分子标记辅助育种技术
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分子标记辅助选择技术及其在作物育种上的应用研究目录1. 引言1.1 背景和意义1.2 结构概述1.3 目的2. 分子标记辅助选择技术2.1 分子标记的定义和分类2.2 常用的分子标记技术2.3 分子标记辅助选择技术的原理和方法3. 作物育种中的应用研究3.1 传统育种与分子标记辅助选择育种的对比3.2 分子标记辅助选择在作物抗病性改良中的应用研究3.3 分子标记辅助选择在作物品质改良中的应用研究4. 分子标记技术在现代作物育种中面临的挑战和前景展望4.1 技术挑战及其解决方案4.2 应用潜力与发展前景5. 结论5.1 总结已有研究成果5.2 展望未来发展方向和价值所在1. 引言1.1 背景和意义随着人口的不断增长和资源的有限性,如何提高作物的产量、品质和抗病能力成为全球农业面临的重要问题。
传统育种方法虽然可以改良作物,但其进展缓慢且存在许多局限性。
近年来,分子标记辅助选择技术的出现为解决这一问题提供了新的途径。
这项技术利用分子标记对作物基因组进行精确分析和筛选,从而加速育种过程,并在遗传改良上取得了显著成果。
1.2 结构概述本文将首先介绍分子标记辅助选择技术的定义和分类,然后探讨常用的分子标记技术以及相应的原理和方法。
接下来,将重点关注该技术在作物育种中的应用研究,并与传统育种方法进行比较。
特别是,我们将探讨分子标记辅助选择在作物抗病性改良和品质改良方面的应用案例。
此外,我们还将对分子标记技术在现代作物育种中面临的挑战及其解决方案进行深入讨论。
最后,本文将总结已有的研究成果,并展望未来分子标记辅助选择技术在作物育种领域的发展方向和价值。
1.3 目的本文的主要目的是全面介绍分子标记辅助选择技术及其在作物育种上的应用研究。
通过对该技术原理、方法以及实际应用案例的深入探讨,旨在加深读者对该领域的理解,并为相关研究提供参考和启示。
此外,本文还将探讨分子标记技术在现代作物育种中面临的挑战,并提出一些解决方案,为该技术未来的发展提供思路和指导。
分子标记辅助育种技术分子标记辅助育种技术第一节分子标记的类型和作用原理遗传标记是指可以明确反映遗传多态性的生物特征。
在经典遗传学中,遗传多态性是指等位基因的变异。
在现代遗传学中,遗传多态性是指基因组中任何座位上的相对差异。
在遗传学研究中,遗传标记主要应用于连锁分析、基因定位、遗传作图及基因转移等。
在作物育种中,通常将与育种目标性状紧密连锁的遗传标记用来对目标性状进行追踪选择。
在现代分子育种研究中,遗传标记主要用来进行基因定位和辅助选择。
1、形态标记形态标记是指那些能够明确显示遗传多态性的外观性状。
如、株高、穗型、粒色等的相对差异。
形态标记数量少,可鉴别标记基因有限,难以建立饱和的遗传图谱。
有些形态标记受环境的影响,使之在育种的应用中受到限制。
2、细胞学标记细胞学标记是指能够明确显示遗传多态性的细胞学特征。
如染色体的结构特征和数量特征。
核型:染色体的长度、着丝粒位置、随体有无。
可以反映染色体的缺失、重复、倒位、易位。
染色体结构特征带型:染色体经特殊染色显带后,带的颜色深浅、宽窄和位置顺序,可以反映染色体上常染色质和异染色质的分布差异。
染色体数量特征—是指细胞中染色体数目的多少。
染色体数量上的遗传多态性包括整倍体和非整倍体变异。
细胞学标记优点:克服了形态标记易受环境影响的缺点。
缺点:(1)培养这种标记材料需花费大量的人力物力;(2)有些物种对对染色体结构和数目变异的耐受性差,难以获得相应的标记材料;(3)这种标记常常伴有对生物有害的表型效应;(4)观察鉴定比较困难。
3、蛋白质标记用作遗传标记的蛋白质分为酶蛋白质和非酶蛋白质两种。
非酶蛋白质:用种子储藏蛋白质经一维或二维聚丙烯酰胺凝胶电泳,根据显示的蛋白质谱带或点,确定其分子结构和组成的差异。
酶蛋白质:利用非变性淀粉凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳及特异性染色检测,根据电泳谱带的不同来显示酶蛋白在遗传上的多态性。
