顶空气相色谱法测乙醇实验报告

顶空-气相色谱法测定血液中酒精含量摘 要：以叔丁醇为内标，采用顶空-气相色谱法对血液中的酒精含量进行分析。

该方法在5~160 mg/100mL 浓度范围内线性良好，回收率在90%~110%之间，方法的检出限为0.38 mg/100mL 。

关键词：顶空-气相色谱法 血液 乙醇2008年世界卫生组织的事故调查显示，大约50%~60%的交通事故与酒后驾驶有关，酒后驾驶已经被列为车祸致死的主要原因。

在中国，每年由于酒后驾车引发的交通事故达数万起；而造成死亡的事故中50%以上都与酒后驾车有关，酒后驾车的危害触目惊心，已经成为交通事故的第一大“杀手”。

根据国家质量监督检验检疫局发布的《车辆驾驶人员血液、呼气酒精含量阈值与检验》(GB19522—2004)中规定，驾驶人员每血液酒精含量大于等于20 mg/100mL 小于80 mg/100mL 为酒后驾车；血液酒精含量大于或等于80 mg/100mL 为醉酒驾车。

本文参照公安部GA/T842-2009标准，以叔丁醇为内标，顶空-气相色谱法分析血液中的酒精含量。

该方法准确可靠，重复性好。

1．实验部分1.1仪器与试剂岛津GC-2010 Plus 气相色谱仪，配FID 检测器，顶空进样器（DANI HSS-86.50） 1.2分析条件 1.2.1色谱条件色谱柱：Stabilwax ，30 m×0.25 mm×0.25 μm 进样口温度：200℃柱温程序：70℃(4 min) 20℃/ min 150℃(1 min) 柱流量：1.2 mL/min 进样方式：分流 分流比：5:1 检测器温度：230℃ 氢气流量：40 mL/min 空气流量：400 mL/min 尾吹气流量：30 mL/min 1.2.2顶空条件 平衡温度：70℃ 平衡时间：15 min 定量环温度：105℃ 传输线温度：110℃ 1.3样品制备用移液枪移取0.50 mL 待测血液样品于顶空瓶中，加入0.1 mL 叔丁醇水溶液（200 mg/100mL ）作为内标，密封后待测试。

基金项目　校级科研项目,项目编号:07LG002。

作者简介　刘兆(1974—　),男,汉族,讲师,法医学博士。

2008年第4期No 142008　Journal of Chinese Peop le πs Public Security University (Science and Technol ogy )　总第58期Su m58血中乙醇的顶空气相色谱分析刘　兆,温永启,张惠芹(中国人民公安大学刑事科学技术系,北京　100038)摘　要　目的:探讨改良测定血中乙醇的顶空气相色谱分析方法。

方法:以正常人空白血液添加乙醇为样本,采用1,4-二氧六环作为内标物并在稀释液中加入硫脲和高氯酸以提高挥发性并促进蛋白质的降解,通过顶空气相色谱法进行定性定量分析,在对实际案例检样的检验中与采用“标准方法”检测的结果进行对比。

结果:采用新方法定量分析时,血中乙醇在010625mg/mL ～1mg/mL 范围内线性关系良好(r 2=019996),各浓度组的变异系数(CV )<2%,血中乙醇的最低检出限为012μg/mL (S/N ≥3)。

结论:以1,4-二氧六环为内标物的新方法简便、准确,比以往的方法更加灵敏且避免干扰,适用于血醇的定性、定量检验。

关键词　乙醇;顶空气相色谱;法医检验中图分类号　D9181930　引言血醇检验是法医毒化分析中的一项基本工作,在酒后驾车、中毒死亡等案件的鉴定中至关重要[1]。

目前国内公共安全行业标准中使用的方法(以下简称方法A )采用叔丁醇作内标物,通过顶空气相色谱法进行血中乙醇的检验[2],同时还可检测出甲醇、丙醇、戊醇等易挥发性物质。

所述方法中用作内标物的叔丁醇由于保留时间较短,易与其他挥发性物质产生干扰,且其定性、定量检验需使用约3mL 血液,在一些特殊情况中实属较大的消耗。

为改善上述问题,本实验方法(以下简称方法B )采用保留时间较长的1,4-二氧六环作为内标物以避免与其他挥发性物质的干扰,在检样制备中所用的稀释液里加入硫脲和高氯酸可提高挥发性和分解蛋白质[3],以便提高灵敏度,减少检样的消耗。

