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硫酸铵溶液饱和度

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饱和硫酸铵溶液的配制[新版]

饱和硫酸铵溶液的配制[新版]

饱和硫酸铵溶液的配制00000①在25℃下，硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每升溶液所加固体硫酸铵的克数。

000001． 2．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃）0000①在0℃下，硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每100毫升溶液所加固体硫酸铵的克数。

000025℃下100%硫酸铵是1L水中约加780g硫酸铵。

可以在加进去之后，用微波炉加热到溶解为止，然后放置在过夜，第二天就会有晶体析出，这就可以了。

0000双蒸水中加入过量硫酸铵，热至50－60度保温数分钟，趁热滤出沉淀，在0度或25度平衡1－2天，有固体析出时即达100％饱和度，以氨水调节PH值至7.0。

0000硫酸铵在水中的溶解度，100度时为1.034g/ml，0度时为0.706g/ml。

因此，每100ml 蒸馏水加90gAR级结晶硫酸铵，80度溶解，趁热过滤，降至室温后即有结晶析出，应任其留存瓶中，使用前吸出所需的量，用28%的氨水调PH至7.2即可。

结晶（要留着，随着温度变化，溶解度也会变化，你总要保证溶液中是饱和的，所以结晶留在瓶底，不需要再过滤，使用时取上面的溶液即可。

pH7.0或7.2影响不大，也有调到7.4的，因为最后沉淀的蛋白一般都是用PBS稀释的。

）0000最方便的就是500ml水加半瓶250g硫酸铵剧烈搅拌，上层澄清的就是饱和的了。

00000另外较快达到饱和状态的方法是，将过量的硫酸铵（参考不同温度下的溶解大多数，或干脆多加点）放在水浴箱内高温溶解，取出致室温放置至其平衡（会有硫酸铵重新析出），上清即为室温下的饱和硫酸铵0000先将硫酸氨80克溶解到100水中，加热到80左右，溶解部分过滤，其余的再溶，仍有一部分结晶，过滤的溶液当降到室温的时候就会有结晶，平衡一两天，取上清用同时氨水调节PH值用。

00000。

硫酸铵溶液饱和度计算表

硫酸铵溶液饱和度计算表

硫酸铵溶液饱和度计算表
注：本表为室温（25℃）下数据，该温度下饱和硫酸铵的浓度为4.1mol/L,即将761g硫酸铵溶于1L水中。

同时鉴于4-25℃之间数据没有明显变化，所以表中数据也可用于4℃。

饱和溶液加入法是指将预先调好PH的饱和硫酸铵溶液逐步加至相应的蛋白质溶液中，使其达到一定的硫酸铵浓度（或饱和度），令蛋白质沉淀下来。

不同饱和度所需要加入的饱和硫酸铵的量可以用如下公式计算：V=V0 (S2—S1)/(100—S2) 其中v为应加入饱和硫酸铵溶液的体积，V0 是蛋白质溶液的原始体积，S2是所要达到的硫酸铵饱和度，S1 原来溶液的硫酸铵饱和度。

