高效液相色谱解决方案

高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法液相色谱常见问题解决方法1 高效液相色谱仪系统液相色谱仪紧要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统构成。

对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的紧要部位。

2 常见问题及解决方法高效液相作为一种高精密仪器，假如在使用过程中不依照正确操作的话，就简单导致一些问题。

其中常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。

1.柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要紧密注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分别效果及保留时间等紧密相关。

所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI（3.3 Bar）之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。

压力过高、过低都属于柱压问题。

压力过高：这是高效液相在使用中常见的问题，指的是压力蓦地上升，一般都是由于流路中有堵塞的原因。

此时，我们应当分段进行检查。

（1）.首先断开真空泵的入口处，此时PEEK管里充分液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，假如液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。

处理方法：用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。

假如液体自由滴下，溶剂过滤头正常，在检查；（2）.打开Purge阀，使流动相不经过柱子，假如压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。

处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。

假如压力降至100PSI （6.7 Bar）以下，过滤白头正常，在检查；（3）.把色谱柱出口端取下，假如压力不下降，则是柱子堵塞。

处理方法：假如是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。

假如是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。

假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。

这时，假如柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很简单造成柱效下降，所以尽量少用。

高效液相色谱仪分析样品的预处理及解决方案高效液相色谱仪分析样品的预处理高效液相色谱仪分析样品的种类繁多，物理形态广泛，构成及其浓度多而杂多变，对分析结果的干扰因素很多，为达到分析目的，样品要进行有效的预处理。

