溶剂极性依次递增分离法

葡聚糖凝胶 Sephadex LH-20 使用说明
Sephadex G 型葡聚糖凝胶只适合在水中使用，Sephadex G-25 羟丙化 后就是 Sephadex LH-20。此君既有分子筛作用，在由极性与非极性溶剂组 成的溶剂中还有反相层析效果。虽然价位很高，但由性能颇佳，可再生利 用，所以倍受钦睐。此外上柱样品损失很少，对处理小样品较好，这也是 我们实验室常用的原因之一。
sephadexlh20柱子被弄脏了大多数情况下是由于样品没滤将柱头堵住或由于样品的死吸附一般很少发生使柱子的柱头部分污染一般的处理是将被污染的柱头部分的填料弃去具体做法很简单只将被污染的柱头部分的填料用玻棒轻轻搅起倒掉即可如果柱子整个被污染如果是将sephadexlh20用反相被污染办法如下依次用水naohnacl水溶液水甲醇洗涤被污染的柱子
不要着急,实验是一点一点做出来的,刚开始总是困难的.首先我要说 的是 Sephadex LH20 不是万能的,你的样品不一定适于用它分离,
1 "结果用约一个保留体积就洗完了",这很正常,这也是 Sephadex LH20 这种填料的特点:"洗脱体积一般为 2-3 个保留体积，对特殊保留强的化合 物，可洗脱 5 个保留体积",
3 "还有分到什么程度是用 Sephadex LH20 比较好?"
如果实验室 Sephadex LH20 很珍贵，分道较纯再用， 如果实验室 Sephadex LH20 很普及，只要满足使用的注意事项，较粗的样品可直接使用 Sephadex LH20 分离。日本的师兄都是用 Sephadex LH20 粗分，人家有钱， 所以不在乎。如果硅胶比 Sephadex LH20 还贵，你一定先用 Sephadex LH20 粗分，再用硅胶吧。有很多问题根本不是学术本身的问题，人也不可能在 真空中搞科研。哈哈，跑题了。

N R'
RCOR'
RCOOR'
ROR'
小
RX
CHO
R +NH 3 CH
_
COO
氨基酸，极性强
HCOH
HO CH HCOH HCOH
葡萄糖，分 子中多个羟 基，极性强
CH 3(CH 2)6COOH 硬脂酸，长链烃基，极性弱
CH 2OH
分子的极性大小比较
O
O R
O R'' OH
OO
O CH 3 R '
② 未知成分，根据一般性经验选择溶剂。
_____极性小的亲脂性化合物如萜类、甾体等 脂环化合物、芳香类化合物——氯仿、乙 醚溶剂。
α -金 合 欢 烯
O
O C21 甾 类 化 合 物
β -金 合 欢 烯
H 3CO
OCH 3
H
CC
OCH 3
CH 3
α-细 辛 醚 （ α-asarone)
_____糖苷、氨基酸等极性大的成分——水或含水的 醇溶液。
常见溶剂极性大小顺序
水＞甲醇＞乙醇＞正丙醇＞丙酮＞正丁醇 ＞乙酸乙酯＞氯仿＞无水乙醚＞苯＞四氯 化碳＞环己烷＞石油醚
思考：如何解释溶剂的极性顺序？
中草药提取如何选择溶剂？
• 选择的溶剂应对目标组分溶解度大，对 杂质成分的溶解度小，不能与提取的物 质起化学反应，安全无毒。
① 提取分离已知成分，根据结构判断极性， 按照“相似相溶”原则选择溶剂。
第一节、提取方法（extraction)
常见提取方法
• 水蒸气蒸馏法 • 升华法 • 超临界流体萃取方法 • 溶剂法
几个方法是相互关联的，有时同时使用。但 溶剂法经典、常用。

