菌种保藏中的细菌鉴定方法

菌种保藏的方法菌种保藏是一种重要的微生物资源保护方式，对于研究、应用和开发微生物具有重要意义。

以下是几种常见的菌种保藏方法及其操作步骤。

一、低温冷冻保藏法低温冷冻是一种常用的微生物保藏方法，适用于大多数真菌、细菌和酵母菌。

其主要原理是将菌株保存在低温下，使其生理活动缓慢，以延长菌种的保藏时间。

操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。

2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。

3. 制备保存液：根据不同菌株的需要，制备适宜的保存液，常用的保存液有甘油、甘露醇等。

4. 菌种保存：将菌株用保鲜膜包裹，放入保存管中，加入保存液，密封保存管。

5. 冷冻保存：将保存管放入低温冰箱或液氮罐中进行冷冻保存。

二、干燥保藏法干燥保藏法是一种简便、经济的保藏方法，适用于真菌、细菌、放线菌等微生物。

其基本原理是将菌种与干燥剂混合，使其水分含量降低，从而实现微生物的休眠状态。

操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。

2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。

3. 制备干燥剂：根据不同菌株的需要，选择合适的干燥剂，如硅胶、氧化钙等。

4. 菌种混合：将菌株与干燥剂按照一定比例混合均匀。

5. 干燥保存：将混合物均匀地散布在无菌培养基上，置于通风干燥的环境中进行保存。

三、冷冻冻干保存法冷冻冻干保存法是一种较为复杂的菌株保藏方法，适用于难保存的微生物，如厌氧菌、放线菌等。

其主要原理是将菌株在低温下冻结干燥，从而保护微生物的活力。

操作步骤：1. 选择菌株：选择生长良好、菌株特性完整的菌株进行保藏。

2. 菌株处理：将菌株经过预处理，如鉴定鉴别、菌落孤立等。

3. 制备保存液：根据不同菌株的需要，制备适宜的保存液，如甘油、甘露醇等。

4. 冷冻过程：将菌株加入保存液中，放入冷冻机冷冻至低温（通常为-80℃）。

5. 冻干过程：将冷冻的菌株经过真空排气、结冰降温等步骤进行冻干处理。

一般细菌培养及鉴定结果-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述部分的内容可以包括以下内容：细菌是一类微小而重要的生物体，广泛存在于自然界的各个角落中，包括土壤、水体、空气以及生物体等。

它们对于生态系统的正常运行和人类的健康至关重要，具有重要的科学研究和应用价值。

在进行细菌的研究和应用之前，首先需要进行细菌的培养和鉴定。

细菌培养是指将采集到的细菌样本在合适的培养基中提供充足的营养和生长条件，使其繁殖扩增。

而细菌鉴定是指通过对细菌形态、生理生化特性以及基因组等方面进行分析和判断来确定细菌的种类和特性。

本文将重点讨论细菌的一般培养方法和鉴定方法。

在细菌培养方法方面，将介绍不同种类的培养基的配制和使用，以及培养条件的控制因素。

在细菌鉴定方法方面，将介绍常用的鉴定手段，如形态观察、生理生化实验和分子生物学技术等，以及它们的原理和应用范围。

通过对一般细菌培养和鉴定的研究，我们可以更好地认识细菌的生长规律和特性，进一步了解它们在自然界和人类生活中的作用。

同时，这些研究成果也为细菌的应用提供了技术支持，例如在医学、工业、农业等领域中的应用。

通过本文的探讨，希望能够使读者对细菌培养和鉴定有更清晰和全面的认识，为相关领域的研究和应用提供理论和实践的指导。

在继续研究细菌的过程中，我们也要注意遵守实验室的安全操作规范，确保实验的准确性和可重复性。

文章结构部分的内容可以写成如下形式：1.2 文章结构本文按照以下结构进行组织和展示：引言部分主要是对整篇文章进行一个概述和介绍，包括细菌培养和鉴定的基本概念以及研究目的。