蛋白质标记的不足之处:(1)每一种同工酶标记都需特殊的显色方法和技术;(2)某些酶的活性具有发育和组织特异性;(3)标记的数量有限。
分子标记在作物育种中的应用作物育种是改良作物种质的重要手段,通过对作物的遗传基础的深入研究,运用现代生物技术手段,筛选出具有优良性状基因的优良种质材料,从而加速有关作物的育种进程。
在现代生物技术手段中,分子标记技术在作物育种中扮演了非常重要的角色。
本文将介绍分子标记在作物育种中的应用。
一、分子标记简介分子标记是指与基因组中某个特定区域或特定性状相关的DNA序列片段。
这种技术可以用于确定个体间的遗传差异,进行基因型鉴定,进而确定等位基因种类及其比例。
通过分子标记技术,可以确定物种间的基因组组成和遗传的联系,并且还可以对单个个体的基因组进行分析和定位,制定具体的育种策略。
分子标记技术在育种材料鉴定和筛选中有着广泛的应用。
习惯上,育种过程需要大量的物种杂交,然后去通过后代材料中的遗传差异进行筛选、后代选择和提高纯度。
这种育种方法需要大量的时间和耗费大量的资源。
而采用分子标记技术,可以大大提高材料筛选的速度和效率。
远缘杂交后代中的有些个体通常会表现出可喜的性状,但是由于其他不良的遗传特征,基本上是无法继续进行育种的。
这个时候,分子标记技术就可以对杂交后代的DNA样本进行分析,从而确定哪些个体的基因组组成更加适合于后续育种筛选工作。
2. 分子标记在基因型分析和遗传图谱绘制中的应用在作物遗传基础的研究中,分子标记技术在基因型分析和遗传图谱绘制中的应用日益广泛。
通过分子标记技术,可以分析大量的遗传标记,确定不同基因型间的遗传差异,对遗传多样性和相关性进行统计分析,最终清晰地绘制出遗传图谱,揭示了不同群体间的遗传关系。
遗传图谱的绘制对于作物育种的后续研究至关重要,能够帮助育种人员了解群体内的基因性状分布情况,确定功能多样的分子标记,确保育种目标的达成。
3. 分子标记在杂交组合选择中的应用分子标记在杂交组合选择中的应用同样十分重要。
通过分析杂交后代的DNA序列,可以细致地分析出每个基因型对数量性状、质量性状、抗病性等性状的影响,并且还可以计算各基因型的复杂性状遗传度。
分子标记辅助的遗传育种实践分子标记辅助的遗传育种实践遗传育种是农作物改良中的重要手段,为了提高育种效率和准确性,科学家们通过分子标记技术的应用,开展了分子标记辅助的遗传育种实践。
这项技术的出现,极大地促进了农作物育种的进程。
分子标记是一种通过DNA序列检测和分析的方法,可以确定特定基因位点的遗传信息。
借助这项技术,育种者可以更加准确地筛选和选择具有优良基因的个体,从而加速了育种过程中的杂交和选择。
与传统育种相比,分子标记辅助的育种具有更高的效率和准确性。
在实践中,科学家们首先通过分析物种的基因组,发现了与目标性状相关的分子标记。
这些标记可以是单核苷酸多态性(SNP)或简单重复序列(SSR)等。
然后,他们利用这些标记开展杂交和选择。
通过对大量杂交个体进行分子标记的检测,科学家可以快速筛选出携带目标基因的个体,并将其作为亲本进行后续的杂交。
这种方式避免了传统育种中的大量试验和大规模筛选的工作,提高了育种效率。
此外,在分子标记辅助的育种中,科学家还可以利用分子标记数据进行定位和图谱构建。
通过分析标记位点的位置和分布,可以预测携带目标基因的染色体区域,从而缩小育种目标的范围。
同时,构建遗传图谱可以帮助科学家更好地理解物种的遗传结构和基因座位间的连锁关系,为育种的进一步研究提供了基础。
分子标记辅助的遗传育种实践已经在多个农作物中得到了成功应用。
例如,在水稻育种中,通过分子标记技术可以筛选出高产、抗病、抗虫等多种优良性状的基因,从而加速了新品种的培育。
此外,分子标记还可以用于小麦、玉米、大豆等农作物的育种中。
总之,分子标记辅助的遗传育种实践为农作物改良提供了一种高效、准确的方法。
通过利用分子标记技术,育种者可以更加精确地选择优良基因,加速杂交和选择的过程,并为育种研究提供基础。
随着技术的不断发展,分子标记辅助的遗传育种将在农业生产中发挥愈加重要的作用。
