人血浆中非布司他的测定方法-LC-MS解读

cokinetics , Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang 110016, China) ABSTRACT: OBJECTIVE To develop a LC MS/ MS method for the quantification of gliclazide in human plasma and to evaluate the phar macokinetics of gliclazide in healthy volunteers METHODS After a simple liquid liquid extraction, gliclazide and the internal standard glibenclamide were separated on a Zorbax SB C8 column and detected by tandem mass spectrometry The mobile phase consisted of acetonitrile water formic acid ( 90 10 0 5) An atmospher ic pressure chemical ionization interface was applied and operated in the positive ion mode Se lected reaction monitoring ( SR M ) mode was used with the trasitions of m/ z 324~ m/ z 127 for gliclazide and m/ z 494~ m/ z 369 for the in ternal standard, respectively RESULTS The linear calibration curve was obtained in the concentration range of 1 0~ 4 000 g L- 1 T he limit of quantification was 1 0 g Lin ! 5 1%

一种灵敏的方法定量测定人血浆中非布司他的浓度及其药动学应用摘要：一种改进的、简单的高度敏感的LC-MS/MS测定非布司他的方法已经建立，根据监管指南在100毫升人血浆中使用febuxostat-d7作为内标（IS）验证。

用乙醚液液萃取从人的血浆中提取分析物和内标。

色谱分离是在用混合乙腈和5Mm/L的甲酸铵(60:40, v/v)作为流动相，流速为0.5mL/min的C18烷硅胶柱上实现的。

总流动时间为5.0分钟，非布司他和IS 的洗脱分别发生在1.0和1.5分钟。

线性响应函数的浓度范围在1-6000ng/mL(r>0.99)。

非布司他和内标的离子检测前体分别为m/z 317.1→261.1 和324.2→262.1。

日内和日间精密度(%RSD)分别在1.29–9.19%和2.85–7.69%范围内。

上述方法已成功与用于人的药代动力学研究。

关键词：非布司他；人血浆；LC-MS/MS检测方法；药代动力学前言非布司他（图一），化学名为2 -[ (3 - 氰基- 4 - 异丁氧基) 苯基]- 4 - 甲基噻唑- 5 - 甲酸，是一种新型的选择性黄嘌呤氧化酶抑制剂，被用作高尿酸血症和痛风的治疗（恩斯特和福瑞威尔，2009）。

根据血清和尿液中黄嘌呤氧化酶浓度的增加和尿酸水平的下降可证明其对黄嘌呤氧化酶有抑制作用，并且在嘌呤总量上缺乏显著性差异。

，2008 年在欧盟获得批准上市，美国FDA 也于2009 年批准其上市。

近日，有一个LC-MS和一些LC-MS/MS方法检测生物样品中非布司他的报道。

最近Lukram et al（2012）用于非布司他人血浆样品检测的UPLC-MS/MS灵敏度不足以用于生物等效性的研究，因为这种方法的定量下线偏高(LLOQ; 75 ng/mL)血浆体积也偏大（500μL）。

Ding et al（2012）报道了一种小鼠血浆的LC-MS检测方法，用咪达挫仑做内标定量下线可以达到10 ng/mL。

制剂的药代动力 学 时 应 同 时 测 定 血 浆 中 的 福 辛 普 利和福辛普利 拉 来 对 其 进 行 评 价。 由 于 福 辛 普 利
［ 4］ 的口 服 剂 量 较 小 （通 常 ,0 1 -0 23） 且代谢很快 ，
福辛普利拉对照品适量， 甲醇溶解并定容分别制得 质量浓度 为 40 ! 用甲醇稀释制成 3<2= 的 贮 备 液； 系列质量浓度的 福 辛 普 利 与 福 辛 普 利 拉 对 照 品 溶 液； 精密称取扎 来 普 隆 对 照 品 适 量， 用甲醇溶解并 定容， 制得质量浓度为 40 ! 精密移 3<2= 的 贮 备 液， 取 , ; 0 2= 置于 ,00 2= 量 瓶 中， 用 甲 醇 稀 释 成 400 %3<2= 的内标溶液。 ,;/;血浆样品处理 取血浆 ,;0 2=， 置 ,0 2= 离 心管中， 加 入 内 标 溶 液 -0 ! 加 入 ,;0 2"(<= 盐 酸 =， 涡旋 ,0 #， 加入乙醚) 二氯甲烷 （. U ,） 提取溶剂 -00 ! =， 涡旋 . 2$%， 取有机层 4 2=， / 000 ’<2$% 离心 ,0 2$%， / 2=， /0 M 水 浴 中 氮 气 流 下 吹 干。 残 渣 用 流 动 相 取 -0 ! ,00 ! = 溶解， = 进 =>)?@<?@ 系统分析。 ,;4 临床实验方案 经 生 化 检 验 证 实 肝、 肾 -0 名男性健康受试者， 功能 正 常， 心 电 图 检 查 正 常， 精 神 状 态 良 好。受 试 前对试验目的与要求完全了解， 并由志愿者签署知 情同意书， 并经临床试验机构伦理委员会审核通 过。受试者试 验 前 - 周 及 实 验 期 间 未 服 用 其 他 药 物及烟和酒， 用药前 ,- F 及 用 药 后 . F 内 禁 食， 实 验期间统一 进 餐。 健 康 受 试 者 单 次 口 服 -0 23 福 辛普 利 片， 受 试 者 于 服 药 前 及 服 药 后 0， , ; 0， - ; 0， . ; 0， / ; 0， 4 ; 0， 5 ; 0， 7 ; 0， ,0 ， ,- ， ,4 ， -/ ， .5 F 取 血 / ; 0 离 心 分 离 出 血 浆， 于 V -0 M 2= 置肝素化 试 管 中， 保存待测。 ,;5 数据分析 消除速率常数 %； 消除 # 2*W 及 $ 2*W 均 为 实 测 值； 半衰期 （ $ ,< - ） 、 曲线下面积 （ &’( ） 等参数的计算采 用 ONSS - ; - 程序，# 2*W ， $ 2*W ， &’( 0).5 ， &’( 0) X 的方差 分析和 # 2*W， &’( 0).5 ， （显 著 性 水 &’( 0) X 单 双 侧 检 验 平 "Y 0 ; 04）均由 ONSS - ; - 程序完成。 " -;, 结 果 方法的专属性 在 “, ; .” 色 谱 ) 质 谱 条 件 下， 福 辛 普 利、 福辛普 利拉和扎来普隆峰形良好， 保留时间分别约为 7 ; 6