硫酸铵饱和溶解度

硫酸铵饱和溶解度

硫酸铵饱和溶解度
硫酸铵溶解度25℃时饱和溶液为4.1M，即767克/升。

0℃时饱和溶解度为3.9M，即676克/升。

硫酸铵水溶液呈酸性，不溶于醇、丙酮和氨水，有吸湿性，吸湿后固结成块。

硫酸铵主要用作肥料，适用于各种土壤和作物，还可用于纺织、皮革、医药等方面。

纯品为无色透明斜方晶系结晶，水溶液呈酸性。

不溶于醇、丙酮和氨水。

有吸湿性，吸湿后固结成块。

加热到513℃以上完全分解成氨气、氮气、二氧化硫及水。

与碱类作用则放出氨气。

与氯化钡溶液反应生成硫酸钡沉淀。

也可以使蛋白质发生盐析。

硫酸铵饱和度常用表

硫酸铵饱和度常用表

117附录五 硫酸铵饱和度的常用表　１．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（２５℃）　硫 酸 铵 终 浓 度 ， % 饱 和 度10202530333540455055606570758090100每1升溶液加固体硫酸铵的克数①0 56 114 144 176 196 209 243 277 313 351 390 430 472 516 561 662 767 10 5786 118 137 150 183 216 251 288 326 365 406 449 494 592 694 20 2959 78 91 123 155 189 225 262 300 340 382 424 520 619 253049 61 93 125 158 193 230 267 307 348 390 485 583 30 1930 62 94 127 162 198 235 273 314 356 449 546 33 1243 74 107 142 177 214 252 292 333 426 522 35 3163 94 129 164 200 238 278 319 411 506 40 3163 97 132 168 205 245 285 375 469 45 3265 99 134 171 210 250 339 431 50 3366 101 137 176 214 302 392 55 3367 103 141 179 264 353 603469 105 143 227 314 65 3470 107 190 275 70 3572 153 237 75 36115 198 80 77157 硫酸 铵 初 浓 度 ， % 饱 和 度9079○1在25℃下硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每升溶液所加固体硫酸铵的克数。

118２．硫酸铵溶液饱和度计算表（０℃）；硫 酸 铵 终 浓 度 ， % 饱 和 度20253035404550556065707580859095100每100毫升溶液加固体硫酸铵的克数①0 10.6 13.4 16.4 19.4 22.6 25.8 29.1 32.6 36.1 39.8 43.6 47.6 51.6 55.9 60.3 65.0 69.7 5 7.9 10.8 13.7 16.6 19.7 22.9 26.2 29.6 33.1 36.8 40.5 44.4 48.4 52.6 57.0 61.5 66.2 10 5.3 8.1 10.9 13.9 16.9 20.0 23.3 26.6 30.1 33.7 37.4 41.2 45.2 49.3 53.6 58.1 62.7 15 2.6 5.4 8.2 11.1 14.1 17.2 20.4 23.7 27.1 30.6 34.3 38.1 42.0 46.0 50.3 54.7 59.2 20 02.7 5.5 8.3 11.3 14.3 17.5 20.7 24.1 27.6 31.2 34.9 38.7 42.7 46.9 51.2 55.7 25 02.7 5.6 8.4 11.5 14.6 17.9 21.1 24.5 28.0 31.7 35.5 39.5 43.6 47.8 52.2 30 02.8 5.6 8.6 11.7 14.8 18.1 21.4 24.9 28.5 32.3 36.2 10.2 44.5 48.8 35 02.8 5.7 8.7 11.8 15.1 18.4 21.8 25.4 29.1 32.9 36.9 41.0 45.3 40 02.9 5.8 8.9 12.0 15.3 18.7 22.2 25.8 29.6 33.5 37.6 41.8 45 02.9 5.9 9.0 12.3 15.6 19.0 22.6 26.3 30.2 34.2 38.3 50 03.0 6.0 9.2 12.5 15.9 19.4 23.0 26.3 30.8 34.8 55 03.0 6.1 9.3 12.7 16.1 19.7 23.5 27.3 31.3 60 0 3.1 6.2 9.5 12.9 16.4 20.1 23.1 27.9 653.1 6.3 9.7 13.2 16.8 20.5 24.4 70 03.2 6.5 9.9 13.4 17.1 20.9 75 03.2 6.6 10.1 13.7 17.4 80 03.36.7 10.3 13.9 85 03.46.8 10.5 90 03.47.0 95 03.5 硫 酸 铵 初 浓 度 ， % 饱 和 度100○1在0℃下硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每100毫升溶液所加固体硫酸铵的克数。

硫酸铵饱和度常用表#精选.