1*天然药物化学研究的内容有哪些？答：天然药物中各类化学成分的结构特点、理化性质、提取分离与鉴定方法，操作技术及实际应用。

2*如何理解有效成分和无效成分？答：有效成分是指天然药物中经药效实验筛选具有生物活性并能代表临床疗效的单体化合物，能用结构式表示，具有一定的物理常数。

天然药物中不代表其治疗作用的成分为无效成分。

一般认为天然药物中的蛋白质、多糖、淀粉、树脂、叶绿素、纤维素等成分是无效成分或杂质。

3*天然药物有效成分提取方法有几种？采用这些方法提取的依据是什么？答：①溶剂提取法：利用溶剂把天然药物中所需要的成分溶解出来，而对其它成分不溶解或少溶解。

②水蒸气蒸馏法：利用某些化学成分具有挥发性，能随水蒸气蒸馏而不被破坏的性质。

③升华法：利用某些化合物具有升华的性。

4*常用溶剂的亲水性或亲脂性的强弱顺序如何排列？哪些与水混溶？哪些与水不混溶？答：石油醚>苯>氯仿>乙醚>乙酸乙酯>正丁醇（与水互不相容）>丙酮>乙醇>甲醇>水5*两相溶剂萃取法是根据什么原理进行？在实际工作中如何选择溶剂？答：利用混合物中各成分在两相互不相溶的溶剂中分配系数不同而达到分离的目的。

实际工作中，在水提取液中有效成分是亲脂的多选用亲脂性有机溶剂如苯、氯仿、乙醚等进行液‐液萃取；若有效成分是偏于亲水性的则改用弱亲脂性溶剂如乙酸乙酯、正丁醇等，也可采用氯仿或乙醚加适量乙醇或甲醇的混合剂。

6*色谱法的基本原理是什么？答：利用混合物中各成分在不同的两相中吸附、分配及其亲和力的差异而达到相互分离的方法。

7*聚酰胺吸附力与哪些因素有关？答：①与溶剂有关：一般在水中吸附能力最强，有机溶剂中较弱，碱性溶剂中最弱；②与形成氢键的基团多少有关：分子结构中含酚羟基、羧基、醌或羰基越多，吸附越牢；③与形成氢键的基团位置有关：一般间位＞对位＞邻位；④芳香核、共轭双键越多，吸附越牢；⑤对形成分子内氢键的化合物吸附力减弱。

展开剂的选择以及常用溶剂极性表选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚Petroleumether/Ethylacetate,petroleumether/Acetone,Petroleumether/Ether, Petroleumether/CH2Cl2, ethylacetate/MeOH,CHCl3/ethylacetate展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。

展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间；④不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小；⑥展开后组分斑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制。

一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。

很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。

我们在实验中，为了实现一个配体与其他杂质有效分离，曾经尝试了很多种的溶剂组合，最后才找到石油醚—EtOAc—HCOOH（5.5：3.5：0.1）混合溶剂。

一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例（或者加入第三种溶剂）,达到最佳效果；如果没有分开的迹象（斑点较“拖”），最好是换溶剂。

对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质，在展开剂里往往加一点点三乙胺，氨水，吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性。

B. Gibb’s 反应 E. 三氯化铝反应
C. Emerson 反应
4．游离香豆素可溶于热的氢氧化钠水溶液，是由于其结构中存在（ B. 亚甲二氧基 E. 酮基 C. 内酯环
）
B. 对羟基桂皮酸
C. 反式邻羟基桂皮酸
E. 苯骈 γ-吡喃酮 ） B.2，6-二氯（溴）苯醌氯亚胺 D. 三氯化铁—铁氰化钾 ）
三、选择填空
1. Gibb's反应呈阳性结果的化合物是（
A
）
B
O
O
O
HO
O
O
C HO O O
D
O
O
O
2.下列香豆素类化合物在硅胶吸附薄层上的Rf值大小顺序为：
(1) (2) HO
HO
O
O
HO
O
O
(3)
glcO
(4)
HO
O
O
O
O
O
A. ④①②③
B. ③②①④
C.①②③④ ）
D.④③①②
3．鉴别香豆素首选的显色反应为（ A. 三氯化铁反应 D. 异羟酸肟铁反应 A. 甲氧基 D. 酚羟基对位的活泼氢 5．香豆素的基本母核为（ A. 苯骈 α-吡喃酮 D. 顺式邻羟基桂皮酸 6．Gibb′s 反应的试剂为（ A. 没食子酸硫酸试剂 C. 4-氨基安替比林-铁氰化钾 E. 醋酐—浓硫酸 ）
，适用于分离
三、选择题 (一)单选题
1．通常要应用碱性氧化铝分离，而硅胶色谱一般不适合分离的化合物为（ A. 香豆素类 D. 黄酮类化合物 B. 生物碱类 E. 酯类化合物 ） C. 聚酰胺色谱 C. 中性化合物 ）
2．原理为氢键吸附的色谱是（ A. 离子交换色谱 D. 硅胶色谱

