流行性感冒诊断标准及处理原则
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流行性感冒诊断与治疗指南流行性感冒是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病。
流感是一种严重的疾病,每年都会导致大量的住院治疗和死亡病例,尤其对老年人、儿童和患有慢性病的人群来说更为危险。
及早诊断和治疗对于减少病情的严重度和传播的风险至关重要。
以下是流行性感冒的诊断与治疗指南。
一、流行性感冒的诊断1.病史询问:询问患者是否在流感流行季节接触过流感患者或在流行地区,并了解其症状、病程和严重程度。
2.体格检查:检查患者的体温、呼吸频率、心率、血压等生命体征,并仔细观察患者是否存在发热、咳嗽、喉痛、流涕、肌肉疼痛等症状。
3.实验室检查:流行性感冒的确诊通常依靠实验室检查。
常见的实验室检查包括流感病毒抗原检测、流感病毒核酸检测、病毒分离培养等。
二、流行性感冒的治疗1.对症治疗:对于轻型流感患者,通常只需要进行对症治疗。
包括:休息、补充水分、适当运动、保持室内空气流通等。
有流感病毒感染的患者应避免外出。
2.抗病毒治疗:对于高危人群和重症患者,推荐使用抗病毒药物进行治疗。
目前临床常用的抗病毒药物有阿那米韦、奥司他韦等。
这些药物能够抑制流感病毒的复制,缩短疾病持续时间和减轻症状的严重程度。
3.合理用药:在使用抗病毒药物时,需要在临床医生的指导下合理用药。
必须注意药物的禁忌症和副作用,遵守药物使用的指导,不滥用药物。
4.病情观察:在治疗过程中,需要密切观察患者的病情变化。
出现严重呼吸困难、胸痛、意识模糊等严重病症时,应立即就医。
5.个人防护措施:流感是通过飞沫传播的,所以个人防护措施非常重要。
包括:勤洗手、避免接触眼、口、鼻,尽量避免在人员密集的地方停留等。
总之,流行性感冒的诊断与治疗需要综合考虑患者的临床表现、流行病学史和实验室检查。
对于轻型流感患者,通常只需要进行对症治疗。
对于高危人群和重症患者,应及时进行抗病毒治疗。
在治疗过程中,需要密切观察患者的病情变化,合理用药,并采取个人防护措施。
最后,提醒大家在流感流行季节注意个人卫生,勤洗手,加强锻炼提高身体免疫力,保持良好的生活习惯。
严重流行性感冒病患诊断与治疗指南
诊断准则
1. 根据患者的病史和症状,特别是突发的高热、咳嗽、流涕、喉咙痛等症状,结合其是否接触过已确诊的流感病患,可以初步怀疑患者可能患有严重流行性感冒。
2. 体温超过38.5°C,咳嗽咳痰,持续时间超过3天,进一步支持严重流行性感冒的诊断。
3. 实验室检测结果,如鼻咽拭子中的流感病毒核酸检测阳性,可以确诊为严重流行性感冒。
治疗指南
1. 安排患者休息,保持充足的水分摄入,加强营养。
2. 对于有高热的患者,可以使用退热药物,如对乙酰氨基酚。
但需要注意使用剂量和频次,避免药物过量或滥用。
3. 对于伴有咳嗽的患者,可以使用镇咳药物,但也需要注意使用剂量和频次,并遵循医嘱。
4. 对于严重感染病例,可能需要采取抗病毒治疗,如奥司他韦等抗流感病毒药物,请在专业医生的指导下使用。
5. 在治疗过程中,密切观察患者的病情变化,及时调整治疗方案,并注意观察并处理可能出现的并发症。
以上为严重流行性感冒病患的诊断与治疗指南,具体的治疗方案应根据患者的具体情况和专业医生的建议进行制定。