药学实践杂志
３ ５ ４
２ ０ １ ４年 ９月 ２ ５ 日第 ３ ２卷 第 ５期
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｐｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ Ｐ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｃ ｅ ， Ｖｏ １ ． ３ ２，Ｎｏ ． ５， Ｓ ｅ ｐ ｔ ｅ ｍｂ ｅ ｒ ２ ５， ２ ０１ ４
Ｊ Ｉ ＡＮ Ｇ Ｎ ａ ｎ， ＹＡＮＧ Ｙｏ ｎ ｇ ｇ ｅ ， Ｓ ＯＮＧ Ｌ ｉ ｘ ｕ ｅ ， Ｘ Ｕ Ｘｕ ｅ ｔ ｉ ｎ ｇ（ Ｄｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｙ ， Ｇｅ ｎ ｅ ｒ ａ ｌ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ， Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ Ｍｉ ｌ ｉ ｔ ａ ｒ ｙ Ｒ ｅ ｇ ｉ ｏ ｎ ，Ｂｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ １ ０ ０ ７ ０ ０， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ）
・
论著 ・
Ｌ Ｃ— ＭＳ — Ｍ Ｓ法 测 定 人 血 浆 中 非 布 司 他 浓 度
姜 楠 ， 杨永 革 ， 宋丽 雪 ， 许 雪延 （ 北京军区总医院药Байду номын сангаас科， 北京 １ ０ ０ ７ ０ ０ ）
［ 摘要］ 目的 建 立 液 质 联用 色谱 法 （ Ｌ Ｃ — ＭＳ ． Ｍ Ｓ ） 测 定 人 血 浆 中非 布 司 他 （ ｆ ｅ ｂ ｕ ｘ ｏ ｓ ｔ ａ ｔ ｅ） 浓 度 。 方 法 空 白血 浆 加 非 布
司他 ， 用乙腈作为沉淀剂 ， 取上清液用于 Ｌ Ｃ — Ｍ Ｓ — ＭＳ分 析 。 分 析 柱 为 Ｔ ｈ ｅ ｒ ｍ ｏ Ｂ ｉ ｏ ｂ ａ ｓ ｉ ｃ － ８柱 （ ５ ｍ， ５ ０ ｍ ｍ× ２ ． １ ｍ ｍ） ， 流 动 相 为 乙腈 一 １ ０ ｍ ｍｏ ｌ ／ Ｌ乙 酸 铵 （ 含０ ． ０ ５ ％甲酸） （ ７ ０： ３ ０ ） ， 流速为 ０ ． ２ ｍｌ ／ ｍ ｉ ｎ ； 质谱条件 ： 电 喷雾 离 子 化 电离 源 Ｅ Ｓ Ｉ 负离子检测 ， 喷 雾 电压（ ｓ Ｐ ） ３ ５ ０ ０ ｋ Ｖ， 鞘气 （ Ｓ Ｇ Ｐ ） 流速 １ ０ Ａ ｒ ｂ ， 辅 助气 （ Ａ Ｇ Ｐ ） 流速 ４ ５ Ａ ｒ ｂ ， 毛细管温度 （ Ｔ Ｅ Ｍ） ２ ７ ０ ℃； 非 布 司 他 和 内标 苯 扎 贝 特 的 碰撞能量分别为 １ ０ ｅ Ｖ、 １ ８ ｅ Ｖ； 选择反应 监测 （ Ｓ Ｒ Ｍ） 分 别 测 定 非 布 司 他 和 内标 苯 扎 贝 特 负 离 子 ｍ／ ｚ ３ １ ５ —２ ７ １和 ｍ ／ ｚ ３ ６ ０ — ２ ７ ４ 。结果 非 布 司他 在 １ ０～８ ０ ０ ０ ｇ ／ Ｌ检 测 浓 度 范 围 内呈 良好 线 性 关 系 （ ｒ ＞ ０ ． ９ ９ ） ， 最低定量限（ Ｌ Ｌ Ｏ Ｑ） 为１ ０ ｐ ￣ ｇ ／ Ｌ ， 绝 对 回

