2.1微生物的实验室培养001

鉴别培养基：培养基中加入某种试剂或化学 药品，区别出不同类型的微生物。
选择培养基
在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长， 同时抑制或阻止其它种类微生物生长的培养基。 选择培养基 应用 加入青霉素 加入高浓度食盐 不加氮源 分离酵母菌、霉菌等真菌 分离金黄色葡萄球菌 分离固氮菌
Байду номын сангаас
不加含碳有机物的 分离自养型微生物 无碳培养基 加入青霉素等抗生 分离导入了目的基因的受 素 体细胞
灭菌的方法： 1、灼烧灭菌 2、干热灭菌：160-170 ℃ 下加热1-2h。 3、高压蒸汽灭菌：100kPa、 121 ℃下维持15-30min.
请你判断以下材料或用具是否需要消毒或 灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 培养细菌用的培养基与培养皿 灭菌 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 消毒（3） 实验操作者的双手
鉴别培养基
根据微生物的代谢特点在培养基加入某种指示剂 或化学药品配制而成，用以鉴别不同的微生物
只起鉴别作用，并不能抑制其他微生物
液体培养基
固体培养基
培养基一般都含有哪些营养物质，此外 还要满足哪些要求？
不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、 和氮源、 无机盐等营养物质 另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营 养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需 ，而自身不能合成的化合物,如维生素、 某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二 氧化碳、渗透压等的要求。
5.灭菌：培养基、培养皿 H2O 定容至1000ml
6.倒平板：
约50℃
倒平板
灼烧灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基
防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用 来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？
答：用手触摸，刚不烫手。
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
避免操作者自身被微生物感染
消毒与灭菌
消毒：使用较温和的物理或化学方法仅杀死物
体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不 包括芽孢和孢子）。
灭菌：使用强烈的理化因素杀死物体内所有的
微生物，包括芽孢和孢子。
灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普 通也是最重要的技术。
——特殊的休眠构造
有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆 形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对恶劣的环境有 很强的抵抗力。每一细胞仅形成一个芽孢，所以其没有繁 殖功能。
⑵营养全面、浓度适宜、比例恰当
加入缓冲剂 ⑶适宜的pH值：
二.无菌技术：防止外来杂菌的污染
1.消毒与灭菌：
2.无菌范围：实验操作空间消毒 操作者的手、衣着消毒 实验用具灭菌 实验操作过程
酒精灯旁操作 超净工作台
二、无菌操作技术
1. 获得纯净培养物的关键？
防止外来杂菌入侵 2、无菌技术除了用来防止实验室的培养物 被其他外来微生物污染外，还有什么目的 ？
四.大肠杆菌的纯化培养
㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算：培养基用量 依配方计算各成分的用量 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 2.称量： 牛肉膏黏稠，用称量纸称取
牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖 琼脂20.0g
3.溶化：牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解 →取纸 牛肉膏 5g
蛋白胨 10g →补水定容 →蛋白胨、 NaCl→琼脂 4.调pH、分装、封口： Nacl 5g
牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。
1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方
琼脂20.0g 牛肉膏 蛋白胨 5g 10g
Nacl
5g
H2O 定容至1000ml
培养基配制原则
生产 科研
⑴目的明确： 根据微生物的种类、培养目的选择原料 自养型： 不加碳源（CO2碳源） 异养型： 有机碳源
4.为什么不能划破培养基？ 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分 离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩 的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成 一个条状的菌落。
⑵稀释涂布平板法： a.梯度稀释菌液：
1ml
1ml
1ml
1ml
1ml
1ml
101
102
103
104
105
106
菌液
6支试管，分别加入9ml无菌水
六.菌种的保藏
1.临时保藏： 斜面保藏 2.长期保存： 甘油冷冻管藏法 甘油管藏 1ml甘油＋1ml菌液 －20℃ 试管固体斜面培养基上 4℃ 菌种易被污染、变异
知识小结:
【巩固】 下列有关平板划线操作的叙述不正确的 是 ( )
C
•
• • •
A．第一步灼烧接种环是为了避免接种环上 可能存在的微生物污染培养物 B．每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上 次划线结束后，接种环上残留的菌种 C．在第二区域内划线时，接种环上的菌种 直接来源于菌液 D．划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死 接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和 感染操作者
一.培养基： 微生物生存的环境和营养物质 1.基本成分：碳源、氮源、水、无机盐 ⑴碳源 CO2、CO3 、HCO3 无机碳源： 有机碳源： 牛肉膏、蛋白胨等
2-
自养微生物 异养微生物
NH4＋、NO3无机氮源： ⑵氮源 有机氮源： 牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等
注：对于异养微生物，含C、N的化合物既为碳 源，也是氮源。
二.大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ㈡纯化大肠杆菌： 1.接种： ⑴平板划线法： 接种环
菌种
防止划破培养基
（重复实验） 划3个平板 1个不划线 （空白对照）
问题1：第一步灼烧接种环的目的：
避免接种环上可能存在的微生物污染培养基
问题2：每次划线前灼烧接种环的目的 ： 杀死上次划线结束后残留的菌种
2.培养基的类型和用途 按 物 理 性 质 液体培养基：不加凝固剂；用于工业生产
半固体培养基：加少量琼脂；可用于保藏菌种
固体培养基:加琼脂；用于分离、鉴定、计数
按 化 学 成 分
天然培养基：成分不明确；用于工业生产。 合成培养基：成分明确；分类鉴定。
按 目 的 用 途 分
选择培养基：根据某一种或一类微生物的特 殊营养要求或对一些物理、化学抗性设计培 养基。如用青霉素选出酵母菌等。
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
答：皿盖凝结水珠，防止水珠落入培养基，造成污染； 平板倒置，防止培养基表面的水分挥发。
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在 皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微 生物吗？为什么？ 答：最好不用，空气中的微生物可能在皿盖与皿 底之间的培养基上滋生。
专题2 微生物的培养与应用
课题1 微生物的实验室培养
主要内容
一、培养基作用、种类
二、无菌技术
三、制备牛肉膏蛋白胨培养基 四、纯化大肠杆菌
病毒:
无细胞结构
微生物的类群 原核生物: 细菌、蓝藻 原核细胞 如草履虫、单细胞藻类等 原生生物： 真核细胞 真菌: 如酵母菌
？
一、培养基
营养物质 的不同需求，配置 1. 概念：人们按照微生物对_________ 生长繁殖 的营养基质。 出供其____________
微生物的培养与观察
大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征
在普通琼脂培养基上： 圆形，边缘整齐，表 面光滑，半透明。 典型的大肠杆菌在伊红美蓝琼脂平板上的特征 为:深紫黑色、光滑、湿润、带有金属光泽的 圆形菌落。
五、结果分析与评价
1.未接种的培养基表面是否有菌落生长？如 果有菌落生长，说明了什么？ 若有，说明培养基灭菌不彻底
细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有 繁殖或休眠作用的生殖细胞。能直接发育成新个体。
消毒的方法：
1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮
15min
3、化学药剂消毒法:用75%酒精进行皮肤消毒;氯气
消毒水源
4、紫外线 适用对象：操作空间、液体、双手等
问题3：划线结束后灼烧接种环的目的 ：
及时杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和操 作者。
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行 划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是 从上一次划线的末端开始划线？ 答：线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次 从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划 线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌 繁殖而来的菌落。
⑵稀释涂布平板法： a.梯度稀释菌液： 稀 释 b.涂布平板： 103 滴 倍
灼
稀 释 104 倍
试
不超过0.1ml 各梯度分别涂布3个平板 1个不涂布作空白对照
稀 释 105 倍 涂
二.大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
㈡纯化大肠杆菌：
1.接种： ⑴平板划线法： ⑵稀释涂布平板法： 2.培养： 将接种后的培养基和一个未接种的培养基 放入37℃恒温箱中培养12h～24h后， 观察并记录
2.在接种大肠杆菌的培养基上，能否观察到独 立的菌落？它们的大小、形状、颜色相似吗？ 相似的菌落，接种符合要求
3.培养12h和24h后，观察到的实验结果相同吗？ 如果不同，请分析产生差异的原因？ 大小会有明显不同 4.如果在培养基上观察到不同形态的菌落，请 分析其可能的原因。
无菌操作未达到要求：培养基灭菌不 彻底；可能是接种时或培养时污染
灭菌 （1 ）
练习：思考并讨论下面的仪器分别用什么样 的消毒和灭菌方法？
接种环
牛 奶
①灼烧灭菌
②巴氏消毒
双 手 培养基
培养皿 空 气
③化学消毒
④干热灭菌
⑤紫外线消毒