分析与检测沈平申广文卢志敏(广州市浪奇实业股份有限公司，广东广州，510627)摘要：采用毛细管顶空气相色谱法测定乙醇消毒剂中的乙醇含量。

该方法以体积比配制试液，采用极性岛津WondCapwax毛细管色谱柱分离，FID检测器进行检测，内标法定量。

结果表明，乙醇的体积浓度在0.2~1.0mL/L范围内与其色谱峰面积呈良好的线性关系，相关系数为0.9998,方法定量限为1口L/L，加标平均回收率99.8%，该方法简单、快捷、准确。

关键词：毛细管柱；顶空气相色谱；内标法；乙醇含量测定中图分类号：R187+.2文献标识码：A文章编号：1672-2701(2021)04-61-05随着新型冠状病毒感染的肺炎疫情暴发，消毒剂成为市面上热销产品，其中包括众所周知的乙醇类消毒剂。

乙醇是良好的溶剂，有较强的渗透作用，其作用时间快，易挥发、性质稳定、安全。

市面上通常有喷雾型、凝胶型两种。

乙醇消毒原理是能够使细菌蛋白质变性，降低细菌活性从而杀灭细菌，适用于一般物体表面消毒，手和皮肤消毒。

研究表明乙醇消毒剂中的乙醇含量在70%〜80%(v/v)之间对细菌及病毒具有良好的灭活作用。

目前GB/T26373《醇类消毒剂卫生要求》中乙醇含量的检测方法是采用色谱填充柱，制备样品后直接进样，标准曲线法定量。

本文探讨以体积比进行试液配制，采用极性毛细管顶空气相色谱分离、内标法定量来检测消毒剂中乙醇含量。

实验证明，对比目前使用的手动进样的填充柱色谱法更方便、快捷、准确，同时能满足液状和凝胶状（黏度高）的消毒剂样品检测。

1实验部分1.1实验原理用毛细管气相色谱法结合顶空技术，在选定工作条件下，使乙醇、正丙醇（内标物）得到分离，用FID检测，根据内标法计算出乙醇的含量。

1.2主要试剂和仪器乙醇（色谱纯）；正丙醇（色谱纯）；水（实验室二级用水），自制。

气相色谱仪（岛津GC-2010plus），岛津公司；气相顶空进样器（DK-3001A型），北京中兴分析仪器研究所；色谱柱（0.25mmX30mX0.25pm WondCapwax柱），岛津公司；FID检测器，岛津公司；分析天平（AL204），梅特勒托利多仪器有限公司；移液器（100〜1000pL），艾本德Eppendorf。

实验二 气相色谱外标法定量测定乙醇含量一、 实验目的1、熟悉气相色谱仪的操作步骤2、学习外标法定量的基本原理和测定方法二、基本原理所谓的外标法就是应用欲测组分的纯物质来制作标准曲线。

用欲测组分的纯物质加稀释剂（对液体试样用溶剂稀释，气体试样用载气或空气稀释）配制成不同质量分数的标准溶液，取固定量标准溶液进样分析，从所得色谱图上测得相应信号（峰面积或峰高），然后绘制响应信号（纵坐标）对质量分数（横坐标）标准曲线。

分析时，取和绘制的标准曲线时同样量的试样（固定量进样），测得该试样的响应信号，由标准曲线即可查出其质量分数。

用外标法进行定量具有不使用校正因子，操作简单，计算方便等优点，但是这种方法结果的准确度主要取决于进样量的重现性和操作条件的稳定性。

本实验以未知含量的乙醇样品为待测物，利用外标法，测定样品中乙醇的质量分数。

三、实验仪器与试剂仪器：1）GC7700 气相色谱仪、TCD 检测器 2）微量进样器 10μl 3）色谱柱 试剂：乙醇（分析纯）， 去离子水 载气：高纯氮四、实验步骤1．标准溶液的配制：在实验课前配好1号、2号、3号、4号、5号标准溶液（50–500ppb ） 2．GC7700（TCD ）的操作步骤：1）打开载气总阀门，至0.4 MPa ，保持半小时。

