蛋白纯化生物预装柱的特点及分类

亲和层析预装柱和填料选择指南亲和层析是一种常用的生物分离技术，其基本原理是利用靶分子与具有特殊亲和性的固定相相互作用，实现目标分子的分离纯化。

该技术被广泛应用于蛋白质纯化、分析、制备以及药物研发中。

本文将为您介绍亲和层析预装柱和填料选择的指南。

首先，亲和层析的预装柱种类繁多，如Ni-NTA、GST、MBP、Protein A、Protein G、Protein L等。

选择合适的预装柱主要取决于目标蛋白的性质和亲和配体的选择。

以下是几种常见的亲和层析预装柱及其适用性。

1. Ni-NTA柱：适用于His标记蛋白的纯化。

该柱上的Ni2+离子与His标记相互作用，实现蛋白的选择性吸附。

Ni-NTA柱广泛应用于蛋白质纯化和表达系统中。

2. GST柱：适用于GST标记蛋白的纯化。

GST标记用于表达系统和蛋白质亲和纯化，其独特的亲和性可与谷胱甘肽S转移酶 (glutathione S-transferase，GST)结合。

3. MBP柱：适用于MBP标记蛋白的纯化。

麦芽糖结合蛋白(maltose-binding protein，MBP)可通过特异性辅助蛋白结合一些亲和配体，实现蛋白的纯化和表达。

4. Protein A/G/L柱：适用于免疫球蛋白 (IgG) 的富集。

Protein A/G/L分别与IgG的不同部位结合，用于IgG的富集和纯化，常用于抗体生产和医学诊断。

其次，填料选择也是亲和层析中一项重要的技术选择。

填料是用于填充柱体的固体介质，其性能直接影响到层析分离的效果。

以下是一些常见的填料种类及其特点：1.球形填料：球形填料具有均一的颗粒尺寸和良好的柱层分离性能。

常见的球形填料有琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等。

2.凝胶填料：凝胶填料通常用于分离较大分子，如蛋白质、核酸等。

常见的凝胶填料有琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等。

3.磁性填料：磁性填料具有较高的分离效率和灵敏度，常用于磁性亲和层析。

磁性填料结合预装柱可以实现高通量的自动化分离和纯化。

蛋白纯化空柱
蛋白纯化空柱介绍如下：
蛋白纯化预装柱是专为抗体、重组蛋白和其他生物大分子纯化、脱盐、浓缩而设计的。

蛋白层析柱管也不同一般的玻璃柱，柱床长度通常可调节，分为一端可调轴向压缩和两端可调轴向压缩柱。

现推出ZXK夹套式蛋白层析柱和LK系列蛋白层析柱，广泛应用于蛋白、多肽、抗体、酶、病毒、重组蛋白等生物分子纯化。

蛋白纯化预装柱是专为抗体、重组蛋白和其他生物大分子纯化、脱盐、浓缩而设计的。

该类型的中压层析空柱，适合科研院所和工业客户进行小批量分离和纯化抗体、蛋白等生物大分子，并能方便有效地进行工艺放大。

使用说明A5220 Protein A40亲和层析预装柱使用说明预装柱介绍芯硅谷® A40 预装柱是专为实验室抗体快速、简单分离纯化而设计的亲和柱，有 1ml 和 5ml 两种规格。

柱管采用生物耐受性的聚丙烯材料，具有无毒、不与生物分子结合及低溶解度的优点。

预装柱的 1/16 英寸接口，可随实验条件不同与注射器、蠕动泵或色谱系统配套使用。

预装芯硅谷® A40，是以单分散高交联度聚苯乙烯-二乙烯基苯微球为载体，重组 Protein A 为配基的亲和色谱填料，其载体的刚性结构、快速传质能力以及Protein A 的正确键合，使芯硅谷® A40 成为抗体纯化的理想填料。

