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染色体制片实验准备一所用试剂及配制：1、0.8％生理盐水：8gNaCl溶于1000ml蒸馏水，4℃存放。
2、PHA：例如，粉剂10mg溶于100ml灭菌生理盐水得到100ug/ml的注射液。
必须根据鱼的大小来确定配制的注射液的浓度。
4℃存放。
3、秋水仙素：1mg溶于100ml灭菌生理盐水得到10ug/ml的注射液。
必须根据鱼的大小来确定配制的注射液的浓度。
4℃存放。
4、0.075M KCl：5.59gKCl溶于1000ml蒸馏水，4℃存放。
5、卡氏固定液：甲醇：冰醋酸(体积比)＝3：1，现配现用，充分混匀。
6、Giemsa染液：用1ml Giemsa母液加6～7ml磷酸缓冲液（即PBS,PH6.8）稀释后用。
7、PBS（pH6.8）：先配制：甲液：KH2PO49.078g加蒸馏水至1000ml.乙液：Na2HPO4.2H2O 11.876g(或Na2HPO4.12H2O 23.8g)加蒸馏水至1000ml.再配制pH6.8 PBS：若为100ml，则取甲液50.8ml+乙液49.2ml混合而成。
二器材准备1、载玻片处理：将载玻片一片一片放入肥皂液中后煮沸30min，趁热刷洗干净，自来水冲洗后放入蒸馏水中浸泡一天（更换数次蒸馏水），再浸入95％酒精保存待用。
滴片前放入玻片盒，干燥后放入－20℃冷冻。
2、注射器及针头处理：肥皂液中煮沸、刷洗，自来水冲洗，蒸馏水浸泡，80℃烤干，盒内保存。
3、注射器: 5ml或1ml；针头4.5号，青霉素小瓶（同样方法洗净），其他不同大小试剂瓶。
4、解剖盘，镊子，大剪刀，小剪刀，小培养皿。
5、10ml刻度离心管，乳头吸管，100ml量筒；试管架，4000转电动离心机6、－20℃冰箱，显微镜，数码相机。
三实验步骤1 实验前准备：实验前1天按质量比10 µg/g鱼体重在实验鱼胸鳍基部往腹腔注射PHA，隔12小时后，按8 µg/g鱼体重再次给实验鱼腹腔注射PHA，4.5小时后，按2 µg/g鱼体重给实验鱼腹腔注射秋水仙素。
【实验题目】染色体标本制作与观察【实验目的】1、掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操作步骤的原理。
2、了解常用实验动物染色体的数目及特点。
3、认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组型图。
【实验材料与用品】1.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯等2.材料：小鼠3. 试剂：蒸馏水、0.9%NaCl溶液、0.3%KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、秋水仙素【实验原理】一、制作染色体标本的先决条件①细胞具有旺盛的分裂能力：选择活跃的组织，如胸腺、骨髓、睾丸、小肠；或施加药物使细胞分裂（PHA）②设法得到大量的分裂中期细胞：利用秋水仙素二、染色体染色体是基因的载体。
真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传特性之一。
制备染色体标本是细胞学最基本的技术之一，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。
染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。
最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞、、和组织培养的细胞中制备染色体。
本实验采用的方法是从小鼠的睾丸细胞中获取。
染色体的形态结构在细胞增殖周期中是不断的运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体形态最典型、最易辨认和区分。
因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。
染色体特征：数目、长度（绝对长度、相对长度）、着丝粒位置（M/SM/ST/T)、随体与次缢痕的数目大小和位置、带型分析描述染色体的四个参数：①相对长度=（每条染色体的长度）/（单倍常染色体之和+X染色体）*100，相对长度可以用来表示每条染色体的长度。
