三聚氰胺单克隆抗体的制备及鉴定

三聚氰胺单克隆抗体制备与鉴定王旻子;应永飞;龚云飞;方结红;陈宗伦;张明洲【摘要】[Objective] To prepare the anti-melamine monoclonal antibodies and determinate their titer,sensitivity and specificity. [ Method] The spleen cells of BALB/c mice immunized by MEL-BSA were fused with SP2/0 myeloma cells,and hybridomas secreting monoclonal antibodies a-gainst melamine were selected and cloned. The titer,sensitivity and specificity of the monoclonal antibodies were determined by indirect ELISA method. [Result] Two stable hybridoma cell lines, named 1B12 and 2H9 were established. The titer of the monoclonal antibodies secreted by 1B12 and 2H9 determined by indirect ELISA were 1:25 600 and 1:12 800, respectively. The monoclonal antibodies had a good sensitivity with an ICX of 8.0 ng/ml and 8.3 ng/ml and 100% cross-reactivity to melamine,and scarcely showed cross-reactivity to others. [Conclusion] The anti-melamine special monoclonal antibodies with high titer and sensitivity were obtained, which laid foundation for future research.%[目的]制备抗三聚氰胺单克隆抗体,并对其效价、敏感性与特异性进行测定.[方法]通过三聚氰胺人工抗原MEL-BSA免疫BALB/c小鼠以及细胞融合等方法,获得分泌抗三聚氰胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并利用小鼠体内腹水诱生法制备抗三聚氰胺单克隆抗体；采用间接竞争ELISA法鉴定单克隆抗体的效价、敏感性与特异性.[结果]经小鼠免疫、细胞融合与亚克隆后获得了2株分泌抗三聚氰胺单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为1B12和2H9；间接ELISA检测结果显示,杂交瘤细胞1B12和2H9腹水型单抗的效价分别为1∶25 600与1∶12 800,IC50分别为8.0 ng/ ml与8.3 ng/ml,且该2种单抗只与三聚氰胺有反应,与三聚氰胺类似物无交叉反应.[结论]该研究获得了高效价、高灵敏度的三聚氰胺特异性单克隆抗体,为后续研究提供了良好基础.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2012(000)005【总页数】3页(P2574-2576)【关键词】三聚氰胺;单克隆抗体【作者】王旻子;应永飞;龚云飞;方结红;陈宗伦;张明洲【作者单位】杭州迪恩科技有限公司,浙江杭州 310013;浙江省畜产品质量安全检测中心,浙江杭州 310020;中国计量学院生命科学学院,浙江省生物计量与检验检疫技术重点实验室,浙江杭州 310018;中国计量学院生命科学学院,浙江省生物计量与检验检疫技术重点实验室,浙江杭州 310018;杭州迪恩科技有限公司,浙江杭州310013;中国计量学院生命科学学院,浙江省生物计量与检验检疫技术重点实验室,浙江杭州 310018【正文语种】中文【中图分类】TS201.6三聚氰胺(Melamine)是一种三嗪类含氮杂环有机化工原料，广泛应用于木材、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革、电气等行业［1］，其含氮量极高，不法商贩把廉价的三聚氰胺添加入食品中，以虚假提高食品中的蛋白质含量。

食品中三聚氰胺的检测方法进展摘要:三聚氰胺是一种用途十分广泛的有机化工产品,由于其含氮量高达66%,因此近年来被不法商家利用。

国内外三聚氰胺的分析方法很多,本文综述了三聚氰胺的各种检测方法,并且比较了不同方法的优缺点及其实用性,意在找出最快速、便捷、成本低的检测方法。

关键词:三聚氰胺检测食品方法三聚氰胺作为一种重要的化工原料,常用于制造三聚氰胺树脂该物质,是建筑业中常用的防火阻燃燃料[1]。

三聚氰胺既不是食品原料,也不是食品添加剂,但与蛋白质相比其含氮量更高,并且价格较蛋白质便宜很多,因此一些不法商家将其添加在食品或饲料中,钻国家目前蛋白质检测方法的空子,以形成产品中蛋白质含量高的假象[2],从而获得更高的利益。