柱子规格柱体积 1 ml 5 ml柱尺寸I.D. 7 × 25 mm I.D. 16 × 25 mm最大流速 4 ml/min 15-20 ml/min推荐流速0.5-1 ml/min 1-5 ml/min最大压力 5 bar 5 bar注意：芯硅谷® A40 预装柱不可拆开或自行填装两端的堵头确保拧紧以免贮存液泄漏填料规格参数描述载体单分散高交联度聚苯乙烯-二乙烯基苯(PS-DVB)配基美国产重组 A 蛋白粒径40 µm动态载样量约 35 mg hIgG/mL 填料（通过 10%前沿分析法，流速 1.38mL/min，柱长 50 mm，residence time = 0.6 min）最大压力<1000 psi缩胀性< 1% from 1–100% organic solventpH 稳定范围pH 2–10清洗剂8 M 尿素或 6 M 盐酸胍温度稳定范围4–40 ℃储存条件4-8 ℃20%乙醇操作说明由于 Protein A 与 IgG 的结合可以在较宽的 pH 范围里进行，选择何种缓冲体系取决于所应用的样品。

洗脱过程通常采用降低 pH 的方式进行，而不同来源的 IgG 因其亚基不同，适宜的洗脱缓冲液 pH 也不相同。

ProteinAt Beads 4FF 的预装柱说明书货号：YA2471规格：1*1mL /1*5mL /5*1mL /3*1mL+1*5mL /5*5mL保存：2-8℃产品说明：Protein At Beads 4FF 是用于分离和纯化单克隆抗体、多克隆抗体或Fc-融合蛋白的亲和层析介质。

Protein A 是一种分离自金黄色葡萄球菌的细胞壁蛋白，主要通过Fc 片段结合哺乳动物IgG 。

Protein At Beads 4FF 的配体蛋白Protein At 是在天然蛋白A 的基础上进行生物工程突变得到的一种耐碱蛋白A(Alkaline tolerate ，故缩写为At)。

Protein At Beads 4FF 是以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质，可以在相对较高的流速下进行单克隆抗体和多克隆抗体的纯化。

表1：介质性能参数介质高度交联的4%琼脂糖平均粒径～90μm配体耐碱性Protein A结合载量>40mg 人lgG/ml 介质化学稳定性可耐受抗体纯化过程中的所有试剂工作pH 3-12在线清洗0.1-0.5M NaOH 线性流速50-300cm/h 保存20%乙醇纯化流程：1、Buffer 的准备所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22μm 或0.45μm 滤膜过滤。

平衡/洗杂液：0.15M NaCl 、20mM Na 2HPO 4，pH7.0洗脱液：0.1M 甘氨酸，pH 3.0中和液：1M Tris-HCl ，pH 8.5。

2、样品准备上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH 值，可以用平衡/洗杂液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用平衡/洗杂液透析。

样品在上样前建议离心或用0.22μm 或0.45μm 滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

