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第四章声调训练第一节认识声调一、调值和调类声调是音节发音时具有区别性功能的音高变化。

它同声母、韵母一样，具有区别意义的作用。

在汉语里，一个音节一般就是一个汉字，所以声调也叫字调。

普通话声调可以从调值和调类两个方面去分析、认识。

1．调值调值指声调的实际读法，即声调的高低升降变化。

普通话声调有四个基本调值，即高平调、中升调、降升调、全降调。

每个调值的音高情况可以用“五度标记法”加以具体描写，如图4.1。

535 451 3214 21图 4.1注：竖线分为五度，表示相对音高。

竖线左侧的线条表示四个调值的音高变化形式。

2．调类调类就是声调的分类，是根据声调的实际读法(调值)归纳出来的。

把调值相同的归为一个调类，这样普通话声调可归为四类，即：阴平(高平调55)、阳平(中升调35)、上声(降升调214)、去声(全降调51)。

调类名称也可以用序数表示，称为第一声、第二声、第三声、第四声，简称为“四声”。

3．调号调号是指表示声调的符号。

普通话的调号是根据普通话语音调值的升降情况制定的。

调号的形状是根据“五度标记法”缩写而成的。

调号简化为：阴平“一”、阳平“/”、上声“∨”、去声“\”。

表 4.1普通话的调值调类综述表二、声调发音练习认读下列单音节字词，体会四声的调值(•字前标“△”的为多音字)哀āi 癌ái 矮ǎi 爱ài△凹āo 敖áo 袄ǎo 奥ào巴bā拔bá靶bǎ爸bà掰bāi 白bái 百bǎi 拜bài包bāo 雹báo 饱bǎo 报bào 崩bēnɡ甭bénɡ△绷běnɡ泵bènɡ逼bī鼻bí比bǐ闭bì憋biē蹩bié△瘪biě△别biè拨bō帛bó跛bǒ△簸bò逋bū醭bú补bǔ布bù猜cāi 才cái 彩cǎi 菜cài餐cān 残cán 惨cǎn 灿càn 糙cāo 曹cáo 草cǎo △操cào 插chā茶chá△衩chǎ岔chà搀chān 谗chán 产chǎn 忏chàn 昌chānɡ常chánɡ敞chǎnɡ畅chànɡ抄chāo 巢cháo 炒chǎo 耖chào 琛chēn 臣chén 碜chěn 衬chèn 瞠chēnɡ成chénɡ逞chěnɡ△秤chènɡ吃chī池chí齿chǐ赤chì充chōnɡ虫chónɡ宠chǒnɡ△冲chònɡ抽chōu 酬chóu 丑chǒu 臭chòu 出chū刍chú储chǔ触chù川chuān 船chuán 喘chuǎn 串chuàn 疮chuānɡ床chuánɡ闯chuǎnɡ怆chuànɡ疵cī词cí此cǐ次cì村cūn 存cún 忖cǔn 寸cùn 搓cuō痤cuó脞cuǒ挫cuò搭dā达dá△打dǎ△大dà刀dāo △叨dáo 导dǎo 到dào 低dī迪dí底dǐ弟dì督dū毒dú赌dǔ杜dù多duō夺duó朵duǒ惰duò婀ē鹅é△恶ě厄è△发fā罚fá法fǎ珐fà帆fān 凡fán 反fǎn 犯fàn方fānɡ防fánɡ仿fǎnɡ放fànɡ飞fēi 肥féi 匪fěi 废fèi纷fēn 汾fén 粉fěn 份fèn风fēnɡ逢fénɡ讽fěnɡ凤fènɡ肤fū芙fú甫fǔ讣fù旮ɡā噶ɡá△嘎ɡǎ尬ɡà戈ɡē隔ɡé舸ɡě△个ɡè根ɡēn 哏ɡén △艮ɡěn 亘ɡèn郭ɡuō国ɡuó果ɡuǒ△过ɡuò嗨hāi 孩hái 海hǎi 害hài酣hān 含hán 罕hǎn 汉hàn蒿hāo 亳háo 郝hǎo 浩hào轰hōnɡ弘hónɡ△哄hǒnɡ鸿hònɡ齁hōu 喉hóu 吼hǒu 后hòu乎hū狐hú琥hǔ互hù欢huān 环huán 缓huǎn 幻huàn荒huānɡ黄huánɡ恍huǎnɡ△晃huànɡ灰huī回huí悔huǐ卉huì△豁huō活huó火huǒ或huò击jī吉jí脊jǐ计jì加jiā颊jiá甲jiǎ驾jià交jiāo △嚼jiáo 狡jiǎo 轿jiào阶jiē劫jié姐jiě戒jiè拘jū局jú举jǔ巨jù撅juē决jué△蹶juě倔juè苛kē△壳ké渴kě刻kè匡kuānɡ狂kuánɡ夼kuǎnɡ眶kuànɡ亏kuī葵kuí△傀kuǐ愧kuì垃lā旯lá喇lǎ辣là啷lānɡ狼lánɡ朗lǎnɡ浪lànɡ捞lāo 劳láo 老lǎo 涝lào△勒lēi 雷léi 垒lěi 泪lèi△哩lī厘lí里lǐ力lì蹽l iāo 辽l iáo 燎l