请遵循医疗机构提供的指导和建议,确保患者获得正确的诊断和恰当的治疗。
流行性感冒诊疗方案流行性感冒,简称流感,是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病。
它具有较强的传染性,容易在人群中引起流行。
为了帮助大家更好地了解和应对流感,以下为大家提供一份详细的流行性感冒诊疗方案。
一、流感的症状流感的症状通常比普通感冒更严重,主要表现为:突然发热,体温可达 39℃以上,常伴有畏寒、寒战;头痛、肌肉酸痛、乏力等全身症状明显;咳嗽、咽痛、流涕、鼻塞等呼吸道症状相对较轻。
部分患者还可能出现呕吐、腹泻等胃肠道症状。
儿童、老年人、孕妇以及患有慢性基础疾病的人群,感染流感后容易出现严重并发症。
二、流感的诊断1、临床诊断根据患者的流行病学史(如接触过流感患者、在流感高发季节发病等)、临床表现(发热、头痛、肌肉酸痛等),可以初步诊断为流感。
2、实验室诊断(1)病毒核酸检测:通过采集患者的鼻咽拭子、口咽拭子等标本,进行流感病毒核酸检测,是诊断流感的金标准。
(2)病毒抗原检测:快速检测流感病毒抗原,操作简便,但敏感性相对较低。
(3)血清学检测:检测患者血清中的流感病毒抗体,主要用于回顾性诊断和流行病学调查。
三、治疗方法1、一般治疗患者应注意休息,多饮水,保持室内空气流通。
饮食宜清淡、易消化,避免食用辛辣、油腻食物。
对于高热患者,可给予物理降温,如温水擦浴、冷敷等。
2、抗病毒治疗(1)药物选择常用的抗病毒药物有奥司他韦、扎那米韦、帕拉米韦等。
发病 48 小时内进行抗病毒治疗可减少并发症、降低病死率、缩短住院时间;发病时间超过 48 小时的重症患者依然能从抗病毒治疗中获益。
(2)用药剂量和疗程奥司他韦:成人剂量为每次 75mg,每日 2 次,疗程 5 天。
儿童根据体重调整剂量。
扎那米韦:适用于 7 岁以上儿童和成人,通过吸入给药,每次10mg,每日 2 次,疗程 5 天。
帕拉米韦:成人用量为 300~600mg,静脉滴注,每日 1 次,疗程1~5 天。
3、对症治疗(1)解热镇痛药对于发热、头痛、肌肉酸痛等症状明显的患者,可使用对乙酰氨基酚、布洛芬等解热镇痛药。
流感治疗的基本原则
流感是一种常见的病毒感染,常会引起发热、咳嗽、喉咙痛、乏力等症状。
治疗流感的基本原则包括抗病毒治疗、对症治疗和并发症治疗。
1. 抗病毒治疗
抗病毒药物能缩短病程和减轻症状,但应在发病初期使用。
常用的抗病毒药物包括神经氨酸酶抑制剂和 m2 离子通道阻滞剂。
神经氨酸酶抑制剂如奥司他韦、扎那米韦等可以抑制病毒的复制,缩短病程和减轻症状。
m2 离子通道阻滞剂如金刚烷胺和金刚乙胺等可以减轻病毒对细胞膜的破坏,减少病毒的释放。
2. 对症治疗
对症治疗可以减轻症状,包括退热、止咳、缓解喉咙疼痛等。
退热药物如对乙酰氨基酚可以缩短发热的时间和降低发热的高度。
止咳药物如左多诺肽可以减轻咳嗽的症状。
缓解喉咙疼痛的药物如硫酸锌喉喷雾剂可以缓解喉咙疼痛和干燥。
3. 并发症治疗
对于重症患者和有并发症的患者,需要住院治疗并及时治疗并发症。
并发症包括肺炎、支气管炎、鼻窦炎、中耳炎等。
对于肺炎和支气管炎,可以使用抗生素进行治疗。
对于鼻窦炎和中耳炎,可以使用类固醇激素和抗生素进行治疗。
此外,流感的预防也非常重要,包括接种疫苗、加强锻炼、勤洗手、避免接触患者等措施。
流行性感冒诊疗指南流行性感冒,又称为普通感冒,是由流感病毒引起的常见疾病。