硫酸铵饱和度常用表#精选.
33.5
37.6
41.8
45
0
2.9
5.9
9.0
12.3
15.6
19.0
22.6
26.3
30.2
34.2
38.3
50
0
3.0
6.0
9.2
12.5
15.9
19.4
23.0
26.8
30.8
34.8
55
0
3.0
6.1
9.3
12.7
16.1
19.7
23.5
27.3
31.3
60
0
3.1
6.2
9.5
12.9
16.4
硫酸铵饱和度常用表
（一）调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25 ℃）
硫酸铵终浓度，饱和度 / %
10
20
25
30
33
35
40
45
50
55
60
65
70
75
80
90
100
每一升溶液加固体硫酸铵的克数 *
硫酸铵初浓度，饱和度 /%
0
56
114
114
176
196
209
243
277
313
351
390
430
472
516
19.7
22.9
26.2
29.6
33.1
36.8
40.5
44.4
48.4
52.6
57.0
61.5
66.2
10
5.3
8.1
10.9
13.9
16.9
20.0

硫酸铵饱和度的常用表,聚丙烯酰胺凝胶的配制表(参考模板)

硫酸铵饱和度的常用表,聚丙烯酰胺凝胶的配制表(参考模板)

硫酸铵饱和度的常用表1．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃）2．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25℃）3．不同温度下饱和硫酸铵溶液的数据聚丙烯酰胺凝胶的配制表1 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液溶液成分不同体积（ml）凝胶液中各成分所需体积（ml）5101520253040506%水 2.6 5.37.910.613.215.921.226.5 30%丙烯酰胺溶液123456810 1.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.3 2.5 3.85 6.37.51012.5 10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5 10%过硫酸氨0.050.10.150.20.250.30.40.5 TEMED0.0040.0080.0120.0160.020.0240.0320.04 8%水 2.3 4.6 6.99.311.513.918.523.2 30%丙烯酰胺溶液 1.3 2.74 5.3 6.7810.713.3 1.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.3 2.5 3.85 6.37.51012.5 10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5 10%过硫酸氨0.050.10.150.20.250.30.40.5 TEMED0.0030.0060.0090.0120.0150.0180.0240.03 10%水 1.94 5.97.99.911.915.919.8 30%丙烯酰胺溶液 1.7 3.35 6.78.31013.316.7 1.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.3 2.5 3.85 6.37.51012.5 10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5 10%过硫酸氨0.050.10.150.20.250.30.40.5 TEMED0.0020.0040.0060.0080.010.0120.0160.02 12%水 1.6 3.3 4.9 6.68.29.913.216.5 30%丙烯酰胺溶液246810121620 1.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.3 2.5 3.85 6.37.51012.5 10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5 10%过硫酸氨0.050.10.150.20.250.30.40.5 TEMED0.0020.0040.0060.0080.010.0120.0160.0215%水 1.1 2.3 3.4 4.6 5.7 6.99.211.5 30%丙烯酰胺溶液 2.557.51012.5152025 1.5 mol/L Tris (pH8.8) 1.3 2.5 3.85 6.37.51012.5 10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5 10%过硫酸氨0.050.10.150.20.250.30.40.5 TEMED0.0020.0040.0060.0080.010.0120.0160.02表2 配制6% Tris-甘氨酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳5%积层胶所用溶液溶液成分不同体积（ml）凝胶液中各成分所需体积（ml）123456810水0.68 1.4 2.1 2.7 3.4 4.1 5.5 6.8 30%丙烯酰胺溶液0.170.330.50.670.831 1.3 1.7 1.5 mol/L Tris(pH8.8)0.130.250.380.50.630.750 1.25 10% SDS0.010.020.030.040.050.060.080.1 10%过硫酸氨0.010.020.030.040.050.060.080.1 TEMED0.0010.0020.0030.0040.0050.0060.0080.01（本资料素材和资料部分来自网络，仅供参考。

常用浓度配制表格

附录1硫酸铵饱和度常用表（一）调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25℃）硫酸铵终浓度，饱和度∕%在25℃时，硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每升溶液所加固体硫酸铵的克数。