摘要：建立了快速、灵敏、可靠的液相色谱串联质谱（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）方法，用于同时测定治 疗稳定期精神分裂患者血浆中 ４种非典型抗精神病药物利培酮、氯氮平、奥氮平、阿立哌 唑和 ２种的代谢物 ９－羟基利培酮、脱氢阿立哌唑的浓度．血浆样品通过液 －液萃取进行 纯化并采用 ＡｇｉｌｅｎｔＸＤＢ－Ｃ１８柱（１５０×２１ｍｍ，３５μｍ）进行色谱分离．６种分析物及其 同位素内标均用正离子模式下的 ＥＳＩ源电离，并通过选择性反应监测进行测定．６种分析 物线性关系良好（ｒ＞０９９５８），批内批间精密度的变异系数小于 １３８％，准确度的偏差在 ±１１７％以内．该方法已成功应用于抗精神分裂药物单药或多药治疗的稳定期精神分裂 患者的治疗药物浓度监测． 关键词：非典型抗精神分裂药；单药治疗；多药治疗；ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ；治疗药物浓度监测 中图分类号：Ｒ９１７ 文献标志码：Ａ
Ｐ－糖蛋白的底物［６－８］，可能发生竞争性抑制引起临 床相关的 ＤＤＩ．
目前，有许多研究报道了同时测定血浆中抗精 神分裂药 物 浓 度 的 液 相 色 谱 串 联 质 谱 （ＬＣ－ＭＳ／ ＭＳ）方 法［９－１２］，这 些 方 法 主 要 应 用 于 常 规 分 析 和 ＡＭＰ的治疗药物浓度监测 （ＴＤＭ）研究，很少涉及 ＡＰＰ．本研究的目的是建立一种 ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ方法， 用于同时测定接受 ＡＭＰ或 ＡＰＰ的治疗稳定期精神 分裂患者血浆中的利培酮、氯氮平、奥氮平、阿立哌 唑和活性代谢物 ９－羟基利培酮 （９ｈｙｄｒｏｘｙｒｉｓｐｅｒｉ ｄｏｎｅ）、脱氢阿立哌唑（ｄｅｈｙｄｒｏａｒｉｐｉｐｒａｚｏｌｅ）的稳态浓 度（ｃｐｓ），并从药代动力学的角度探讨 ＡＰＰ潜在的 ＤＤＩ．
利培酮（９９９％）和 氯 氮 平 （＞９８％）购 自 中 国 药品生物制品检定所（北京）；阿立哌唑（９９８％）从 永诺制药公司获得（宜昌）；脱氢阿立哌唑（≥９８％） 从呈贡生物制品公司获得（昆明）；脱氢阿立哌唑 － ｄ８（９８８％）购 自 多 伦 多 研 究 化 学 品 公 司 （多 伦 多， 加拿大）；９－羟 基 利 培 酮 （≥ ９８％）、奥 氮 平 （≥ ９８％）、利培酮 －ｄ４（９８６％）、９－羟基利培酮 －ｄ４ （＞９９９％）和奥氮平 －ｄ８（９９８％）均 购 自 Ｓｉｇｍａ

普伐他汀 ( pravastatin) 为 3- 羟基 3- 甲基戊二 酰辅酶 A 还原酶 ( HMG - CoA 还原酶 ) 的竞争性抑 制剂, 可以抑制胆固醇的生物合成。适合于能降低 体内总的尤其适用于饮食限制仍不能控制的原发性 高胆固醇血症 ( ∃ a和 ∃ b型 ) [ 1 ] 。
普伐他汀 ( pravastatin) 通常为钠盐形式, 是一种 吸湿的结晶性粉末。目前测定生物样品中普伐他汀 含 量 的 方 法 有 气 质 联 用 [ 2] 、放 射 化 学 法 [ 3 ] 、 H PLC[ 4, 5 ] 和 LC - M S /M S[ 1, 6] , 分别测定尿、胆汁、肌 肉和人血浆中的普伐他汀的含量。本研究提供了一 种经济、简单、高效和 灵敏的方法对 普伐他汀进行
子为 m /z 448∀ 327 7(普伐他汀 ) 和 m /z 483 2∀ 258 6 (罗 素 他汀 )。结 果: 本 方法 线性 范 围为 0 957 ~ 510 ng mL- 1 ( r =
0 9991), 最小检出浓度为 0 957 ng mL- 1, 绝对回收率均在 75% 以上, 相对回收率在 80% ~ 120% 之间, 日内、日间 RSD 均小
* 通讯作者 % Te:l ( 0731) 4805379; E - ma i:l hhzhou2003@ 163 com
药 物分析杂志 Ch in J Pharm Ana l 2009, 29( 1)
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基醚、甲醇、甲酸 购自广 州迪 马公司, 其 余试 剂均 为分析纯。
2% 色谱质谱条件 色谱柱为 Inertsil ODS- 3柱 ( 2 1 mm 50 mm,
m in, 转移上清至另一干净玻璃管, 30 ! 水浴氮吹仪 中挥干, 以 150 L 流动相溶解, 进样 10 L。 5 专属性考察