一、样品预处理的紧要性：1、样品预处理所用时间宏大于色谱分别时间。

2、消耗大量的溶剂和其它化学品，占分析消耗总成本最大。

3、样品预处理是试验的重复性和精准性最差的环节，是影响试验结果好坏的紧要因素。

二、样品预处理的目的：1、除去微粒，削减干扰杂质。

2、浓缩微量组分。

3、提高检测的选择性和灵敏度。

4、改善分别效果。

5、有利于色谱柱和仪器的保护。

6、使样品形式和所用溶剂符合HPLC的要求。

三、样品预处理达到的要求：1、样品全部转化为低浓度溶液。

2、样品溶液洗脱强度低于流动相，与流动相相溶。

四、样品预处理的原则：1、在样品预处理过程中，尽可能防止和避开与待测组分发生化学反应。

2、在样品预处理过程中，假如与待测组分进行化学反应，那么这一反应必需是已知的，而且可以定量的完成。

3、在样品预处理过程中，要防止和避开待待测组分被玷污，尽可能削减无关化合物引入制备过程。

4、样品的处理过程应尽可能简单易行，所接受的样品处理装置尺寸应与样品处理量相适应。

5、采样之后应尽可能快的进行样品的分析测定，或使用合适的方法除去可能的变化和干扰。

五、样品预处理方法：1、过滤、离心：常用的滤膜材质有纤维素、聚四氟乙烯和聚酰胺。

其中聚酰胺应用广泛。

2、加速溶剂萃取：加速溶剂萃取是在提高温度（50～200℃）和压力（10.3～20.6MPa）下，用溶剂萃取固体或半固体样品。

3、超临界流体萃取：超临界流体萃取是利用超临界流体对物质的特别溶解性能原理而建立的萃取方法。

4、固相萃取：固相萃取是通过接受选择性吸附和选择性洗脱对样品进行富集、分别和净化，可以将其貌似地看作一种简单的液固色谱过程。

5、固相微萃取：固相微萃取是基于涂敷在纤维上的高分子涂层或吸附剂和样品之间的吸附－解吸平衡原理，集采样、萃取、浓缩和进样于一体的无溶剂的样品微萃取方法。

高效液相色谱常见故障及解决方案1.压力过高或过低-压力过高可能是由于柱堵塞或流动阻力增加所致。

解决方案包括更换柱、清洗柱或检查管路是否存在问题。

-压力过低可能是由于泵的磁力搅拌器不工作或进样器封堵所致。

解决方案包括检查泵的磁力搅拌器是否工作正常，清洗进样器。

2.峰形不对称-峰形不对称可能是由于进样量不均匀或柱温度过高所致。

解决方案包括确保进样量均匀和降低柱温度。

3.峰尾或前肩-峰尾可能是由于柱温度过高、流速过快或流动相pH值不合适所致。

解决方案包括降低柱温度、减慢流速或调整pH值。

-前肩可能是由于流动相中存在杂质或柱堵塞所致。

解决方案包括更换流动相或清洗柱。

4.杂峰或基线噪声-杂峰可能是由于样品纯度不高、固定相老化或试剂污染所致。

解决方案包括提高样品纯度、更换固定相或检查试剂是否污染。

-基线噪声可能是由于进样器密封不良、流动相气泡或电噪声所致。

解决方案包括检查进样器密封情况、减少流动相中的气泡或检查电子设备是否存在干扰。

5.柱寿命短-柱寿命短可能是由于样品预处理不彻底、柱收尾不当或流动相pH值不合适所致。

解决方案包括增加样品预处理步骤、正确收尾柱或选择合适的流动相pH值。

6.流量不稳定-流量不稳定可能是由于柱堵塞、进样器密封不良或流动相流速波动所致。

解决方案包括清洗柱、检查进样器密封情况或调整流动相流速稳定性。

7.进样量偏差-进样量偏差可能是由于进样器封堵、进样器针头磨损或进样器流速不稳定所致。

解决方案包括清洗进样器、更换进样器针头或调整进样器流速稳定性。

8.柱温度不稳定-柱温度不稳定可能是由于温控系统故障或环境温度变化所致。

解决方案包括检查温控系统是否工作正常或采取措施保持恒定环境温度。

这些是HPLC常见故障及其解决方案的例子。

在实际操作中，操作人员应该根据具体情况诊断和解决故障，并遵循相关的操作规程和安全操作指南。

高效液相色谱的常见问题分析一、高效液相色谱仪操作步骤1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。

2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。

3)．打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。

4)．进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。

5)．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。

冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。

冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。

6)．调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。

点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。

7)．设计走样方法。

点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。

若需建立一个新的方法，点击new method。

选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。

选完后，点击protocol。

一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。

8)．进样和进样后操作。

选定走样方法，点击start。

进样，所有的样品均需过滤。

方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。

全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。

9)．关机时，先关计算机，再关液相色谱。

10)．填写登记本，由负责人签字。

二、注意事项：1)．流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。

脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。

2)．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。

3)．所有过柱子的液体均需严格的过滤。

4)．压力不能太大，最好不要超过2000 psi三、提高HPLC检测限、溶剂脱气等的几点经验1、仅针对用反相碳十八烷基硅烷化填料的柱子和紫外检测器的HPLC通常在理论教学时，HPLC分析总要求实用HPLC纯的试剂、用孔径比填料粒度小的微孔滤膜过滤流动相、最好用真空或氦气脱气。

高效液相色谱仪的操作步骤液相色谱解决方案高效液相色谱仪操作步骤：1）．过滤流动相，依据需要选择不同的滤膜.2）．对抽滤后的流动相进行超声脱气10—20分钟。

3）．打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。

4）．进入hplc掌控界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。

5）．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。

冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。

冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。

6）．调整流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000、点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，察看基线的情况。

7）．设计走样方法。

点击file，选取se—lect users and methods，可以选取现有的各种走样方法。

若需建立一个新的方法，点击new method。

选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，依据需要而不同。

选完后，点击protocol。

一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2—5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading—inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。

8）．进样和进样后操作。

选定走样方法，点击start。

进样，全部的样品均需过滤。

方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。

全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。

9）．关机时，先关计算机，再关液相色谱。

10）．填写登记本，由负责人签字。

注意事项：11）．流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。

脱气后的流动相要当心振动尽量不引起气泡。

12）．柱子是特别脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。

13）．全部过柱子的液体均需严格的过滤。

14）．压力不能太大，可以不要超过2000 psi。

液相色谱流动相说明流动相相当于液相的血液，可以想象对液相的紧要程度。

高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法1 色谱柱跑干了，处理方法：将贮液瓶装入重蒸水，首先按purge键，将柱前气柱排出，若无法排出，可将色谱柱前拆下，用注射器抽吸。

待柱前气体排空后，连接色谱柱，用水高低流速交替冲洗色谱柱，直至柱压稳定为止。

2.基线不稳，有静电，处理方法：检查接地是否良好。

3.峰面积变化非常大，处理方法：检查是否进样阀堵塞。

4.基线突然提高，变粗，处理方法：检查样品池能量，若低于正常值，说明检测器污染。

5.柱压变动范围较大，处理方法：多为进气泡。

高低流速交替冲洗。

6.柱效或峰形突然变差，处理方法：更换预柱。

7塔板数低：色谱柱选择不对，二次保留、峰形不好的影响8色谱柱易变性：色说柱选择不对，二次保留的影响9色谱柱寿命短：色谱柱选择不对，样品需预处理（PH<3或PH>7）10保留值变化：色谱柱平衡不够，流动相比例改变11出现新的干扰峰：初始分离不够或初始样品无代表性选择波长要从以下几个方面考虑：1. 检测波长要大于溶剂截止波长。