(二)调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃）硫酸铵终浓度，饱和度∕%*在0℃时，硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每100ml溶液所加固体硫酸铵的克数。

附录2实验中常用酸、碱的比重和浓度的关系名称化学式分子量比重质量分数/%（W/W）物质的量浓度（粗略）/mol·L-1配1L1mol·L-1溶液所需量/mL盐酸HCl 36.47 1.19 37.2 12.0 841.18 35.4 11.81.10 20.0 6.0硫酸H2SO498.09 1.84 95.6 18.0 281.18 24.8 3.0硝酸HNO363.02 1.42 70.98 16.0 631.40 65.3 14.51.20 32.36 6.1冰醋酸CH3COOH 60.05 1.05 99.5 17.4 59 醋酸CH3COOH 1.075 80.0 14.3 69.93磷酸H3PO498.06 1.71 85.0 15 67 氨水NH4OH 35.05 0.90 15 670.904 27.0 14.3 700.91 25.0 13.40.96 10.0 5.6氢氧化钠NaOH 40.0 1.5 50.0 19 53 溶液附录3常用固态酸、碱、盐的物质的量浓度配制参考表名称化学式Mr物质的量浓度/mol·L-1配1L1mol/L溶液所需量/g·L-1草酸H2C2O4·2H2O 126.08 1.0 63.04 柠檬酸H3C6H5O7·H2O 210.14 0.1 7.00 氢氧化钾KOH 56.10 5.0 280.50 氢氧化钠NaOH 40.00 1.0 40.00 碳酸钠Na2CO3 106.00 0.5 53.00 磷酸氢二钠Na2HPO4·12H2O 358.20 1.0 358.20 磷酸二氢钾KH2PO4 136.10 1/15 9.08 重铬酸钾K2Cr2O7 294.20 1/60 4.9035 碘化钾KI 166.00 0.5 83.00 高锰酸钾KMnO4158.00 0.05 3.16 乙酸钠NaC2H3O2 82.04 1.0 82.04 硫代硫酸钠Na2S2O3·5H2O 248.20 0.1 24.82附录4常用有机溶剂及其主要性质附录5常用酸、碱指示剂中文名英文名变色pH 范酸性碱性浓度/%溶剂100mL 指示剂需名称 化学式 分子量 Mp(℃) BP(℃) 溶解性质性质甲醇 CH 3OH 32.04 -97.8 64.7 溶于水、乙醇、乙醚、苯等 有毒 乙醇 C 2H 5OH 46.07 -114.10 78.50 与水及许多有机溶剂混溶 易燃丙醇 CH 3CH 2CH 2OH 60.09 -127.0 97.20 与水、乙醇、乙醚等混溶 对眼有刺激作用 异丙醇 （CH 3）2CHOH 60.09 -88.5 82.5 与水、乙醇、乙氯仿等混溶，不溶于盐溶液易燃丁醇 CH 3CH 2CH 2CH 2OH 74.12 -90.0 117~118 与乙醇、乙醚等多种有机溶剂混溶 蒸汽有刺激性 戊醇 CH 3（CH 2)4OH 88.15 -79.0 137.5 与乙醇、乙醚混溶有刺激作用 特丁醇 （CH 3）2COH 74.12 25.6 82.41 溶于水、与乙醇、乙醚混溶丙酮CH 3COCH 358.08-94.056.5与水、乙醇、氯仿、乙醚及多种油类混溶挥发性强，易燃,有麻醉性乙醚 C 2H 5OC 2H 5 74.12 -116.3 34.6微溶于水，易溶于浓盐酸与苯 氯仿、石油醚及脂肪溶剂 易挥发，易燃有麻醉性 氯仿 CHCL 3 119.39 -63.5 固化 61~62易溶于水，能与多种有机溶及油类混溶剂易挥发乙酸 乙酯 CH 3COOC 2H 5 88.1 -83.0 77.0 溶于水，与乙醇、氯仿、丙酮乙醚混溶易挥发，易燃烧苯C 6H 6 78.11 5.5 固化 80.1 易溶于水，与乙醇、乙醚、氯仿等有机溶剂及油混溶极易燃，有毒 甲苯 CH 3C 6H 5 92.13 -95 固化 110.6 微溶于水，能与多种有机溶剂混溶易燃，高浓度有麻醉作用二甲苯 C 6H 4（CH 3）2 106.16137~ 140 不溶于水，与无水乙醇、乙醚等多种有机溶剂混溶易燃，高浓度有麻醉作用酚 C 6H 5OH 94.11 40.85 182.0能溶于水，易溶于乙醇、乙醚氯仿、甘油、油。