非布司他原料2种含量测定方法的比较研究沈卫阳;郭静沫;施睿;沈圃毅;金祥飞【摘要】目的：建立并比较滴定法和高效液相色谱法测定原料中非布司他含量。

方法化学分析法，用乙醇作为溶剂，氢氧化钠溶液为标准溶液，酚酞为指示剂进行滴定。

高效液相色谱法，采用Inertsil ODS‐SP （250 mm ×4．6 mm ，5μm）色谱柱；流动相为1 mL・L －1磷酸溶液（三乙胺调pH值至2．4）‐乙腈（45∶55）；流速为1．5 mL・min－1；柱温为30℃；检测波长为315 nm。

结果2种方法均符合方法学验证要求，测定同一样品，测量值差异无统计学意义（P＜0．05）。

结论2种分析方法均能快速、有效地测定原料中非布司他的含量，均可作为非布司他原料质量控制的分析方法。

%Objective To establish and compare the titration method and high performance liquid chromatography (HPLC) method for determining the content of febuxostat .Methods For chemical analysis ,ethanol was used as the solvent ,sodium hydroxide as the volumetric solution and phenolphthalein as an indicator for titration .The HPLC was carried out on an Inertsil ODS‐SP (250 mm × 4 .6 mm ,5 μm) column ;the mobile phase con sisted of 1 mL ・L -1 phosphoric acid solution (adjust pH value to 2 .4 by tri‐ethylamine)‐acetonitrile (45∶55) with a flow rate of 1 .5 mL ・ min-1 ;the column temperature was set at 30 ℃ ;the detection wavelength was 315nm .Results The 2 methods both met the requirements of methodology validation ,and there was no signifi‐cant difference between the results obtained from the titration method and HPLC method(P<0 .05) .Conclusion The two meth‐ods can detect febuxostat content effectively and suitable for the quality control of febuxostat .【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2015(000)002【总页数】4页(P134-137)【关键词】非布司他;含量测定;容量分析;高效液相色谱法【作者】沈卫阳;郭静沫;施睿;沈圃毅;金祥飞【作者单位】中国药科大学理学院，南京 210009; 药物质量与安全预警教育部重点实验室，南京 210009;中国药科大学理学院，南京 210009; 药物质量与安全预警教育部重点实验室，南京 210009;南京师范大学附属中学，南京 210003;南京师范大学附属中学，南京 210003;中国药科大学理学院，南京 210009; 药物质量与安全预警教育部重点实验室，南京 210009【正文语种】中文【中图分类】R927.2非布司他是一种非嘌呤、非竞争性的黄嘌呤氧化酶（XO）抑制剂［1］，用于治疗痛风，2009年2月获美国食品药品管理局（FDA）批准，同年3月在美国上市。

LC-MS-MS法同时测定人血浆中阿戈美拉汀及其2种代谢产物的浓度曹媛【摘要】Objective To establish a method for the simultaneous determination of agomelatine,7-desmethyl-agomelatine and 3-hydroxy-agomelatine in human plasma.Methods The LC-MS/MS method was used with phenacetin as internal standard,and the determination was performed on Phenomenex ODS-3 column with 0.2% ammonium formate+100% water-methanol (30∶70) as the mobile phase.Agomelatine(244.1→185.1),7-desmethyl-agomelatine (260.1→201.1) and 3-hydroxy-agomelatine (180.1→110.1) were detected by electrospray ionization (ESI) with positive ion in MRM mode quantitatively.Results The linear range was good within 0.045 7~100 ng/mL of agomelatine,0.137 2~300 ng/mL of 7-desmethyl-agomelatine and 0.457 2~1 000 ng/mL of 3-hydroxy-agomelatine,respectively,and the lowest limits of quantitation were 0.045 7,0.137 2 and 0.457 2 ng/mL,respectively.The intra-day and inter-day precision and accuracy were all in line with the requirements of biological sample analysis.The plasma samples were stable after 3 freeze-thaw cycles and being stored for 4 h at room temperature and 90 d at-80 ℃.Conclusion The method is rapid,sensitive and repeatable,which can be used for the determination of plasma concentration and pharmacokinetic study.%目的建立同时测定人血浆中阿戈美拉汀及其代谢产物7-去甲阿戈美拉汀和3-羟基-阿戈美拉汀浓度的方法.方法采用LC-MS/MS法(液相色谱串联质谱)进行检测,以非那西汀为内标、Phenomenex ODS-3为色谱柱,A(0.2%甲酸铵+100%水)-B(甲醇)=30∶70为流动相进行色谱分离.采用ESI(电喷雾电离源)和MRM(多反应监测)的方式进行正电荷检测,用作定量分析的阿戈美拉汀、7-去甲-阿戈美拉汀、3-羟基-阿戈美拉汀和非那西汀的离子反应对m/z分别为244.1→185.1、230.1→171.1、260.1→201.1、180.1→110.1.结果阿戈美拉汀、7-去甲-阿戈美拉汀、3-羟基-阿戈美拉汀分别在0.045 7~100 ng/mL、0.137 2~300 ng/mL、0.457 2~1 000 ng/mL范围内线性关系良好;最低检测限分别为0.045 7、0.137 2、0.457 2 ng/mL;所有待测样本的日内及日间精密度和准确度均符合相关生物样品分析的要求,且RSD<10%.在稳定性试验中,血浆样品在室温放置4 h、在4 ℃放置24 h、经历3 次冷冻-解冻循环及在-80 ℃中放置3个月等条件下均可保持稳定.结论该方法具有操作简便、检测快速及灵敏性好等特点,能够用于临床相关药动学研究.【期刊名称】《实用药物与临床》【年(卷),期】2017(000)003【总页数】5页(P322-326)【关键词】阿戈美拉汀;7-去甲阿戈美拉汀;3-羟基-阿戈美拉汀;液相色谱串联质谱法;血药浓度【作者】曹媛【作者单位】宝鸡市人民医院药剂科,陕西宝鸡 721000【正文语种】中文阿戈美拉汀是第一个褪黑素受体激动剂类抗抑郁药物[1-2]，主要用于抗焦虑、抗抑郁、调节生物钟及调整睡眠节律等[3]，对于重度抑郁症患者，阿戈美拉汀的抗抑郁效果明显优于经典抗抑郁药物氟西汀[4-5]，由于该药物的不良反应较少，因此可能成为一种应用广泛的抗抑郁药物。