iǎo 镣l iào拎līn 邻lín 凛lǐn 吝lìn△溜l iū刘l iú柳l iǔ△遛l iù△隆lōnɡ龙lónɡ垄lǒnɡ△弄lònɡ噜lū颅lú卤lǔ录lù啰l uō罗l uó裸l uǒ洛l uò妈mā△麻má马mǎ骂mà△嫚mān 蛮mán 满mǎn 曼màn 猫māo 毛máo 卯mǎo 茂mào △蒙mēnɡ虻ménɡ猛měnɡ孟mènɡ咪mī迷mí米mǐ觅mì喵miāo 苗miáo 秒miǎo 妙miào 摸mō膜mó△抹mǒ末mò△那nā拿ná△哪nǎ纳nà囡nān 南nán 蝻nǎn △难nàn 孬nāo 挠náo 恼nǎo 闹nào 妮nī尼ní拟nǐ昵nì蔫niān 鲇nián 捻niǎn 念niàn 妞niū牛niú扭niǔ△拗niù拍pāi 牌pái △迫pǎi 湃pài抛pāo 咆páo △跑pǎo 炮pào 抨pēnɡ彭pénɡ捧pěnɡ碰pènɡ坯pī毗pí癖pǐ媲pì偏piān 骈pián 谝piǎn 骗piàn 剽piāo 嫖piáo 瞟piǎo 票piào 姘pīn 频pín 品pǐn 聘pìn 颇pō婆pó叵pǒ破pò扑pū菩pú普pǔ铺pù戚qī颀qí杞qǐ讫qì谦qiān 虔qián 谴qiǎn 堑qiàn 枪qiānɡ蔷qiánɡ△抢qiǎnɡ呛qiànɡ锹qiāo 樵qiáo 巧qiǎo 窍qiào △切qiē△茄qié△且qiě惬qiè侵qīn 擒qín 寝qǐn 沁qìn 倾qīnɡ擎qínɡ请qǐnɡ庆qìnɡ蛆qū渠qú龋qǔ趣qù△圈quān 颧quán 畎quǎn 券quàn △嚷rānɡ瓤ránɡ壤rǎnɡ让rànɡ杀shā啥shá傻shǎ△煞shà艄shāo 韶sháo △少shǎo 潲shào 赊shē△蛇shé△舍shě赦shè身shēn 神shén 婶shěn 蜃shèn笙shēnɡ绳shénɡ△省shěnɡ圣shènɡ诗shī时shí矢shǐ△氏shì收shōu △熟shóu 首shǒu 瘦shòu叔shū塾shú暑shǔ戍shù胎tāi △苔tái △呔tǎi 态tài贪tān 昙tán 忐tǎn 探tàn涛tāo 淘táo 讨tǎo 套tào剔tī啼tí体tǐ屉tì添tiān 阗tián 腆tiǎn 掭tiàn△挑tiāo 笤tiáo 窕tiǎo 粜tiào汀tīnɡ庭tínɡ艇tǐnɡ挺tìnɡ△通tōnɡ瞳tónɡ捅tǒnɡ痛tònɡ偷tōu 投tóu 钭tǒu 透tòu凸tū荼tú土tǔ兔tù推tuī颓tuí腿tuǐ蜕tuì吞tūn 臀tún 汆tǔn △褪tùn 托tuō鸵tuó椭tuǒ△拓tuò娲wā娃wá佤wǎ袜wà碗wān 丸wán 惋wǎn 腕wàn汪wānɡ亡wánɡ枉wǎnɡ忘wànɡ危wēi 帷wéi 伪wěi 魏wèi瘟wēn 雯wén 稳wěn 汶wèn屋wū毋wú妩wǔ戊wù晰xī檄xí徙xǐ隙xì△鲜xiān 咸xián 冼xiǎn 腺xiàn镶xiānɡ翔xiánɡ饷xiǎnɡ△巷xiànɡ枭xiāo 淆xiáo 晓xiǎo 孝xiào歇xiē偕xié△写xiě械xiè星xīnɡ型xínɡ醒xǐnɡ幸xìnɡ△戌xū徐xú诩xǔ婿xù轩xuān 漩xuán 癣xuǎn 绚xuàn 薜xuē穴xué雪xuě△血xuè押yā衙yá△哑yǎ揠yà胭yān 炎yán 俨yǎn 雁yàn殃yānɡ杨yánɡ仰yǎnɡ怏yànɡ吆yāo 肴yáo 舀yǎo 药yào△掖yē爷yé野yě腋yè揖yī贻yí倚yǐ役yì喑yīn 吟yín 瘾yǐn 荫yìn膺yīnɡ蝇yínɡ颖yǐnɡ映yìnɡ拥yōnɡ颙yónɡ永yǒnɡ△佣yònɡ幽yōu 鱿yóu 黝yǒu 釉yòu迂yū鱼yú雨yǔ狱yù鸳yuān 辕yuán 远yuǎn 苑yuàn晕yūn 匀yún 允yǔn 孕yùn簪zān △咱zán 攒zǎn 暂zàn糟zāo 凿záo 澡zǎo 躁zào渣zhā札zhá眨zhǎ乍zhà摘zhāi 宅zhái 窄zhǎi 寨zhài招zhāo △着zháo 沼zhǎo 召zhào遮zhē蛰zhé褶zhě蔗zhè汁zhī职zhí止zhǐ质zhì诌zhōu 妯zhóu 肘zhǒu 皱zhòu诛zhū逐zhú瞩zhǔ贮zhù△作zuō昨zuó左zuǒ做zuò第二节辨正声调一、误读与缺陷普通话声调虽然只有“四声”，但由于各方言声调与普通话声调间有许多差别，并对其干扰，要念准普通话的“四声”还是有一定难度。