通过引言，读者可以对文章的内容和目的有一个初步的了解。

正文部分是本文的核心内容，主要介绍了细菌培养方法和细菌鉴定方法。

在细菌培养方法部分，将会详细介绍细菌培养所需的培养基成分、培养条件和培养技术等方面的内容，帮助读者了解细菌在实验室中的培养过程。

在细菌鉴定方法部分，将会介绍细菌鉴定所需的常用技术和方法，包括形态学观察、生理生化试验、分子生物学方法等，帮助读者了解如何对分离到的细菌进行鉴定。

实验微生物菌种的分离纯化、培养、鉴定及保藏一、实验目的和要求1。

了解微生物的分离纯化方法。

2.学习检测水中大肠菌群的方法。

3。

学习微生物的保藏及鉴定方法。

4。

熟悉革兰氏染二、实验原理多管发酵法多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。

发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管.乳糖能起选择作用,因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气.1.初发酵试验水样接种于发酵管内，37℃下培养,24小时内小套管中有气体形成,并且培养基混浊，颜色改变，说明水中存在大肠菌群,为阳性结果。

48小时后仍不产气的为阴性结果。

2。

平板分离初发酵管24至48小时内产酸产气的均需在复红亚硫酸钠琼脂（远藤氏培养基）或伊红美蓝琼脂，平板上划线分离菌落。

3.复发酵试验以上大肠菌群阳性菌落,经涂片染色为革兰氏阴性无芽孢杆菌者，通过此试验再进一步证实。

原理与初发酵试验相同，经24小时培养产酸产气的，最后确定为大肠菌群阳性结果。

三、实验器材及试剂1。

水样污水样本2、培养基及试剂：二甲苯、苯酚、琼脂粉、香柏油、乳糖胆盐液体培养基、伊红美蓝琼脂（EMB）、营养琼脂培养基、革兰氏一液、革兰氏二液、革兰氏三液、革兰氏四液。

3、器材及耗材：双目显微镜、恒温培养箱、恒温干燥箱、洁净工作台、紫外线灯管、紫外线灭菌手推车、接种环、试管、酒精灯、滤纸、擦镜纸、载玻片、打火机、棉花、滴瓶、长塑料篓、纱布、吸耳球、产气管、培养皿、移液管等四、实验方法及步骤1。

第一天实验前的准备1）配制3支乳糖胆盐液体培养基，每支10mL,并加入产气管.配置营养琼脂培养基，灌装进2支试管中，配置200mL伊红美兰培养基150mL,于121℃高温高压灭菌20分钟，后放进恒温干燥箱。

2）包扎5套培养皿，包扎6根1mL、1根10mL移液管和3支滴管。

于121℃高压灭菌锅中灭菌20分钟。

3）称取一定量的液体石蜡,约为锥形瓶的三分之一。

于121℃高温高压灭菌20分钟。

菌种保藏中心如何进行细菌鉴定细菌鉴定是指将分别培育获得的病原菌,通过纯化培育使其达到不含有其他微生物的纯培育程度,继而进行系统鉴定。

而菌种保藏机构在收集一些已经冻干的菌种时,应在开启后经过两代的适应性培育方可进行复核性的系统鉴定。

系统鉴定是通过细菌的形态结构、生长特性、抗原性、病原性以及目前流行的核酸测定方法等检测,并用已知标准免疫血清确定分别细菌的属、种和型(群).目前菌种保藏机构通常使用的细菌鉴定方法大致有以下几种：传统方法常规宏观菌落形态学观看,主要观看菌落在其适合的培育基上的生长状况:细菌在固体培育基上的生长形态、大小、颜色是否匀称全都,菌落个体表面及边缘的生长状况;在液体培育基上的浑浊状况、沉淀状况、液面菌膜状况;半固体上穿刺接种后,观看细菌是否沿着接种线生长以及其生长状态是呈毛刷样生长还是匀称生长,上下生长是否全都.在鉴别培育基上培育,观看结果是否跟预期结果相同。

细菌的个体形态学观看,即通过显微镜观看.观看前细菌需要着色,要依据预先确定的观看项目选择与之相对应的染色方法,目前常用的染色方法包括革兰氏染色法、美蓝染色法、ZiehlNeelsen染色法、姬姆萨染色法、鞭毛染色法、芽胞染色法等.尽量选择对数生长期的细菌进行染色观看,此时的细菌生特长于幼期,利于观看,由于一些陈旧细菌的染色结果会有变化,如本为革兰氏阳性菌经过长期搁置后染色结果可能为革兰氏阴性.同时细菌培育时要留意培育基的选择,一些细菌的特别结构如荚膜、鞭毛、菌毛、芽胞等,其表达是需要在特定的培育基上才能正常发育,有的细菌如炭疽在一般的培育基上不形成荚膜,只在动物体内形成明显的荚膜,所以需先接种试验动物后用病料进行涂片镜检.在镜检时观看细菌基本形态结构和大小及其排列状态、菌端外形、有无两极染色、有无形成芽胞和荚胞等。