2）打开设备电源，TCD 设为“开”，设置各路温度参数，TCD 电流为“0”。

3）开启T2000工作站，观测设备输出信号。

4）15分钟后，气路稳定，确定TCD温度高于100o C并初步稳定,根据分析条件设TCD电流。

5）观测 TCD基线，调至可视范围，基本稳定后，调零（0-5mv）.6）进样分析，如出倒峰，则可通过修改TCD极性校正。

7）进样结束后，进行降温设置，或调用关闭设置，关闭TCD电流，各温度设置降到80o C 以下，关电源，关载气。

3．标准曲线的绘制：用微量进样器向色谱柱中进1号、2号、3号、4号、5号标准溶液各1μl，得到各标准溶液的色谱图，进行数据处理，绘制出标准曲线。

顶空-气相色谱法测定血液中乙醇含量方法的研究摘要：利用乙醇的挥发性，以叔丁醇为内标，用顶空-气相色谱火焰离子化检测器（FID），对血液中的乙醇含量进行分析，经与平行操作的乙醇对照品比较，以保留时间定性，用内标法、峰面积比进行定量。

该方法在0.5-400mg/100ml浓度范围内线性良好，回收率在95%-105%之间，方法检出限为0.01mg/100ml。

关键词：顶空气相色谱法血液乙醇内标乙醇是一种高效麻醉剂，研究表明，饮酒后由于乙醇的麻醉作用，人的中枢神经活动会变得迟钝，并延及运动神经和末梢神经，使手足活动迟缓，生理机能减退，视力、听力等感知能力降低[1]。

近年来，酒后驾车和酒精中毒事件日益增多，人体中乙醇含量的测定是诊断和治疗酒精中毒性疾病及对酒后引发的交通事故和刑事案件分析裁定的重要依据。

乙醇主要在胃吸收，约1 h-1.5 h可全部吸收[2]。

因此，血液乙醇含量分析对临床治疗效果监测和交通部门执法都有重要意义。

交通事故处理和临床治疗中常需快速、准确地检测血液中乙醇含量[3]。

目前，血液中乙醇含量测定有化学法、色质联用法、生物传感器法和气相色谱法等，这些已有的方法在实际应用中操作复杂，耗时长，或者成本较高，导致检测应用的局限性。

本研究建立一种无需样品前处理方法，对实验影响因素进行探讨和优化，确立了血液中乙醇含量快速测定的顶空气相色谱法。

1实验部分1.1仪器与试剂Agilent7890A气相色谱仪（配FID检测器），北京中兴DK-3001A型顶空进样器，精密移液器，色谱纯乙醇和叔丁醇。

1.2分析条件1.2.1色谱条件色谱柱：INNOWAX毛细柱 30m×0.32mm进样口温度：250℃柱温：60℃柱流量：3ml/min检测器温度：250℃分流比：10：1进样方式：顶空进样器进样氢气流量：30ml/min空气流量：400ml/min尾吹气流量：30ml/min载气：氮气1.2.2顶空进样器条件样品瓶温度：70℃阀箱温度：90℃管路温度：110℃1.3试剂制备1.3.1乙醇标准溶液的配置吸取5.02ml色谱纯乙醇至于200ml容量瓶中，添加重蒸馏水至刻度，混匀，得2000mg/100ml乙醇储备液。

顶空气相色谱法测定小鼠血液中乙醇的浓度雷红伟,高铁祥,田先翔,杨　敏,陈　靓(湖北中医学院药学院,湖北武汉430065) 摘要:目的　建立测定小鼠血液乙醇的浓度的灵敏方法。

方法　取仲丁醇标液1m l和血样0125m l放入顶空瓶中,用内衬聚四氟乙烯膜的硅垫密封,置电热恒温器中60℃加热平衡30m in,气相色谱仪测定小鼠血液的乙醇浓度。