简述分子辅助育种的特点
分子辅助育种是一种利用分子生物学技术辅助传统育种方法的育种技术。
其特点如下:
1. 高效性:分子标记技术可以快速地筛选出具有目标性状基因的植株,从而加速了新品种的选育过程。
2. 精准性:分子标记技术可以精确鉴定目标基因,避免了传统育种方法中因基因频率低而难以筛选的问题。
3. 经济效益:由于筛选效果更精确,所需试验材料更少,节约了时间和经费,从而降低了新品种研发的成本。
4. 增强了遗传多样性:分子辅助育种可以挖掘出被遗传多样性所掩盖的自然变异,进一步拓展了育种材料的遗传多样性。
总之,分子辅助育种技术可以提高育种效率,降低成本,并且为选择更具优势的遗传材料提供了更好的手段,有望在未来带来更多的发展。
畜禽分子标记辅助育种技术规程随着科技的不断发展,分子标记辅助育种技术已经成为畜禽育种的重要手段之一。
分子标记技术可以通过标记遗传物质上的特定序列,从而实现对畜禽基因组的分析和筛选。
本文将介绍《畜禽分子标记辅助育种技术规程》,旨在为畜禽分子标记辅助育种提供规范和指导。
一、技术原理畜禽分子标记辅助育种技术是利用分子标记技术对畜禽基因组进行分析,筛选出具有优良性状的个体或群体,以实现畜禽品种改良的目的。
该技术主要依靠PCR扩增技术,对标记遗传物质进行检测分析。
PCR扩增技术是在酶的作用下,将DNA序列进行复制,从而扩大检测的灵敏度和准确性。
二、技术流程畜禽分子标记辅助育种技术的主要流程包括:样本采集、DNA提取、PCR扩增、电泳分析、数据分析等步骤。
具体流程如下:1. 样本采集:选取具有代表性的样本,包括不同品种、不同性别、不同年龄、不同环境等因素的畜禽个体。
2. DNA提取:将畜禽组织样本中的DNA提取出来,可采用CTAB 法、盐酸法、酚氯仿法等方法进行提取。
3. PCR扩增:选择合适的引物和PCR反应体系,对DNA进行扩增。
该步骤需要考虑PCR反应体系的温度、时间、引物浓度等因素,以保证PCR反应的成功和准确。
4. 电泳分析:将PCR扩增产生的DNA片段通过琼脂糖凝胶电泳分析,根据不同电泳迁移速度,判断是否存在目标基因型。
5. 数据分析:根据电泳分析结果,进行数据分析和统计,筛选出具有优良性状的个体或群体。
三、技术应用畜禽分子标记辅助育种技术在畜禽育种中有着广泛的应用。
它可以用于畜禽品种间的遗传多样性分析,为畜禽种质资源保护和利用提供技术支持。
同时,该技术也可以用于畜禽品种改良和优化,通过筛选出具有优良性状的个体或群体,实现畜禽品种的提高和优化。
四、技术优势畜禽分子标记辅助育种技术相比传统育种技术具有以下优势: 1. 高效性:该技术可以快速、准确地筛选出具有优良性状的个体或群体,大大提高了育种效率。
分子标记辅助育种技术分子标记辅助育种技术是在水稻、小麦、玉米、大豆、油菜等重要作物上,通过利用与目标性状紧密连锁的DNA分子标记对目标性状进行间接选择,以在早代就能够对目标基因的转移进行准确、稳定的选择,而且克服隐性基因再度利用时识别的困难,从而加速育种进程,提高育种效率,选育抗病、优质、高产的品种。
(一)发展回顾我国的农作物分子标记辅助育种的研究始于90年代初,在过去的近十年时间里,取得了重要的研究进展:1.构建了水稻等作物的染色体遗传图谱;2.构建了水稻染色体物理图谱;3.利用分子标记对我国作物种质资源遗传多样性进行了初步的研究;4.对一些重要的农艺性状进行了定位、作图与标记,相应的基因克隆已在进行。
在基因组计划开展以来的短短的几年时间内,主要农作物的遗传连锁图的绘制均已完成。
1996年我国用RFLP标记对水稻进行作图,构建了水稻12条染色体的完整连锁图。
此后,又构成了有612个标记的水稻遗传连锁图,较好地满足水稻遗传育种工作的需要。
除水稻之外,还绘制了谷子的RFLP连锁图。
构建了大豆分子标记遗传框架图、小麦野生近缘植物小伞山羊草的连锁图以及小麦的第1、第5、第6染色体部分同源群RFLP连锁图等。
1997年,利用广陆矮4号水稻品种构建的BAC文库,建立了631个长度不同的跨叠群。