该病具有高度传染性,易在秋冬季节迅速传播。
本篇文章将为您提供流行性感冒的诊疗指南,帮助您更好地了解该疾病并采取适当的治疗措施。
一、病因与传播途径流感病毒主要通过空气飞沫传播,也可以通过接触染有病毒的物体而传染。
当患者咳嗽、打喷嚏时,口腔和鼻腔中的病毒会随飞沫进入空气中,他人吸入后容易感染。
此外,受感染的手部接触口鼻眼部位也是传播途径。
二、临床表现1. 呼吸道症状:流感患者常伴有喉咙痛、咳嗽、鼻塞、流涕等呼吸道不适症状。
2. 全身症状:流感患者出现全身不适、发热、乏力等症状,有时还会出现头痛、肌肉酸痛、寒战等。
3. 消化系统症状:少数患者可能出现恶心、呕吐、腹泻等消化系统症状。
三、诊断与鉴别1. 临床诊断:医生通常通过询问患者病史和症状,进行体格检查,结合流行病学调查等方式初步诊断。
2. 实验室检查:可通过咽拭子或鼻咽拭子进行实验室检查,如RT-PCR检测病毒核酸、病毒分离培养等确认诊断。
3. 与其他疾病鉴别:流感与感冒、其他呼吸道感染疾病在症状和病程上有一些不同,医生可以根据不同的表现来做出准确的鉴别。
四、治疗原则1. 休息:患者应保持充足的休息,避免参与剧烈活动,以利于身体康复。
2. 饮食调理:建议患者饮食应清淡易消化为主,多摄入富含维生素和矿物质的食物,如新鲜蔬菜、水果等。
3. 药物治疗:可根据患者症状严重程度,选用解热镇痛药、抗病毒药物等进行治疗。
抗生素对病毒感染无效,不应滥用。
4. 对症治疗:如鼻塞可使用盐水冲洗鼻腔、少量局部鼻黏膜刺激剂等缓解症状。
五、预防措施1. 接种疫苗:流感疫苗是预防流感最有效的方法之一,每年秋季接种疫苗可以降低患流感的风险。
2. 保持良好卫生习惯:勤洗手、避免接触病毒、保持良好的居室通风等可以有效降低感染风险。
3. 尽量避免人群密集场所:人群聚集易传播疾病,尽量避免到人群密集的场所,特别是流感高发期。
重症流行性感冒诊断与治疗指南一、病原学流感病毒属于正黏病毒科病毒。
分为甲、乙、丙三型。
流感的流行病学特点为突然暴发,迅速扩散,从而造成不同程度的流行。
二、临床分型1.单纯型流感。
最常见。
2.中毒型流感。
极少见。
表现为高热、休克及弥漫性血管内凝血(DIC)等,病死率高。
3.胃肠型流感。
除发热外,以呕吐、腹泻为显著特点,儿童多于成人。
2~3天即可恢复。
三、重症病例的临床表现1. 流感病毒性肺炎:季节性甲型流感(H1N1、H2N2和H3N2等)所致的病毒性肺炎主要发生于婴幼儿、老年人、慢性心肺疾病及免疫功能低下者,2009年甲型H1N1流感还可在青壮年、肥胖人群、有慢性基础疾病者和妊娠妇女等人群中引起严重的病毒性肺炎,部分患者发生难治性低氧血症。
人感染高致病性禽流感病毒引起的肺炎常可发展成急性肺损伤(Acute lung injury, ALI)或ARDS,病死率高。
2. 肺外表现:⑴心脏损害: 心脏损伤不常见,主要有心肌炎、心包炎。
可见肌酸激酶水平升高、心电图异常,而肌钙蛋白异常少见,多可恢复,重症病例可出现心力衰竭。
⑵神经系统损伤: 包括脑脊髓炎、横断性脊髓炎、无菌性脑膜炎、局灶性神经功能紊乱及急性感染性脱髓鞘性多发性神经根神经病(吉兰-巴雷综合征,Guillain-Barre syndrome)。
⑶肌炎和横纹肌溶解综合征: 在流感中罕见。
主要症状有肌无力、肾功能衰竭,肌酸激酶水平升高。
