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生态毒理学(大三)试验一叶绿素a和叶绿素b含量的测定 20110422一、实验目的掌握叶绿素a和叶绿素b含量的测定的方法。
二、实验原理因叶绿素a和叶绿素b溶于二甲基亚砜（DMSO），叶绿素a和叶绿素b在663nm、645nm处具特有吸收峰，测其光密度值。
根据朗伯比尔定律计算叶绿素a和叶绿素b的浓度。
三、材料用品新鲜植物叶片 721nm分光光度计 DMSO 25ml容量瓶 80%丙酮量筒四、实验步骤1称取100mg绿叶撕碎放入25ml容量瓶中，并向其加入5mlDMSO2然后将其放入65℃恒温柜中保温0.5-4h。
3待到一定时间取出后，向其加入80%丙酮溶液定容至25ml。
4取溶液于663nm、645nm条件下测定光密度值，记下实验数据。
五、实验数据处理将测得的光密度值带入下列公式中计算叶绿素a和叶绿素b的含量Ca=12.7*A663-2.69*A645Cb=22.9*A945-4.68*A663Ct=Ca+CbC(mg/g鲜重)=mg/L*总体积(L)/鲜重(g)试验三重金属铜离子对种子萌发的毒性效应一、实验原理植物种子在适宜的条件（水分、温度和氧气等）下，吸水膨胀萌发，在各种酶的催化作用下，发生一系列的生理、生化反应。
但是，当大量重金属离子存在时会抑制一些酶的活性，从而使种子萌发受到影响，破坏发芽过程，因此通过测定种子发芽情况，就可以预测和评价重金属离子对植物的潜在毒性。
二、实验目的1. 学习掌握植物种子毒性试验的方法2. 确定种子发芽率和伸长率的EC50三、材料，试剂及仪器材料：荞麦，小麦，黄豆试剂：CuSO4 ·5H2O、蒸馏水仪器：培养皿、移液管、滤纸、镊子四、实验步骤1、溶液配制硫酸铜溶液的配置：将硫酸铜按浓度梯度0（对照）、100 mg/L 1000 mg/L、5000mg/L、10000mg/L配置不同浓度的硫酸铜溶液2、种子处理种子经挑选后按每培养皿每种10粒置于垫有两层滤纸直径为6cm的玻璃培养皿,每培养皿加入10mL不同浓度的硫酸铜处理液,处理液浸透滤纸并完全浸润种子, 将培养皿盖好放入室温阳光下进行发芽试验3、观察记录每日向不同处理组添加5mL硫酸铜溶液以保持湿润。
生态毒理学实验实验一动物试验的一般操作技术一、目的与要求毒理学的许多试验研究，主要通过动物实验来进行。
而实验过程中技术及生物材料的收集是否恰当，直接影响实验结果的质量。
因此，毒理学实验工作者必须正确地掌握动物实验中的一般操作技术，这是保证试验工作成功的基本条件之一。
本实验要求掌握动物的捉拿、固定、麻醉、编号、采血、处死方法和解剖检查。
二、实验内容和方法（一）实验动物的捉拿和固定方法1、小鼠：捉拿时先用右手将鼠尾抓住提起，放在较粗糙的台面或鼠笼上，在其向前爬行时，右手向后拉尾，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和头颈部皮肤，将其固定于左手手心中，拉直四肢并用左手无名指压紧尾和后肢，右手即可作注射或其他实验操作。
取尾血及尾静脉注射时，可将小鼠固定在金属或木制的固定器上。
2、大鼠：大鼠抓取方法基本同小鼠，抓大鼠时若操作者不熟练，或者大鼠特别凶猛，操作者最好戴上防护手套(帆布或硬皮质均可)。
如若是灌胃、腹腔注射、肌肉和皮下注射时，可采用与小鼠相同的手法，即拇、食指捏住鼠的耳朵及头颈皮肤，余下三指紧捏住背部皮肤，置于掌心中，调整大鼠在手中的姿势后即可操作。
3、豚鼠：豚鼠性情温和，胆小易惊，一般不易伤人，抓取时，先用手掌扣住豚鼠背部，抓住其肩胛上方，拇、食指环握颈部，另一只手托住臀部。
如果在实验时豚鼠频繁挣扎，不宜采用此方法，因为操作者的拇、食指会随动物的挣扎越抓越紧而引起豚鼠窒息。
另外，有时可用纱布将豚鼠头部轻轻盖住，操作人员轻扶住其背部或者让其头部钻到实验人员的臂下，然后进行实验操作。
4、家兔：一手抓住兔颈部的被毛与皮肤，另一手托其臀部或腹部，使其躯干的重量大部分集中在手上。
(二)实验动物的编号、标记和去毛方法1、编号和标记方法：在动物实验中，为了使实验动物个体间或组间区别开来，便于对每个实验动物的反应情况进行观察，必须对实验动物进行编号、标记。