如果所选择的波长下溶剂有很强的吸收当然是不合适的。

溶剂有强吸收后，基线抬高，减小检测的线性范围而且会加大基线噪声，对溶质的检测灵敏度下降。

2. 对各组分都要有适当的吸收。

一般是不可能做到的。

所以只要选择一个对大多数组分都有较大吸收的波长就可以了。

3. 外标法定量时，要选择被测组份最大吸收波长。

254nm 对常见的共轭结构和羰基官能团都有吸收。

对饱和基团也有弱的吸收。

而对于常见的乙腈、甲醇的透过率很高。

是在不知道用什么波长时最理想的试验波长。

（一）涡流扩散（Eddy diffusion）流动相碰到较大的固体颗粒，就像流水碰到石头一样产生涡流。

如果柱装填得不均匀，有的部分松散或有细沟，则流动相的速度就快；有的部位结块或装直紧密则流就慢，多条流路有快有慢，就使区带变宽。

因此，固相载体的颗粒要小而均匀，装柱要松紧均一，这样涡流扩散小，柱效率高。

78宁夏农林科技，Ningxia Journal of Agri.and Fores.Sci.&Tech. 2020，61(11 ):78-80高效液相色谱仪常见故障及解决方法吴江瑞，马燕，黄燕，孔祥明，杜越，魏晓琴，李慧中卫市农产品质量安全检验检测中心，宁夏中卫755000摘要：高效液相色谱法在农产品检测领域发挥着重要作用。

文章分析了高效液相色谱仪在使用中常见故障产生的原因，提出了常见故障解决方法，以期为检测人员提供参考。

关键词：高效液相色谱；常见故障；解决方法中图分类号：0657.31 文献标识码:A文章编号：1002-204X(2020)11-0078-03doi:10.3969/j.issn.1002-204x.2020.11.027Analysis of HPLC Common Faults Causes and SolutionsWu Jiangrui, Ma Yan, Huang Yan, Kong Xiangming, Du Yue, Wei Xiaoqin, Li Hui(Zhongwei City Agricultural Products Quality Safety Detection and Testing Center,Zhongwei,Ningxia 755000) Abstract High performance liquid chromatography plays an important role in the detection and testing of agricultural products.In this paper,the causes of common faults during the application of HPLC were analyzed.The solutions were also put forward,aiming to provide references for more testing personnel.Key words HPLC;Common faults;Solutions高效液相色谱法是农产品质量安全控制过程中不可缺少的重要方法，具有分离速度快、检测效率高、重现性好等特点，尤其在检测极性较强、相对分子质量较大、不易气化或受热易分解的农药中更能显示其优越性[1-2]。

高效液相色谱法一．仪器的维护与常见问题处理若液相出现规律性基线波动，长时间不平稳可能原因是什么？快速解决方法：一般为仪器系统出现气泡，最好使用纯甲醇长时间冲洗系统（不少于3小时，特殊情况要12小时左右）柱压逐渐升高可能原因是什么？快速判断①色谱柱出现堵塞②针座堵塞③进样针出现堵塞④系统管路中有未冲洗干净的盐⑤滤芯脏了解决方法①色谱柱出现堵塞：一种是将堵塞了色谱柱的位置拆卸，取出里面的筛网用水或甲醇超解（不建议采用，除非没有其他方法）另一种是将堵塞一头色谱柱链接在仪器上另一头不要链接，先用10%甲醇根据色谱柱柱压调节流速冲洗一小时左右，然后换成纯甲醇再以此方法继续冲洗，根据其柱压随时调整流速。

②针座堵塞与进样针出现堵塞：情况不严重则将它们拆卸后用水超解几分钟就可以了，若堵塞严重只有更换新的（堵塞不代表不能用，若无明显的质量损坏如：变形，滑口，开裂等，后续修好后还能做备件使用）③系统管路中有未冲洗干净的盐：用水或10%异丙醇对系统冲洗，冲洗后柱压正常，则可正常使用。

（注意不建议对系统反冲洗，会造成管路中的残留盐类物质重新回到系统中造成二次堵塞。

）④滤芯脏了：更换滤芯若出现保留时间飘移可能原因是什么？快速判断原因：①流动相混合不均匀②柱温不稳③压力不稳④密封圈松动⑤对于是四元泵的液相，其比例阀区域有堵塞情况（流动相是按比例配置，若比例阀区域堵塞，进样第一针时，可能有一个阀只进入25%另一个阀则是75%，进样第二针时则会变成一个阀进入20%，另一个阀80%）快速解决方法：①流动相重新配置，并按要求混匀②保证环境温度与仪器设定温度相差不大并稳定③系统冲洗平衡后方能实验④更换或调整密封圈⑤将出现堵塞区域的设备进行超声清洗。

1.气相检验化学残留：对照品重复性必须符合要求，但供试品重复性不做要求（上海海尼是对照品重复性必须符合要求，但配置两个供试品，各进一针不计算重复性。

目前海陵是对照品与供试品都要计算重复性）液相进样针无法正常采集?解决方法：一般为仪器机械故障，若进样器显示信号一直为红色，可能是进样针损坏或机械臂故障。