组相比肺内单核细胞的浸润减轻但肺纤维化程度加重提示I L-12能提高淋巴组织细胞的炎性反应以及能抑制肺纤维化的晚期发展可能通过调节I F N-Y的产生来起作用25I L-18是肺纤维化中重要的前炎症因子不仅参与早期的肺损伤和炎症的维持发展也可能参与纤维化的形成I L-18具有上调黏附分子I C AM-1的表达和功能诱导趋化因子M C P-1和M I P-1促进I L-1p T N F a和GM C S F 的表达上调N F-。
mmp9参考范围
mmp9参考范围MMP9（Matrix Metallopeptidase 9）是一种属于基质金属蛋白酶（Matrix Metallopeptidases）家族的酶，也被称为凝胶酶B （Gelatinase B）。
它是由MMP9基因编码的蛋白质，在许多生理和病理过程中发挥重要作用。
MMP9主要在中性粒细胞、巨噬细胞、纤维母细胞等多种细胞中表达，也广泛存在于多种组织和器官中。
MMP9在正常生理条件下参与胶原蛋白的降解、基底膜的重塑和细胞迁移等过程。
它能够剪切和降解基质中的胶原蛋白，破坏基底膜的完整性，并参与细胞外基质的重塑和重建。
此外，MMP9还能够调节细胞外基质的释放，影响细胞迁移、增殖和分化过程。
然而，当MMP9异常表达或活性过高时，会导致多种病理情况的发生。
研究表明，MMP9参与了多种炎症性疾病，如风湿性关节炎、炎症性肠病、动脉粥样硬化等的发展和进展。
MMP9还与肿瘤的发生、侵袭和转移相关。
肿瘤细胞产生大量的MMP9，促进肿瘤细胞穿透血管壁并进行迁移侵袭，从而影响肿瘤发展和预后。
此外，研究还发现MMP9在神经系统中具有重要的作用。
它参与了中枢神经系统的发育和重塑，对神经元迁移、突触形成和突触可塑性起调节作用。
MMP9还参与了多种神经退行性疾病的发生和发展，如阿尔茨海默病、帕金森病和多发性硬化症等。
在临床上，MMP9已被广泛应用于多种疾病的诊断和预后评估。
例如，在心脑血管疾病中，MMP9的水平与动脉壁的炎症程度、斑块的脆性和动脉瘤的形成相关。
通过检测血液中MMP9的水平，可以评估疾病的发展和预后，并指导治疗策略的选择。
近年来，研究人员对MMP9的调控机制进行了深入研究，以寻找潜在的治疗靶点。
研究表明，多种信号通路和因子调控MMP9的表达和活性，如核因子-κB（NF-κB）通路、细胞外基质金属蛋白酶抑制物（TIMPs）、转录因子等。
针对MMP9的抑制剂已经被开发出来，并且在临床试验中显示出潜在的治疗效果和应用前景。
巨噬细胞与肺纤维化的相关研究进展
2 巨噬细胞在肺纤维化中的作用
巨 噬 细 胞 在 原 有 的 吞 噬 细 菌 能 力 的 基 础 外 ，还参 与 伤 口修复的过程，其 中 ，M l型巨噬细胞主要以促使 炎症 反 应 为 主 ，M2 型巨噬细胞具有较强的抗炎活性，
M2 型 巨 噬 细 胞 在 伤 口 愈 合 和 纤 维 化 中 起 到 重 要 作 用' 同 时 M2 型 巨 噬 细 胞 还 可 以 拮 抗 M l巨噬细胞的 活 性 ，这对于激活伤口愈合反应和恢复组织稳态有着 至 关 重 要 。同 时 也 有 研 究 表 明 ，M l型巨噬细胞在组 织 修 复 中 可 以 转 化 成 具 有 抗 炎 活 性 的 M2 型巨噬 细胞丨10丨。
关键词 ：巨 噬 细 胞 巨 噬 细 胞 极 化 肺 纤 维 化 doi: 10.11842/wst.20201111012 中 图 分 类 号 ：R563 文 献 标 识 码 ：A
肺 纤 维 化 （ pulmonary fibrosis,PF)是 一■种广泛的 异致性终末期的慢性间充质性肺疾病,其特征是细胞 外 基 质 过 度 沉 积 和 肺 实 质 破 坏 。 由于遗传易感性和 各 种 环 境 风 险 因 素 包 括 病 毒 ，细 菌 ，香 烟 烟 雾 ，木 屑 ， 石 屑 等 引 起 的 刺 激 而 引 起 肺 泡 上 皮 细 胞 损 伤 、成纤维 细 胞 增 殖 、成纤维细胞向肌成纤维细胞转化和胶原的 形成并引起病理性的细胞外基质沉积,降低肺的顺应 性 ，导致气体交换受阻、肺 功 能 急 剧 下 降 、呼吸困难等 器 官 功 能 障 碍 ，最 终 发 展 成 为 呼 吸 衰 竭 而 危 及 生 命 的 纤维化间充质疾病m。近 些 年 对 PF治疗的研究有了深 人 的 发 展 ，但 是 对 于 PF 发 病 机 制 的 认 识 仍 不 十 分 清楚。
巨 噬 细 胞 在 原 有 的 吞 噬 细 菌 能 力 的 基 础 外 ，还参 与 伤 口修复的过程，其 中 ，M l型巨噬细胞主要以促使 炎症 反 应 为 主 ，M2 型巨噬细胞具有较强的抗炎活性，