形态学鉴定辅以生化试验在细菌鉴定中具有重要的意义,生化试验是依据细菌培育过程中不同菌种所产生的新陈代谢产物各异,表现出不同的生长特性.通过生物化学的方法来检测这些物质的存在与否,从而能够得到细菌的鉴定结果.如糖(醇)类代谢试验、氨基酸和蛋白质代谢试验、有机酸盐和胺盐利用试验、呼吸酶类试验、毒性酶类试验等。

中国医学微生物菌种保藏管理办法根据中国微生物菌种保藏委员会管理和组织条例的规定，为了加强医学微生物菌种(以下简称菌种)的保藏管理，特制定本管理办法。

第一条组织及任务在卫生部领导下，在中国微生物菌种保藏委员会指导下，设下列医学微生物菌种保藏管理中心:中国医学真菌菌种保藏管理中心:由中国医学科学院皮肤病防治研究所负责。

中国医学细菌菌种保藏管理中心:由卫生部药品生物制品检定所负责。

中国医学病毒菌种保藏管理中心:由中国预防医学中心病毒学研究所负责。

保藏管理中心的任务是:(一)负责本门类微生物菌种的选择、收集、鉴定、保藏、交换和供应;(二)开展菌种分类、鉴定及保藏管理的研究;(三)组织学术交流和经验交流;(四)办理国内外菌种交换;(五)编制保管的菌种目录。

保藏管理中心下设专业实验室，承担全国性的业务工作。

专业实验室对其直接领导机构和保藏管理中心负责，并定期向管理中心汇报工作情况。

其具体任务是:(一)负责本专业有关微生物菌种的选择、收集、鉴定、保藏、交换和供应;(二)承担本专业有关疑难菌种鉴定;(三)开展有关菌种分类、鉴定、保藏的研究，包括新技术、新方法的研究和应用;(四)办理对外交流和交换菌种。

各专业实验室科研技术人员的编制和经费由所属主管部门负责。

生物制品生产、检定用的菌种按"生物制品生产、检定用菌种、毒种管理规程"执行，统一由卫生部药品生物制品检定所办理。

第二条菌种的分类菌种的分类根据其危险性决定(包括实验室感染的可能性，感染后发病的可能性，症状轻重及愈后情况，有无致命危险及有效的防止实验室感染方法，用一般的微生物操作方法能否防止实验室感染、我国有否此种菌种及曾否引起流行、人群免疫力等情况)。

依其危险程度的大小，我国的菌种分为四类。

一类:实验室感染的机会多，感染后发病的可能性大，症状重并能危及生命，缺乏有效的预防方法，以及传染性强，对人群危害性大的烈性传染病，包括国内未发现或虽已发现，但无有效防治方法的烈性传染病菌种。