非异氰酸酯法合成豆田除草剂氯嘧磺隆王文芳,　郭秀江,　李彩荣,　刘爱红(河北宣化农药有限公司科技中心,河北张家口075100)摘　要:报道了以氯甲酸甲酯为起始原料合成豆田除草剂氯嘧磺隆的方法。

原料邻乙氧羰基苯磺酰胺先与氯甲酸甲酯生成邻乙氧羰基苯磺酰胺基甲酸甲酯,再与22氨基242氯262甲氧基嘧啶反应生成氯嘧磺隆。

避免了异氰酸酯路线的种种缺点,具有收率高、含量高、成本低的特点。

以邻乙氧羰基苯磺酰胺计,总收率为76.7%,原药纯度达92.12%。

关键词:氯嘧磺隆;氯甲酸甲酯;磺酰脲;豆田除草剂中图分类号:TQ 457.23; 文献标识码:A 文章编号:036726358(2002)0120035203N on 2isocyanate M ethod fo r P rep arati on of Ch lo rim u ron 2ethyl as H erb icide fo r SoybeanW AN G W en 2fang ,GUO X iu 2jiang ,L I Cai 2rong ,L I U A i 2hong(S cience and T echnology Cen tre ,X uanhua A g ro 2che m Co .H ebei ,H ebei Z hangj iakou 075100,Ch ina )Abstract :A m ethod fo r p reparati on of ch lo ri m u ron 2ethyl from m ethyl ch lo rofo r m ate as starting m aterial w as repo rted E thyl 22su lfam oyl benzoate reacts w ith m ethyl ch lo rofo r m ate to give ethyl 22m ethoxycar 2bonyl su lfam oyl benzoate .Ch lo ri m u ron 2ethyl w ill be ob tained after reacti on of the above p roduct w ith 22am ino 242ch lo ro 262m ethoxyp yri m idine .T h is is an econom ical m ethod to p repare ch lo ri m u ron 2ethyl in h igh yield and good p u rity ,avo iding the sho rtcom ing of the isocyanate rou te .T he to tal yield reaches 76.7%based on ethyl 22su lfam oyl benzoate and the pu rity is 92.12%.Key words :ch lo ri m u ron 2ethyl ;m ethy 1ch lo rofo r m ate ;su lfonylu reas ;herb icide on soybean .修稿日期:2000207230作者简介:王文芳(1790～),男,工程师。

第6 7卷第3期2 0 2 1年5月地质论评G E O L O G I C A L R E V I E WVol.67 No.3May , 2 0 2 1晚渐新世以来青藏高原北部东昆仑山构造隆升对亚洲内陆干旱化的潜在影响—基于现代地质删证据/georev 李乐意⑶，常宏⑶，关冲4,5)，陶亚玲6)，沈俊杰'’5)，权春艳 '秦秀玲°，常小红U1)中国科学院地球环境研究所黄土与第四纪地质国家重点实验室，西安,710061;2)西安地球环境创新研究院，西安,710061;3)中国科学院第四纪地质与全球变化卓越中心，西安,710061;4)中国科学院青藏高原研究所，北京，100101;5)中国科学院大学，北京，100049; 6)中国地震局地质研究所，北京，100029内容提要：青藏高原的构造隆升一生长过程及其资源环境效应是地球系统科学研究中的一个重要命题其中.新生代青藏高原构造隆升过程与亚洲内陆干旱化之间的联系是研究的一个热点和难点。

本文基于青藏高原从那曲到格尔木沿109国道现代地理要素和景观变化的证据以及大量器测数据和模拟结果讨论了青藏高原具体IX域对亚洲内陆干旱化形成演化的重耍影响，结果指出东昆仑山对印度季风继续深人内陆具有明显的阻裆作用，是一个重要的水汽屏障。

同时本文结合东昆仑山晚渐新W以来主要构造隆升事件与亚洲内陆干旱化关键时间点的高度契合，进一步指出东昆仑山晚渐新世以来的构造隆升对亚洲内陆或者至少柴达木盆地的干旱化事件具有重要的影响，但是~3. 6 M a之后，北半球冰期对内陆盆地的干旱化的影响更大关键词：青藏高原；亚洲内陆T旱化；东昆仑；构造隆升青藏高原的构造隆升一生长过程及其资源环境 效应是地球系统科学研究中的一个重要命题。

其中 在青藏高原的隆升与亚洲内陆干旱化的形成和演化 等方面不同学科或交叉学科背景的学者开展了大量 的研究工作（G u o Z h e n g t a n g et al.，2002; S u n Xianjyun et al. , 2005；S u n Jimin et al. , 2008, 2017；Q i a n g X ia o k e et al. ,2011；A n Z h i s h e n g,2014；Z h e n g H o n g b o et al. ,2015 ；C h a n g H o n g et al., 2017；H e e r m a n c e et al. , 2018；Liu X i a o d o n g et al., 2019):在黄土高原地区，因为黄土的形成离不开 物源区，它的形成在某种程度上指示了西北内陆物 源丨X:存在真正意义上、范围较广的荒漠或者戈壁(Q i a n g X ia o k e et al.，2011;郭正堂等，2017);其黄 土一古土壤序列和红粘土保存着丰富的古气候信息 (刘东生等，1985 ),同时也是亚洲内陆干旱荒漠化形成开始时间的见证者。