②臂指数=（长臂的长度）/(短臂的长度)，臂指数可以用来确定臂的长度。
③着丝粒指数=（断臂长度）/（染色体全长）*100，着丝粒指数可以决定着丝粒的相对位置。
④染色体臂数（NF），根据着丝粒的位置来确定。
三、操作原理小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织（由于分裂活动旺盛，睾丸也可）利用睾丸细胞的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但基本程序并不复杂。
染色体检查实验步骤
第一步呢，就是要采集样本。
这采集样本的方式可不少哦。
要是做外周血染色体检查，那护士姐姐就会像打针一样，从你的胳膊上抽一点血，就一小管，一点都不疼啦，就像小蚂蚁轻轻咬了一口。
如果是做羊水穿刺查胎儿染色体呢，这个听起来有点吓人，但其实现在技术很成熟啦。
医生会用一根很细很细的针，穿过妈妈的肚皮，进到子宫里取一点羊水，这里面就有宝宝的细胞可以用来查染色体啦。
还有一种是绒毛取样，也是取胎儿细胞的办法。
第二步，样本取好之后，就要让细胞开始分裂啦。
这个过程就像是给细胞下命令，让它们快快长大繁殖。
在实验室里，会把细胞放到专门的培养液里面，给它们提供各种营养，就像我们吃饭一样，细胞也得吃饱喝足才有力气分裂呀。
第三步，等细胞分裂到合适的阶段，就像果实成熟了一样，就得把它们固定住。
这就好比给正在跳舞的细胞拍个快照，让它们停在这个状态，这样才能好好观察它们的染色体。
固定的方法也是有专门的试剂来帮忙的。
第四步，染色环节来啦。
这个就像给染色体穿上漂亮的衣服，用特定的染料去染这些染色体，这样它们就会在显微镜下显示出不同的颜色和条带。
就像每个染色体都有了自己独特的标记，方便我们区分它们。
第五步，就是在显微镜下观察啦。
这时候就像是探险家在寻找宝藏一样，科学家们会仔细地看这些染色体的数目、形态、结构有没有异常。
要是发现哪个染色体多了一块或者少了一块，那可能就有问题啦。
好啦，这就是染色体检查大致的实验步骤啦。
宝子，是不是感觉还挺有趣的呢？。
1. 了解染色体分析的基本原理和方法。
2. 掌握染色体观察、计数和核型分析的操作技能。
3. 通过实验，对实验结果进行分析和总结，提高对染色体变异和遗传规律的认识。
二、实验原理染色体是生物细胞中携带遗传信息的结构，由DNA和蛋白质组成。
染色体分析是研究生物遗传、发育、进化等领域的重要手段。
本实验通过观察染色体形态、计数染色体数目、分析核型，探讨染色体变异和遗传规律。
三、实验材料与仪器1. 材料：人体口腔黏膜细胞、甲醇、冰醋酸、Giemsa染液等。
2. 仪器：显微镜、染色缸、滴管、载玻片、盖玻片、显微镜载物台等。
四、实验步骤1. 取材：用消毒的牙签刮取人体口腔黏膜细胞，放入盛有生理盐水的试管中。
2. 涂片：将细胞悬液滴于载玻片上，用盖玻片轻轻压平。
3. 固定：将载玻片放入固定液中固定细胞，然后用流水冲洗。
4. 染色：将固定后的载玻片放入Giemsa染液中染色，然后用流水冲洗。
5. 观察：将染色后的载玻片放在显微镜下观察染色体形态、计数染色体数目。
6. 核型分析：根据染色体形态、数目和结构，分析核型。
五、实验结果与分析1. 染色体形态观察：在显微镜下观察，可见染色体呈带状，有明显的着丝粒和端粒。
染色体分为两类：A类染色体（长染色体），B类染色体（中染色体），C类染色体（短染色体）。
2. 染色体计数：在显微镜下观察，对染色体进行计数，得到每对染色体的数目。
3. 核型分析：根据染色体形态、数目和结构，分析核型。
本实验观察到的染色体核型为46，XX。
1. 实验过程中，染色体的固定和染色是关键步骤。
固定要适度，以免染色体断裂；染色要均匀，避免染色过深或过浅。
2. 观察染色体时，要调整显微镜的焦距，确保染色体清晰可见。
同时，要注意观察染色体的形态、数目和结构，以便进行核型分析。
3. 染色体变异是生物进化的一个重要因素。
通过染色体分析，可以研究染色体数目、结构变异等遗传现象，为生物遗传、发育、进化等领域的研究提供依据。
实验六染色体的标本制作及其组型实验在真核生物中, 染色体的数量和形态具有物种的特异性一直能够作为此物种分类的大体依据之一。
染色体作为遗传物质-DNA的载体, 对生物的遗传、变异、进化和个体发生, 和细胞的增殖和生理进程的平衡控制等都具有十分重要的意义。