用水稻遗传图谱上的RFLP标记及STS标记确定了631个跨叠群在水稻12条染色体上的位置,绘制出了水稻的染色体物理图。
该物理图长为352284Kb,覆盖了水稻基因组的92%。
我国近年来对作物的重要性状,如育性基因、抗性基因及产量性状基因的作图与标记方面开展了大量研究工作。
在育性方面,找到了与光敏核不育水稻的光敏不育基因位点连锁的RFLP标记。
定位了水稻不育系5460F的育性隐性单基因tms1,并找到与之紧密连锁(1.2cM)的RFLP标记。
定位水稻野败不育系恢复基因的两个主效基因Rfi3和Rfi4,初步确定了与其中Rfi3基因紧密连锁(2.7cM)的RFLP标记,并已转化为STS标记。
利用分子标记辅助育种一、分子标记辅助育种概述分子标记辅助育种是现代生物技术与传统育种方法相结合的一种高效育种技术。
它利用分子标记与目标基因紧密连锁的特性,在作物育种过程中对目标基因进行追踪和选择,从而显著提高育种效率和准确性。
随着分子生物学技术的不断发展,分子标记辅助育种已成为作物遗传改良的重要手段,在农业生产中发挥着越来越重要的作用。
二、分子标记辅助育种的关键技术1. 分子标记类型- SSR标记(简单重复序列标记):SSR标记具有多态性高、共显性遗传、重复性好等优点。
其核心是由1 - 6个核苷酸组成的简单重复序列,广泛分布于基因组中。
通过设计特异性引物对SSR区域进行扩增,根据扩增产物的长度多态性来检测个体间的差异。
例如,在水稻育种中,利用SSR 标记可以有效区分不同品种的水稻,为品种鉴定和纯度检测提供了可靠的方法。
- SNP标记(单核苷酸多态性标记):SNP标记是基因组中单个核苷酸的变异,是最常见的遗传变异类型。
它具有数量多、分布广泛、检测通量高的特点。
SNP标记的检测方法包括基于PCR的方法、芯片技术和新一代测序技术等。
在玉米育种中,SNP标记已被广泛应用于全基因组关联分析(GWAS),用于挖掘与重要农艺性状相关的基因位点,为分子标记辅助选择提供了丰富的标记资源。
- AFLP标记(扩增片段长度多态性标记):AFLP标记结合了RFLP(限制性片段长度多态性)和PCR技术的优点,具有较高的多态性检测效率。
其原理是通过对基因组DNA进行限制性内切酶酶切,然后连接特定的接头,再进行选择性扩增。
扩增产物通过电泳分离,根据片段长度多态性来分析遗传差异。
在小麦育种中,AFLP标记可用于构建遗传连锁图谱,定位控制小麦抗病性、品质等性状的基因。
2. 目标基因定位与克隆- 连锁分析:连锁分析是通过研究标记与目标基因在染色体上的连锁关系来定位目标基因的方法。
当标记与目标基因紧密连锁时,它们在遗传过程中倾向于一起传递。
分子标记的发展及分子标记辅助育种分子标记辅助选择育种(Marker Assisted Selection (MAS)或Marker Assisted Breeding)是利用与目标基因紧密连锁的分子标记或功能标记),在杂交后代中准确地对不同个体的基因型进行鉴别,并据此进行辅助选择的育种技术。
通过分子标记检测,将基因型与表现型相结合,应用于育种各个过程的选择和鉴定,可以显著提高育种选择工作的准确性,提高育种研究的效率。
分子标记辅助育种示意图DNA分子标记相对同类技术来说具有很强的优越性:因为大部分标记为共显性,对隐性性状的选择十分有利;数量极多,应对极其丰富的基因组变异;在生物发育的不同阶段,不同组织的DNA都可用标记分析;不影响目标性状的表达,与不良性状无必然的连锁等等。
随着分子生物学技术的发展,现在DNA分子标记技术也有数十种,广泛应用于遗传育种、基因组作图、基因定位、物种亲缘关系鉴定、基因库构建、基因克隆等方面。
分子标记的类型分子标记按技术特性可分为三大类。
第一类是以分子杂交为基础的DNA标记技术,主要有限制性片段长度多态性标记(Restriction fragment length polymorphisms,RFLP标记);第二类是以聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR反应)为基础的各种DNA指纹技术;第三类是一些新型的分子标记,如单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP),由基因组核苷酸水平上的变异引起的DNA序列多态性,包括单碱基的转换、颠换以及单碱基的插入/缺失等。