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Chin JMAP, 2008 October, Vol. 25 No. 5 中国现代应用药学杂志 2008年 10月第 25卷第 5期
王试剂厂 ) ; 甲酸 、乙醚和碳酸钠为分析纯 (沈阳化学试剂 厂 ) ;空白血浆由沈阳中心血站提供 。 2 方法 2. 1 试验条件 2. 1. 1 色谱条件 色谱柱为 D iamonsil C18柱 (150 mm ×4. 6 mm , 5μm ) ;流动相为甲醇 2水 2甲酸 (75∶25∶0. 5) ,流速为 0. 5 mL ·m in - 1 ,柱温 :室温 。 2. 1. 2 质谱条件 ESI离子源 ;源喷雾电压为 4. 0 kV;加热 毛细管温度为 300 ℃;鞘气 (N2 )压力 25 A rb;辅助气 (N2 )压 力 5 A rb;碰撞气 (A r)压力 1. 2 mTorr;罗红霉素和克拉霉素 的碰撞诱导解离 (C ID )电压都为 25 eV;正离子方式检测 ;扫 描方式为选择反应监测 ( SRM ) ,用于定量分析的离子反应分 别为 m / z 837. 5 (m / z 679. 3 罗 红 霉 素 ) 和 m / z 748. 5 (m / z 158. 1 (克拉霉素 ) ;扫描时间为 0. 3 s。 2. 2 样品的处理方法 2. 2. 1 样品的预处理 用肝素抗凝的负压真空离心管取全 血 2 mL ,上下震荡 3次 ,以 5 000 r·m in - 1离心 5 m in,分离上 层血浆 ,立即置于冰箱 , - 20 ℃贮存 。 2. 2. 2 血浆样品的处理 向 50μL血浆中分别加入 50μL内 标溶液 (克拉霉素 10μg·mL - 1 )和 0. 05 mol·L - 1 Na2 CO3 30 μL,混匀 ;加 1 mL提取溶剂乙醚 ,涡流混合 1 m in,往复振荡 10 m in (180次 ·m in - 1 ) ,离心 5 m in ( 4 000 r·m in- 1 ) ,分取上层 有机相于另一试管中 ,于 40 ℃空气流下吹干 ,残留物加入 1 mL 流动相溶解 ,涡流混合 ,取 20μL进行 LC /MS/MS分析 。

人血浆中介芬胺血药浓度LC—MS／MS测定方法的建立目的：建立人血浆中介芬胺血药浓度LC-MS/MS测定方法，为藜芦临床应用时血药浓度测定提供可靠检测方法。

方法：采用乙酸乙酯提取法处理血浆样品，以非那西汀为内标，流动相为乙腈-10 mmol/L醋酸铵（氨水调pH至8.8），采用电喷雾离子化（ESI）源，正离子模式扫描，多反应监测（MRM）定量，介芬胺定量离子对m/z：426.2→114.1，非那西汀定量离子对m/z：180.2→110.0。

结果：介芬胺在2.70～86.7 ng/mL范围内线性良好，连续3批标准曲线相关系数r均不小于0.99（权重1/X2），定量下限为2.70 ng/mL；日内、日间精密度（RSD%）≤11.65%，准确度介于91.84%～99.26%间；基质效应不影响测定；血浆样品于室温放置6 h、-80 ℃放置173 d、期间冻融3次均稳定。