3、样品纯化1.上柱：将泵管道中注满去离子水。

去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。

再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。

蛋白纯化柱子选择蛋白纯化是生物科学中常用的一种技术手段，通过对混合溶液中的蛋白进行分离和纯化，从而得到纯度较高的目标蛋白。

而在蛋白纯化的过程中，蛋白纯化柱子的选择是非常重要的环节。

蛋白纯化柱子广泛应用于各个领域，如生物医药、食品科学等。

根据不同的需求和实验目的，我们需要选择合适的蛋白纯化柱子。

下面将从柱子类型、填料材料和柱子尺寸三个方面介绍蛋白纯化柱子的选择。

柱子类型是选择蛋白纯化柱子时需要考虑的重要因素之一。

一般来说，常见的蛋白纯化柱子类型包括亲和柱、离子交换柱和凝胶过滤柱等。

亲和柱是通过目标蛋白与特定配体之间的亲和力进行分离纯化的。

离子交换柱则是利用目标蛋白与固定带电柱子表面的离子交换进行分离纯化的。

凝胶过滤柱则是利用分子大小的差异进行分离纯化的。

根据实验需要和目标蛋白的性质，我们可以选择不同类型的蛋白纯化柱子。

填料材料也是选择蛋白纯化柱子的重要考虑因素。

常见的填料材料有琼脂糖、琼脂糖凝胶、硅胶等。

不同的填料材料具有不同的性质，如吸附性能、分离效果和稳定性等。

根据目标蛋白的特性和实验需求，我们可以选择合适的填料材料。

柱子尺寸也是选择蛋白纯化柱子时需要考虑的因素之一。

柱子尺寸的选择通常取决于样品量和纯化效果的要求。

样品量较大的情况下，我们可以选择较大尺寸的柱子，以提高纯化效率。

而纯化效果的要求较高时，我们可以选择较小尺寸的柱子，以提高分离效果。

蛋白纯化柱子的选择是蛋白纯化过程中的关键环节。

选择合适的柱子类型、填料材料和柱子尺寸对于蛋白纯化的效果至关重要。

在实验中，我们应根据实际需求和目标蛋白的性质，综合考虑这些因素，选择适合的蛋白纯化柱子，以获得高纯度的目标蛋白。

蛋白纯化柱子选择
1. 目标蛋白的特性：首先要了解目标蛋白的分子量、等电点、疏水性等特性。

这些信息将有助于选择适合的柱子类型，例如分子筛、离子交换、亲和层析等。

2. 柱子的选择性：不同的柱子具有不同的选择性，可以根据目标蛋白与杂质之间的差异来选择柱子。

例如，离子交换柱可以根据蛋白质的电荷性质进行分离，而亲和层析柱则可以利用蛋白质与特定配体的亲和力进行纯化。

3. 柱子的容量：根据需要处理的样品量来选择柱子的容量。

柱子的容量应足够大，以满足实验需求，但也不宜过大，以免造成浪费。

4. 柱子的分辨率：分辨率是指柱子分离蛋白质混合物的能力。

对于复杂的混合物，可能需要使用具有高分辨率的柱子，如高效液相层析（HPLC）柱子。

5. 柱子的稳定性：柱子的稳定性对于长期的蛋白纯化非常重要。

选择具有良好稳定性和重复性的柱子可以确保实验结果的可靠性。

6. 柱子的价格和可获得性：不同柱子的价格差异较大，需要根据实验预算来选择合适的柱子。

同时，还要考虑柱子的可获得性，以确保实验的顺利进行。

7. 参考文献和经验：查阅相关的文献和其他研究者的经验可以提供有关不同柱子在类似实验条件下的性能信息，有助于做出更明智的选择。

综上所述，选择蛋白纯化柱子需要综合考虑目标蛋白的特性、柱子的选择性、容量、分辨率、稳定性、价格和可获得性等因素。

在选择之前，最好进行一些小规模的实验来评估不同柱子的性能，以确定最适合的柱子。

1ml 层析柱空柱层析柱是一种广泛应用于分离和纯化化合物的实验室技术。

1ml层析柱是其中一种类型的层析柱，其具有1ml的样品处理容量。

层析柱中的空柱则是指没有填充分离介质的柱子。

本文将介绍1ml层析柱空柱的特点、应用领域以及使用注意事项。

1. 1ml层析柱空柱的特点1ml层析柱空柱的最显著特点是其样品处理容量为1ml。

这使得它在需要处理小样品量的实验中非常有用。

空柱意味着柱子内没有填充任何分离介质，因此，它的分离能力和分辨率较低。

然而，空柱具有一定的吸附能力，可以用于去除某些杂质或无机盐，以达到简单的样品净化目的。

2. 1ml层析柱空柱的应用领域1ml层析柱空柱的应用领域非常广泛。

以下是一些常见的应用领域：2.1 蛋白质纯化1ml层析柱空柱可以用于简单的蛋白质纯化过程中的预处理步骤。