硫酸铵溶液饱和度计算表

硫酸铵溶液饱和度计算表
注：本表为室温（25℃）下数据，该温度下饱和硫酸铵的浓度为L,即将761g硫酸铵溶于1L 水中。

同时鉴于4-25℃之间数据没有明显变化，所以表中数据也可用于4℃。

饱和溶液加入法是指将预先调好PH的饱和硫酸铵溶液逐步加至相应的蛋白质溶液中，使其达到一定的硫酸铵浓度（或饱和度），令蛋白质沉淀下来。

不同饱和度所需要加入的饱和硫酸铵的量可以用如下公式计算：V=V0 (S2—S1)/(100—S2) 其中v为应加入饱和硫酸铵溶液的体积，V0 是蛋白质溶液的原始体积，S2是所要达到的硫酸铵饱和度，S1 原来溶液的硫酸铵饱和度。

饱和硫酸铵溶液的配制

饱和硫酸铵溶液的配制 The document was finally revised on 2021饱和硫酸铵溶液的配制①在25℃下，硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每升溶液所加固体硫酸铵的克数。

1．2．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃）①在0℃下，硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每100毫升溶液所加固体硫酸铵的克数。

25℃下100%硫酸铵是1L水中约加780g硫酸铵。

可以在加进去之后，用微波炉加热到溶解为止，然后放置在过夜，第二天就会有晶体析出，这就可以了。

双蒸水中加入过量硫酸铵，热至50－60度保温数分钟，趁热滤出沉淀，在0度或25度平衡1－2天，有固体析出时即达100％饱和度，以氨水调节PH值至。

硫酸铵在水中的溶解度，100度时为ml，0度时为ml 。

因此，每100ml蒸馏水加90gAR级结晶硫酸铵，80度溶解，趁热过滤，降至室温后即有结晶析出，应任其留存瓶中，使用前吸出所需的量，用28%的氨水调PH至即可。

结晶（要留着，随着温度变化，溶解度也会变化，你总要保证溶液中是饱和的，所以结晶留在瓶底，不需要再过滤，使用时取上面的溶液即可。

或影响不大，也有调到的，因为最后沉淀的蛋白一般都是用PBS稀释的。

）最方便的就是500ml水加半瓶250g硫酸铵剧烈搅拌，上层澄清的就是饱和的了。

另外较快达到饱和状态的方法是，将过量的硫酸铵（参考不同温度下的溶解大多数，或干脆多加点）放在水浴箱内高温溶解，取出致室温放置至其平衡（会有硫酸铵重新析出），上清即为室温下的饱和硫酸铵先将硫酸氨80克溶解到100水中，加热到80左右，溶解部分过滤，其余的再溶，仍有一部分结晶，过滤的溶液当降到室温的时候就会有结晶，平衡一两天，取上清用同时氨水调节PH值用。

硫酸铵沉淀主要分为两种形式：1.将事先配好的饱和硫酸铵溶液加入目标溶液中，这种方法精确度高，硫酸铵是弱酸性的，事先调好pH后，再补入溶液中pH变化小，适合于对pH敏感的蛋白（酶类）或要求比较高的实验。