结论：所建方法专属性强、灵敏度高，可用于藜芦临床血药浓度测定。

标签：LC-MS/MS法；介芬胺；人血浆；血药浓度藜芦为百合科藜芦属植物，以根、根茎入药，用于治疗高血压、血吸虫、脑出血、中风痰壅、喉痹不通、癫痫、疟疾、骨折、跌打损伤、疥癣和恶疮等疾病，民间也用于癌症的治疗[1-5]。

藜芦的主要活性成分为甾体类生物碱，其中介芬胺含量较高，达生物总碱的21.28%[6-12]。

介芬胺具有抗肿瘤、抑制细菌生长的作用，其可以与Hh通路上游激活因子Smo特异性结合而抑制通路信号的传递，进而发挥抑制肿瘤细胞的增值效应；细胞实验也证实了介芬胺对胰腺癌细胞ASPC-1、PANC-1有明显的抑制作用[13-20]。

同时，介芬胺也为毒性成分，且毒性较强[1，20]，主要表现为致畸、生殖毒性等[20-22]。

介芬胺既是藜芦药材中的活性成分，也是毒性成分。

在藜芦临床应用时，应进行药物浓度监测，防止过高的药物浓度导致的毒性反应。

目前，国内外文献中尚无关于人血浆中介芬胺血药浓度测定方法的报道。

UPLC—MS／MS法同时测定人血浆中卡马西平、文拉法辛、罗格列酮和硝苯地平的浓度目的：建立同时测定人血浆中卡马西平、文拉法辛、罗格列酮和硝苯地平浓度的方法。

方法：血浆样品经甲醇（含0.1%甲酸）沉淀蛋白后，以盐酸吡格列酮为内标，采用超高效液相色谱-串联质谱法测定。

色谱柱为Waters ACQUITY UPLC HSS C18，流动相为含0.01%甲酸的水溶液-含0.01%甲酸的甲醇溶液（梯度洗脱），流速为0.3 mL/min，柱温为50 ℃，进样量为5 μL；采用电喷雾离子源，以多反应监测模式进行正离子扫描，用于定量分析的离子对分别为m/z 237.00→194.05（卡马西平）、m/z 278.20→58.10（文拉法辛）、m/z 358.08→135.04（罗格列酮）、m/z 347.15→315.17（硝苯地平）、m/z 357.09→134.06（内标）。

结果：卡马西平、盐酸文拉法辛、盐酸罗格列酮、硝苯地平血药浓度的线性范围分别为2.00～2 000.00、2.12～2 120.00、2.00～2 000.00、2.04～1 020.00 ng/mL（r 分别为0.995 9、0.990 5、0.991 5、0.991 0，n=5），最低检测限分别为0.200、0.106、0.100、1.020 ng/mL；日内、日间RSD均小于15%，相对误差的绝对值小于15%；提取回收率为65.66%～96.36%（RSD<15%，n=5），基质效应为80.99%～114.33%。

采用该法测得2例癫痫患者体内卡马西平的血药浓度分别为（1 500.41±169.11）、（1 159.01±59.24）ng/mL（RSD分别为11.27%、5.60%，n=3），2例高血压患者体内硝苯地平的血药浓度分别为（14.68±1.92）、（21.18±3.59）ng/mL（RSD分别为16.98%、13.10%，n=3）。

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2 2. 1 方法 色谱和质谱条件 色谱条件： 色 谱 柱 为 Phenomenex C18 （ 150 mm ×
辽宁中医杂志 2015 年第 42 卷第 11 期 C 作权重回归计算， 得回归方程。 样品用同样的方法 分析后， 代人标准曲线， 计算得到待测血浆中苦参碱的 浓度。标准曲线： y = bC + a ， 其中： C 为溶液中标准物 质的浓度（ μg / ml） ； y = As / Ai ； As 为待测样品的面积 响应值； Ai 为内标物质的面积响应值。 b 为标准曲线 的斜率； a 为标准曲线的截距。 3 结果 3. 1 测量不确定度的来源分析 生物样本中药物测定步骤包括： （ 1 ） 标准血浆的 制备： 这一过程涉及工作液的制备 、 加入空白血浆和内 标， 其中工作液的制备受储备液配制 （ 影响因素包括 对照品纯度、 量瓶允差和称量 ） 和逐级稀释过程 （ 影响 因素包括移液器允差 ） 的影响， 加入空白血浆和内标 受移液器允差的影响 ； （ 2 ） 样品的提取： 涉及回收率问 题； （ 3 ） 仪器测定； （ 4 ） 标准曲线的拟合； （ 5 ） 温度等。 因 这些步骤中的每个因素都会对测定结果产生影响 ， 此都是不确定度的来源 。 3. 2 3. 2. 1 各分量不确定度的分析和评定 A 类不确定度评定， ur （ 1）
Uncertainty Evaluation for Matrine Determination in Human Plasma by LC － MS / MS HE Min， GUO Lin， WANG Mengmeng， QIU Furong， GAO Chenglu， JIANG Jian （ Department of Clinical Pharmacology， Shuguang Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine， Shanghai 201203 ， China） Abstract： Objective： To evaluate the uncertainty of matrine determination in human plasma by LC － MS / MS． Methods： The uncertainty caused by various factors in the whole process of determination， including repeatability， weighing， solution preparation， protein precipitation process， the apparatus and calibration fitting， was estimated． The expanded uncertainty was obtained by calculating each component of uncertainty and combined uncertainty． Ｒesults： The expanded uncertainty for 3． 0 ng·mL － 1 and 30． 0 ng ·mL － 1 of matrine was （ 2． 938 ± 1． 091 ） ng·mL － 1 ， （ 31． 18 ± 2． 712 ） ng·mL － 1 （ P = 95% ， k = 2 ） ． Conclusion： The uncertainty of this method was mainly caused by calibration curve （ especially low level of sample） ， extraction recovery and plasma preparation， sample pretreatment and LC － MS / MS error． Key words： matrine； plasma concentration； uncertainty； LC － MS / MS； plasma pharmaceutical analysis 不确定度用于表征合理赋予被测量之值的分散 ［1 － 4 ］ 。 在临床药动 性， 它是测量结果含有的一个参数 学和生物等效性研究中需要进行大量的生物样品检测 工作， 建立和实施检测的不确定度评定方法 ， 既能提高 检测质量和优化实验方法 ， 又有助于实现检测数据国 。 际互认所 苦参碱是从豆科槐属植物苦参或豆科植物 山豆根中分离出来的生物碱 ， 具有抗病毒、 抗肝损伤、 抗肝纤维化、 抗肿瘤、 免疫调节、 抗炎、 利胆等多种药理 作用 ， 是治疗慢性乙型肝炎的临床常用药。 研究 团队建立了 LC － MS / MS 法测定血浆中苦参碱浓度的