分子标记是以DNA多态性为基础,因而具有以下优点:①表现稳定,多态性直接以DNA 形式表现,无组织器官、发育时期特异性,不受环境条件、基因互作影响;②数量多,理论上遍及整个基因组;③多态性高,自然界存在许多等位变异,无需专门人为创造特殊遗传材料,这为大量重要性状基因紧密连锁的标记筛选创造了条件;④对目标性状表达无不良影响,与不良性状无必然连锁;⑤部分标记遗传方式为共显性,可鉴别纯合体与杂合体;⑥成本不高,一般实验室均可进行。
农业科学专业农作物育种的分子标记辅助选择技术研究随着人口的增长和食品需求的不断增加,农业科学专业的研究者们面临着巨大的挑战,需要提高农作物的产量和品质。
在这个背景下,分子标记辅助选择技术成为了农作物育种的重要手段之一。
本文将探讨农业科学专业农作物育种的分子标记辅助选择技术的研究进展和应用前景。
一、分子标记辅助选择技术的概述分子标记辅助选择技术是一种利用分子标记对农作物进行选择和育种的方法。
通过分析农作物基因组中的特定位点,可以快速、准确地鉴定和选择具有优良性状的个体。
这种技术不仅可以提高育种效率,还可以减少传统育种中的时间和资源消耗。
二、分子标记辅助选择技术的研究进展1. 分子标记的种类目前,常用的分子标记包括DNA标记、SNP标记和SSR标记等。
这些标记可以通过PCR扩增和测序等方法进行检测和分析。
2. 分子标记的应用分子标记辅助选择技术在农作物育种中的应用非常广泛。
例如,可以利用分子标记对抗病性、耐逆性和品质等性状进行选择。
此外,分子标记还可以用于亲本选择、杂交组合优选和种质资源鉴定等方面。
3. 分子标记辅助选择技术的优势与传统育种方法相比,分子标记辅助选择技术具有以下优势:(1)高效性:可以快速筛选出具有目标性状的个体,提高育种效率;(2)准确性:通过分子标记可以准确鉴定和选择目标基因型;(3)经济性:相对于传统育种方法,分子标记辅助选择技术可以节省时间和资源。
三、分子标记辅助选择技术的应用前景分子标记辅助选择技术在农作物育种中的应用前景非常广阔。
随着分子标记技术的不断发展和完善,我们可以更加精确地选择和改良农作物的性状。
此外,分子标记辅助选择技术还可以与其他育种方法相结合,进一步提高育种效率和品质。
四、分子标记辅助选择技术的挑战和解决方案尽管分子标记辅助选择技术在农作物育种中具有巨大的潜力,但仍然面临一些挑战。
例如,分子标记的选择和设计、标记与性状之间的关联性等问题。
为了解决这些问题,我们需要加强对分子标记技术的研究和应用,提高标记的选择和设计的准确性,加强标记与性状之间的关联性研究。
分子标记辅助育种技术
第一节
分子标记的类型和作用原理
遗传标记是指可以明确反映遗传多态性的生物特征。
在经典遗传学中,遗传多态性是指等位基因的变异。
在现代遗传学中,遗传多态性是指基因组中任何座位上的相对差异。
在遗传学研究中,遗传标记主要应用于连锁分析、基因定位、遗传作图及基因转移等。
在作物育种中,通常将与育种目标性状紧密连锁的遗传标记用来对目标性状进行追踪选择。
在现代分子育种研究中,遗传标记主要用来进行基因定位和辅助选择。
1、形态标记
形态标记是指那些能够明确显示遗传多态性的外观性状。
如、株高、穗型、粒色等的相对差异。
形态标记数量少,可鉴别标记基因有限,难以建立饱和的遗传图谱。
有些形态标记受环境的影响,使之在育种的应用中受到限制。
2、细胞学标记
细胞学标记是指能够明确显示遗传多态性的细胞学特征。
如染色体的结构特征和数量特征。
核型:染色体的长度、着丝粒位置、随体有无。
可以反映染色体的缺失、重复、倒位、易位。
染色体结构特征
带型:染色体经特殊染色显带后,带的颜色深浅、宽窄
和位置顺序,可以反映染色体上常染色质和异染
色质的分布差异。
染色体数量特征—是指细胞中染色体数目的多少。
染色体数量上的
遗传多态性包括整倍体和非整倍体变异。
细胞学标记