每一个物种的细胞一般都有必然数量、形状和大小的染色体。
将体细胞核中全数染色体依照其大小、着丝粒位置，以至带型有序地排列起来，此模式图象排列即为核型(karyotype)或染色体组型。
核型分析均是以中期染色体为标准，对制作出的染色体标本进行照相以取得染色体的显微图象，并将其剪裁排列即成。
华裔学者庄有兴(Joe Hin Tjio)和瑞典学者合作, 利用低渗法研究胎儿肺组织的染色体标本制做方式，终于在1956年第一次肯定了人类的染色体数量是46条，而不是前人所主张的48条，这为后来的人类核型研究奠定了基础。
1.实验目的初步掌握动物骨髓染色体标本制备大体进程，了解操作步骤的原理。
了解常常利用实验动物染色体的数量及特点。
通过组型实验，掌握染色体组型的大体方式2.实验原理凡细胞处于活跃增殖状态，或通过各类处置后，细胞就可进入割裂的任何动物组织，都可用于染色体分析。
在正常动物体内，精巢和骨髓均为是活跃割裂的组织。
给动物注射必然剂量的秋水仙碱即可使许多处于割裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法制备染色体，即可取得大量可分析的染色体标本。
本方式简便、靠得住，不需要经体外培育和无菌操作，易于推行。
骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究专门好的材料。
但在取材方面，精巢又比骨髓要简易一些，故本实验也选用小鼠的精巢为实验材料。
对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点: 1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处; 2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上; 3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。
人类染色体标本制备经验手册3.0版本广州市达晖生物技术有限公司印制GUANGZHOUDAHUIBIOTECHCO.,LTD 目录第一部分各类器械清洗与常用试剂配置4页第三部分探讨染色体标本制备技术中的若干问题22页第五部分附录25页第一部分一、实验室要求1、准备室（约30平方米）：供清洗玻璃仪器、配制试剂仪器包装消毒及制片场所，还必需配置耐酸碱水池、实验操作台、药橱等设施。
并能合理放置冰箱、电热干燥箱、离心机、纯水器、消毒锅、天平等仪器，以方便使用。
2、无菌室（约25平方米）：用作细胞的接种培养、配备培养基。
分为更衣室（约4平方米）、缓冲室（约6平方米）、接种室（约15平方米）。
配备空调机、传递窗、离心机、倒置显微镜、超净工作台、臭氧发生器或紫外灯、培养箱等设备仪器。
二、设备仪器（一）仪器1、超净工作台一台2、光学显微镜二台（可以安装染色体软件分析系统）倒置显微镜与带照相装置的正立显微镜各一台。
倒置显微镜用作细胞培养；正立显微镜用作核型分析，有条件的单位可配备染色体分析软件、电脑、打印机等。
3、隔水式恒温培养箱一台开展产前检查的单位，最好购买二氧化碳培养箱。
4、电热干燥箱一台5、冰箱二台：普通冰箱和低温冰箱各一台6、酸度计一台（可略）7、纯水器（电阻率18兆欧姆）一台；（可略）-1-8、高压灭菌锅一台（可略）9、电热磁力搅拌器一台（可略）10、真空泵（无油）一台（可略）11、电子天平二台（万分之一天平与普通天平各一台）12、水平式离心机二台转速0-4000转/分，10毫升/管，大容量与小容量各一台。
大容量的供制片用，小容量的放置无菌室供细胞培养用。
13、可调移液器若干支：规格从5-5000微升若干支14、超声波清洗器一台（可略）15、水浴箱（0-100℃可调）（二）玻璃器皿与耗材1、培养瓶：15毫升链霉素瓶，25毫升小方瓶（建议采用一次性培养瓶）。
2、刻度离心管（10毫升）50支3、量筒（10-1000毫升）：各种规格各一个。
一、实验目的1. 熟悉染色体的基本结构和功能。
2. 掌握染色体标本制作和观察的方法。
3. 学习染色体计数和核型分析技术。
二、实验原理染色体是生物体内具有遗传信息的结构，由DNA和蛋白质组成。
染色体在细胞分裂过程中具有重要作用，其结构稳定性和数目恒定性对于维持生物遗传信息的完整性至关重要。