天然药物化学1.红外光谱的单位是：（）A. cm-12.酶的专属性很高，可使β-葡萄糖苷水解的酶是：（）C. 纤维素酶3.最适于用活性炭分离的天然化合物是：（）C. 寡糖类4.当药材为花、果实时，采用碱溶酸沉法提取黄酮化合物，常用碱液宜选用（）E. 饱和石灰水5.不能作用于强心苷甾体母核的反应有（）B. α-萘酚一浓硫酸反应6.不属亲脂性有机溶剂的是：（）D. 丙酮7.甲型强心苷甾体母核C-17位连接的基团是：（）B. 五元不饱和内酯环8.下列中药中不含有蒽醌类成分的有（）E. 秦皮9.盐酸-镁粉反应鉴别黄酮类化合物，下列哪项错误（）D. 异黄酮多为负反应10.二氯氧锆-枸橼酸反应中，先显黄色，加入枸橼酸后颜色显著减退的是：（）A. 5-OH黄酮11.Ⅰ-型强心苷分子结合形式为（）C. 苷元-O-(2，6-二去氧糖)x-O-(α-羟基糖)y12.若某黄酮化合物在MeOH溶液中的紫外光谱与加入诊断试剂AlCIз/HCl后的紫外光谱均相同，提示该化合物（）C. 无3，5-二羟基13.不能用于鉴别甲型强心苷与乙型强心苷的试剂有（）C. 10%硫酸14.大黄素型蒽醌母核上的羟基分布情况是：（）D. 一个苯环的α或β位15.在大黄的总蒽醌提取液中，若要分离大黄酸、大黄酚、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、采用（）分离法最佳 E. pH梯度法与硅胶柱层析相结合的方法16.可以确定化合物分子量的波谱技术是：（）C. 质谱17.从水中萃取皂苷用下列哪种溶剂中溶解性最好（）D. 正丁醇18.下列结构应属于（）A. 螺甾烷醇类19.鉴别二氢黄酮类化合物的显色反应是：（）C. 四氢硼钠反应20.一般,酸性成分呈非解离状态.碱性成份成解离状态的pH条件为（） A. pH≤321.下列皂苷中具有甜味的是：（）B. 甘草皂苷22.构成黄酮类化合物的基本骨架是：（）D. 6C-3C-6C23.在含氧单萜中，沸点随功能基极性不同而增大的顺序应为（） A. 醚<酮<醛<醇<羧酸24.用葡聚糖凝胶分离下列化合物，最先洗脱下来的是：（）D. 番泻苷25.青蒿素结构中与抗疟活性有关的活性基因是：（）。

应加以注意。 含苷类成分时，则要避免接触酸，以防在提取过程中发生水解，而且应按提取苷类成分的常法事先破坏酶的活性。
利用内酯化合物在热碱液中，开环成盐而溶于水中，酸化后又闭环, 析出原内酯化合物的特性来提取倍半萜类内酯化合物。 萜类生物碱也可用酸碱法分离。
(三) 吸附法
n 1. 活性碳吸附法： 苷类的水提取液用活性碳吸附，
水中，酸化后又闭环, 析出原内酯化合物的 如倍半萜内酯可在碱性条件下开环，加酸后又环合，借此可与非内酯类化合分离；
萜类化合物，尤其是倍半萜内酯类化合物容易发生结构的重排，二萜类易聚合而树脂化，引起结构的变化，所以宜选用新鲜药材或迅速晾干 的药材，并尽可能避免酸、碱的处理。
特性来提取倍半萜类内酯化合物。但是当 (二) 碱提取酸沉淀法
n 2. 非苷类化合物的提取：用甲醇或乙醇为
溶剂进行提取，减压回收醇液至无醇味，残 留液再用乙酸乙酯萃取，回收溶剂得总萜类 提取物；或用不同极性的有机溶剂按极性递 增的方法依次分别萃取，得不同极性的萜类 提取物，再行分离。
(二) 碱提取酸沉淀法
利用内酯化合物在热碱液中，开环成盐而溶于 n 含苷类成分时，则要避免接触酸，以防在提取过程中发生水解，而且应按提取苷类成分的常法事先破坏酶的活性。
(ent-kaurane)二萜及其二聚体。
H3C
H3C
1
CH3
R1
R1 R2
CH2OH H3C
R2
H3C R3
R1
AcO
H3C
CH3
H3C
CH3
2 R1 =H R2 =CH2OH R3 =OH
5
3 R1=H R2=OH R3=CH2OH
4 R1=OAc R2=CH2OHR3=OH