结果　校正因子Fi/Fs的平均值为31686,平均偏差为2115%。

结论　本方法是测定血液乙醇浓度简便、灵敏、有效的方法。

关键词:顶空气相色谱法;血药浓度;乙醇;仲丁醇中图分类号:R96911 文献标识码:A 文章编号:1008-987X(2007)02-0037-02D e tec ti o n o f the A l co ho l Co ncen tra ti o n i n R a ts’B l o o d byHead sp ace Ga s C h r om a t o g rap hHong wei Lei,Tiexiang Gao,Xianxiang Tian,et,al(11Depart m ent of Phar macol ogy,Phar maceutic of Hubei Chinese medicfal college W uhan430065) Ab s trac t:O b j ec ti ve:To detect the alcohol concentrati on in Rats’bl ood.M ethods:Sec-butyl alcohol is used as the inter2 nal standard and,heated at the te mperature of60℃and balanced f or30m inutes.Heads pace gas chr omat ograph is adop ted t o detect the alcohol concentrati on in Rats’bl ood.Results:The average value of correcti on fact or Fi/Fs is3.686,and the average deviati on is2.15%.Conclusi ons:Heads pace gas chr omat ograph is the si m p le,flexible and effective method t o detect the alco2 hol concentrati on in Rats bl ood.Ke y wo rd s:Heads pace gas chr omat ograph;B l ood concentrati on;A lcohol;Sec-butyl alcohol 血液乙醇含量测定,一般采用三氯醋酸稀释[1],离心后取上清液经微孔滤膜过滤,再以气相色谱法测定。

空顶气相色谱外标法测定全血中乙醇含量改进全血中乙醇含量测定的方法。

方法采用顶空气相色谱外标法测定，峰面积定量，保留时间定性。

结果本法质量浓度在0.0～160.0mg/100ml，加标回收率在97.0～103.0%。

结论本法操作步骤简单、快速，线性关系良好，灵敏度高，适用于全血中乙醇含量的测定。

［关键词］气相色谱；外标法；全血；乙醇乙醇俗名酒精，我国酒文化源远流长，在婚庆、节日、宴会等都有饮酒的习惯。

但过量饮酒会严重抑制中枢神经系统，引起运动失常，呼吸中枢麻痹，严重会导致死亡。

血液中乙醇浓度在200～400mg/100ml为严重中毒，400mg/100ml以上可致死[1]。

近年来因饮酒驾车而引起重、特大交通事故不计其数，《中华人民共和国道路交通安全法》第九十一条规定：严禁机动车驾驶员酒后驾车，这就要求建立一个快速、准确检测全血中乙醇含量的方法。

血中乙醇检测方法有重铬酸钾比色法[1]，顶空气相色谱法[2]，直接进样气相色谱法[3]，叔丁醇作内标物的气相色谱检测方法[4~5]，呼出气体酒精含量测定仪现场检测法。

本文研究了顶空气相色谱--外标法测定全血中乙醇含量，该法简便、快速、准确。

结果满意。

1 材料与方法1.1　原理　在一定温度下，乙醇在密闭条件下，经过一定时间，气液达到平衡，吸取一定体积液上气体，通过GDX-102柱子分离，FID检测器分析，以保留时间定性，峰面积定量，利用外标法计算样品中乙醇的含量。

1.2　仪器　GC-SC6000气相色谱仪（重庆川仪九厂），带FID检测器，GDX-102不锈钢填充柱2m×3mm（重庆川仪九厂），DK-3001A型顶空进样器（北京中兴分析仪器新技术研究所），顶空瓶(20ml)，抗凝管5ml。

1.3 试剂乙醇标准物质（国家标准物质研究中心），8000mg/100ml。

1.4 分析步骤1.4.1 色谱条件汽化室180℃，检测室180℃，柱箱150℃，氮气20ml/min，氢气30ml/min ，空气100ml/min。

实验报告单仪器分析实验报告实验四气相色谱测定甲醇、乙醇含量学号：姓名：专业：实验日期： 2014.04.17 实验教师：评分等级：【实验目的】学习色谱法的分离原理并熟悉色谱仪器的操作掌握色谱法保留时间定性和内标法定量的基本原理和方法了解氢火焰检测器的基本原理【实验原理】是利用试样中各组份在气相和固定液液相间的分配系数不同，当汽化后的试样被载气带入色谱柱中运行时，组份就在其中的两相间进行反复多次分配，由于固定相对各组份的吸附或溶解能力不同，因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，按顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流讯号经放大后，在记录器上描绘出各组份的色谱峰。

气相色谱仪的组成部分（1）载气系统：包括气源、气体净化、气体流速控制和测量（2）进样系统：包括进样器、汽化室（将液体样品瞬间汽化为蒸气）（3）色谱柱和柱温：包括恒温控制装置（将多组分样品分离为单个）（4）检测系统：包括检测器，控温装置（5）记录系统：包括放大器、记录仪、或数据处理装置、工作站【仪器试剂】仪器：气相色谱仪（恒信仪器）全套试剂：甲醇、乙醇混合溶液【实验内容】1.打开稳定电源。

