实验室标准操作程序
编号:
00. 目录
01.食品细菌总数的检验方法
1•仪器和设备
1 . 1恒温培养箱：36 ± 1 C
1 . 2恒温水浴箱：45 土1 C
1 . 3高压灭菌锅
1 . 4均质器
1. 5 冰箱：0-4 C 和-15 〜-20 C
1. 6 试管:18 x 150mm
1. 7 锥形瓶:500ml 250ml
1. 8平皿：直径为90mm
1. 9灭菌吸管
1. 10灭菌均质杯
1. 11酒精棉
1. 12天平：感量0.1g
2.培养基的制备
2.1 生理盐水：
称氯化钠8.5g溶于1000.0ml蒸馏水中，分装锥形瓶和试管内，每管吸9ml, 121 C高压灭菌。
2.2平板计数琼脂
称平板计数琼脂 23.5g 加入1000.0ml 蒸馏水中，煮沸溶解，分装锥形瓶内, 121C 高压灭菌。
3.操作程序 3.1样品稀释
以无菌操作取 25g 样品 T •放入装有 225ml 生理盐水的灭菌均质杯内, 均质1分30秒，制成1： 10的样品匀液 _►
用灭菌吸管吸取1ml 样液 _►
放入9ml 生理盐水中，摇匀。 一从试管中吸取1ml 样液 ―k 分别注入两个平皿内，
一►
依次类推（10-2
、10-3
） —►平板计数琼脂（恒温 45 土 1 C ） 分别倒12-15ml 平板计数琼脂入各平皿 _►待琼脂凝固后将平皿翻转
立即放进 36 土 1 C 的恒温培养箱内| ―^培养48 土 2
3.2培养
02.食品大肠菌群和大肠杆菌的检验方法
制成10倍的样品稀释液，—► 立即将平皿内的样液和琼脂充分混合
1 . 1恒温培养箱：36 ± 1 C 1. 2恒温水浴箱：44.5 ± 1C 1 . 3高压灭菌锅 1 . 4均质器
1. 5 试管:18 x 150mm 18X 180mm
1. 6 锥形瓶：500ml 250ml 1. 7平皿：直径为 90mm 1. 8灭菌均质杯 1. 9灭菌吸管 1. 10酒精棉
1. 11天平：感量0.1g
1.12 冰箱：0-4 C 和-15 〜-20 C 1.13显微镜 2 .培养基的制备
2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST ）肉汤
称35.6g 溶于1000.0ml 蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装于有倒立的小发酵管的 18x 180mm 试管中, 每管
10ml ，于121 C 高压灭菌15min 。 2.2煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB
称40g 溶于1000.0ml 蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装于有倒立的小发酵管的 每管
10ml , 121 C 高压灭菌15min 。 2.3EC 肉汤
称37g 溶于1000.0ml 蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装于有倒立的小发酵管的 每管吸
8ml , 121 C 高压灭菌15min 。 2.4伊红美蓝琼脂（EMB
称37.5g 溶于1000.0ml 蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装于三角烧瓶， 121 C 高压灭菌15min 。摇匀
冷却至45 C 倾注平皿。
2.5营养琼脂
称33g 溶于1000.0ml 蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，
121 C 高压灭菌15min 。制成斜面备用。 2.6生理盐水
称氯化钠8.5g 溶于1000.0ml 蒸馏水中，分装锥形瓶和
18x 150mm 试管内，121 C 高压灭菌15min 。
2.7成品生化管
2.7.1色氨酸肉汤 2.7.2 MR-VP 2.7.3 Koser
氏枸橼酸盐琼脂 2.7.4 革兰氏染色试剂盒 2.7.5 Kovacs 氏靛基质试剂2.7.6甲基红指示剂2.7.7 V-P
试剂甲液和乙液
3.操作步骤
3.1样品的稀释和培养
18x 180mm 试管中,
18x 180mm 试管中,
3.2大肠菌群的测定
3.3大肠杆菌的测定
3.4将斜面培养物移种到下列培养基中进行生化实验。
3.4.1
343
344
345大肠杆菌与非大肠杆菌生化鉴别如下:
3.5结果报告：大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌，发酵乳糖产酸产气，IMViC试验为+ + ——或—+ 再根据LST肉汤阳性管数查MPN表，报告每克样品中大肠杆菌MPN值。
1g样品中最近似值(MPN)表
使用三管法，接种量分别为0.1g,0.01g,0.001g
阳性管数
MPN 阳性管数
MPN
0.1 0.01 0.001 0.1 0.01 0.001
0 0 0 V 3 2 0 0 9.1 0 0 1 3 2 0 1 14 0 0 2 6 2 0 2 20 0 0 3 9 2 0 3 26 0 i 0 3 2 1 0 15 0 i 1 6.1 2 1 1 20 0 i 2 9.2 2 1 2 27 0 i 3 12 2 1 3 34 0 2 0 6.2 2 2 0 21 0 2 1 9.3 2 2 1 28 0 2 2 12 2 2 2 35 0 2 3 16 2 2 3 42 0 3 0 9.4 2 3 0 29 0 3 1 13 2 3 1 36 0 3 2 16 2 3 2 44
0 3 3 19 2 3 3 53
i 0 0 3.6 3 0 0 23 i 0 1 7.2 3 0 1 39 i 0 2 11 3 0 2 64 i 0 3 15 3 0 3 95 i 1 0 7.3 3 1 0 43 i 1 1 11 3 1 1 75 i 1 2 15 3 1 2 120 i 1 3 19 3 1 3 160 i 2 0 11 3 2 0 93 i 2 1 15 3 2 1 150 i 2 2 20 3 2 2 210 i 2 3 24 3 2 3 290 i 3 0 16 3 3 0 240