第三章植物化学成分的提取所谓提取，就是用适当的溶剂或适当的方法将植物的化学成分从植物中抽提出来的过程。

任何一种溶剂或任何一种方法提取得到的提取液和提取物，是包含多种化学成分的混合物称为总提取物，尚待进一步分离和精制。

那么，传统的提取方法有哪些呢：溶剂提取法、水蒸气蒸馏法、超临界流体提取法、升华法等。

本节重点掌握：溶剂提取法的原理，化学成分的极性、常用溶剂、极性大小顺序及提取溶剂的选择；常见的提取方法及应用范围。

重点介绍溶剂提取法。

第一节传统的提取方法一、溶剂提取法溶剂提取法的提取原理：根据植物中各成分在溶剂中的溶解度的差异，选用对活性成分溶解度大，对不需要溶出的成分溶解度小的溶剂，而将有效成分从药材组织内溶解出来的方法。

这是植物化学成分提取最常用的方法。

当溶剂加到经适当粉碎的药材中时，溶剂由于溶剂由于扩散、渗透作用逐渐通过细胞壁透入到细胞内，溶解了可溶性物质，而造成细胞内外的浓度差，于是细胞内的浓溶液不断向外扩散，溶剂又不断进入药材组织细胞中，如此多次往返，直至细胞内外溶液浓度达到动态平衡时，将此饱和溶液滤出，继续多次加入新溶剂，就可以把所需要的成分近于完全溶出或大部溶出。

化学成分在某种溶剂中的溶解度大小遵循“相似相溶”的规律：即亲脂性的化学成分易溶于亲脂性的溶剂，难溶于亲水性的溶剂；反之，亲水性的化学合成分易溶于亲水性的溶剂，难溶于亲脂性的溶剂。

这种亲脂性和亲水性的强弱直接与化学成分或溶剂的分子结构相关，我们可通过其极性的大小来估计它的亲脂性或亲水性。

这也是选择提取溶剂最重要的依据。

那么，影响化学成分极性的因素有哪些呢？一般来说：(1)分子大、碳数多，极性小、亲脂性强；分子小、碳数少，极性大、亲水性强。

(2)在化合物基本母核相同或相近情况下，化合物极性大小主要取决于取代基极性大小，取代基的极性越大或数目越多，则整个分子的极性越大，亲水性越强，而亲脂性越弱；其分子非极性部分越大，则极性越小，亲脂性越强，而亲水性就越弱。

确定供试品取样量、提取和纯化方法、点样量等条件
选择合适的对照物质，确定对照物质用量、 浓度、溶剂、点样量等
中药材薄层色谱鉴别
验证
专属性 重复性 耐用性 重现性
多来源药材、饮片的色谱行为是 否一致 混淆品的区别 斑点是否重叠
不同品牌的薄层板或自制薄层板考察 考察至少2~3个品牌或厂家的薄层板，
不同温度、湿度考察，在5℃~35℃ 考察高低2个温度；在低相对湿度 （RH）15~30%和高相对湿度75~90% 各考察一个相对湿度
薄层色谱技术在中药标准的优势
薄层色谱独有的特点是分析结果以直观的 彩色图像表达，为其它色谱技术所不能。 而图像给出的多层面的信息是文字难以表 达的，而且丰富多彩的图像可以给分析者 更多的思考判断的空间。
提供直观的彩色图像是薄层色谱独有的特点
离线操作的灵活性
各单元操作既有关联，又相互独立，点样 器材和方法、展开方式、显色试剂选择、 直观比较或扫描比较可根据需要灵活变通。 根据需要操作可以视实际需要和实验室条 件分层次进行和终止，节省分析时间和资 源。
（2）尽可能采取一个供试液多项多维鉴别使用的薄层色谱方法，达到 节约资源、保护环境、简便实用的目的
（3）注意”过柱“的影响，不同品牌、不同批号的吸附剂吸附能力有的不同
（4）对原方法的验证注意原标准点样量按手铺板制定，现用市售薄层板点 量过大分离度差，点样量可减少
薄层色谱应用的影响因素
样品预处理 薄层色谱的点样技术 吸附剂活性 溶剂蒸汽在薄层色谱中的应用 温湿度对薄层色谱的影响 薄层色谱的优化及溶剂系统（展开剂）的
相对湿度对薄层色谱的影响
一般而言，湿度越低， Rf值越低； 相对湿度是影响薄层色谱重现性差的主要