药物研究 LC/M S/MS法测定人血浆中阿莫西林克拉维酸浓度及其药物代谢动力学及人体生物等效性研究中国医科大学附属第一医院(110001) 高 瞰 邢俊家阿莫西林(amox icillin)为半合成广谱青霉素类抗菌药,具有杀菌活性强、生物利用度高、组织分布好等优点[1]。

克拉维酸(clav ulanic acid)是竞争性广谱 -内酰胺酶的抑制剂,由阿莫西林和 -内酰胺酶抑制剂克拉维酸钾组成的复方制剂,在临床上的应用日趋普及。

克拉维酸可以增强阿莫西林对产 -内酰胺酶菌种的抗菌活性,且对多数产 -内酰胺酶的细菌也有明显的抗菌活性,临床应用十分广泛[2]。

本研究建立了快速、灵敏、适用于测定高通量样品的液相色谱质谱联用(L C/M S/M S)分析方法,用于同时测定健康受试者血浆中阿莫西林和克拉维酸的浓度,评价受试制剂和参比制剂的人体生物等效性,希望能为临床安全合理用药提供科学依据。

1 仪器与试剂1.1 仪器:Q-T R A P型三重四极杆串联质谱仪(美国Applied Biosystem公司);配有ESI电源以及A na lyst数据处理软件A gilent1100高效液相色谱系统(美国A g ilent公司),包括二元输液泵、自动进样器、切换阀。

1.2 药品及试剂:阿莫西林对照品(纯度为86.2%),克拉维酸对照品(纯度为95.0%),内标5-氟尿嘧啶对照品(纯度>99%)均购于中国药品生物制品检定所;受试制剂:阿莫西林/克拉维酸钾(4 1)颗粒剂(含阿莫西林250mg,克拉维酸钾62.5mg,石药集团中诺药业有限公司);参比制剂:阿莫西林/克拉维酸钾(4 1)颗粒剂(含阿莫西林250 mg,克拉维酸钾62.5mg,安徽省皖北药业股份有限公司);乙腈为色谱纯,其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果2.1 色谱条件:色谱柱:A g ilent T C C18柱(5 m粒径,150 mm 4.6mm I.D.),美国A gilent公司;流动相:乙腈-0 2 mmol/L乙酸铵(10 90,v/v);流速:1 0mL/min(50%分流);柱温:35 ;进样量:20 L。

&58&药物分析杂志Ch i n J Phar m Ana l 2009, 29(1
LC-M S /M S方法检测人血浆中普伐他汀的浓度
张敏,谭志荣,陈豪,陈英,郭栋,周宏灏
(中南大学临床药理研究所,长沙410078
摘要
目的:建立液质联用法测定人血浆中普伐他汀的浓度。方法:空白血浆加普伐他汀和内标,液液萃取后采用LC-M S /
-1
-1
a mm o
n i u m for m ate w ater so l u ti o n(i n clude 0 1%for m ic acid (60 40, v /v at a flo w rate o f 0 2mL m i n , the co lu m n
+
te mperature w as set at 40! . ESI w as perfor m ed i n t h e MR M m ode using target i o ns at m /z448∀327 7(pravas tati n and m /z483 2∀258 6(rosuvastati n . R esults :The peak area of pravastati n in p las m a sho w ed good li n earity i n the range o f0 957-510ng mL
试验制剂普拉固片,中美上海施贵宝制药有限公司,每片含普伐他汀钠10m g ,批号0510056。普伐他汀对照品由浙江海正药业股份有限公司提供,批号0502-1,纯度99 5%。罗素他汀购自S i g m a公司,纯度99 8%。色谱纯乙腈、叔丁基甲
。
普伐他汀(pravastatin通常为钠盐形式,是一种