例如，可以通过空柱去除样品中的无机盐、杂质或其他干扰物质，以提高后续纯化步骤的效果。

2.2 药物分析1ml层析柱空柱可以用于药物分析中的样品预处理步骤。

通过空柱，可以去除样品中的杂质，净化样品，以提高后续分析的准确性和灵敏度。

2.3 生物大分子分析1ml层析柱空柱也可用于生物大分子（如DNA、RNA和蛋白质）的分析。

空柱可以去除样品中的无机盐、杂质或其他干扰物质，提高分析的精确性和可靠性。

2.4 质量控制1ml层析柱空柱可以用于质量控制过程中的样品净化步骤。

通过空柱，可以去除样品中的杂质，提高质量控制的准确性和可靠性。

3. 1ml层析柱空柱的使用注意事项使用1ml层析柱空柱时，有一些注意事项需要遵守：3.1 预处理在使用空柱之前，柱子需要进行预处理，以去除可能存在的残留杂质。

常见的预处理方法包括用洗涤液洗涤柱子，或者用溶剂进行反洗。

3.2 样品处理量由于1ml层析柱空柱的样品处理容量为1ml，因此，需要确保样品的体积不超过1ml。

如果样品体积较大，可以考虑使用更大处理容量的层析柱。

3.3 分离介质空柱内没有填充分离介质，因此，它的分离能力和分辨率较低。

密理博（Millipore）尺寸排组蛋白纯化柱是一种用于分离和纯化组蛋白的实验设备。

这种纯化柱具有特殊的尺寸和设计，能够高效地去除杂质并保留目标组蛋白，从而提高组蛋白的纯度。

以下是关于密理博尺寸排组蛋白纯化柱的一些基本信息：
1. 尺寸与设计：密理博尺寸排组蛋白纯化柱通常采用适中的柱床高度和直径，以便于在实验室内进行操作。

其内部填充了能够选择性吸附组蛋白的介质，从而在流动相中实现组蛋白的分离和纯化。

2. 介质类型：纯化柱所使用的介质通常是高度特异性的配体，能够与组蛋白结合并选择性地将其保留在柱内。

常用的介质包括各种类型的抗体、肽段或其他配体。

3. 操作流程：使用密理博尺寸排组蛋白纯化柱进行组蛋白纯化的操作流程通常包括结合、洗涤和洗脱等步骤。

在结合步骤中，目标组蛋白与纯化柱内的介质结合；在洗涤步骤中，去除杂质；最后在洗脱步骤中，将目标组蛋白从介质上解离并收集。

4. 应用范围：密理博尺寸排组蛋白纯化柱广泛应用于生命科学、生物技术和医学研究领域。

它可以用于分离和纯化各种类型的组蛋白，包括核心组蛋白和组蛋白变体，从而为研究组蛋白的结构、功能和调控机制提供重要的工具。

总之，密理博尺寸排组蛋白纯化柱是一种专为组蛋白纯化而设计的实验设备，通过结合高度特异性的介质，能够实现高效、高纯度的组蛋白分离。

简述几种柱层析的特点作者：张弓【摘要】柱层析技术在近几十年得到了广泛的应用和不断地发展，已成为各行各业离不开的重要技术。

本文就其中几种常用的柱层析的特点做了综述。

【关键词】凝胶过滤柱层析离子交换柱层析疏水作用柱层析亲和柱层析金属螯合层析在过去的三十年中,分离生物大分子的各种技术和方法得到了不断的发展。

随着各种介质的完善和商品化,使以填料为核心的柱层析技术在蛋白质等粗提后的纯化中起到了重要作用。

本文总结了几种柱层析的特点：一，凝胶过滤柱层析（Gel Filtration Chromatography, GFC）GFC是以分子大小和形状为分离基础的。

具体说就是利用不同大小分子通过凝胶滞留时间的差别来分离混合物的柱层析方法。

另外一种说法是分离是以分子体积的大小为基础的,分子体积即分子溶剂化后的体积,受分子形状和相对分子质量两方面因素的影响。

有时加入变性剂（尿素、盐酸胍等）以破坏蛋白质的三、四级结构,可以使分离主要受控于相对分子质量的大小。

GFC特别适用于分离相对分子质量大于2000的高分子化合物和相对分子质量差异大的混合物及低聚物。

GFC的分离不依赖于流动相和固定相的相互作用,所以不必使用梯度洗脱。

但是由于电荷屏蔽的因素,为了降低填料与生物分子之间的相互作用,往往会适当提高盐浓度,至少高于0.05 mol/LNaCl。

由于试样在柱中的保留时间不会超出柱中溶剂的总体积(Vt) ,所以不会出现在其他液相色谱中经常出现的由于色谱峰的弥散而引起的检测极限。

GFC的容量通常由流动相效应来控制。

由于GFC的分离靠大小组分流程途径长短之差达到分离,柱要有足够的长度(75～100 cm ,)但由于微小的粒子在GFC也有扩散的效应,柱子又不可过长,上样量不可过多(< 20 % Vt)。