腰围35码是多少厘米35码的裤子腰围是93厘米。

一般裤子的尺码单位是英尺，并且按照我国实施统一的GB1335－1991《服装号型》的标准，35码的腰围就是2尺75，换算成厘米就是93厘米。

常见服装有两种型号标法：一是S（小）、M（中）、L（大）、XL（加大）；二是身高加胸围的形式，比如160/80A、165/85A、170/85A等。

第一种标注不规范。

不管是国产服装还是进口服装，必须按中国的服装型号标准GB/T1335标注型号，英文字母只能作为辅助代码标注。

35的腰围是2尺8。

一般说的是英尺的表达方式，穿多少尺码的，这要换算成尺码；按照我们国家实施统一的GB1335－1991《服装号型》的标准，35的腰围就是27.5，也就是2尺75，目前的话在市场上买的是2尺8比较常见。

腰围计算方法男性：身高（cm）÷2-11（cm）女性：身高（cm）÷2-13（cm），±5%为正常范围。

腰围怎么量1.把带子拿出来。

建议选择一米长的卷尺或者专用卷尺。

2.用两个手指把尺带放在肚脐上，然后圈起来。

3.转圈时要收腹，保持身体放松。

不要紧紧拉成一圈，紧贴皮肤放松一点就好。

4、读出一圈长度的数据即可。

35码的裤子对应的尺码是2尺65，这个号码对应的身高比例尺码是180/86A码，其腰围是90厘米，对应的臀围是110厘米，而裤长是109厘米，膝围是49.6厘米。

标准腰围计算方法：腰围=身高的二分之一减去19厘米，比如：身高为160cm 的标准腰围是160cm/2-19=61cm。

臀围测量方法是先将软尺放到臀部最隆起的地方，然后将其两端分别朝着腹部最突出的方向，交叉两端即可测出臀围数据。

在购买裤子前，虽然尺码一样，但裤子的版型、款式等都不一样，所以大小也不一样，因此在购买裤子的时候还是要以试穿为主。

35的腰围是2尺8；93厘米相当于2.8英尺。

一般说的是英尺的表达方式，穿多少尺码的，这要换算成尺码；按照我们国家实施统一的GB1335－1991《服装号型》的标准，35的腰围就是27.5，也就是2尺75，目前的话在市场上买的是2尺8比较常见。