M2 型 巨 噬 细 胞 在 伤 口 愈 合 和 纤 维 化 中 起 到 重 要 作 用' 同 时 M2 型 巨 噬 细 胞 还 可 以 拮 抗 M l巨噬细胞的 活 性 ，这对于激活伤口愈合反应和恢复组织稳态有着 至 关 重 要 。同 时 也 有 研 究 表 明 ，M l型巨噬细胞在组 织 修 复 中 可 以 转 化 成 具 有 抗 炎 活 性 的 M2 型巨噬 细胞丨10丨。
关键词 ：巨 噬 细 胞 巨 噬 细 胞 极 化 肺 纤 维 化 doi: 10.11842/wst.20201111012 中 图 分 类 号 ：R563 文 献 标 识 码 ：A
肺 纤 维 化 （ pulmonary fibrosis,PF)是 一■种广泛的 异致性终末期的慢性间充质性肺疾病,其特征是细胞 外 基 质 过 度 沉 积 和 肺 实 质 破 坏 。 由于遗传易感性和 各 种 环 境 风 险 因 素 包 括 病 毒 ，细 菌 ，香 烟 烟 雾 ，木 屑 ， 石 屑 等 引 起 的 刺 激 而 引 起 肺 泡 上 皮 细 胞 损 伤 、成纤维 细 胞 增 殖 、成纤维细胞向肌成纤维细胞转化和胶原的 形成并引起病理性的细胞外基质沉积,降低肺的顺应 性 ，导致气体交换受阻、肺 功 能 急 剧 下 降 、呼吸困难等 器 官 功 能 障 碍 ，最 终 发 展 成 为 呼 吸 衰 竭 而 危 及 生 命 的 纤维化间充质疾病m。近 些 年 对 PF治疗的研究有了深 人 的 发 展 ，但 是 对 于 PF 发 病 机 制 的 认 识 仍 不 十 分 清楚。
巨噬细胞对组织的修复、再生和纤维化的调节作用研究进展
Ｋｏｒｆ—Ｋｌｉｎｇｅｂｉｅｌ等 从 类 似 人 生 物 信 息 分 泌 蛋 白组 学分 析 发 现 了 Ｃ１９ｏｒｆｌ０，一 个 巨噬 细 胞 来 源 的 生长 因子 ，由染 色体 ｌ９上 的 开放 阅读 框 编 码 而 来 ，能诱 导 急性 心肌 梗 死 后 心肌 细胞 的存 活和 促 血 管 生成 。这 项研 究说 明 了生 长 因子对 于急性 心肌 梗 死组 织修 复 的 关键 作 用 ，而 且极 有 可 能是 由修 复 性 的 巨噬 细胞群 产 生分 泌 而来 的。
【关键词】 巨噬细胞；表型转化 ；炎症 ；修复；纤维化 ；再生
组 织 巨噬 细胞 是指 体 内根据 组 织 来源不 同命 名 的 巨噬 细胞 ，成 熟 个体 中的 巨噬 细胞 大 多都 是 由循 环 的 单核 细胞衍 生 而 来。组 织 巨噬 细胞 一般 分 为三 种 ：由髓 系发 育分 化 而 来 ，卵黄 囊衍 生 而 来 ，局 部 自 我 增 殖。根 据 其功 能 又可 分 为 经 典 活化 型 、创 伤修 复型和 调 节型 三类 ，还 有 一 些 亚 型 的 巨噬 细 胞 具 有 上 述任 意 的 两种特 性 。单 核／巨噬 细 胞 不仅 具 有 组 织修 复 的功 能 ，在 组 织 的 纤维 化 和 再 生 中也起 着 关键 性 的作 用 。在 组 织损 伤 相 当严 重 时 ，巨噬 细 胞活化干细胞和局部祖细胞参与修复 ，此时的单核／ 巨噬 细 胞主 要 是 抗 炎表 型 （Ｍ２型 ），分 泌 多种 抗 炎 介 质 ，如 白细 胞介 素 （ＩＬ）一１０、转化 生 长 因子 一８ （ＴＧＦ—Ｊ３ ），抑 制免 疫 系统 ，减轻 炎 症反应 Ｊ。如 炎 症控 制 失衡 ，可致 细胞 死 亡 ，修 复延 迟 。 因此 必须协 调好 各 个 阶段 的组 织修 复。 同时炎症介 质 和 生长 因 子 分泌 紊乱 和抑 制 巨噬 细胞 生成 能 力的 下 降 ，也 与 慢 性 损伤 息 息相 关 ，最 终 导 致 病 理 性 纤 维 化 形 成 。 目前研 究比较清楚的巨噬细胞类型主要是具有促 炎 作 用的促 炎表 型 （Ｍ１型 ）巨噬 细 胞 和 Ｍ２型 巨噬 细 胞 。在许 多疾病 中，巨噬 细胞 不仅 存 在 着这 两种 功 能 ，还 有促 纤 维化 、抗 纤 维化 、促 溶 解 和 组 织 再 生等 功 能 ，其 具体 特征 尚不明确 。近 年 来 ，如 何鉴 定调 节 不 同阶段 组 织修 复 的 各 种 类 型 的 巨噬 细 胞 及 其 特 征 ，已经是 研 究 的 重 点。 尤其 是 组 织 巨噬 细 胞 的作 用是 重要 的研 究领 域 。 目前 也有很 多证据 证 实不 同 类型 的单核／巨噬 细胞在 组 织修 复 、纤维化 和 再 生阶 段 发挥 其 独 特 和 关键 性 的作 用 。但 是 目前 尚 不 清楚 的是 巨噬 细胞 单 独 适 应 局 部 微 环 境 变 化 ，然后
【关键词】 巨噬细胞；表型转化 ；炎症 ；修复；纤维化 ；再生