因为GFC 洗脱时间可粗略估计,所以再隔一定时间连续进样,提高柱的使用效率,缩短纯化周期。

除了以上特点外,GFC还有回收率较高,洗脱条件温和,不易发生副反应,使用寿命较长,同时可用作换盐等特点。

蛋白纯化层析柱2011-06-15 15:19:14 易生物仪器浏览次数：1164 网友评论0 条关键词：蛋白离子交换分离分子物质树脂从个人学术性实验室到大型的医药制造企业，小型或者大规模的蛋白纯化通常都需要几种类型的液相色谱仪。

这些相关的大部分技术已应用了多年，但是新型柱料的发展为这些利用蛋白物理和化学特性进行分离的，经过时间考验的方法注入了新的力量。

其中最值得提到的就是凝胶过滤层析技术（gel filtration，GF），离子交换层析技术（ion exchange，IEX），羟基磷灰石层析（hydroxyapatite，HAP）和疏水作用层析（hydrophobic interaction，HI)，以及亲和层析和高效液相色谱方法（high-performance liquid chromatography，HPLC）。

对于一个初接触蛋白纯化的新手而言，从哪儿下手也许是令人头疼的一件事，但是幸运的是目前这些流程都已经逐步系统化了。

GE Healthcare（原Amersham Biosciences）的技术顾问Andrew Mitchell解释道，通常利用液相色谱技术进行蛋白纯化有三步：捕获——从细胞其它成份，比如DNA和RNA中分离需要的蛋白；区分——从与目的蛋白具有相近的大小，或者相似的物理/化学特征的污染物中分离蛋白；修饰——使分离得到的样品处于可使用状态。