危重症患者可发展为多器官功能衰竭(MODF)和DIC等,甚至死亡。
四、并发症1. 继发细菌性肺炎:发生率为5~15%。
流感起病后2~4天病情进一步加重,或在流感恢复期病情反而加重,出现高热、剧烈咳嗽、咳脓性痰及呼吸困难,肺部可闻及湿性罗音及肺实变体征。
外周血白细胞总数和中性粒细胞显著增多,以肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌,尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)或流感嗜血杆菌等为主。
流行性感冒诊断标准及处理原则流行性感冒,又称为流感,是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病。
它具有较高的传染性和流行性,每年都会在全球范围内造成大规模的感染。
为了及时诊断和妥善处理流行性感冒病例,以下是流行性感冒的诊断标准及处理原则。
一、流行性感冒的诊断标准:1. 临床表现:流感的典型症状包括突发高热、寒颤、全身酸痛、头痛、咳嗽、喉咙痛和乏力等。
患者通常会有明显的全身不适感。
2. 流行病学史:患者是否有接触流感患者或者疫区人员的史料,以及是否曾经到过流感高发地区,对于流感的诊断非常重要。
3. 实验室检查:流感病毒的分离与鉴定是确诊流感的关键。
常用的检查方法包括鼻咽拭子或者咽拭子的病毒培养、免疫荧光染色、PCR等。
二、流行性感冒的处理原则:1. 病情观察与隔离:对于确诊或者高度疑似的流感患者,应即将隔离,避免与他人密切接触。
同时,需要对患者的病情进行密切观察,特殊是对于高危人群,如老年人、儿童、孕妇和慢性病患者等,应更加重视。
2. 对症治疗:对于流感患者,可以采取对症治疗的方式缓解症状。
常用的药物包括解热镇痛药、抗病毒药物和抗生素等。
但是需要注意,抗生素对于病毒感染无效,应避免滥用。
3. 充分歇息和饮食调理:流感患者应保持充足的歇息,避免过度劳苦。
合理的饮食调理有助于提高免疫力,包括多摄入富含维生素C的水果和蔬菜,适量补充蛋白质和碳水化合物。
4. 预防措施:流感的预防是非常重要的。
人们应该养成良好的卫生习惯,如勤洗手、避免接触眼、鼻、口等黏膜部位,保持室内空气流通,避免与患者密切接触等。
此外,流感疫苗是预防流感的有效手段,建议高危人群及时接种。
5. 并发症的处理:流感患者可能浮现并发症,如肺炎、支气管炎等。
对于浮现并发症的患者,应及时进行相应的治疗,包括使用抗生素、抗病毒药物和支持性治疗等。
总结:流行性感冒的诊断标准主要包括临床表现、流行病学史和实验室检查。
对于确诊或者高度疑似的患者,应进行隔离观察,并采取对症治疗、充分歇息和饮食调理等措施。
流行性感冒诊断标准及处理原则GB 15994—1995前言流行性感冒(简称流感)是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病,主要通过空气飞沫传播。
流感病毒有甲、乙、丙三个型,其中甲型所引起的流感流行最为广泛和严重,乙型常引起爆发,丙型则多引起小儿散发病型。
在我国虽将该病归属于法定丙类传染病,但一旦流行,传播快、波及面广,对人民健康及劳动生产力有很大影响,而且对年老体弱多病者及婴幼儿的威胁较大。
为贯彻执行《中华人民共和国传染病防治法》及《中华人民共和国传染病防治法实施办法》,特制定本标准。