实验：目的基因克隆PCR技术课前预习PCR polymerase chain reaction 反应的基本原理;目的要求1．学习和掌握PCR 反应的基本原理与实验技术方法;2．认真完成每一步实验操作,详细记录实验现象和结果并加以分析和总结;基本原理类似于DNA 的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物;PCR 由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA 经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR 扩增形成的双链DNA 解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备；②模板DNA 与引物的退火复性：模板DNA 经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA 单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA 模板--引物结合物在TaqDNA 聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板;每完成一个循环需2～4 分钟,2～3 小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍;到达平台期Plateau所需循环次数取决于样品中模板的拷贝;实验用品1．材料：重组质粒DNA作为模板2．器材和仪器：移液器及吸头,硅烷化的PCR 小管,DNA扩增仪PE 公司,琼脂糖凝胶电泳所需设备电泳槽及电泳仪,台式高速离心机3．试剂：①10×PCR 反应缓冲液：500mmol/L KCl, 100mmol/L Tris·Cl, 在25℃下, , ％Triton X-100;②MgCl2 ：25mmol/L;③ 4 种dNTP 混合物:每种L;④Taq DNA聚合酶5U/μl;⑤T4 DNA连接酶及连接缓冲液：方法步骤一PCR反应1. 依次混匀下列试剂35μl H2 O 5μl 10×PCR反应缓冲液4μl 25mmol/L MgCl2 4μl 4种dNTP μl 上游引物引物１μl 下游引物引物２μl 模板DNA约1ng 混匀后离心5秒;2. 将混合物在94℃下加热5分钟后冰冷,迅速离心数秒, 使管壁上液滴沉至管底,加入Taq DNA聚合酶μl约,混匀后稍离心,加入一滴矿物油覆盖于反应混合物上;3. 用94℃变性1分钟,45℃退火1分钟, 72℃延伸2分钟, 循环35轮,进行PCR;最后一轮循环结束后, 于72℃下保温10分钟,使反应产物扩增充分;4 电泳按前所述,取10μl扩增产物用1％琼脂糖凝胶进行电泳分析,检查反应产物及长度; 注意1. PCR非常灵敏, 操作应尽可能在无菌操作台中进行;2. 吸头、离心管应高压灭菌, 每次吸头用毕应更换, 不要互相污染试剂;3. 加试剂前, 应短促离心10秒钟, 然后再打开管盖, 以防手套污染试剂及管壁上的试剂污染吸头侧面;4. 应设含除模板DNA所有其它成分的负对照;实验结果注意事项微量操作、PCR 反应体系的设计、引物设计、扩增条件的优化思考题1. 降低退火温度对反应有何影响2. 延长变性时间对反应有何影响3. 循环次数是否越多越好为何4. PCR有哪些用途举例说明;附：PCR知识供参考一PCR 反应体系与反应条件标准的PCR 反应体系：10×扩增缓冲液10ul4 种dNTP 混合物各200umol/L引物各10～100pmol模板DNA ～2ugTaq DNA聚合酶Mg2+ L加双或三蒸水至100ulPCR 反应五要素：参加PCR 反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+引物：引物是PCR 特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度;理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR 就可将模板DNA在体外大量扩增;设计引物应遵循以下原则：①引物长度：15-30bp,常用为20bp左右;②引物扩增跨度：以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb 的片段;③引物碱基：G+C 含量以40-60%为宜,G+C 太少扩增效果不佳,G+C 过多易出现非特异条带;ATGC最好随机分布,避免5 个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列;④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带;⑤引物3’端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR 失败;⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处;⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性;引物量：每条引物的浓度～1umol 或10～100pmol,以最低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会;酶及其浓度：目前有两种Taq DNA聚合酶供应, 一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶,另一种为大肠菌合成的基因工程酶;催化一典型的PCR 反应约需酶量指总反应体积为100ul 时,浓度过高可引起非特异性扩增,浓度过低则合成产物量减少;dNTP 的质量与浓度：dNTP 的质量与浓度和PCR 扩增效率有密切关系,dNTP 粉呈颗粒状,如保存不当易变性失去生物学活性;dNTP 溶液呈酸性,使用时应配成高浓度后,以1M NaOH 或1M Tris;HCl的缓冲液将其PH调节到～,小量分装,-20℃冰冻保存;多次冻融会使dNTP 降解;在PCR 反应中,dNTP 应为50～200umol/L, 尤其是注意 4 种dNTP 的浓度要相等等摩尔配制, 如其中任何一种浓度不同于其它几种时偏高或偏低,就会引起错配;浓度过低又会降低PCR 产物的产量;dNTP 能与Mg2+结合,使游离的Mg2+浓度降低;模板靶基因核酸：模板核酸的量与纯化程度,是PCR 成败与否的关键环节之一,传统的DNA 纯化方法通常采用SDS 和蛋白酶K 来消化处理标本;SDS 的主要功能是：溶解细胞膜上的脂类与蛋白质,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜,并解离细胞中的核蛋白,SDS 还能与蛋白质结合而沉淀；蛋白酶K 能水解消化蛋白质,特别是与DNA 结合的组蛋白,再用有机溶剂酚与氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份,用乙醇或异丙醇沉淀核酸;提取的核酸即可作为模板用于PCR 反应;一般临床检测标本,可采用快速简便的方法溶解细胞,裂解病原体,消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离,直接用于PCR 扩增;RNA 模板提取一般采用异硫氰酸胍或蛋白酶K 法,要防止RNase降解RNA;Mg2+浓度：Mg2+对PCR 扩增的特异性和产量有显著的影响,在一般的PCR 反应中,各种dNTP 浓度为200umol/L时,Mg2+浓度为～L为宜;Mg2+浓度过高,反应特异性降低,出现非特异扩增,浓度过低会降低Taq DNA聚合酶的活性,使反应产物减少;PCR 反应条件的选择PCR 反应条件为温度、时间和循环次数;温度与时间的设置：基于PCR 原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点;在标准反应中采用三温度点法,双链DNA 在90～95℃变性,再迅速冷却至40 ～60℃,引物退火并结合到靶序列上,然后快速升温至70～75℃,在Taq DNA 聚合酶的作用下,使引物链沿模板延伸;对于较短靶基因长度为100～300bp 时可采用二温度点法, 除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一,一般采用94℃变性,65℃左右退火与延伸此温度Taq