优点:克服了形态标记易受环境影响的缺点。
缺点:
(1)培养这种标记材料需花费大量的人力物力;
(2)有些物种对对染色体结构和数目变异的耐受性差,难以获得相应的标记材料; (3)这种标记常常伴有对生物有害的表型效应;
(4)观察鉴定比较困难。
3、蛋白质标记
用作遗传标记的蛋白质分为酶蛋白质和非酶蛋白质两种。
非酶蛋白质:用种子储藏蛋白质经一维或二维聚丙烯酰胺凝胶电泳,根据显示的蛋白质谱带或点,确定其分子结构和组成的差异。
酶蛋白质:利用非变性淀粉凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳及特异性染色检测,根据电泳谱带的不同来显示酶蛋白在遗传上的多态性。
蛋白质标记的不足之处:
(1)每一种同工酶标记都需特殊的显色方法和技术;
(2)某些酶的活性具有发育和组织特异性;
(3)标记的数量有限。
4 、 DNA标记
DNA分子标记是DNA水平上遗传多态性的直接反映。
DNA水平的遗传多态性表现为核苷酸系列的任何差异,包括单个核苷酸的变异。
二、分子标记的类型及作用原理
三大类:
(1)基于DNA-DNA杂交的DNA标记
利用限制性内切酶酶解及凝胶电泳分离不同生物体的DNA分子,然后用经标记的特异DNA探针与之进行杂交,通过放射性自显影或非同位素显色技术来揭示DNA的多态性。
(2)基于PCR的DNA标记
根据所用引物的特点分为随机引物PCR标记和特异引物PCR标记。
(3)基于单核苷酸多态性的DNA标记
何谓PCR?
聚合酶链反应
(Polymerase Chain Reaction)简称PCR
是一项在短时间内大量扩增特定的DNA片段的分子生物学技术。
PCR原理
类似于DNA的体内复制。
首先待扩增DNA模板加热变性解链,随之将反应混合物冷却至某一温度,这一温度可使引物与它的靶序列发生退火,再将温度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。
•这种热变性-复性-延伸的过程就是一个PCR 循环,PCR就是在合适条件下的这种循环的不断重复。
三个基本步骤:
(1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下
解链;
(2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度
(50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对;
(3) 延伸(Extension):在Taq DNA聚合酶合成DNA的最适
温度下,以目的DNA为模板进行合成.
由这三个基本步骤组成一轮循环,理论上每一轮循环将使目的DNA扩增一倍,这些经合成产生的DNA又可作为下一轮循环的模板,所以经25-35轮循环就可使DNA扩增达倍。
PCR反应中的主要成份
1. 引物
2. 4种三磷酸脱氧核苷酸(dNTP)
3. Mg2+
4. 模板DNA
5. Taq DNA聚合酶
6. 反应缓冲液
遗传性疾病的基因诊断
在临床医学上,PCR被用于鉴别遗传疾病和快速检测病毒、病菌感染。
法医学
个人识别、亲子鉴定
1985年,英国遗传学家Jeffreys采用DNA
指纹图谱进行个人识别和亲子鉴定。
•
有时犯罪物证量很少,不足以用来进行DNA指纹分析,PCR有效解决这些问题。
对于犯罪现场中遗留的少量生物物证,如一根毛发、一滴血等都可用于分析,在法医学上认证罪犯、亲子鉴定以及人的性别鉴定中PCR技术被普遍采用。
植物遗传育种
构建遗传图谱、分离目的基因、基因定位
分子标记辅助育种
了解不同品种间的亲缘关系、系统进化
畜牧
畜禽病诊断:猪伪狂犬病毒、猪口蹄疫病毒、猪瘟病毒、牛白血病毒、牛病毒、性腹泻病毒、免疫缺陷病毒等检测
性别鉴定:牛、绵羊Y染色体上特异DNA片段
构建基因图谱
检测基因整合与表达:转基因鱼
植物保护
病原微生物的基因型鉴定
植物病原微生物分类
形态学上相似性和潜在的血清学交互反应,用常规方法难以区分,采用反转录PCR (RT-PCR)可准确快速区分.