本标准的附录A是标准的附录;本标准的附录B、附录C都是提示的附录。
本标准由中华人民共和国卫生部提出。
本标准起草单位:中国预防医学科学院病毒学研究所。
本标准主要起草人:陶三菊。
本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部传染病防治监督管理办公室负责解释。
1 范围本标准规定了流感的诊断标准及处理原则。
本标准适用于各级各类医疗、卫生、保健机构和人员对流感的诊断、报告和处理的应用。
2 诊断原则流感流行时一般根据临床症状、结合流行病学可对病人作出初步诊断。
如确定诊断则需要分离病毒阳性或病人双份血清抗体,测定恢复期抗体较急性期增高4倍或以上。
3 诊断标准3.1 流行病学史在流行季节一个单位或地区同时出现大量上呼吸道感染病人;或近期内本地区或邻近地区上呼吸道感染病人明显增多;或医院门诊上呼吸道感染病人明显增多。
3.2 临床症状3.2.1 出现急起畏寒、高热、头痛、头晕、全身酸痛、乏力等中毒症状。
3.2.2 可伴有咽痛、干咳、流鼻涕、流泪等呼吸道症状。
3.2.3 少数病例有食欲减退,伴有腹痛、腹胀、呕吐和腹泻等消化道症状。
3.3 实验室诊断3.3.1 血液化验检查白细胞总数不高或偏低。
3.3.2 从病人鼻咽分泌物分离到流感病毒(见附录A)。
3.3.3 恢复期病人血清中抗流感病毒抗体滴度比急性期有4倍或4倍以上升高(见附录B)。
3.3.4 直接检查呼吸道上皮细胞的流感病毒抗原阳性(见附录C 中C1)。
3.3.5 标本经敏感细胞增殖1代后查抗原阳性(见附录C中C2)。
3.4 病例分类3.4.1 疑似病例具备3.1加3.2或3.1加3.2加3.3.1。
3.4.2 确诊病例疑似病例加3.3.2或3.3.3或3.3.4或3.3.5。
4 处理原则4.1 早期隔离病人、对症治疗病人和防治合并症早期发现病人、早期隔离病人是最重要的措施。
对病人治疗一般采用对症治疗。
防治并发症主要应防止流感病毒性肺炎和细菌性肺炎,特别是对年老体弱者或伴有心血管、慢性呼吸道疾病者或婴幼儿,流感本身或其合并症可能引起死亡,应特别注意加强治疗护理。
4.2 预防措施一般采用综合性预防措施,讲究卫生,注意体格锻炼和营养,保持室内空气流通;对易感人群应采取相对隔离措施,如避免接触病人,不去公共场所等;对年老体弱者必要时可采用灭活疫苗接种或服用金刚烷胺等预防方法(但须注意金刚烷胺仅对防治甲型流感有效)。
附录A(标准的附录)病原学诊断方法A1 病毒分离从疑似流感病人呼吸道采集标本分离病原体。
A2 标本的收集和处理A2.1 标本收集时间应于发病早期(1~3d内)越早越好。
A2.2 标本收集方法常用棉拭子擦抹法或咽喉漱洗法。
棉拭子擦抹法用于采集儿童标本,采集时将灭菌棉拭子稍沾标本收集液(pH7.2~7.6含20%~40%灭菌肉汤的生理盐水或Hanks液或生理盐水),反复擦拭患者咽部数次,然后将此棉拭子放进装有上述收集液的试管中塞上棉塞。
咽喉洗漱法用于采集成人标本,采集时先让患者咳嗽,然后用10mL左右的收集液反复洗漱咽喉部约1min,吐入管内。
如有条件,儿童标本用负压抽吸法抽取鼻咽分泌物,成人标本用鼻咽洗液,可提高分离的阳性率。
标本采集后置冰壶(4℃)中尽快送实验室。
A2.3 标本的处理:用毛细吸管反复吹打标本液(如为咽拭子标本,先反复挤压咽拭子后弃之),将粘液打散,于4℃静置5~10min,待自然沉淀后取3mL上清,按每毫升加青霉素1000单位和链霉素1000μg,混匀置4℃处理2~4h即可接种。