组 织 巨噬 细胞 是指 体 内根据 组 织 来源不 同命 名 的 巨噬 细胞 ，成 熟 个体 中的 巨噬 细胞 大 多都 是 由循 环 的 单核 细胞衍 生 而 来。组 织 巨噬 细胞 一般 分 为三 种 ：由髓 系发 育分 化 而 来 ，卵黄 囊衍 生 而 来 ，局 部 自 我 增 殖。根 据 其功 能 又可 分 为 经 典 活化 型 、创 伤修 复型和 调 节型 三类 ，还 有 一 些 亚 型 的 巨噬 细 胞 具 有 上 述任 意 的 两种特 性 。单 核／巨噬 细 胞 不仅 具 有 组 织修 复 的功 能 ，在 组 织 的 纤维 化 和 再 生 中也起 着 关键 性 的作 用 。在 组 织损 伤 相 当严 重 时 ，巨噬 细 胞活化干细胞和局部祖细胞参与修复 ，此时的单核／ 巨噬 细 胞主 要 是 抗 炎表 型 （Ｍ２型 ），分 泌 多种 抗 炎 介 质 ，如 白细 胞介 素 （ＩＬ）一１０、转化 生 长 因子 一８ （ＴＧＦ—Ｊ３ ），抑 制免 疫 系统 ，减轻 炎 症反应 Ｊ。如 炎 症控 制 失衡 ，可致 细胞 死 亡 ，修 复延 迟 。 因此 必须协 调好 各 个 阶段 的组 织修 复。 同时炎症介 质 和 生长 因 子 分泌 紊乱 和抑 制 巨噬 细胞 生成 能 力的 下 降 ，也 与 慢 性 损伤 息 息相 关 ，最 终 导 致 病 理 性 纤 维 化 形 成 。 目前研 究比较清楚的巨噬细胞类型主要是具有促 炎 作 用的促 炎表 型 （Ｍ１型 ）巨噬 细 胞 和 Ｍ２型 巨噬 细 胞 。在许 多疾病 中，巨噬 细胞 不仅 存 在 着这 两种 功 能 ，还 有促 纤 维化 、抗 纤 维化 、促 溶 解 和 组 织 再 生等 功 能 ，其 具体 特征 尚不明确 。近 年 来 ，如 何鉴 定调 节 不 同阶段 组 织修 复 的 各 种 类 型 的 巨噬 细 胞 及 其 特 征 ，已经是 研 究 的 重 点。 尤其 是 组 织 巨噬 细 胞 的作 用是 重要 的研 究领 域 。 目前 也有很 多证据 证 实不 同 类型 的单核／巨噬 细胞在 组 织修 复 、纤维化 和 再 生阶 段 发挥 其 独 特 和 关键 性 的作 用 。但 是 目前 尚 不 清楚 的是 巨噬 细胞 单 独 适 应 局 部 微 环 境 变 化 ，然后
mmp9因子 -回复
mmp9因子-回复什么是mmp9因子？mmp9因子，全称为基质金属蛋白酶9（Matrix Metalloproteinase 9），是一种溶酶体蛋白酶。
溶酶体蛋白酶是一类以质膜为目标的酶，其主要功能是调控细胞外基质的降解和清除。
MMP9主要由体内的中性粒细胞、巨噬细胞和内皮细胞产生，它在多种疾病的发展过程中发挥重要作用。
MMP9的生物学功能MMP9主要在体内参与组织的修复和重塑过程。
在正常生理条件下，MMP9的表达级别较低，维持组织的稳定。
然而，在许多疾病过程中，MMP9的表达会显著增加。
首先，MMP9在炎症反应中起着重要的作用。
当组织受到感染或损伤时，炎症细胞会释放细胞因子，刺激MMP9的产生。
MMP9能够降解基质蛋白，包括胶原蛋白和纤维连接蛋白等，从而促进炎症细胞的迁移和炎症介质的释放。
这一过程有助于清除病原微生物和坏死组织，并加速伤口修复。
其次，MMP9也参与肿瘤的发展和转移。
炎症反应的持续存在和MMP9的过度激活会对正常组织产生损害，并为肿瘤细胞的生长和扩散提供合适的环境。
MMP9降解基质蛋白，破坏基质的组织障碍，在肿瘤侵袭和转移过程中发挥重要作用。
因此，MMP9被认为是肿瘤治疗的潜在靶点。
最后，MMP9还参与心血管疾病的发展。
近年来的研究发现，MMP9与动脉粥样硬化的形成密切相关，它能降解血管内膜的基质蛋白，导致血管壁的脆弱和破损，进而促进血栓的形成。
此外，MMP9还参与血液-脑屏障和血-视网膜屏障的破坏，与脑卒中和糖尿病视网膜病变相关。
如何调控mmp9因子的产生？考虑到MMP9在多种疾病中的作用，调控其产生和活性对于疾病的预防和治疗具有重要意义。
目前，有多种方法可以调控MMP9的表达和活性。
首先，这可以通过调节细胞信号转导途径来实现。
许多细胞因子和激活剂能够诱导MMP9的合成和释放，包括肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和血小板衍生生长因子（PDGF）等。
巨噬细胞纤维化指标
巨噬细胞纤维化指标巨噬细胞纤维化是一种与慢性炎症相关的疾病，其发展在很大程度上依赖于巨噬细胞的激活和积聚。
巨噬细胞是免疫系统的一部分，起到清除病原体和垃圾细胞、调节免疫反应和组织修复等重要作用。
然而，当巨噬细胞受到过度激活或损伤时，它们会释放大量的炎症介质，导致组织纤维化。