理想的DNA标记的应具备以下特点:
(1)表现稳定;
(2)数量多;
(3)多态性高;
(4)对目标性状表达无不良影响;
(5)部分标记的遗传方式为共显性,可鉴别纯合体和杂合体;
(6)信息量大,分析效率高;
(7)检测手段简单快捷,易于实现自动化;
(8)开发成本和使用成本低。
引物长度为9~10个碱基。
由于引物较短,在PCR中必须使用较低的退火温度,以保证引物能与模板DNA结合。
RAPD标记的优点:对DNA需要量极少;对DNA的质量要求不高;操作简单易行;一套引物可用于不同生物的基因组分析。
AFLP标记
优点:可靠、高效。
可在一个反应内检测大量限制性片段。
不足:需用同位素或非同位素标记引物,较费时耗材。
三个步骤
(1)DNA•酶切及人工接头连接,对提取DNA质量要求较高,需避免其它DNA•污染和抑制物质的存在;
(2) 扩增反应;
(3) 通常在4%-6%的变性聚丙烯酰胺凝胶上分离.
(四)SSR标记
( Simple sequence Repeat )
=(microsatellite)
=(Short Tandem Repeat,STR)
简单序列重复标记
优点:多态性丰富;操作简便,稳定可靠。
缺点:依赖测序设计引物,开发成本高。
第二节
重要农艺性状基因
连锁标记的筛选技术
分子标记为实现对基因型的直接选择提供了可能,因为分子标记的基因型是可以识别的。
如果目标基因与某个分子标记紧密连锁,那么通过分子标记基因型的检测,就能获知目标基因的基因型。
因此,可以借助分子标记对目标性状的基因型进行选择,这称为分子标记辅助选择(MAS)。
用于MAS育种的分子标记需具备的条件:
1.分子标记与目标基因紧密连锁;
2.标记适用性强,重复性好;
3.不同遗传背景选择有效.
一、遗传图谱的构建
主要环节:
1、根据遗传材料的多态性确定亲本组合,建立作图群体;
2、群体中不同植株的标记基因型分析;
3、用计算机程序构建连锁群。
暂时性分离群体:F2、F3、F4、
BC、三交群体等。
两类分离群体
永久性分离群体:RIL、DH群体等。
二、近等基因系(NIL)的培育
近等基因系:一组遗传背景相同或相近,只是在个别染色体区段上存在差异的株系。
如果一对近等基因系在目标性状上表现差异,那么,凡是能在这对近等基因系间揭示多态性的分子标记,就可能位于目标基因的附近。
近等基因系是一系列回交过程的产物。
三、利用群体分离法进行性状标记
利用NIL寻找质量性状基因的分子标记的基本策略是比较轮回亲本、NIL及供体亲本三者的标记基因型。
当NIL与供体亲本具有相同的标记基因型,但与轮回亲本的标记基因型不同时,则该标记基因就可能与目标基因连锁。
四、数量性状的基因定位
控制数量性状的基因在基因组中的位置称为数量性状基因座(QTL)。
利用分子标记进行连锁遗传分析,可以检测出QTL,即QTL定位(QTL mapping)。
第三节
作物MAS育种
一、作物MAS育种需具备的条件
1、分子标记与目标基因共分离或紧密连锁;
2、具有在大群体中利用分子标记进行筛选的有效手段(PCR);
3、重复性好、经济、简单、易操作;
4、有相应的计算机数据处理软件。
二、MAS育种方法
1、回交育种
应用于单基因或寡基因控制的质量性状。
2、MAS聚合育种
基因聚合就是将分散不同品种中的有用基因聚合到同一基因组中。
局限性:
(1)标记数量不够多,尤其是多基因控制的数量性状标记少;
(2)受遗传背景影响,一些QTL在不同作图群体中结果不一致;
(3)遗传图密度不够,标记与目标性状之间的遗传距离太大;
(4)分子标记辅助选择的技术要求高,成本高。