非布司他原料2种含量测定方法的比较研究沈卫阳;郭静沫;施睿;沈圃毅;金祥飞【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2015(000)002【摘要】目的：建立并比较滴定法和高效液相色谱法测定原料中非布司他含量。

方法化学分析法，用乙醇作为溶剂，氢氧化钠溶液为标准溶液，酚酞为指示剂进行滴定。

高效液相色谱法，采用Inertsil ODS‐SP （250 mm ×4．6 mm ，5μm）色谱柱；流动相为1 mL・L －1磷酸溶液（三乙胺调pH值至2．4）‐乙腈（45∶55）；流速为1．5 mL・min－1；柱温为30℃；检测波长为315 nm。

结果2种方法均符合方法学验证要求，测定同一样品，测量值差异无统计学意义（P＜0．05）。

结论2种分析方法均能快速、有效地测定原料中非布司他的含量，均可作为非布司他原料质量控制的分析方法。

%Objective To establish and compare the titration method and high performance liquid chromatography (HPLC) method for determining the content of febuxostat .Methods For chemical analysis ,ethanol was used as the solvent ,sodium hydroxide as the volumetric solution and phenolphthalein as an indicator for titration .The HPLC was carried out on an Inertsil ODS‐SP (250 mm × 4 .6 mm ,5 μm) col umn ;the mobile phase consisted of 1 mL ・L -1 phosphoric acid solution (adjust pH value to 2 .4 by tri‐ethylamine)‐acetonitrile (45∶55) with a flow rate of 1 .5 mL ・ min-1 ;the column temperature was set at 30 ℃ ;the detection wavelength was 315nm .Results The 2 methods both met the requirements of methodologyvalidation ,and there was no signifi‐cant difference between the results obtained from the titration method and HPLC method(P<0 .05) .Conclusion The two meth‐ods can detect febuxostat content effectively and suitable for the quality control of febuxostat .【总页数】4页(P134-137)【作者】沈卫阳;郭静沫;施睿;沈圃毅;金祥飞【作者单位】中国药科大学理学院，南京 210009; 药物质量与安全预警教育部重点实验室，南京 210009;中国药科大学理学院，南京 210009; 药物质量与安全预警教育部重点实验室，南京 210009;南京师范大学附属中学，南京 210003;南京师范大学附属中学，南京 210003;中国药科大学理学院，南京 210009; 药物质量与安全预警教育部重点实验室，南京 210009【正文语种】中文【中图分类】R927.2【相关文献】1.异丁司特原料及片剂含量测定方法的研究 [J], 陈继建;潘锡强2.尼可地尔原料药含量测定方法的比较研究 [J], 肖瑶3.非布司他关键中间体合成方法的比较研究 [J], 张勇;李毓桔;马志刚;徐来;隋宁;陈雪梅4.非布司他关键中间体合成方法的比较研究 [J], 张勇;李毓桔;马志刚;徐来;隋宁;陈雪梅5.盐酸苯达莫司汀原料药含量测定方法的比较 [J], 沈红梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

LC-MS法测定人血浆中格列苯脲及其在健康志愿者中的药代动力学李晓天;王广基;王素军【期刊名称】《中国药科大学学报》【年(卷),期】2004(35)6【摘要】目的测定人血浆中格列苯脲的浓度,并研究在中国志愿者中单剂量口服5mg后的药代动力学过程。

方法用液液萃取法提取血浆中药物。

采用液相色谱质谱联用的分析手段,建立人血浆中格列苯脲浓度的测定方法。

结果格列苯脲在156～400μg/L浓度范围内线性良好(r=09999),其在人血浆中的回收率大于80%,日内、日间RSD分别为36%～68%和61%～84%。

最低检测限为05ng/ml。

该药在人体内的主要动力学参数为AUC0∞=(8136±2542)μg·h/L,AUC0t=(7906±2482)μg·h/L,cmax=(1301±648) ng/ml,tmax=(26±18)h和t1/2=(27±19)h。

结论本方法专属性强,灵敏度高,可准确测定格列苯脲在人血浆中的浓度。

【总页数】4页(P532-535)【关键词】格列苯脲;高效液相色谱法;电子喷雾离子化质谱法;药代动力学【作者】李晓天;王广基;王素军【作者单位】中国药科大学药物代谢与动力学研究中心【正文语种】中文【中图分类】R969.1;R978.11【相关文献】1.HPLC法测定人血浆中司帕沙星及其在健康志愿者中的药代动力学 [J], 陈辞;石迎迎;张莉蓉2.LC-MS/MS法测定大鼠血浆中芹黄春浓度及其在药代动力学研究中的应用 [J], 李海龙;尹航;文琪;谭银丰;陈峰;张小坡;赖伟勇3.RP-HPLC法测定人血浆中奥美拉唑浓度及其在健康男性志愿者药代动力学研究[J], 胡玉荣;张楠;单丽红;田鑫;乔海灵4.LC-MS法测定人血浆中赖诺普利及其在药代动力学中的应用 [J], 黄荻;丁莉坤;丁黎;徐贵丽;贺建昌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。