那么，巨噬细胞纤维化的指标有哪些呢？以下是一些常见的巨噬细胞纤维化指标。
1.血清纤维连接蛋白（FN）：纤维连接蛋白是一种重要的细胞外基质蛋白，其积累可以促进纤维化过程。
测量血清中纤维连接蛋白水平可以反映巨噬细胞纤维化的程度。
2.血清基质金属蛋白酶（MMP）：基质金属蛋白酶是一种调节基质降解和重建的酶类。
在巨噬细胞纤维化过程中，MMP的平衡会被破坏，导致基质积聚和纤维化。
检测血清中MMP水平可以帮助评估纤维化的程度。
3.核因子-κB（NF-κB）：NF-κB是一种调节炎症反应和免疫反应的重要转录因子。
在巨噬细胞纤维化中，NF-κB的活性通常会增加，促进炎症介质的释放，并参与巨噬细胞的激活和纤维化。
因此，监测NF-κB的活性可以作为评估巨噬细胞纤维化的指标之一4.细胞因子和趋化因子：巨噬细胞纤维化过程中，许多细胞因子和趋化因子会被激活和释放，促进炎症反应和巨噬细胞的聚集。
例如，白介素-1β（IL-1β）、转化生长因子-β1（TGF-β1）和间质细胞源性肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等。
检测这些因子的水平可以用来评估巨噬细胞的激活和纤维化程度。
5.巨噬细胞相关受体：巨噬细胞上表达的受体与巨噬细胞纤维化密切相关。
例如，TGF-β受体、核因子-κB受体等。
通过检测这些受体的表达情况，可以判断巨噬细胞纤维化过程的进展。
需要注意的是，以上仅仅是一些常见的巨噬细胞纤维化指标，研究人员和医生在具体情况下可能会选择其他更具体和敏感的指标来评估巨噬细胞纤维化。
此外，巨噬细胞纤维化的发病机制十分复杂，还有许多未知的分子和信号通路与其相关，需要进一步的研究来揭示。
mmp9因子 -回复
mmp9因子-回复标题：mmp9因子：结构、功能与潜在应用引言：mmp9因子，全名为基质金属蛋白酶9（Matrix Metalloproteinase 9），是一种重要的蛋白酶，广泛存在于不同细胞和组织中，并参与多种生物学过程。
本文将从结构、功能和潜在应用三个方面对mmp9因子进行深入探讨，并全面阐述其与健康和疾病之间的关系。
一、结构：mmp9因子是一种酶类分子，属于基质金属蛋白酶家族。
其分子量约为92千道尔顿，由707个氨基酸残基组成，并包括一个信号肽、一个原型肽、一个蛋白酶基质区以及一个尾酶区。
mmp9因子的活性主要依赖于其蛋白酶基质区域中的Zn2+离子结合位点。
二、功能：1. 基质降解功能：mmp9因子具有降解多种基质分子的能力，如胶原蛋白、弹力纤维和基底膜等。
这种功能在胚胎发育、组织修复以及肿瘤转移等生理和病理过程中起着重要作用。
2. 促进细胞迁移和侵袭：mmp9因子能够通过降解基质分子，促进白细胞和肿瘤细胞的迁移和侵袭。
这对于炎症反应和肿瘤转移等过程至关重要。
3. 调控细胞外基质的重塑：mmp9因子参与细胞外基质（ECM）的重塑过程，能够调节上皮细胞间的紧密连接和细胞内信号传递。
在胚胎发育和肺纤维化等过程中，mmp9因子的参与是必不可少的。
4. 调控炎症反应：mmp9因子参与炎症反应的调控，其活性可以被一些炎症因子如肿瘤坏死因子和白细胞介素1β等所激活。
通过降解细胞外基质和调节炎症细胞密度，mmp9因子在炎症反应的调节中具有重要作用。
三、潜在应用：1. 肿瘤治疗：mmp9因子在肿瘤转移过程中发挥着重要作用。
研究人员通过抑制mmp9的活性，试图阻止肿瘤细胞的侵袭和转移，并提高肿瘤患者的存活率。
2. 组织修复和再生：mmp9因子参与细胞外基质的降解和重塑过程，对于组织修复和再生至关重要。
因此，利用mmp9因子对基质进行修饰，可以促进组织的修复和再生。
3. 炎症性疾病治疗：由于mmp9的参与，一些炎症性疾病如类风湿性关节炎和炎症性肠病等得到了广泛关注。
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材料和方法
1 .试剂 :小牛血清 FCS 购自杭州四季青生物工 程研究所 , RPMI 1640 培养基系 Sigma 公司产品 , 小 鼠抗人 Col Ⅳ单克隆抗体和相应二抗 、三抗及 DAB 显色液购自武汉博士德生物试剂公司 。
2 .肺泡巨噬细胞(AM)的分离和培养 :二级雄性
· 550 ·
中华放射医学与防护杂志 2006 年 12 月第 26 卷第 6 期 Chin J Radiol Med Prot , December 2006 , Vol 26 , No.6
【Key words】 Radiation pulmonary injury ; Alveolar macrophage ; Fibroblast ; Type Ⅳ Collagen ; Matrix metalloproteinase-9