这每一个纯化的步骤都有特定的色谱层析技术和最佳的beads大小。

第一步捕获步骤，也就是从细胞裂解物粗成份中分离蛋白，这需要一个具有高容量和高流量（flow rate）的填料。

bead大小比较大，范围比较宽（比较于bead大小平均值）的“fast flow”填料比较理想，这种填料也有利于防止目标蛋白被水解——因为速度比较快。

第二步则对分辨率要求更高，需要更好的从混合物中分离需要的成份。

通常bead的大小与分辨率成反比，因此在这一部中比较小的bead比较合适。

蛋白层析空柱
关于蛋白层析空柱介绍如下：
蛋白层析空柱是一种用于蛋白质分离纯化的层析柱，具有特定的填料和结构，可以用于蛋白质的分离、纯化和分析。

以下是关于蛋白层析空柱的详细介绍：
1. 结构：蛋白层析空柱主要由柱体、填料和柱头等部分组成。

柱体通常是不锈钢管或玻璃管，填料可以是硅胶、琼脂糖、聚丙烯酰胺等，根据不同的分离需求选择不同的填料。

柱头是进样口，可以将样品注入层析柱。

2. 工作原理：层析是一种利用不同物质在固定相和流动相之间分配系数不同的原理，使不同物质在层析柱中得到分离的方法。

在蛋白层析中，蛋白质分子与填料之间的相互作用力使其在流动相和固定相之间进行分配，根据不同的分配系数，蛋白质分子在层析柱中得到分离。

3. 操作步骤：蛋白层析空柱的操作步骤包括平衡、上样、洗脱、检测等。

平衡是使层析柱中的填料充分湿润，以便进行后续的上样和洗脱步骤。

上样是将待分离的蛋白质样品加入层析柱中。

洗脱是通过改变流动相的成分，使不同蛋白质分子根据其特性在层析柱中移动并得到分离。

检测是对洗脱出来的组分进行检测和收集。

4. 应用：蛋白层析空柱在蛋白质研究和生物工程领域有广泛的应用，例如蛋白质纯化、蛋白质分析和鉴定、蛋白质相互作用研究等。

通过使用蛋白层析空柱，可以实现对蛋白质的分离、纯化和分析，为
生物学和医学研究提供有力的工具。

总之，蛋白层析空柱是一种重要的蛋白质分离纯化工具，可以根据不同的需求选择不同的填料和操作方法，为蛋白质研究和生物工程领域的发展提供支持。

简述几种柱层析的特点作者：张弓【摘要】柱层析技术在近几十年得到了广泛的应用和不断地发展，已成为各行各业离不开的重要技术。

本文就其中几种常用的柱层析的特点做了综述。

【关键词】凝胶过滤柱层析离子交换柱层析疏水作用柱层析亲和柱层析金属螯合层析在过去的三十年中,分离生物大分子的各种技术和方法得到了不断的发展。

随着各种介质的完善和商品化,使以填料为核心的柱层析技术在蛋白质等粗提后的纯化中起到了重要作用。

本文总结了几种柱层析的特点：一，凝胶过滤柱层析（Gel Filtration Chromatography, GFC）GFC是以分子大小和形状为分离基础的。

具体说就是利用不同大小分子通过凝胶滞留时间的差别来分离混合物的柱层析方法。

另外一种说法是分离是以分子体积的大小为基础的,分子体积即分子溶剂化后的体积,受分子形状和相对分子质量两方面因素的影响。

有时加入变性剂（尿素、盐酸胍等）以破坏蛋白质的三、四级结构,可以使分离主要受控于相对分子质量的大小。

GFC特别适用于分离相对分子质量大于2000的高分子化合物和相对分子质量差异大的混合物及低聚物。

GFC的分离不依赖于流动相和固定相的相互作用,所以不必使用梯度洗脱。

但是由于电荷屏蔽的因素,为了降低填料与生物分子之间的相互作用,往往会适当提高盐浓度,至少高于0.05 mol/LNaCl。

由于试样在柱中的保留时间不会超出柱中溶剂的总体积(Vt) ,所以不会出现在其他液相色谱中经常出现的由于色谱峰的弥散而引起的检测极限。

GFC的容量通常由流动相效应来控制。

由于GFC的分离靠大小组分流程途径长短之差达到分离,柱要有足够的长度(75～100 cm ,)但由于微小的粒子在GFC也有扩散的效应,柱子又不可过长,上样量不可过多(< 20 % Vt)。

因为GFC 洗脱时间可粗略估计,所以再隔一定时间连续进样,提高柱的使用效率,缩短纯化周期。

除了以上特点外,GFC还有回收率较高,洗脱条件温和,不易发生副反应,使用寿命较长,同时可用作换盐等特点。

平衡柱子时,压力增 大 柱子中出现气泡
原因 样品中的物质吸附. 样品浓度太高聚集 3. 样品中的颗粒堵塞柱子
平衡液与储存液互补相容导 致盐沉淀
泵或管路中有气泡流入
解决办法 进行彻底的清洗
1. 采 用 高 盐 , 去 污剂或碱清洗 2.更换柱顶的滤 膜
用去离子水去除 储存液再平衡
蛋白纯化‐预装柱篇
预装柱是指在工厂里已经预装好层析 填料的柱子,预装柱的优点点是装填 均一,柱效稳定 而且对于蛋白纯化人员来说来说,预装柱 具有摸索条件快,结果稳定等优点, 可以大大节省人 力物力.
1. 预装柱选择指南
2.预装柱接头选择指南 1.Hitrap 系列预装柱接头选择
2.Hiscreen 系列预装柱接头选择 3.Hiprep 系列预装柱接头选择 4.Tricon(GL) 高分辨率预装柱选择
先抽泵气泡,后 连接一个 FR902, 低流速以赶走气 泡
怎么预防 定期清洗,清洗方法见层析介质的 寿命和清洗方法 1.所用样品均要 0.22um 膜过滤后 上样以除去颗粒 2. 尽 量 把 样 品 溶 解 到 平 衡 缓 冲 液 中 3.稀释样品浓度防止聚集
4 1. 平衡前用水冲洗柱子以及系
统 2. 柱子储存前用水清洗柱子 1. 实验之前溶液均除气过滤 2. 实验之前把泵气泡抽除
5.Resource 系列预装柱选择
6.旧 Hiload 预装柱预装柱选择
7.新 Hiload 预装柱选择
AKTA purifier AKTA FPLC AKTA prime AKTA express AKTA AVANT
3.预装柱常见问题解答
柱子出现问题 柱子反压逐渐增高 上样时,柱子压力突 然增大