硫酸铵饱和度

硫酸铵饱和度
硫酸铵饱和度是指含中硫酸铵物质的溶液在加入或吸收硫酸铵的容量达到最大后，所
饱和物质的量与溶液总体积的比例，即被称作硫酸铵溶液的饱和度。

硫酸铵饱和度是衡量硫酸铵溶液丰度程度的重要标准。

一般来说，硫酸铵的溶液是按
国家标准要求的饱和度来按照NCS 8011-28号标准进行测定的。

硫酸铵饱和度的测定以硫酸铵溶液的标准濁度为基准，测定时将制备的硫酸铵溶液放
入玻璃体积瓶中，将其搅拌均匀后放置在室温下，十分钟后以双面直尺检测溶液濁度变化，然后计算出饱和度值。

在含硫酸铵溶液中，硫酸铵饱和度的测定一般分两种情况：一种是传统的测试方法，
即将溶液放入玻璃体积瓶中，将溶液搅拌均匀，然后采用双面直尺测量溶液濁度，根据所
测得的濁度值计算出硫酸铵溶液饱和度；另一种是高灵敏的仪器测定，该测定方法取用晶
体生长仪实验室技术测定法，即利用晶体生长仪的测试功能，在溶液的湿度、比重测定仪
及热力学仪中显示出来。

以上两种测试方法能够满足不同种类的硫酸铵溶液饱和度的测定
需要。

除了上述的传统方法和现代仪器方法，还有其他计算机软件供应商提供的自动化计算
工具，能够计算不同情况下硫酸铵溶液的饱和度数值，可以很大程度地提高测试的精确性
与准确率。

从理论上讲，在硫酸铵溶液中，饱和度的高低对于溶液中硫酸铵的活性有一定的影响。

一般情况下，饱和度越高，溶液中硫酸铵的活性就越高。

此外，在工业生产中，也需要注
意溶液的饱和度，其饱和度过低或过高都会影响溶液质量，甚至不能够达到质量标准要求，因此，在配制硫酸铵溶液时，要注意硫酸铵饱和度及秤量比例，以保证产品质量。

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生命科学学院 生物科学51班
第一节 沉淀的基本原理
沉淀法也称溶解度法。
其纯化生物大分子的基本原理是：

根据各种物质结构的 差异 （如蛋白分子表面的疏水基 团和亲水基团之间比例的差异）来改变溶液的某些性 质（如pH、极性、离子强度、金属离子等），就能致 使抽提液中有效成分溶解度的变化。
则可通过选择适当的抽提溶剂使欲分离的有效成分最 大溶解，而杂质最小溶解；或者相反。从而达到分离 的目的。

有机溶剂沉淀法


等电点沉淀法
其它沉淀剂沉淀法：聚乙二醇（PEG），十六烷基三 甲基溴化铵（CTAB），LiCl，精胺，钙盐。
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第三节 核酸沉淀法
有机溶剂沉淀法

乙醇

优点：对盐类沉淀少，沉淀中所含迹量乙醇易挥发 除去，不影响以后实验。
பைடு நூலகம்

缺点：需要量大，一般要求低温操作。
V ：表示需要加入的硫酸铵溶液体积（ml） V0 ：表示原来溶剂的体积（ml）
S1与S2同上
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S3 ：表示需要加入的硫酸溶液的饱和度
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硫酸铵分级沉淀示例：
各溶解度区段的沉淀效果（尿素酶）：
名称 硫酸铵饱和度/ %（25℃） 沉淀物酶活力单位/ U 0~25 0 25~35 112 沉淀效果 35~45 6850 45~55 3020 55~65 27
钙盐沉淀法：

在核酸提取液中加入一定体积比(一般为1/10)的10%氯化 钙溶液，使DNA和 RNA均成为钙盐形式，再加进1/5体积 的乙醇，DNA钙盐即形成沉淀析出。
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异丙醇