γ射线胸部照射可使肺内成纤维细胞(Fb)活化 成为肌成纤维细胞(MFb), 合成 Ⅰ 、Ⅲ型胶原的能力 增强[ 1 , 2] , 胶原的沉积导致呼吸膜增厚直至取代肺泡 组织 。基质蛋白酶-9(MMP-9)主要来自炎细胞和呼 吸道上皮细胞 , 能降解细胞外基质成分 , 其主要底物 是Ⅳ型胶原(Col Ⅳ), 而 Col Ⅳ又能 够刺激 MMP-9 的合成及分泌 , 两者之间的相互关系及其在放射性
基金项目 :国家自然科学基金资助项目(30570545) 作者单位 :100850 北 京 , 军事 医学 科学 院放 射与 辐射 医 学研 究所 通讯作者 :宋良文 , Email :Lsong1 @
肺损伤重建中的作用尚未完全明了 。 本研究拟通过 检测分析大鼠胸部照射后肺巨噬细胞条件培养液对 肺成纤维细胞增生和 Ⅳ型胶原合成的作用 , 探讨放 射性肺纤维化早期启动的机制 。
中华放射医学与防护杂志 2006 年 12 月第 26 卷第 6 期 Chin J Radiol Med Prot , December 2006 , Vol 26, No .6
· 549 ·
·基础研及 合成 Ⅳ型胶原的作用
宋良文 孙丽 刁瑞英 李杨 张勇 尹纪业
中华放射医学与防护杂志 2006 年 12 月第 26 卷第 6 期 Chin J Radiol Med Prot , December 2006 , Vol 26, No .6
与其他两组比较 ＊ P <0 .05 图 1 条件培养液对 HLF 增殖的影响
与对照组比较 ＊ P <0 .05 图 2 CMAM 促 HLF 增生作用的时间-效应关系
2 .CMAM 对 HLF 合成 Col Ⅳ的促 进作 用 :经 Western blot 检测和图像分析(电泳分离条带的平均 吸光度 , A 值)证明 , 经 不同因素处理 24 h 后 , CTR 组合成的 Col Ⅳ量较低(MA =0.1864 ±0.06), CMAM (-)组较 CTR 组 为 高(0.442 ±0.02 , P <0.01); CMAM 组 Col Ⅳ 的 量 明 显 高 于 CMAM (-)组
5 .Col Ⅳ胶原检测(Western blot):收集经过同样 处理因素作用后 6 、12 、24 、48 和 72 h 的各组 HLF 提 取细胞总蛋白 , 制备 7.5 %分离胶进行电泳 , 每孔加 蛋白 20 μg , 上样总体积 20 μl , PVDF 转膜 , 10 %脱脂 奶粉 封 闭 3 h , 加 入小 鼠 抗 人 Col Ⅳ 单克 隆 抗体 (1∶1000稀释), 同时做 β-actin 内参照 ;4 ℃摇床过夜 ; 加入生物素标记的 二抗(1∶2000), 摇床常温孵育 1 h , 加入过氧化物酶标记的三抗(1∶2000), 摇床常温 孵育 1 h , ECL 化学发光反应 , X 光底片曝光 , 显影及 定影 , 对电泳条带扫描及图像分析 , 得出条带的平均 吸光度(MA)。试验重复3 次 。
【摘要】 目的 探讨放射性肺纤维化早期 启动的 发生机制 。 方法 灌洗收集 经60 Co γ射 线照 射后的 Wistar 大 鼠肺泡巨噬细胞制备条件培养液 , 刺激培养 的人肺成纤 维细胞增 生 , 用 MTT 法检测 细胞增生活力 , Western blot 检测细胞合成 Ⅳ型胶原含量的改变 , 酶谱分析检测细胞基质金属 蛋白酶9 的活性 。 结果 经条件培养液刺激后 , 人肺成纤维细胞 的增殖 活力明显 增加 , 在 48 ～ 72 h 之 内作 用明显 HLF 合成 Ⅳ型胶原增多 , 12 h 达高峰 , 随后有所 下降 ;12 h 后基质金属 蛋白酶-9 活性开 始增 高 , 于 48 h 达高峰 , 72 h 开始下降 。 结论 20 Gy 60 Co γ射 线能刺激 AM 分泌某些细胞因子促进肺间 质成纤维细胞增生及合成 Ⅳ型胶原 , 与此同时 后者能激活基质金属蛋白酶-9, 降解增多的 Col Ⅳ , 参 与肺损伤早期的重建过程 。
3 .条件培养液(CMAM)的制备 :台盼蓝细胞活 性排斥试验鉴定收集的 AM , 存活 率为 95 %。改用 含 0.2 % FCS 的培养液(5 ml 瓶)继续培养 24 h , 收 集上清作为 CMAM ;收集用同样方法处理的未照射 大鼠的 AM 培养上清作为阴性对照[ CMAM(-)] 。