本实验通过观察染色体的形态、结构和数目，了解染色体的基本特征。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：洋葱根尖、盐酸、酒精、醋酸、龙胆紫染液、载玻片、盖玻片、显微镜等。
2. 仪器：实验台、酒精灯、滴管、镊子、剪刀、解剖镜、显微镜等。
四、实验步骤1. 制备洋葱根尖细胞染色体标本（1）将洋葱根尖放入盛有盐酸和酒精的混合液（1:1）中，室温下处理30分钟。
（2）用镊子取出根尖，放入醋酸和酒精的混合液（1:1）中，室温下处理10分钟。
（3）用剪刀将根尖剪成约1mm长的小段，放入载玻片中央。
（4）用滴管加入适量的龙胆紫染液，覆盖根尖。
（5）室温下染色5-10分钟。
2. 观察染色体标本（1）用镊子夹取盖玻片，覆盖在染色后的标本上。
（2）用解剖镜调整标本位置，使其在载玻片上均匀分布。
（3）用显微镜观察染色体形态、结构和数目。
3. 计数和核型分析（1）在显微镜下观察染色体，记录染色体数目、形态和结构。
（2）对观察到的染色体进行分类和核型分析。
五、实验结果与分析1. 染色体形态：洋葱根尖细胞染色体呈长棒状，两端钝圆，染色体数目为8条。
2. 染色体结构：染色体由DNA和蛋白质组成，DNA位于染色体中央，蛋白质包裹在DNA周围。
3. 核型分析：洋葱根尖细胞染色体核型为二倍体，即2n=16。
六、实验结论通过本实验，我们成功制备了洋葱根尖细胞染色体标本，并观察到了染色体的形态、结构和数目。
实验结果表明，洋葱根尖细胞染色体呈长棒状，由DNA和蛋白质组成，核型为二倍体。
本实验为后续研究染色体的遗传机制和生物学功能奠定了基础。
七、实验讨论1. 实验过程中，盐酸和酒精的混合液对染色体有固定作用，有助于观察染色体的形态和结构。
一、实验目的1. 掌握染色体标本的制作方法。
2. 观察并识别有丝分裂中期相的染色体形态。
3. 了解染色体的形态特征及其数目。
二、实验原理染色体是细胞核中具有遗传信息的结构，由DNA和蛋白质组成。
在细胞分裂过程中，染色体复制并分离到子细胞中，从而保证遗传信息的传递。
本实验通过制作染色体标本，观察染色体的形态特征和数目，以了解染色体的结构及其在细胞分裂中的作用。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：小鼠骨髓细胞2. 试剂：甲醇、冰醋酸、秋水仙素、生理盐水、卡诺氏固定液、Giemsa染液、载玻片、盖玻片、显微镜等四、实验步骤1. 注射：提前2小时向小鼠注射秋水仙素，使其细胞分裂。
2. 处死小鼠：处死小鼠后，剪下四肢，剔除肉等，剪碎骨。
3. 制备细胞悬液：将剪碎的骨加入生理盐水，制成细胞悬液。
4. 离心：将细胞悬液离心，取沉淀物。
5. 低渗处理：将沉淀物用生理盐水洗涤，加入低渗液，使细胞膜破裂，染色体释放。
6. 预固定：将低渗处理后的细胞用卡诺氏固定液固定，使染色体固定在特定时期。
7. 染色：将固定后的细胞用Giemsa染液染色，使染色体着色。
8. 滴片：将染色后的细胞滴在载玻片上，盖上盖玻片。
9. 观察与记录：在显微镜下观察染色体的形态特征和数目，并进行记录。
五、实验结果与分析1. 染色体形态特征：观察到的染色体呈带状，具有明显的着丝粒，染色体长度不一，数目与小鼠染色体数目一致。
2. 染色体数目：通过观察，记录小鼠染色体的数目，与文献报道的小鼠染色体数目相符。
六、实验讨论1. 秋水仙素在实验中的作用：秋水仙素可以抑制纺锤体的形成，使染色体停留在有丝分裂的中期，便于观察染色体的形态特征。
2. 染色体固定液的选择：卡诺氏固定液是一种常用的染色体固定液，可以使染色体固定在特定时期，便于观察。
3. 染色体的着色：Giemsa染液是一种常用的染色体染色剂，可以使得染色体着色，便于观察。
七、实验结论本实验成功制作了小鼠骨髓染色体标本，并观察了染色体的形态特征和数目。
新建染色体实验室可行性操作方案
一、派遣计划：
实验室建立初期市场尚未深入，标本量较少，为避免人力及物力资源的浪费，染色体实验室建设可分为两个阶段：
第一阶段，标本量不足40例时：
1．在当地联系合作医院，标本暂时外包；染色体属于形态学范畴，部分结果的判断并没有一个统一的标准，这样既可以加强与当
地实验室及当地遗传专家的联系，又可在实验室出现仪器故障
等突发事件时可暂时外包标本；