DNA酶仍有较高的催化活性;①变性温度与时间：变性温度低,解链不完全是导致PCR 失败的最主要原因;一般情况下,93℃～94℃lmin足以使模板DNA变性,若低于93℃则需延长时间,但温度不能过高,因为高温环境对酶的活性有影响;此步若不能使靶基因模板或PCR 产物完全变性,就会导致PCR 失败;②退火复性温度与时间：退火温度是影响PCR 特异性的较重要因素;变性后温度快速冷却至40℃～60℃,可使引物和模板发生结合;由于模板DNA 比引物复杂得多,引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞;退火温度与时间,取决于引物的长度、碱基组成及其浓度,还有靶基序列的长度;对于20 个核苷酸,G+C 含量约50%的引物,55℃为选择最适退火温度的起点较为理想;引物的复性温度可通过以下公式帮助选择合适的温度：Tm值解链温度=4G+C＋2A+T复性温度=Tm值-5～10℃在Tm值允许范围内, 选择较高的复性温度可大大减少引物和模板间的非特异性结合,提高PCR 反应的特异性;复性时间一般为30～60sec,足以使引物与模板之间完全结合;③延伸温度与时间：Taq DNA聚合酶的生物学活性：70～80℃150核苷酸/S/酶分子70℃60 核苷酸/S/酶分子55℃24 核苷酸/S/酶分子高于90℃时, DNA合成几乎不能进行;PCR 反应的延伸温度一般选择在70～75℃之间,常用温度为72℃,过高的延伸温度不利于引物和模板的结合;PCR 延伸反应的时间,可根据待扩增片段的长度而定,一般1Kb以内的DNA片段,延伸时间1min是足够的;3～4kb 的靶序列需3～4min；扩增10Kb 需延伸至15min;延伸进间过长会导致非特异性扩增带的出现;对低浓度模板的扩增,延伸时间要稍长些;循环次数：循环次数决定PCR 扩增程度;PCR 循环次数主要取决于模板DNA的浓度;一般的循环次数选在30～40 次之间,循环次数越多,非特异性产物的量亦随之增多;PCR 反应特点特异性强PCR 反应的特异性决定因素为：①引物与模板DNA 特异正确的结合；②碱基配对原则；③Taq DNA 聚合酶合成反应的忠实性；④靶基因的特异性与保守性;其中引物与模板的正确结合是关键;引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的;聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA 聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合复性可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度;再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高;灵敏度高PCR 产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克pg=10 -12 g量级的起始待测模板扩增到微克ug=10 -6 g水平;能从100 万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中,PCR 的灵敏度可达3 个RFU空斑形成单位；在细菌学中最小检出率为3 个细菌;简便、快速PCR 反应用耐高温的Taq DNA 聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA 扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2～4 小时完成扩增反应;扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广;对标本的纯度要求低不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板;可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等粗制的DNA 扩增检测;PCR 扩增产物分析PCR 产物是否为特异性扩增,其结果是否准确可靠,必须对其进行严格的分析与鉴定,才能得出正确的结论;PCR产物的分析,可依据研究对象和目的不同而采用不同的分析方法;凝胶电泳分析：PCR产物电泳,EB 溴乙锭染色紫外仪下观察,初步判断产物的特异性;PCR产物片段的大小应与预计的一致,特别是多重PCR,应用多对引物,其产物片断都应符合预讦的大小,这是起码条件;琼脂糖凝胶电泳：通常应用1～2%的琼脂糖凝胶,供检测用;聚丙烯酰胺凝胶电泳：6～10%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离效果比琼脂糖好,条带比较集中,可用于科研及检测分析;酶切分析：根据PCR 产物中限制性内切酶的位点,用相应的酶切、电泳分离后,获得符合理论的片段,此法既能进行产物的鉴定,又能对靶基因分型,还能进行变异性研究;分子杂交：分子杂交是检测PCR 产物特异性的有力证据,也是检测PCR 产物碱基突变的有效方法;Southern 印迹杂交：在两引物之间另合成一条寡核苷酸链内部寡核苷酸标记后做探针,与PCR 产物杂交;此法既可作特异性鉴定,又可以提高检测PCR 产物的灵敏度,还可知其分子量及条带形状,主要用于科研;斑点杂交：将PCR 产物点在硝酸纤维素膜或尼膜薄膜上,再用内部寡核苷酸探针杂交,观察有无着色斑点,主要用于PCR 产物特异性鉴定及变异分析;核酸序列分析：是检测PCR 产物特异性的最可靠方法;PCR 常见问题总结PCR 产物的电泳检测时间一般为48h 以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h 后带型不规则甚致消失;假阴性,不出现扩增条带PCR 反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及活性④PCR循环条件;寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究;模板：①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有Taq 酶抑制剂,③模板中蛋白质没有消化除净,特别是染色体中的组蛋白,④在提取制备模板时丢失过多,或吸入酚;⑤模板核酸变性不彻底;在酶和引物质量好时,不出现扩增带,极有可能是标本的消化处理,模板核酸提取过程出了毛病,因而要配制有效而稳定的消化处理液,其程序亦应固定不宜随意更改;酶失活：需更换新酶,或新旧两种酶同时使用,以分析是否因酶的活性丧失或不够而导致假阴性;需注意的是有时忘加Taq 酶或溴乙锭;引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称,是PCR 失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因;有些批号的引物合成质量有问题,两条引物一条浓度高,一条浓度低,造成低效率的不对称扩增,对策为：①选定一个好的引物合成单位;②引物的浓度不仅要看OD值,更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳,一定要有引物条带出现,而且两引物带的亮度应大体一致,如一条引物有条带,一条引物无条带,此时做PCR 有可能失败,应和引物合成单位协商解决;如一条引物亮度高,一条亮度低,在稀释引物时要平衡其浓度;③引物应高浓度小量分装保存,防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分,导致引物变质降解失效;④引物设计不合理,如引物长度不够,引物之间形成二聚体等;Mg2+浓度：Mg2+离子浓度对PCR 扩增效率影响很大,浓度过高可降低PCR扩增的特异性,浓度过低则影响PCR 扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带;反应体积的改变：通常进行PCR 扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul;或100ul,应用多大体积进行PCR 扩增,是根据科研和临床检测不同目的而设定,在做小体积如20ul 后,再做大体积时,一定要模索条件,否则容易失败;物理原因：变性对PCR 