4 .细胞增殖试验(MTT):人肺成纤维细胞(HLF) 由军事医学科学院毒物药物研究所提供 , 细胞以 3 ×104 ml 接种 于 96 孔板 , 100 μl 孔 , 用含 0 .2 % FCS 的 RPMI 1640 培养液培养 12 h 然后进行分组处 理 :① 对照组(CTR):用含 3.3 % FCS 和 3.3 %PBS 的 1640 培养 ;② CMAM(-)组 :用含 3.3 % FCS 和 3.3 % CMAM(-)的 1640 培养 ;③CMAM 组 :用含 3.3 %FCS 和 3.3 %CMAM 的 1640 培养 。 分别于 6 、 12 、24 、48 和 72 h 加入 MTT 20 μl 孔 , 继续培养 4 h , 测定 570 nm 处的吸光度(A)值 。
6 .酶谱分析 :每组样品取蛋白 25 μg , 与 4 ×样品 缓冲液以 3∶1 混 合 , 于 37 ℃放置 10 min 后 , 4 ℃冷 却 , 用含 0.1 %明胶的 10 %的 SDS-聚丙烯酰胺凝胶 电泳 4 h , 用漂洗缓冲液洗涤凝胶 20 min ×3 次 , 置 于温育缓冲液中 , 在 37 ℃反应 24 h 。 考马斯亮蓝 R250 染色 40 min , 经脱色液 A 、B 、C 分别脱色 30 、60 和 120 min 后照相和图像分析 , 获得条带的平均吸 光度(MA)值 , 取其倒数作为检 测结果 。 试验重复
3次 。 7 .统计学处理 :采用 SPSS 11.0 软件 , 组间差异
比较采用多组间方差分析(F 检验), 然后进行组间 两两比较(q 检验), 数据以均数 ±标准差表示 。
结果 1 .CMAM 对 HLF 增殖的影响 :在 HLF 受 CMAM 刺激后 48 h , MTT 比色结果证明能明显促进 HLF 增 殖而 CMAM(-)对 HLF 增殖无明显作用 , 与对照组 相似(图 1)。时间-效应关系曲线显示 , 用 CMAM 刺 激 6 ～ 12 h 无作用 , 48 ～ 72 h 作用明显 , 有统计学意 义(图 2)。
【Abstract】 Objective To explore pathogenetic mechanism in initiation of radiation-induced pulmonary fibrosis.Methods Alveolar macrophages in Wistar rats irradiated by 60 Co γ-ray were collected by alveolar lavage;condition medium was prepared for stimulating human lung fibroblast (HLF) proliferation;HLF proliferation activity was determined by MTT method;collagen Ⅳ (Col Ⅳ)in HLF was determined by Western blot;the activity of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9)was determined by zymography .Results HLF proliferation activity was significantly increased after stimulation of condition medium , and the increase was most evident within 48-72 hs.Col Ⅳ synthesis in HLF was increased and reached a peak at 12 h after stimulation and then began to decrease .MMP-9 activity began to increase at 12 h and reached a peak at 48 h and then decreased after 72 h .Conclusions Cobalt-60 gamma ray irradiation of 20 Gy can stimulate secretion of some cytokines in alveolar macrophage to promote pulmonary interstitial fibroblast proliferation and synthesis of Col Ⅳ .Col Ⅳ can stimulate MMP-9 increase ;MMP-9 can degrade excess Col Ⅳ .Such changes are involved in remodeling process of early pulmonary injury .