如标本污染较重,可置4℃过夜处理。
如预计标本在48h内不能完成接种时,应将标本置低温(最好-70℃)保存。
A3 接种及培养法最常用鸡胚培养法和组织培养法,有条件的亦可同时用两种方法进行病毒分离。
A3.1 鸡胚培养法:取9~11日龄鸡胚,将处理过的标本液经羊膜腔和尿囊腔各接种0.2mL,每份标本接种3~4只胚,置33~35℃温箱培养3d,然后将鸡胚放置4℃冰箱过夜(或置—20℃冰箱1h再置4℃数小时)可分别收获尿液和羊水,并作初步血凝(其方法是用毛细吸管取1~2滴尿液或羊水,置大孔塑料板内,再加入1~2滴1%鸡红细胞,摇匀后置室温或4℃30~45min观察结果,根据血球凝集程度的不同可分为++++、+++、++、+、±、-),如血凝为+++~++++时,再按系列倍比稀释测定其血凝滴度,如具有一定血凝滴度即可鉴定。
如血凝阴性,可盲传2代,如仍为阴性则弃之。
A3.2 组织培养法:用0.2mL处理过的标本液接种于长成单层的原代人胚肾(或猴肾或地鼠肾),或狗肾传代细胞(Madin Darby Canine Kidney,MDCK),每份标本接种4管,置37℃吸附1~2h 后弃标本液,再加入每毫升含2μg胰酶的199维持液1mL,于33℃培养7~10d,并逐日观察病变。
从第三天开始每隔一天用0.4%鸡或豚鼠红细胞对培养管做红细胞吸附试验(试验前无菌法收获细胞培养上清液),如阴性则用已收获的上清液盲目传代,如阳性则测定上清液的血凝滴度。
如标本第1代红细胞吸附试验阴性,可用收获的全部上清液混合进行盲传2代,仍为阴性则弃之。
A4 新分离株的鉴定新分离流感病毒可用血凝抑制、补体结合、中和以及血细胞吸附抑制等试验方法进行鉴定。
最常用和最简单的方法是血凝抑制试验,必要时采用补体结合试验。
A4.1 血凝抑制试验:用当前流行的甲3、甲1及乙型流感病毒代表株的免疫血清与新分离流感病毒做血凝抑制试验,观察新分离株能否被免疫血清所抑制。
血凝抑制试验方法见附录B。
A4.2 红细胞吸附抑制试验:取红细胞吸附试验阳性的组织培养管和正常细胞对照管,用Hanks液洗细胞2次,加入经霍乱滤液(RDE)处理(1∶10)的免疫血清0.2mL,再加入Hanks0.6mL,室温作用30min后,再加入0.4%鸡(或豚鼠)红细胞0.2mL,置室温30min后于普通光学显微镜下观察有无血球吸附。
如果血细胞吸附被所用免疫血清所抑制,表明所分离的病毒与所用免疫血清型别相一致或接近。
A4.3 补体结合试验:如果用已知的甲型(甲3、甲1)或乙型或丙型流感病毒免疫血清对新分离病毒的血凝均不能抑制,则应考虑可能为甲型流感病毒的新亚型,可用针对甲型、乙型流感病毒核蛋白的免疫血清作补体结合试验定型。
附录B(提示的附录)血清学诊断方法B1 血凝抑制试验方法B1.1 原理一些动物红细胞(如鸡、豚鼠等)以及人“O”型血红细胞上有流感病毒受体,遇流感病毒可产生红细胞凝集现象,简称血凝。
若将特异性抗体与流感病毒(血凝素)预先作用后再加入红细胞则不产生凝集,称为血凝抑制现象。
用定量血凝素与不同稀释度血清抗体作用后,能完全抑制血凝的最高稀释度,即为血凝抑制抗体效价。
B1.2 主要材料大孔塑料板,1mL吸管或1mL移液器。
B1.3 双份血清收集及处理急性期血清于发病3d内采取,恢复期血清于发病后2~4周采取。