菌种的保藏名词解释菌种的保藏对于微生物学研究非常重要，确保菌种的保存和传播。

本文将解释与菌种保藏相关的几个名词，包括：菌种、保藏、菌种鉴定、冻存和保存条件等。

菌种是指一种细菌、真菌或其他微生物，经过世界各地科研机构和鉴定中心确认后，被正式命名并分配了唯一的编号。

菌种通常由科学家从自然环境中分离和培养得来，通过研究和实验验证后确立其存在和性质。

菌种的命名和编号非常重要，可以确保科学研究的准确性和可靠性。

保藏是指将菌种保存并保持其活性和纯度的过程。

保藏通常通过冻存和保存在冷冻设备中来实现，如液氮罐或超低温冰箱。

通过冻存，菌种可以长期保存，并在需要时重新培养。

保藏的目的是防止菌种的丧失、污染和变异，从而保证后续研究的可重复性。

菌种鉴定是指对菌种进行识别和分类的过程。

菌种鉴定的目的是确认菌株的身份和性质，包括其学名、分类和特性。

鉴定菌种的方法包括形态学观察、生理生化特性分析、生物分子检测等。

菌种鉴定的准确性对于后续的科学研究和应用非常重要，可以避免误用和混淆。

冻存是指将菌种保存在极低温度下以确保其存活和保持活性的过程。

冻存的主要方法是将菌种培养物添加适当的保护剂后，冷冻在低温条件下。

常用的保护剂包括甘露醇、甘油和蔗糖等，它们可以防止细胞水分的蒸发和结冰对细胞造成的伤害。

冻存使菌种可以在无菌条件下长期保存，并在需要时快速恢复培养。

保存条件是指在保存和传播菌种时需要注意的环境和条件。

为了保持菌种的活力和纯度，保存过程中需要严格控制温度、湿度和光照等条件。

一般来说，菌种保存的温度应低于冰点，湿度应保持在相对较低的水平，以减少细菌和真菌的生长。

此外，保存过程中需要定期检查，并确保保存容器的密封和标签的完整性。

总结起来，菌种的保藏是科学研究和应用的基础，通过冻存和合理的保存条件，可以确保菌种的长期保存和可重复使用。

菌种的鉴定和保藏是微生物学研究中不可或缺的环节，为科学家提供了准确和可靠的研究对象。

对菌种保藏名词的了解，有助于更好地理解菌种的重要性和保存工作的必要性。

实验室常用菌种的保存和管理摘要：保藏菌种的目的不仅要保存菌株的生命本身，而且还必须要尽可能地使菌株的遗传性状保持不变，同时保证其在整个保存过程中不被杂菌污染。

因此，选择有效且稳定的保藏微生物菌种的方法至关重要。

关键词：菌种；保存；管理医学病原生物学实验室主要承担微生物实验教学任务，日常工作中经常要分离、鉴定细菌、试教演示、保存菌种等。

菌种是微生物实验的基本材料，因涉及到师生的安全，所以要正确保存，妥善管理，逐步实现菌种的保存制度化与科学化。

一、材料与方法1.教学实验常用的菌种保存营养要求不高的菌种：金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、志贺氏菌、变形杆菌、铜绿假单胞菌。

营养要求高的菌种：链球菌、肺炎链球菌、白喉棒状杆菌、脑膜炎奈瑟菌。

厌氧芽孢杆菌：产气荚膜杆菌。

需氧芽胞杆菌：枯草芽孢杆菌。

真菌：白色念珠菌、新生隐球菌。

2.菌种的鉴定实验室中保存的菌种都要经过鉴定合格后方可使用，常用的鉴定方法有形态学观察、菌落特征、生化反应及血清学鉴定。

3.菌种的保存（1）定期传代保存法传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法。

传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低，培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。

①液体培养基低温保存法。

将保持营养要求不高的细菌接种于装有营养肉汤的试管中，营养要求高的细菌接种于含15%血清的营养肉汤中，经37℃培养18~14小时后，取出封口，置4℃冰箱保存。

②半固体穿刺保存法。

将细菌穿刺接种于普通半固体培养基内，37℃培养18~24小时后，在无菌条件下加入灭菌液体石蜡，厚度约1厘米，封口后置4℃冰箱保存。

③琼脂斜面保存法。

营养要求不高的菌种用普通琼脂斜面保存法，营养要求高的菌种用血液琼脂斜面保存，将细菌蜿蜒接种于血液琼脂斜面上，置37℃培养18~24h后，石腊封口，放于4℃冰箱保存。

④沙保氏培养基保存法。

病原微生物菌（毒）种和样本的重要性段丽莉. 菌种保管应有专人负责，保存于冰箱中，房门专人加锁，确保菌种安全。

保管人员变动时，必须严格交接手续。

2、菌种应有严格的登记，包括形态，分离日期，鉴定日期，签发者，主要鉴定性能（包括形态、染色、抗原结构、动物致病力等），并注明使用、转移、销毁情况及原因。

3、各种菌种应按规定时间接种，一般在接种三次后作一次全面的鉴定，注意菌种有无污染及变异，如发现变异时，应及时更换。

4、菌种保存范围及向外单位转移，应按国家卫生部规定执行。

5、所有存在菌种应具备清单。

编写：审核：批准：批准日期：主要内容病原微生物菌（毒）种和样本是国家重要生物资源，是保障生物安全和国家经济安全与稳定的重要战略资源。

是人类传染病预防、诊断和治疗以及医学科研和教学事业的基础和重要支撑条件，也是保障食品安全、生物安全以及抵御生物恐怖袭击的前提条件。

病原微生物菌（毒）种和样本病原微生物菌（毒）种和样本由于其本身所具有的特殊性，在其采集、携带、运输、保藏管理和使用过程中必须强调生物安全，必须符合国家传染病防治、医学微生物菌（毒）种管理有关法规的规定。