1 .试剂 :小牛血清 FCS 购自杭州四季青生物工 程研究所 , RPMI 1640 培养基系 Sigma 公司产品 , 小 鼠抗人 Col Ⅳ单克隆抗体和相应二抗 、三抗及 DAB 显色液购自武汉博士德生物试剂公司 。
2 .肺泡巨噬细胞(AM)的分离和培养 :二级雄性
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中华放射医学与防护杂志 2006 年 12 月第 26 卷第 6 期 Chin J Radiol Med Prot , December 2006 , Vol 26 , No.6
【Key words】 Radiation pulmonary injury ; Alveolar macrophage ; Fibroblast ; Type Ⅳ Collagen ; Matrix metalloproteinase-9
γ射线胸部照射可使肺内成纤维细胞(Fb)活化 成为肌成纤维细胞(MFb), 合成 Ⅰ 、Ⅲ型胶原的能力 增强[ 1 , 2] , 胶原的沉积导致呼吸膜增厚直至取代肺泡 组织 。基质蛋白酶-9(MMP-9)主要来自炎细胞和呼 吸道上皮细胞 , 能降解细胞外基质成分 , 其主要底物 是Ⅳ型胶原(Col Ⅳ), 而 Col Ⅳ又能 够刺激 MMP-9 的合成及分泌 , 两者之间的相互关系及其在放射性
基金项目 :国家自然科学基金资助项目(30570545) 作者单位 :100850 北 京 , 军事 医学 科学 院放 射与 辐射 医 学研 究所 通讯作者 :宋良文 , Email :Lsong1 @
肺损伤重建中的作用尚未完全明了 。 本研究拟通过 检测分析大鼠胸部照射后肺巨噬细胞条件培养液对 肺成纤维细胞增生和 Ⅳ型胶原合成的作用 , 探讨放 射性肺纤维化早期启动的机制 。
中华放射医学与防护杂志 2006 年 12 月第 26 卷第 6 期 Chin J Radiol Med Prot , December 2006 , Vol 26, No .6
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·基础研及 合成 Ⅳ型胶原的作用
宋良文 孙丽 刁瑞英 李杨 张勇 尹纪业
中华放射医学与防护杂志 2006 年 12 月第 26 卷第 6 期 Chin J Radiol Med Prot , December 2006 , Vol 26, No .6
与其他两组比较 ＊ P <0 .05 图 1 条件培养液对 HLF 增殖的影响
与对照组比较 ＊ P <0 .05 图 2 CMAM 促 HLF 增生作用的时间-效应关系
2 .CMAM 对 HLF 合成 Col Ⅳ的促 进作 用 :经 Western blot 检测和图像分析(电泳分离条带的平均 吸光度 , A 值)证明 , 经 不同因素处理 24 h 后 , CTR 组合成的 Col Ⅳ量较低(MA =0.1864 ±0.06), CMAM (-)组较 CTR 组 为 高(0.442 ±0.02 , P <0.01); CMAM 组 Col Ⅳ 的 量 明 显 高 于 CMAM (-)组
5 .Col Ⅳ胶原检测(Western blot):收集经过同样 处理因素作用后 6 、12 、24 、48 和 72 h 的各组 HLF 提 取细胞总蛋白 , 制备 7.5 %分离胶进行电泳 , 每孔加 蛋白 20 μg , 上样总体积 20 μl , PVDF 转膜 , 10 %脱脂 奶粉 封 闭 3 h , 加 入小 鼠 抗 人 Col Ⅳ 单克 隆 抗体 (1∶1000稀释), 同时做 β-actin 内参照 ;4 ℃摇床过夜 ; 加入生物素标记的 二抗(1∶2000), 摇床常温孵育 1 h , 加入过氧化物酶标记的三抗(1∶2000), 摇床常温 孵育 1 h , ECL 化学发光反应 , X 光底片曝光 , 显影及 定影 , 对电泳条带扫描及图像分析 , 得出条带的平均 吸光度(MA)。试验重复3 次 。
【摘要】 目的 探讨放射性肺纤维化早期 启动的 发生机制 。 方法 灌洗收集 经60 Co γ射 线照 射后的 Wistar 大 鼠肺泡巨噬细胞制备条件培养液 , 刺激培养 的人肺成纤 维细胞增 生 , 用 MTT 法检测 细胞增生活力 , Western blot 检测细胞合成 Ⅳ型胶原含量的改变 , 酶谱分析检测细胞基质金属 蛋白酶9 的活性 。 结果 经条件培养液刺激后 , 人肺成纤维细胞 的增殖 活力明显 增加 , 在 48 ～ 72 h 之 内作 用明显 HLF 合成 Ⅳ型胶原增多 , 12 h 达高峰 , 随后有所 下降 ;12 h 后基质金属 蛋白酶-9 活性开 始增 高 , 于 48 h 达高峰 , 72 h 开始下降 。 结论 20 Gy 60 Co γ射 线能刺激 AM 分泌某些细胞因子促进肺间 质成纤维细胞增生及合成 Ⅳ型胶原 , 与此同时 后者能激活基质金属蛋白酶-9, 降解增多的 Col Ⅳ , 参 与肺损伤早期的重建过程 。