标记的方法很多，但基本原则是：号码清楚、耐久、简便、易认和适用。
生态毒理学实验实验一血清乳酸脱氢酶活性的测定一、实验目的熟悉小鼠的采血方法，学会乳酸脱氢酶活性的测定，理解该酶含量变化的意义。
二、实验原理乳酸脱氢酶(LDH，EC．l．1．27)在以辅酶Ⅰ（NAD+）为氢受体的情况下，催化L一乳酸氧化成丙酮酸（对D一乳酸不起作用）。
LDH存在于各种组织的细胞浆中，其活力约为血清的500倍。
组织细胞膜经损伤，血清LDH即见增高，因此可以用LDH作为衡量细胞膜通透性的指标。
本实验采用比色测定法：以NAD＋为氢受体，LDH催化乳酸脱氢生成丙酮酸，丙酮酸与2，4一二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，该物质在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度呈正比，据此计算LDH活性单位。
三、材料及试剂1．实验动物体重18－20 g的健康小鼠40只，随机分为5组，每组8只，1组为阴性对照，一组为阳性对照组，另3组为不同剂量染毒组。
2．器材注射器、手术剪、镊子、移液管、吸耳球、试管、试管架、恒温水浴锅等。
3．试剂（1）乳酸钠底物缓冲液（pH 10.0）：取乳酸钠溶液（65％－75％）10mL，加入0．lmol ／L甘氨酸溶液125mL、0.l mo/L氢氧化钠溶液75mL，混合。
0.1mol/L甘氨酸溶液：称取甘氨酸1.501g，氯化钠二1.17 g，用双蒸水溶解并定容到200 mL。
（2）辅酶Ⅰ溶液(11.3mmol/L)：称取氧化型辅酶Ⅰ15mg（如含量为70％，则称取2I．4 mg），溶于2 mL双蒸水中，4℃保存，至少可用2周。
（3）2，4一二硝基苯肼溶液（1mmol/L）：称取2，4一二硝基苯肼200mg，加4 mol ／L盐酸250 mL，加水约600 mL，加热助溶，冷却后加水至1000 mL。
（4）0.4mol／L氢氧化钠溶液100mL。
（5）丙酮酸标准液（1mmol/L）：准确称取AR级丙酮酸钠11mg，以乳酸钠底物缓冲液溶解并定容到100 mL，临用前现配。
（6）受试化合物溶液：由指导教师根据本实验室情况自定。
生态毒理学研究方法及其应用生态毒理学指的是研究生态系统中生物与环境污染物之间相互作用关系的学科，是环境科学领域中的一个重要分支。
为了更好地了解毒物对环境与生物的危害程度以及评估生态系统健康状况，需要采用一系列科学的研究方法。
本文将介绍生态毒理学研究方法及其应用。
一、生态毒理学研究方法1. 毒性试验毒性试验是研究物质对生物的毒性程度的基本方法之一。
常用的毒性试验方法包括急性毒性试验、亚急性毒性试验和慢性毒性试验。
急性毒性试验可以评估在短时间内暴露下物质对生物的毒性；亚急性毒性试验可以评估生物长期暴露在某种物质下的损害程度；慢性毒性试验则可以评估毒物长时间低剂量暴露情况下对生物体造成的潜在风险。
2. 生物标志物生物标志物是使用生物体内的某些物质或生理指标来反映环境污染程度和毒物暴露水平的方法。
常用的生物标志物包括酶活性、代谢产物、DNA损伤指标等。
生物标志物可以作为一种可靠的检测和监测手段，评估生态系统中污染物对生物体的影响。
3. 生态毒理学模型生态毒理学模型是通过对生态系统中污染物在生物体内、水、土壤和大气等不同介质中的迁移、转化和作用进行数学模型化，预测生态系统中污染物的存在和可能发生的效应的方法。
生态毒理学模型广泛应用于污染地区环境风险评估、环境管理和规划及生态安全评估等方面。
二、生态毒理学的应用1. 环境污染评估生态毒理学可以通过评估环境样品中的毒性及生物学影响，了解污染物对环境的影响，为环境保护和生态修复提供科学依据。
生态毒理学方法可以预测环境中有毒或危险物质的成分、来源以及后果，有助于做好环境保护工作。
2. 生态系统管理生态毒理学可以为生态系统管理提供科学依据。
生态毒理学模型可以预测生态系统中物质的迁移，提供生态系统的维护与改善方案。
同时，生物标志物可以监测生态系统中物质的暴露和损伤程度，为环境污染和生态失衡预警提供数据支持。
3. 毒物风险评估生态毒理学方法可以帮助评估毒物对整个生态系统的影响，对于评估毒物安全性、毒性水平及可能的毒害机制有很大帮助。