蛋白纯化层析柱2011-06-15 15:19:14 易生物仪器浏览次数：1164 网友评论0 条从个人学术性实验室到大型的医药制造企业，小型或者大规模的蛋白纯化通常都需要几种类型的液相色谱仪。

这些相关的大部分技术已应用了多年，但是新型柱料的发展为这些利用蛋白物理和化学特性进行分离的，经过时间考验的方法注入了新的力量。

其中最值得提到的就是...关键词：蛋白离子交换分离分子物质树脂从个人学术性实验室到大型的医药制造企业，小型或者大规模的蛋白纯化通常都需要几种类型的液相色谱仪。

这些相关的大部分技术已应用了多年，但是新型柱料的发展为这些利用蛋白物理和化学特性进行分离的，经过时间考验的方法注入了新的力量。

其中最值得提到的就是凝胶过滤层析技术（gel filtration，GF），离子交换层析技术（ion exchange，IEX），羟基磷灰石层析（hydroxyapatite，HAP）和疏水作用层析（hydrophobic interaction，HI)，以及亲和层析和高效液相色谱方法（high-performance liquid chromatography，HPLC）。

对于一个初接触蛋白纯化的新手而言，从哪儿下手也许是令人头疼的一件事，但是幸运的是目前这些流程都已经逐步系统化了。

GE Healthcare（原Amersham Biosciences）的技术顾问Andrew Mitchell解释道，通常利用液相色谱技术进行蛋白纯化有三步：捕获——从细胞其它成份，比如DNA和RNA中分离需要的蛋白；区分——从与目的蛋白具有相近的大小，或者相似的物理/化学特征的污染物中分离蛋白；修饰——使分离得到的样品处于可使用状态。

这每一个纯化的步骤都有特定的色谱层析技术和最佳的beads大小。

第一步捕获步骤，也就是从细胞裂解物粗成份中分离蛋白，这需要一个具有高容量和高流量（flow rate）的填料。

bead大小比较大，范围比较宽（比较于bead大小平均值）的“fast flow”填料比较理想，这种填料也有利于防止目标蛋白被水解——因为速度比较快。

蛋白纯化反相柱的选择HP-RPC的选择首先要看蛋白质的分子量，20kDa左右的一般用C4或C8，再小一点的可以用C18，太大的蛋白并不适于反相分离。

C18通用性最好，但是有时候保留过强可能会导致收率较低。

如果目的蛋白不是很针对，可以考虑通用性最强的C18柱。

一般来说，4.6mm的内径比较常见，250mm长的柱子比150mm的柱子分离度要好，无论对小肽还是蛋白都是这样。

其次要注意填料的孔径，80A左右的填料主要是用于小分子的分析分离，对于蛋白这样的大分子，要用300A孔径的填料，可以避免分子扩散到填料内部的摩擦阻力，提高柱效。

此外C载量来说，蛋白柱和一般的C18也是不一样的。

Agilent, Waters，Vydac都有相关的成熟产品，最好能配备相应的保护柱。

更小内径的柱子可以节省流动相，有些更适于甲酸等液质连用的情况。

制备的话，还是考虑聚合物的制备级填料Source RPC比较好，可以NaOH CIP。

Amersham 也有ReSource的聚合物反相分析柱卖，寿命会长些，该柱非极性与C8相近，但是价格较贵，印象中要RMB 8000。

一般的进口柱连同保护柱，RMB4000差不多搞定了。

太大分子量的蛋白用Source RPC分离收率也一样不会高的，不过对于硅胶C18系列分析柱，柱子寿命更重要，为了防止堵柱，自然，厂家会强调如何根据蛋白性质来选合适的柱，以尽量延长柱寿命为自己产品赢得口碑。