扩增来说相当重要,如变性温度低,变性时间短,极有可能出现假阴性;退火温度过低,可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率;有时还有必要用标准的温度计,检测一下扩增仪或水溶锅内的变性、退火和延伸温度,这也是PCR失败的原因之一;靶序列变异：如靶序列发生突变或缺失,影响引物与模板特异性结合,或因靶序列某段缺失使引物与模板失去互补序列,其PCR 扩增是不会成功的;假阳性出现的PCR 扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高;引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性, 因而在进行PCR 扩增时, 扩增出的PCR产物为非目的性的序列;靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性;需重新设计引物;靶序列或扩增产物的交叉污染：这种污染有两种原因：一是整个基因组或大片段的交叉污染,导致假阳性;这种假阳性可用以下方法解决：①操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外;②除酶及不能耐高温的物质外,所有试剂或器材均应高压消毒;所用离心管及样进枪头等均应一次性使用;③必要时,在加标本前,反应管和试剂用紫外线照射,以破坏存在的核酸;二是空气中的小片段核酸污染,这些小片段比靶序列短,但有一定的同源性;可互相拼接,与引物互补后,可扩增出PCR产物,而导致假阳性的产生,可用巢式PCR 方法来减轻或消除;出现非特异性扩增带PCR 扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带;非特异性条带的出现,其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体;二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR 循环次数过多有关;其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性扩增;其对策有：①必要时重新设计引物;②减低酶量或调换另一来源的酶;③降低引物量,适当增加模板量,减少循环次数;④适当提高退火温度或采用二温度点法93℃变性,65℃左右退火与延伸;出现片状拖带或涂抹带PCR 扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带;其原因往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多引起;其对策有：①减少酶量,或调换另一来源的酶;②减少dNTP的浓度;③适当降低Mg2+浓度;④增加模板量,减少循环次数;PCR 污染与对策PCR 反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性,但令人头痛的问题是易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生;污染原因一标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散,导致彼此间的污染;二PCR 试剂的污染:主要是由于在PCR 试剂配制过程中,由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染.三PCR扩增产物污染:这是PCR反应中最主要最常见的污染问题, 因为PCR产物拷贝量大一般为1013拷贝/ml,远远高于PCR 检测数个拷贝的极限,所以极微量的PCR 产物污染,就可造成假阳就可形成假阳性;还有一种容易忽视,最可能造成PCR 产物污染的形式是气溶胶污染;在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶,在操作时比较剧烈地摇动反应管,开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染;据计算一个气溶胶颗粒可含48000 拷贝,因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题;四实验室中克隆质粒的污染:在分子生物学实验室及某些用克隆质粒做阳性对照的检验室,这个问题也比较常见;因为克隆质粒在单位容积内含量相当高,另外在纯化过程中需用较多的用具及试剂,而且在活细胞内的质粒,由于活细胞的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力,其污染可能性也很大;污染的监测一个好的实验室,要时刻注意污染的监测,考虑有无污染是什么原因造成的污染,以便采取措施,防止和消除污染;对照试验1. 阳性对照:在建立PCR 反应实验室及一般的检验单位都应设有PCR 阳性对照,它是PCR 反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要的参考标志;阳性对照要选择扩增度中等、重复性好,经各种鉴定是该产物的标本,如以重组质粒为阳性对照,其含量宜低不宜高100 个拷贝以下,但阳性对照尤其是重组质粒及高浓度阳性标本,其对检测或扩增样品污染的可能性很大;因而当某一PCR 试剂经自己使用稳定,检验人员心中有数时,在以后的实验中可免设阳性对照;2. 阴性对照:每次PCR 实验务必做阴性对照;它包括①标本对照:被检的标本是血清就用鉴定后的正常血清作对照;被检的标本是组织细胞就用相应的组织细胞作对照;②试剂对照:在PCR 试剂中不加模板DNA或RNA,进行PCR 扩增,以监测试剂是否污染;3. 重复性试验4. 选择不同区域的引物进行PCR 扩增防止污染的方法一合理分隔实验室:将样品的处理、配制PCR 反应液、PCR 循环扩增及PCR产物的鉴定等步骤分区或分室进行,特别注意样本处理及PCR产物的鉴定应与其它步骤严格分开;最好能划分①标本处理区;②PCR 反应液制备区;③PCR 循环扩增区;④PCR 产物鉴定区;其实验用品及吸样枪应专用,实验前应将实验室用紫外线消毒以破坏残留的DNA 或RNA;二吸样枪:吸样枪污染是一个值得注意的问题;由于操作时不慎将样品或模板核酸吸入枪内或粘上枪头是一个严重的污染源,因而加样或吸取模板核酸时要十分小心,吸样要慢,吸样时尽量一次性完成,忌多次抽吸,以免交叉污染或产生气溶胶污染;三预混和分装PCR试剂:所有的PCR 试剂都应小量分装,如有可能,PCR 反应液应预先配制好,然后小量分装,-20℃保存;以减少重复加样次数,避免污染机会;另外,PCR 试剂,PCR 反应液应与样品及PCR产物分开保存,不应放于同一冰盒或同一冰箱;四防止操作人员污染,使用一次性手套、吸头、小离心管应一次性使用;五设立适当的阳性对照和阴性对照,阳性对照以能出现扩增条带的最低量的标准病原体核酸为宜,并注意交叉污染的可能性,每次反应都应有一管不加模板的试剂对照及相应不含有被扩增核酸的样品作阴性对照;六减少PCR 循环次数,只要PCR 产物达到检测水平就适可而止;七选择质量好的Eppendorf管,以避免样本外溢及外来核酸的进入,打开离心管前应先离心,将管壁及管盖上的液体甩至管底部;开管动作要轻,以防管内液体溅出;参考文献一、主要教学参考书：1.基因工程原理第二版.吴乃虎编著,科学出版社2.分子克隆实验指南第三版.黄培堂等译,科学出版社3.基因克隆和DNA分析.魏群等译,高等教育出版社4.最新分子生物学实验技术梁国栋主编,科学出版5分子生物学实验指导主编：魏群高等教育出版社施普林格出版社二、主要参考文献：, SN, ACY Chang and L Hsu, 1972, Sci. 69:2110., HC and J Doly. 1979.,Nucleic Acids Res. 7:1513., C and P Borst, 1972.,Biochim. Biophys. Acta 269:192.F, RL Rodriguez, PJ Greene, MC Betlach, HL Heyneker, HW Boyer, JH Crosa, and S Falkow, 1977b,,Gene 2:95.K, F Faloona, S Scharf, R Saiki, G Horn and H Erlich, 1986.,Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 51:263.。