取0.1mL已分离的血清加入0.9(或0.4)mL霍乱滤液(RDE)(即1∶10或1∶5稀释)摇匀,于37℃水浴中过夜,以去除血清中的非特异性抑制素,次日置56℃水浴50min以灭活多余的RDE。
B1.4 流感病毒血凝素制备流感病毒接种鸡胚后48h收获的尿囊液,加入1/10000硫柳汞防腐。
为了延迟尿盐沉淀可先用无菌生理盐水做等量稀释,置4℃备用。
B1.5 鸡红细胞悬液的制备从静脉或心脏抽取正常健康鸡血,保存于阿氏(Alsevr's)液中,置4℃保存。
用前以生理盐水洗3次,末次经2000r/min离心10min,将红细胞用生理盐水配成1%浓度。
B1.6 血凝素滴定将流感病毒血凝素在大孔塑料板内用生理盐水从1∶5开始做系列倍比稀释,每孔0.25mL再加入等量1%鸡红细胞,摇匀,置室温或4℃30~45min后观察结果,以出现十十血凝的血凝素最高稀释度为其血凝效价,即为1个血凝单位,实验时采用4个血凝素单位,例如血凝素效价为1∶320,为1个单位,4个单位即为1∶80稀释。
正式实验前经校对取4个血凝单位用于实验。
B1.7 血凝抑制试验步骤B1.7.1 将上述已处理的待检血清(1∶10或1∶5)再用生理盐水做系列倍比稀释,每孔加0.25mL。
B1.7.2 加入等量已配好的4个单位血凝素。
B1.7.3 每孔加入0.25mL 1%鸡红细胞,摇匀置室温或4℃30~45min。
B1.8 结果观察观察结果时将血凝板倾斜数十秒钟,待阴性孔内红细胞自由下滑呈泪滴状时读结果。
以出现完全抑制的血清最高稀释度的倒数为抗体的效价。
在检测患者双份血清时需在同一次试验中进行,并以恢复期血清抗体效价较急性期抗体效价升高4倍或4倍以上为阳性。
B2 型特异性补体结合试验B2.1 原理甲、乙、丙三个型流感病毒各具有特异的可溶性抗原(核蛋白抗原),甲型流感病毒各亚型均具有相同的可溶性抗原,与乙型或丙型的可溶性抗原完全不同,因此可利用补体结合试验来区别它们。
当流感病毒出现很大的变异或出现新亚型而引起大流行时,由于来不及充分掌握新分离毒株的性状,常需同时采用补体结合试验和血凝抑制试验对新毒株进行血清学诊断。
B2.2 型特异免疫血清制备B2.2.1 免疫用抗原甲型为PR8株和乙型为Lee株均为小鼠适应株。
于乙醚麻醉下鼻腔感染12~16g小鼠,每鼠0.05mL,待感染后3~5d大部分小鼠发病、部分死亡时,解剖小鼠。
取肺研磨并用生理盐水制成10%的悬液,低速离心去除粗块,取上清鼠肺悬液即为免疫用抗原。
B2.2.2 免疫血清制备选体重300~500g的健康豚鼠,免前采血3~5mL,分离血清分装冻存留作对照。
豚鼠用乙醚轻度麻醉,鼻腔滴入上述鼠肺悬液抗原0.5mL,共免疫3~4次,每次间隔一周,在末次免疫的同时,由腹腔注射鼠肺悬液2mL,一周后试血,如果对同型尿膜抗原的血清效价超过1∶80,而与异型抗原无交叉反应,立即采血分离血清分装冻存于低温(-20℃以下)。
试验前血清于56℃水浴灭活30min。
B2.3 可溶性抗原的制备用甲、乙型流感病毒或新分离病毒按常规接种和收获尿囊液,如尿液血凝在1∶40以上时,收获其尿囊膜,将尿囊膜用盐水洗一次,用无菌剪刀将膜剪成数小块放入试管中,每个鸡胚的尿囊膜加1mL无菌生理盐水,冻化三次,末次化后以3000r/min离心15min,吸出上清即为可溶性抗原,加入1∶10000的硫柳汞防腐,置4℃冰箱至少可用一个月。