对于安马西亚的Source RPC，它的非极性和C8的蛋白柱相近，这一点是明确的，但选择性不同。

Source柱可以CIP再生，所以寿命不是问题，就是沉淀了活是洗不下来也不用担心，用浓酸碱再生就是了，所以也用不着强调分子量范围，而只是说和C8的非极性相似。

一般的SOURCE RPC的载量是用胰岛素标称的，可见主要用于小蛋白的分离。

对于C18柱，配合相应的保护柱应该可以适用于大部分的应用，收率可能低，但是有保护柱保护，柱子一般不会坏就是了。

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线: 400-1683301或800-8283301 订货e-mail :****************** 技术咨询: ***************** 网址: 碧云天网站 微信公众号Protein A Agarose (Fast Flow, 1ml)预装柱产品简介：碧云天的Protein A Agarose (Fast Flow)预装柱(Protein A Agarose Prepacked Column, Fast Flow)是一种简便、快速、高效的用于抗体纯化、免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)或免疫共沉淀(Co-IP)的即用型预装柱，也称层析柱(Chromatography column)或纯化柱(Purification column)。

本产品也可用于实验中抗原抗体复合物的分离纯化。

特别注意：使用本产品对结合的抗体或抗体复合物进行洗脱时，会有微量Protein A 脱落，洗脱后的样品不适合用于Western 等需要二抗的检测，但适合用于抗原蛋白复合物的质谱分析等不需要使用二抗的检测。

Protein A 是一种发现于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus )的细胞壁表面蛋白，分子量为42kDa ；Protein G 是C 型或G 型链球菌(Streptococcal bacteria)表达的免疫球蛋白结合蛋白。

Protein A 和Protein G 功能相似，能特异性地与哺乳动物免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)结合，结合的部位通常为免疫球蛋白的Fc 区，但有资料显示Protein A 也会和人VH3家族的Fab 区结合，而Protein G 有时与Fab 区也有一定结合。

同时，两者对于不同的免疫球蛋白亚类的结合能力有所不同。

适当重组改造的Protein A 、G 与琼脂糖凝胶(agarose)以一定的方式结合，可用于免疫沉淀或抗体的纯化。

重力型蛋白纯化空柱重力型蛋白纯化空柱是一种常用于生物分离纯化领域的实验工具。

重力型蛋白纯化空柱可以高效地将目标蛋白从复杂的混合物中纯化出来，为进一步研究蛋白的结构和功能提供了可靠的基础。

在生物科学研究中，研究人员常常需要从复杂的生物样品中分离出目标蛋白。

蛋白纯化是生物学研究中至关重要的一步，因为只有获得高纯度的蛋白样品，才能得到准确的结构和功能信息。

重力型蛋白纯化空柱作为蛋白纯化的重要工具，可以快速、高效地实现蛋白的纯化和分离。

重力型蛋白纯化空柱的基本原理是利用重力作用使样品在柱内自由流动，通过特定的层析介质选择性地与目标蛋白结合，从而实现蛋白的分离纯化。

重力型蛋白纯化空柱的层析介质通常是一种具有亲和性的配体，可以与目标蛋白特异性地结合，而非目标蛋白则流经柱床。

重力型蛋白纯化空柱具有操作简单、操作成本低廉、纯化效果好等优点。

在纯化过程中，只需要将混合物样品加载到柱内，然后用洗脱缓冲液洗脱非目标蛋白，最后再用洗脱缓冲液洗脱目标蛋白即可。

由于重力型蛋白纯化空柱不需要使用昂贵的设备和复杂的操作步骤，因此被广泛应用于生物科学研究和工业生产中。

重力型蛋白纯化空柱的选择和使用需要考虑多个因素。

首先是柱子的尺寸和形状，通常根据样品的数量和纯化的需求选择合适的柱子。

其次是层析介质的选择，需要根据目标蛋白的特性和纯化策略选择合适的亲和层析介质。

最后是洗脱缓冲液的选择，洗脱缓冲液的pH 值、浓度和成分等都会对纯化效果产生影响。

除了重力型蛋白纯化空柱，还有其他常用的蛋白纯化方法，如离心纯化、电泳纯化和亲和层析纯化等。

每种方法都有其特点和适用范围，研究人员需要根据实际需要选择合适的纯化方法。

重力型蛋白纯化空柱作为一种常用的蛋白纯化工具，在生物科学研究中发挥着重要的作用。

它的优点是操作简单、纯化效果好，广泛应用于蛋白纯化和分离领域。

随着科学技术的不断进步，相信重力型蛋白纯化空柱在生物科学研究中将发挥更大的作用，为我们揭示蛋白的奥秘提供更多有力的工具和方法。