中国十大咸水湖展开全文中国十大咸水湖咸水湖，顾名思义是指以咸水形式积存在地表上的湖泊。

咸水湖的存在需要一定的地质和气候条件，首先，在内流流域内具有一个集水成湖的盆地；其次，湖水的蒸发要超过补给，湖泊需要有一定的入流，因为极干旱地区无地表径流，不能形成湖泊，所以半干旱半湿润地区最有利于咸水湖的形成；最终，入流河水或风从周围的岩石中携带大量盐分入湖，为盐类的堆积提供可能。

由于特殊的形成条件，我国的咸水湖大部分分布于青藏地区。

盐湖是咸水湖的一种，是湖泊发展到老年期的产物，其含盐度很高，矿化度往往大于35g/L，我们下面要说的中国十大咸水湖不包括盐湖在内。

1.青海湖青海湖古称“西海”，又称“卑禾羌海”，位于青藏高原的东北部，是中国最大的咸水湖，也是我国最大的湖泊。

目前湖面积4451.5km2，最长约104km，最宽约62km，湖水平均深约21m，最大水深为32.8m，湖面海拔3260m，湖水盐度为1.24%（一般海水含盐量为3.5%）。

青海湖卫星图青海湖的湖水补给主要来源于河流注入和降水。

湖水周围大小河流有70余条，呈明显的不对称分布，湖北岸、西北岸和西南岸河流多，流域面积大，支流多；湖东南岸和南岸河流少，流域面积小。

青海湖的径流补给主要来自布哈河、沙柳河、哈尔盖河、泉吉河、黑马河5大水系，它们占入湖径流量的83.1％，各水系特征如表1所示:表1青海湖地区具有高原大陆性气候，日照强烈，冬寒夏凉，雨热同季，干湿季分明。

湖区全年降水量偏少，降水多集中在5～9月份，东部和南部稍高于北部和西部，湖区年平均降水量300~550mm，年蒸发量为800~900mm，蒸发量远远超过降水量。

青海湖是构造断陷湖，四周被橡皮山、大通山、日月山和青海南山所环绕，湖盆边缘多以断裂与周围的山相接。

距今20~200万年前的成湖初期，青海湖属于外流淡水湖，与黄河水系相通，至13万年前，由于新构造运动，周围山地强裂隆起，从上新世末，湖东部日月山强烈上升隆起，使原来注入黄河的倒淌河被堵塞，迫使它由东向西流入青海湖，出现了尕海、耳海，后又分离出海晏湖、沙岛湖等子湖。

司马相如●子虚赋《子虚赋》是西汉辞赋家司马相如早期客游梁孝王时所作。

此赋通过楚国之子虚先生讲述随齐王出猎，齐王问及楚国，极力铺排楚国之广大丰饶，以至云梦不过是其后花园之小小一角。

乌有先生不服，便以齐之大海名山、异方殊类，傲视子虚。

总的来看都是张扬大国风采、帝王气象。

此赋与《上林赋》构成姊妹篇，都是汉代文学正式确立的标志性作品。

【作品原文】子虚赋楚使子虚于齐，王悉发车骑，与使者出畋（1）。

畋罢，子虚过姹乌有先生（2），亡是公存焉。

坐定，乌有先生问曰：“今日畋乐乎？”子虚曰：“乐。

”“获多乎？”曰：“少”。

“然则何乐？”对曰：“仆乐齐王之欲夸仆以车骑之众，而仆对以云梦之事也。

”曰：“可得闻乎？”子虚曰：“可”。

王车架千乘，选徒万骑，畋于海滨。

列卒满泽，罘网弥山（3）。

掩兔辚鹿（4），射麋脚麟（5）。

鹜于盐浦（6），割鲜染轮（7）。

射中获多，矜而自功。

顾谓仆曰：‘楚亦有平原广泽游猎之地饶乐若此者乎？楚王之猎，孰与寡人乎？’仆下车对曰：‘臣，楚国之鄙人也。

幸得宿卫十有余年，时从出游，游于后园，览于有无，然犹未能遍睹也，又焉足以方其外泽乎？’齐王曰：‘虽然，略以子之所闻见而言之。

”仆对曰：“唯唯（8）’’。

“‘臣闻楚有七泽，尝见其一，未睹其余也。

臣之所见，盖特其小小者耳，名曰云梦。

云梦者，方九百里，其中有山焉。

其山则盘纡岪郁（9），隆崇嵂崒（10）。

岑崟参差（11），日月蔽亏。

一交一错纠纷，上干青云。

罢池陂陀（12），下属一江一河（13）。

其土则丹青赭垩（14），雌黄白坿（15），锡碧金银。

众色炫耀，照烂龙鳞。

其石则赤玉玫瑰，琳珉昆吾（16），瑊玏玄厉（17），碝石碔砆（18）。

其乐则有蕙圃，蘅兰芷若（19），芎藭菖蒲（20），一江一蓠蘼芜（21），诸柘巴苴（22）。

其南侧有平原广泽，登降陁靡（23），案衍坛曼。

缘似大一江一，限以巫山。

其高燥则生葴菥苞荔（24），薛莎青薠（25）。

其埤湿则生藏茛蒹葭（26），东蘠雕一胡一。