微生物限度检验操作规程
1目的为了规范药用塑料瓶微生物限度项的控制及检验操作，特制定本规程。
2范围本规程规定了药用塑料瓶微生物限度检验操作的内容和具体方法。
3负责人质检部实验员
4操作步骤
4.1准备
4.1.1设备及仪器
镊子、培养皿、量筒、三角瓶、刻度吸管、架盘天平、电磁炉、自动微生物过滤系统、Z G P-A2270水套式培养箱（30~35℃）、全自动霉菌培养箱（23~28℃）、高压蒸汽灭菌器、电热恒温干燥箱（250℃）。
4.1.2试剂及培养基：
营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、0.9%氯化钠溶液。。
4.1.3试液的配制
1）0.9%无菌氯化钠溶液：称取9g氯化钠，溶于1L注射水中，过滤、分装至三角瓶中，用带砂心硅胶塞塞紧，牛皮纸包扎后，121℃高压灭菌20分钟，备用。
2）营养琼脂培养基：称取干燥商品培养基4.2g，溶于100m l注射水中，加热溶解，分装至三角瓶中，用带砂心硅胶塞塞紧，牛皮纸包扎后，121℃高压灭菌20分钟，备用。
3）玫瑰红钠琼脂培养基：取3.05g培养基，加入100m l注射水中，充分振摇，加热使之完全溶解后，分装至三角瓶中，用带砂心硅胶塞塞紧，牛皮纸包扎后，121℃高压灭菌20分钟，备用。
4）胆盐乳糖培养基：取3.5g培养基，加入100m l注射水中，充分振摇，加热使之完全溶解后，分装至三角瓶中，用带砂心硅胶塞塞紧，牛皮纸包扎后，121℃高压灭菌2
4.1.4用具的清洁消毒：将试验所需用具清洗干净，用纱布包扎后，121℃高压灭菌20分钟，备用。
4.1.5无菌室的清洁消毒：每天清洁无菌室，定期用新概念消毒液擦拭操作台及可
能的死角，每天开启紫外灯杀菌1小时，操作前超净工作台灭菌0.5~1小时。
4.2操作
4.2.1准备
将供试品、培养基及已灭菌的用具移入传递窗口，再移至无菌室内。每次试验中所用物品必须计划好，并有备用物。
操作人员用肥皂水洗手，关闭紫外杀菌灯，进入缓冲间，换工作鞋。再用消毒液洗手并用酒精棉球擦手，穿戴无菌衣帽、口罩。
操作前用酒精棉球擦手，再擦拭供试品瓶、盒、袋等的开口处周围，待干后用灭菌手术镊或剪将供试品启封。
4.2.2净化台的操作
把8个样品依次摆好，然后用移液管加入标示容量1/3量的氯化钠注射液，认真记录当时移液管中的液体体积，同时将盖旋紧，振摇1分钟，最后从每个瓶子用移液管吸取1m l氯化钠试验液，放入培养皿中，最后在培养皿中加入培养基。培养皿盖好盖，放到传递窗准备培养。
4.2.3微生物的培养和计数
细菌、霉菌、酵母菌、大肠杆菌的培养温度和培养天数按照表3进行操作。一般细菌培养48小时，逐日点计菌落数，一般以48小时的菌落数报告；霉菌、酵母菌培养
72小时，逐日点计菌落数，一般以72小时的菌落数报告；培养过程中不断观察菌落增长的情况，到期后数清培养皿中菌落数，然后推算每个瓶中的菌落数。
大肠杆菌供试品在胆盐乳糖培养基中，一般培养18-24小时，然后取上述培养物0.2m l，接种至含5m l M U G培养基的试管内进行培养，于5小时、24小时在366n m紫外线下观察，同时用未接种的M U G培养基作本底对照。若管内培养物呈现荧光，为M U G阳性，不呈现荧光，为M U G阴性。观察后，沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液，液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性；呈试剂本色，为靛基质阴性。本底对照应为M U G阴性和靛基质阴性。
如M U G阳性，靛基质阳性，判供试品检出大肠杆菌；如M U G阴性，靛基质阴性，判供试品未检出大肠杆菌；如M U G阳性，靛基质阴性，或M U G阴性，靛基质阳性则应取胆盐乳糖培养基的培养物划线接种于曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基的平板上，倒置培养18-24小时。
表3
5技术要求
采用点计菌落法
细菌总数为不得超过100c f u/g；霉菌、酵母菌总数不得超过100c f u/g；大肠埃希菌每瓶不得检出。