调节供气装置氢、氮气、空气发生装置；2.调节分流阀使分流流量为实验所需的流量0.1MPa；3.打开空气、氮气开关阀，调节空气、氮气流量为适当值0.4MPa；4.设置柱箱、检测器、注样、辅助为95℃，200℃，200℃,150℃进行实验操作； 5点火。

调节空气阀至示数为0.01，点火以后恢复至0.05：6.打开色谱工作站，设定相关参数；7.仪器稳定后即可进样分析，取样后快速注入；8.峰记录与处理，微机化后自动获得积分面积、高、保留时间等数据；9.实验结束后关闭氢、氮、空气发生器，待柱温降到室温后关闭色谱仪。

【数据记录与处理】02468102468Y /m VX/min谱图文件: C:\N2010\OrgData111314231xq\某样品\某样品_峰序 组分名 保留时间[min] 峰高[uV] 峰面积[uV*s] 峰面积% 含量[%] 峰类型 1 2.346 3073 16645 39.51937 39.51937 BV2 2.508 5441 25473 60.48063 60.48063 VB--- 总计 ------- 8514 42118 100.00000 100.00000 ---甲醇、乙醇含量分别为39.52%、60.48%。

乙醇的顶空气相色谱法
一、样品处理
1.准备样品：选取纯净的乙醇样品，确保无杂质或污染物。

2.样品处理：将乙醇样品放入顶空瓶中，密封瓶口，进行后续分析。

二、顶空进样
1.顶空瓶放置：将装有乙醇样品的顶空瓶放置在顶空进样器中。

2.加热：通过顶空进样器的加热功能，将乙醇样品加热至一定温度，使其挥发。

3.气体分离：在加热过程中，乙醇挥发成气体，通过顶空进样器的气体分离装置，将乙醇气体与其他杂质分离。

4.进样：将纯净的乙醇气体引入色谱柱中进行分离。

三、色谱分析
1.色谱柱：选用适当的色谱柱，根据乙醇的特性选择合适的固定相，以实现乙醇与其他杂质的良好分离。

2.升温：在一定的温度范围内，逐渐升高色谱柱的温度，使乙醇气体在固定相中得到更好的分离。

3.检测器：选用适当的检测器，如火焰离子化检测器（FID）或热导检测器（TCD），以实现对乙醇气体的检测。

4.峰识别：根据色谱图上的峰形和保留时间，识别出乙醇气体的峰。

四、数据处理
1.峰面积测量：通过峰面积测量软件，测量乙醇气体的峰面积。

2.定量分析：根据峰面积测量结果，计算乙醇气体的浓度。

3.数据输出：将定量分析结果输出，得到乙醇气体的含量。

4.结果比较：将不同时间点的乙醇含量进行比较，分析其变化趋势。

食品中乙醇测定气相色谱法
采用气相色谱法测定食品中的乙醇含量，需要使用顶空进样技术。

以下是具体的实验步骤：
1. 对照品溶液的制备：精密量取恒温至20℃的无水乙醇5ml，平行两份，置100ml量瓶中，精密加入恒温至20℃的正丙醇（内标物质）5ml，用水稀释至刻度，摇匀。

然后精密量取该溶液1ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀（必要时可进一步稀释），作为对照品溶液。

2. 对照品溶液进样：精密量取3ml对照品溶液，置10ml顶空进样瓶中，密封，顶空进样，每份对照品溶液进样3次，测定峰面积，计算平均校正因子，所得校正因子的相对标准偏差不得大于2.0%。

3. 供试品溶液的制备：精密量取恒温至20℃的供试品适量（相当于乙醇约5ml），置100ml量瓶中，精密加入恒温至20℃的正丙醇5ml，用水稀释至刻度，摇匀。

然后精密量取该溶液1ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀（必要时可进一步稀释），作为供试品溶液。

4. 供试品溶液进样：精密量取3ml供试品溶液，置10ml顶空进样瓶中，密封，顶空进样测定峰面积，按内标法计算峰面积。

以上步骤仅供参考，实验方法会因具体实验条件和目标而变化。

如有需要，建议咨询专业人士以获取更准确的信息。