医学微生物学与免疫学
实验指导
（供医疗、护理、口腔、药学等专业用）
主编：彭效祥
班级：
学号：
姓名：
山东万杰医专微免教研室编制
2007年6月12日
目录
实验项目一细菌形态及结构观察 (3)
实验项目二细菌形态学检查法 (4)
实验项目三细菌的分布 (6)
实验项目四细菌的消毒及药敏试验 (7)
实验项目五血型抗原检测 (9)
实验项目六免疫球蛋白的测定 (10)
实验项目七细菌凝集反应 (12)
实验项目八琼脂双扩散试验 (13)
实验一细菌形态及结构观察
一、实验目的
1、熟悉显微镜油镜的使用方法，学生能独立用油镜观察细菌标本。
2、认识细菌的基本形态及特殊结构----鞭毛、荚膜、芽胞等。
二、实验内容
1、显微镜油镜的使用方法及维护
2、细菌形态及结构观察
三、实验仪器、设备及材料
1、显微镜
2、标本（鞭毛、荚膜、芽胞、葡萄球菌、链球菌等）
四、实验原理
细菌较小，肉眼不能直接观察，通过显微镜放大1000倍后观察细菌的形态结构
五、实验步骤
1、显微镜油镜使用由指导教师讲解、演示、学生自己操作
2、细菌的基本形态观察—个人操作
个人使用油镜观察细菌中的球菌、杆菌、弧菌等形态标本片。
3、细菌的特殊结构观察—示教
认真观察示教标本——芽孢、荚膜及鞭毛形态。
六、实验报告要求
绘出观察到的细菌形态及结构图。
七、实验注意事项
1、显微镜的正确使用
2、避免压碎标本片和损坏镜头
八、思考练习
1、如何正确使用显微镜的油镜观察细菌
2、绘制出细菌常见的形态与结构
实验二细菌形态学检查法
一、实验目的
1、熟悉细菌涂片的制作。
2、掌握革兰氏染色法。
二、实验内容
1、细菌涂片制作
2、革兰氏染色法
三、实验仪器、设备及材料
1、菌种（金黄色葡萄球菌、大肠杆菌）、取菌环、玻璃片、生理盐水、酒精灯
2、搪瓷盆、支架、冲洗瓶、染液（结晶紫或龙胆紫、碘液、
95%酒精、稀释复红）
四、实验原理
1、G+菌细胞壁结构较致密, 含脂类少,乙醇不易透入, 95%乙醇可使细胞壁脱水,细胞间隙缩小,通透性下降,阻碍结晶紫和碘的复合物渗出;而G-菌的细胞壁结构较疏松, 含脂类量多.易被乙醇溶解, 致使细胞壁通透性增高, 细胞内的结晶紫和碘的复合物易被溶出而脱色.
2、G+菌含大量核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫牢固结合，使已着色的细菌不易被脱色，G-菌含核糖核酸镁盐少，易被脱色。
3、G+菌等电点（PH2-3）比G-菌等电点（PH4-5）低，在同一PH染色环境中，G+菌比G-菌带的负电荷多，与带正电荷的碱性染料（结晶紫）结合牢固，不易脱色。
五、实验步骤
1、细菌涂片制作—个人操作
（1）、取洁净载玻片一张，于中心滴加生理盐水一小滴
（2）、用铂金耳以无菌手续取菌少许，涂于生理盐水中，使成1cm2左右微混浊菌液，待干。
（3）、将涂片通过火焰三次，固定菌膜即成。
2、染色
（1）、初染加结晶紫染液于涂片上,染一分钟后,用水洗去染液.
（2）、媒染加碘液染一分钟,水洗.
（3）、脱色加95%乙醇,不时摇动30秒,至无紫色脱落为止,水洗.
（4）、复染加稀释石炭酸复红液一分钟,水洗,干后镜检.
六、实验报告要求
记录涂片及染色过程及观察结果。
七、实验注意事项
（1）、染色结果常受操作者技术影响,尤其是容易过度脱色,往往阳性染成阴性. （2）、在同一载玻片上,需用已知金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌作革兰阳性及阴性对照.
（3）、染色关键在于涂片与脱色,涂片不宜过厚,固定不宜过热,脱色不宜过度. （4）、菌龄为18～24小时为佳.
八、思考练习
1、涂片的制作方法及革兰氏染色法的步骤
2、革兰氏染色法的意义
实验三细菌的分布
一、实验目的
1、了解细菌在自然界及正常人体皮肤上的分布情况，树立无菌观念。
2、熟悉细菌的培养方法
二、实验内容
1、细菌在自然界的分布：空气、水、土壤中细菌的培养。
2、正常人皮肤细菌培养。
三、实验仪器、设备及材料
普通固体培养基、取菌环、试管、吸管、恒温培养箱
四、实验原理
培养基、恒温箱为细菌提供合适的生长繁殖的条件，使细菌能够繁殖，根据菌落的多少来判断空气、水、土壤中细菌和正常人皮肤细菌的多少。
五、实验步骤
1、细菌在自然界的分布—小组集体操作
（1）、空气培养
取普通琼脂平板培养基一个，标明班级、小组、实验名称后，敞开培养基在空气中暴露10分钟，盖好后送37ºC培养箱中培养，24小时后看结果。（2）、水培养
取普通琼脂平板培养基一个，标明班级、小组、实验名称，以吸管吸取自来水0.1毫升，以无菌手续加入培养基中，再以接种环涂匀，放培养箱培养，24小时后看结果。
（3）、土壤培养
取普通琼脂平板培养基一个，标明班级、小组、实验名称，再取小试管一支，
加无菌盐水1毫升，取土壤一小粒放入盐水中摇匀，以无菌吸管吸取上清液
0.1毫升注入培养基内，再以接种环涂匀，放培养箱培养，24小时后看结果。
2、正常人皮肤细菌培养：取普通琼脂平板培养基一个，标明班级、小组、实验名称，小组中找一名同学用任一手指在培养基表面沾几次，放培养箱培养，24小时后看结果。
六、实验报告要求
记录结果（空气、水、土壤中细菌数的多少，正常人皮肤细菌数的多少）并解释
七、实验注意事项
1、在操作的过程中尽量减少杂菌的污染
2、注意接种环的使用，避免滑破培养基，影响观察
八、思考练习
1、空气、水、土壤哪个环境中细菌数较多，哪个比较少，为什么？
2、人的皮肤表面分布大量细菌的生理意义
实验四细菌的消毒及药敏试验
一、实验目的
1、熟悉常用消毒方法（煮沸、酒精、碘酒、新洁尔灭、过氧
乙酸、紫外线等）
2、熟悉细菌药敏试验的方法及意义
二、实验内容
1、常用的消毒试验
2、细菌药敏试验