这种手段造成了极其恶劣的社会影响,也给国家带来了严重的经济损失。

如今三聚氰胺的分析检测问题已成为一个热点问题,受到广泛的关注。

本文对三聚氰胺的各种检测方法进行归纳总结,为三聚氰胺的快速检测提供理论依据。

近几年三聚氰胺的检测方法发展迅速,已经由早期的苦味酸法和升华法到后来的高效液相色谱法、液相色谱法-质谱联用法、气相色谱-质谱联用法,到现在的酶联免疫法、金纳米粒子光度法和胶体金免疫层析法等。

三聚氰胺的分析检测方法在仪器上不断提高,在精确度上也是逐步提升,时间上不断缩短。

1 重量法重量法包括苦味酸法和升华法,其反应原理简单,但精确度不高。

苦味酸法方法原理是将水加入试样,加热溶解后,加人苦味酸溶液,称量所生成的苦味酸三聚氰胺沉淀的质量,即测得三聚氰胺纯度含量。

升华法测定原理是在升华装置中将试样在负压下进行加热,让三聚氰胺完全升华后,称其残渣量,即测得三聚氰胺纯度[3]。

2 高效液相色谱法(HPLC)国家标准GB/T 22400-2008[4]公布了原料乳中三聚氰胺快速检测的高效液相色谱法,采用乙腈作为原料乳中的蛋白质沉淀剂和三聚氰胺提取剂,0.2μm微孔滤膜过滤后供HPLC测定。

采用紫外/二极管阵列检测器检测,该方法的检出限为0.05 mg/kg,重复性好,再现性强。

抗生物素化三聚氰胺人源单链可变区抗体筛选与鉴定马巍娜;刘雪林;宋宏彬;沈建良;黄友章;刘毅;向丹【摘要】目的筛选生物素化三聚氰胺人源单链可变区(scFv)抗体,为研究相关快速检测试剂盒创造条件.方法本试验利用生物素化三聚氰胺为包被抗原,从半合成噬菌抗体库中筛选其特异性噬菌体抗体片段.即采用菌噬体表面展示技术,以链亲和素-生物素标记的三聚氰胺为固相包被靶抗原,把靶抗原包被在免疫平板上,加入噬菌体抗体库,则头部带有能与靶抗原特异性结合的抗体分子的噬菌体就被固定在免疫平板上,不能特异结合的噬菌体则被漂洗掉;将特异结合的噬菌体洗脱下来,侵染大肠杆菌,就可以得到含抗体基因的噬菌粒.结果从半合成的菌噬体单链可变区抗体库中经过3轮“吸附-洗脱-扩增”筛选过程后,获得抗原特异性和结合性较强的生物素化三聚氰胺scFv片段.结论酶联免疫吸附试验等进行鉴定后,筛选得到了抗生物素化三聚氰胺的噬菌体抗体基因片段,为下一步亲和力鉴定、蛋白表达及开发相关检查试剂盒奠定了基础.【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2016(013)012【总页数】3页(P1608-1610)【关键词】噬菌体表面展示技术;筛选;三聚氰胺;人源单链可变区抗体;生物素化【作者】马巍娜;刘雪林;宋宏彬;沈建良;黄友章;刘毅;向丹【作者单位】中国人民解放军海军总医院血液科,北京100037;中国人民解放军军事医学科学院十所,北京100039;中国人民解放军军事医学科学院十所,北京100039;中国人民解放军海军总医院血液科,北京100037;中国人民解放军海军总医院血液科,北京100037;中国人民解放军海军总医院血液科,北京100037;中国人民解放军海军总医院血液科,北京100037【正文语种】中文·论著·近年对制备化学物质抗体的研究很多，而利用噬菌体抗体库表面展示技术完成制备的报道少见[1-2]。

农药、兽药和食品添加剂抗体制备技术平台的建设是标准抗体资源库和快速检测方法建立的基础和关键。