2．就近送给已开展染色体项目的高新达安临检实验室，但必须将时间控制在标本抽取后24小时内送达实验室，以免影响试验
效果。
第二阶段，标本量达到40例以上时：
1．标本量达到40例时，派遣制片技术人员1名完成前期的试验处理，制好的玻片就近送往广州或上海两地的实验室进行
阅片，也可根据实际情况在当地外聘阅片专家，完成阅片工
作；
2．标本量超过80例时，派遣熟练阅片技术人员1名，完成整个实验流程。
3．以后每增加40例标本可增加技术人员1名。
成立技术监督小组（1-3人），全面负责各实验室的技术及质量问题：
①对各分点实验室提供技术协助；
②观注行业的发展方向，寻找新项目，为本专业的发展提供更多
理论支持；
③培训：组织各实验室每月进行一次网络培训；
④部分对试验效果影响较大的自配试剂统一由中心统一配置。
2．质量方面：
①常用试剂的对比试验：某种试剂需更换厂家时，则由技术监督小组负责进行对比试验及质量评估；
②盲点检查：每100份标本中抽取5份标本进行盲点检查，包括标本编号、病人基本信息、实验记录、核型分析记录及结果的核对等；
②疑难片的会诊流程：
a.拓展实验室提出申请，并附上详细的病历资料、标本玻片4张，提交给中心实验室；
b.中心实验室组织专家进行会诊；
c.中心实验室将会诊结果转交拓展实验室，报告单由拓展实验室发出。
二．实验室配置：
1．实验室要求：
①制片室：供清洗玻璃仪器、配制试剂及标本的接种、收细胞、
制片、染片的场所，还必需配置耐酸碱水池、实验操作台等设
施。
并能合理放置冰箱、电热干燥箱、离心机等仪器，以方便
使用；
②培养室：用作细胞的接种培养及部分试剂的配备，根据需要可
仪器；
③阅片室：为观察分析核型、整理资料场所。
须配备显微镜，电
脑、打印机、办公桌等；
2．仪器
4．玻璃器皿
4．试剂（按50人份采购），因部份试剂的质量会对实验效果有影响，因而有备注广州实验室现用试剂的生产厂家，在前期采购时最好按照附表中所列出的厂家来采购，后期可进行对比试验选择厂家。
【关键试剂由中心实验室把关。
】
5．低值消耗品
三、人员及培训
1．人员安排：
2．人员培训
①染色体制片技术员培训
(1) 染色体实验基础理论：1个星期；
(2) 染色体实验操作：3个月；由带教教师指导一对一进行培训；
②染色体阅片技术员培训，由带教教师指导一对一进行培训：
(1) 染色体基础理论及G显带的识别:1个月
(2) 显微镜下示教，镜检核对，画图核对:5个月
③培训内容
（1）掌握各种实验器具的清洗、准备与消毒；
（2）掌握一般常用试剂的配制；
（3）掌握人类外周血染色体标本制备的方法；
（4）掌握人类染色体胰蛋白酶法G显带技术；
（5）掌握人类染色体R显带及C显带技术；
（6）掌握染色体320-550条带染色体的识别；
（7）掌握染色体R显带、C显带的识别；
（8）分析、处理实验中出现的问题。
四、标准操作规程及物流要求
1．标本采集：
无菌操作是防止污染、决定培养是否成功的首要条件。
由于体外培养细胞缺乏抗感染能力，在一切操作中要努力做到最大限度的无菌。
现将标本的采集要点分述如下：
①血液标本抽取时务必清洁消毒，待干燥后穿刺，用一次性采血器；
②严格无菌操作(注射器在采血前与采血后都需过酒精灯消毒)采集静脉血3ml置无菌肝素钠抗凝管内（肝素钠抗凝管在标本注入前先用沾有酒精的棉签消毒，过酒精灯，待干燥后再注入标本），轻轻混匀，24小时内必须送到实验室检测，运输途中保持无菌，应尽量减少振动、摇晃；
③血液标本在送检之前应置于2-8℃暂时存放；
④药物对检验的影响非常复杂，在采样检查前一个星期，以暂停各种药物为宜；
⑤放、化疗期间的患者暂不宜做细胞培养。
2．血液标本的运输：
①运输时需将标本放入冰盒内，但绝不能与冰块直接接触，保存温度以2℃-8℃为宜；
②标本在运送途中应尽量避免摇晃，颠簸；
③标本于24小时内必须送到实验室检测，如运送路线较长，为了提高检测成功率，建议对病人采取预约集中采集标本，集中运送的方法，以保证标本的质量。
3．标本玻片的运输：
②将包装好的片盒置于四周放好碎纸、泡沫等的纸箱内，以防玻片破碎；
③湿度控制在<60%，可在箱内放一些干燥剂；
④与物流单位交接时需注明为玻璃制品，要轻拿轻放。
4．报告单的发放：
①指定专人负责拓展实验室的报告单发放；
②将报告单转化为电子文档，通过网络发放到拓展实验室；
③标本玻片由广州实验室统一保管。