优点：需体积小，速度快，适于浓度低、体积大的 DNA样品沉淀。一般不需低温长时间放臵。 缺点：易使盐类、蔗糖与DNA共沉淀．异丙醇难以

挥发除去。所以，最后用70％乙醇漂洗数次。
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第三节 核酸沉淀法
等电点沉淀法：

脱氧核糖核蛋白的等电点为pH4.2；核糖核蛋白的等电点 力pH2.0-2.5；tRNA的等电点为pH5。所以将核酸提取液 调节到一定的pH，就可使不同的核酸或核蛋白分别沉淀 而分离。

盐析的缺点：样品继续纯化时须脱盐。

硫酸铵的缺点是铵离子干扰双缩脲反应，为蛋白 质的定性分析造成一定困难。
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第二节 蛋白沉淀法
1. 盐析法
硫酸铵盐析

固体法。在大体积粗制品溶液中逐步加入固体硫酸铵 ，当达到一定饱和度时，蛋白质便可沉淀下来。 饱和溶液法。较固体法温和，但不适用于大体积样品 ，会导致样品体积大量增加。
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调整硫酸溶液饱和度计算表
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第二节 蛋白沉淀法
1. 盐析法
盐析的影响因子：
① 蛋白质浓度对盐析的影响：蛋白质浓度过大，盐析时
发生共沉现象，分离效果不好；蛋白质浓度太稀，耗
盐量过大，蛋白质回收率也低。一般控制样品液蛋白 浓度在0.2%-2%为宜。
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第二节 蛋白沉淀法
3. 蛋白质沉淀法
针对某一类或某一种蛋白的沉淀法，常见沉淀剂有：

碱性蛋白质：多价阳离子的碱性蛋白质，如鱼精蛋白 ，除能有效沉淀核酸外，还能沉淀某些蛋白质。

凝集素：凝集素是一种特殊的蛋白质，对糖蛋白中糖 链末端序列具有明显、特异的凝聚力。该法反应条件 温和，特异性高。 重金属：重金属盐（如铅盐、汞盐）作为蛋白质沉淀 剂，也能将蛋白质或酶沉淀。但应控制条件，并尽快 透析除去重金属，防止变性。
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第二节 蛋白沉淀法
1. 盐析法
原理：

根基蛋白质在稀盐溶液中溶解度会随着盐浓度的增高 而上升（盐溶）

但当盐浓度增高到一定数值时，其溶解度又逐渐下降 ，直至蛋白质析出（盐析）。
盐析的发生在于盐浓度增高到一定数值时，使水活度 降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水 化膜逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子之间相互聚集 并从溶液中析出。
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第一节 沉淀的基本原理
蛋白沉淀法：


盐析法
有机溶剂沉淀法 蛋白质沉淀法

聚乙二醇沉淀法 选择性沉淀法 结晶沉淀法
核酸沉淀：

有机溶剂沉淀法 等电点沉淀法 其它沉淀剂沉淀法：聚乙二醇（PEG），十六烷 基三甲基溴化铵（CTAB），LiCl，精胺，钙盐。
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第二节 蛋白沉淀法
2. 有机溶剂沉淀法
常用溶剂：甲醇、乙醇、丙酮。
优点：有机溶剂沉淀法分辨能力比盐析法高，沉淀不用脱 盐，过滤比较容易。 缺点：对某些具有生物活性的大分子，容易引起变性失活 ，操作常在低温下进行；分离效果差，共沉作用大；离子 强度及离子种类对其也有影响。
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6. 结晶沉淀法
影响结晶的因素：

纯度。各种物质在溶液中均需达到一定的纯度才能析出结晶， 这样就可使结晶和母液分开，以达到进一步分离纯化的目的。 浓度。结晶液一定要有合适的浓度，结晶的大小、均匀度和结 晶的饱和度有很大关系。


pH。pH的变化，可以改变溶质分子的带电性质，是影响溶质 分子溶解度的一个重要因素。一般结晶液所选用的pH 与沉淀 大致相同。 温度。冷却的速度及冷却的温度直接影响结晶效果。