3 .条件培养液(CMAM)的制备 :台盼蓝细胞活 性排斥试验鉴定收集的 AM , 存活 率为 95 %。改用 含 0.2 % FCS 的培养液(5 ml 瓶)继续培养 24 h , 收 集上清作为 CMAM ;收集用同样方法处理的未照射 大鼠的 AM 培养上清作为阴性对照[ CMAM(-)] 。
4 .细胞增殖试验(MTT):人肺成纤维细胞(HLF) 由军事医学科学院毒物药物研究所提供 , 细胞以 3 ×104 ml 接种 于 96 孔板 , 100 μl 孔 , 用含 0 .2 % FCS 的 RPMI 1640 培养液培养 12 h 然后进行分组处 理 :① 对照组(CTR):用含 3.3 % FCS 和 3.3 %PBS 的 1640 培养 ;② CMAM(-)组 :用含 3.3 % FCS 和 3.3 % CMAM(-)的 1640 培养 ;③CMAM 组 :用含 3.3 %FCS 和 3.3 %CMAM 的 1640 培养 。 分别于 6 、 12 、24 、48 和 72 h 加入 MTT 20 μl 孔 , 继续培养 4 h , 测定 570 nm 处的吸光度(A)值 。
6 .酶谱分析 :每组样品取蛋白 25 μg , 与 4 ×样品 缓冲液以 3∶1 混 合 , 于 37 ℃放置 10 min 后 , 4 ℃冷 却 , 用含 0.1 %明胶的 10 %的 SDS-聚丙烯酰胺凝胶 电泳 4 h , 用漂洗缓冲液洗涤凝胶 20 min ×3 次 , 置 于温育缓冲液中 , 在 37 ℃反应 24 h 。 考马斯亮蓝 R250 染色 40 min , 经脱色液 A 、B 、C 分别脱色 30 、60 和 120 min 后照相和图像分析 , 获得条带的平均吸 光度(MA)值 , 取其倒数作为检 测结果 。 试验重复
3次 。 7 .统计学处理 :采用 SPSS 11.0 软件 , 组间差异
比较采用多组间方差分析(F 检验), 然后进行组间 两两比较(q 检验), 数据以均数 ±标准差表示 。
结果 1 .CMAM 对 HLF 增殖的影响 :在 HLF 受 CMAM 刺激后 48 h , MTT 比色结果证明能明显促进 HLF 增 殖而 CMAM(-)对 HLF 增殖无明显作用 , 与对照组 相似(图 1)。时间-效应关系曲线显示 , 用 CMAM 刺 激 6 ～ 12 h 无作用 , 48 ～ 72 h 作用明显 , 有统计学意 义(图 2)。
【Abstract】 Objective To explore pathogenetic mechanism in initiation of radiation-induced pulmonary fibrosis.Methods Alveolar macrophages in Wistar rats irradiated by 60 Co γ-ray were collected by alveolar lavage;condition medium was prepared for stimulating human lung fibroblast (HLF) proliferation;HLF proliferation activity was determined by MTT method;collagen Ⅳ (Col Ⅳ)in HLF was determined by Western blot;the activity of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9)was determined by zymography .Results HLF proliferation activity was significantly increased after stimulation of condition medium , and the increase was most evident within 48-72 hs.Col Ⅳ synthesis in HLF was increased and reached a peak at 12 h after stimulation and then began to decrease .MMP-9 activity began to increase at 12 h and reached a peak at 48 h and then decreased after 72 h .Conclusions Cobalt-60 gamma ray irradiation of 20 Gy can stimulate secretion of some cytokines in alveolar macrophage to promote pulmonary interstitial fibroblast proliferation and synthesis of Col Ⅳ .Col Ⅳ can stimulate MMP-9 increase ;MMP-9 can degrade excess Col Ⅳ .Such changes are involved in remodeling process of early pulmonary injury .