其管理不仅强调在硬件设备上要符合微生物安全防护的要求，更重要的是强调所有管理人员、工作人员在日常工作中要有常备不懈的防护意识和守法观念。

菌（毒）种分类按照微生物结构、组成分为三大类：原核细胞型微生物：细菌、支原体、立克次体、衣原体、螺旋体和放线菌。

真核细胞型微生物：真菌非细胞型微生物：病毒中国医学微生物菌种保藏管理办法第二条菌种的分类菌（毒）种的分类根据其危险性决定的对实验室感染的可能性；人体感染后发病的可能性；发病后症状轻重及愈后情况；有无致命危险及有效的防止实验室感染方法；用一般的微生物操作方法能否防止实验室污染；我国有否此种菌种及曾否引起流行人群免疫力等情况。

依其危险程度的大小，我国的菌(毒)种分为四类。

中国医学微生物菌种保藏管理办法第二条菌种的分类一类：实验室感染的机会多，感染后发病的可能性大，症状重并能危及生命，缺乏有效的预防方法，以及传染性强，对人群危害性大的烈性传染病，包括国内未发现或虽已发现，但无有效防治方法的烈性传染病菌（毒）种。

微生物菌种保存过程中常见的问题一、菌种保藏的认识1.刚买回来的阳性菌株是第0代吗？菌株买回来时上面都会写明第几代，常规来说都是第0代。

像购买的ATCC或CICC的冻干粉都是标记为0代的。

2.菌种保藏时为什么要进行分离纯化？分离纯化后才能获得单一菌株，单一菌株进行菌种保藏才有意义，防止菌种交叉污染和变异，这也是菌种保存的基本原则。

3.怎样纯化菌株？纯化就是从TSA上或别的非选择性平板上转接一次，这就相当于纯化了。

二、菌种可以保存的种类1.所有的菌都能保存吗？如果不是的话，什么样的菌可以保存？什么样的菌不可以保存？菌种保存的原理是预防或减缓DNA复制时自发突变导致菌种退化，因此要创造代谢不活泼的状态，而菌种保存时使菌种进入休眠态（孢子、芽孢)，并创造干燥、低温、缺氧、缺营养的环境，创造的环境越接近此状态，所保存的菌种的时间就越长，所以从原理上讲，所有菌种都可用这种方法保存，但需要注意的是，苛刻菌（如流感嗜血杆菌、脑膜炎萘瑟氏菌）等特殊细菌保存时，需-80℃或更低温度保存，才可以做到更长期的保存。

2.菌种保存管能保存霉菌及酵母菌吗？可以。

对于霉菌等真菌需培养7天进行保存，而酵母菌需培养三天将孢子洗脱下来进行保存，保存管中的小瓷珠可以作为介质来吸附孢子和菌丝，相当于砂土保存法中砂土作为载体起到的作用。

三、菌种的保存时间和保存条件1.怎样延长菌株的保存时间呢？大量的实验证明菌株在低温、干燥、缺氧、缺营养的条件下保存效果是最好的，越接近这种保存条件，菌株的保存时间越长。

2.能用菌种保存管永久保存菌株吗？温度越低，保藏效果越好。

从目前的试验数据及实际保存效果来看，-20℃可保存1~5年，-80℃或液氮中可保存5~10年，不同菌种及不同的保存温度保存时间会有所不同（例如：大肠、沙门等常规细菌-20℃目前可以保存到6年）。

但需要注意的是所保存的菌种需每年抽检进行生化特征的鉴定，确定菌株无变异。

3.为什么说，如果有条件的话，菌种保存管最好置于-80℃冰箱或液氮中？因为，贮存在-70℃以下低温中能减少冰晶形成，可极大降低冰晶形成对细菌的伤害，同时可为被保存的菌种创造更低的代谢环境，从而延长细菌保存的时间。