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第二节 蛋白沉淀法
4. 聚乙二醇沉淀法
聚乙二醇（PEG）和右旋糖酐硫酸钠等水溶性非离子型聚 合物可是蛋白质发生沉淀作用。该法条件温和，不易使蛋 白变性，且沉淀完全，应用范围广。
5. 选择性沉淀法
根据各种蛋白质在不同理化因子（如温度、酸碱度和有机 溶剂等）作用下稳定性不同的特点，用选择性沉淀法，使 杂蛋白变性，而欲分离的有效成分则存在于溶液中（或者 发生可逆性沉淀），从而达到分离有效成分的目的。
② 离子强度和离子类型对盐析的影响：离子强度越大，
蛋白质的溶解度越低，越容易产生盐析现象；离子半 径小而价数高的离子在盐析方面影响较强，离子半径 大而价数低的离子对盐析影响弱。
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盐析的影响因子：
③ ＰＨ对盐析的影响：蛋白质所带净电荷越多，溶解度
越大；在净电荷为零时，溶解度最低。一般将ＰＨ值 调到蛋白质等电点附近，这样有利于盐析。
硫酸铵盐析
固体法
g = 533(S2-S1)/(100-0.3S2)
g = 541(S2-S1)/(100-0.3S2)
S1：表示需要达到的百分饱和度
(20 ℃)
(20 ℃)
S2：表示原溶液中的百分饱和度
g：1升溶液中需加入固体硫酸铵的克数
饱和溶液法
V = V0(S2-S1)/ (S3-S1)
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第二节 蛋白沉淀法
1. 盐析法
盐的选择

一般蛋白沉淀时选用硫酸铵，原因：

溶解度大，对温度不敏感 分级效果好 有稳定蛋白质结构的作用 价格低廉，废液可以肥田
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第二节 蛋白沉淀法
2. 有机溶剂沉淀法
原理：

有机溶剂对许多溶于水的小分子生化物质以及核酸、 多糖、蛋白质等生物大分子都能发生沉淀作用。 有机溶剂的沉淀作用主要是降低溶液的介电常数从而 增强分子之间的相互作用，使其溶解度降低。 对于具有表面水层的生物大分子来说，有机溶剂可破 坏溶质分子表面的水膜，使这些大分子脱水而相互聚 集析出。不同溶质要求不同浓度的有机溶剂，因此可 用有机溶剂进行分步沉淀。
时间。结晶的形成和生长需要一定时间，不同化合物结晶时间 长短不同。 晶种。不易结晶的生化物质常需加晶种。有时用玻璃棒摩擦容 器壁也能促进晶体析出。
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第三节 核酸沉淀法
核酸分离纯化应维持在0-4℃的低温度条件下，以防 止核酸的变性和降解。为防止核酸酶引起的水解作 用，可加入十二烷基硫酸钠(SDS)、乙二胺四乙酸 (EDTA)、8-羟基喹啉、柠檬酸钠等以抑制核酸酶的 活性。 常用的沉淀分离法有：
聚乙二醇（PEG）

优点：可用不同浓度的PEG选择沉淀不同相对分子质量 的DNA片段。应用6000相对分子质量的PEG进行DNA沉 淀时，使用浓度与DNA片段的大小成反比。 注意：PEG沉淀一般需加0.5mol/L的NaCl或10 mmol/L的 MgCl2。要接着加乙醇沉淀核酸或用氯仿抽提除去DNA 沉淀中PEG。
生物化学技术原理及应用
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第二章 沉淀法
沉淀法是纯化生物大分子常用的一种经典方法。该 法操作简单，成本低廉，一般包括盐析沉淀、有机 溶剂沉淀和选择性沉淀等类型。