作者 吕华冲
题目编号： 0503 第 5 章 2 节 页码
难度系数： C (A B C 三级，A 简单，C 最难)
题目：调节溶液的 pH 改变分子的存在状态影响溶解度而实现分离的方法有
答案 A
醇提水沉法
答案 B
酸提碱沉法
答案 C
碱提酸沉法
答案 D
醇提丙酮沉法
正确答案： BC
题目编号： 0504 第 5 章 2 节 页码 难度系数： B (A B C 三级，A 简单，C 最难)
题目编号： 0506 第 5 章 2 节 页码
难度系数： C (A B C 三级，A 简单，C 最难)
题目：用系统溶剂法提取天然药物成分中的游离生物碱、香豆素等化合物时可选用
答案 A
水
答案 B
碱水
答案 C
氯仿
答案 D
乙醇
正确答案： CD
编号方法：题目编号按章编号：章号在前占 2 位，共用四位数。如简答题第十一章第二题： 1102 答题卡请同时提供电子版文档，如果某种类型题没有，就不用填该类型卡。如果提供卡中有没有所须类型，可仿照设计
试题库出题卡 1 单选题 教材名称
题目编号： 0509 第 5 章 2 节 页码
天然药物化学
作者 吕华冲
难度系数： A (A B C 三级，A 简单，C 最难)
题目：系统预试液石油醚提取部分可检查的成分是
答案 A
油脂
答案 B
单宁
答案 C
强心苷
答案 D
生物碱
正确答案： A
题目编号： 0510 第 5 章 2 节 页码 题目：中药黄芩中有效成分属于
难度系数： B (A B C 三级，A 简单，C 最难)

展开剂的选择以及常用溶剂极性表选择适当的展开剂是首要任务。

一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷〈己烷<苯〈乙醚Petroleumether/Ethylacetate，petroleumether/Acetone,Petroleumether/Ether, Petroleumether/CH2Cl2，ethylacetate/MeOH，CHCl3/ethylacetate展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂,然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。

展开剂的选择条件:①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开;③待测组分的Rf在0。

2~0.8之间，定量测定在0。

3～0。

5之间;④不与待测组分或吸附剂发生化学反应;⑤沸点适中，黏度较小；⑥展开后组分斑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制.一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离;中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；强极性溶剂,由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇,乙酸乙酯等来调节,适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。

很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。

我们在实验中，为了实现一个配体与其他杂质有效分离，曾经尝试了很多种的溶剂组合，最后才找到石油醚—EtOAc-HCOOH（5.5：3.5：0。

1）混合溶剂。

一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例（或者加入第三种溶剂）,达到最佳效果;如果没有分开的迹象（斑点较“拖”），最好是换溶剂。

对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质,在展开剂里往往加一点点三乙胺，氨水，吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性。

天然药物化学各章习题及参考答案天然药物化学各章习题及答案(答案见最后) （第⼗、⼗⼀不是重点，没有）第⼀章（⼀）⼀、名词解释1、⾼速逆流⾊谱技术2、超临界流体萃取技术3、超声波提取技术4、⼆次代谢过程⼆、以下每⼀道考题下⾯有A、B、C、D、四个备选答案。

请从中选择⼀个最佳答案。

1、纸层析属于分配层析, 固定相为：（）A. 纤维素B. 展开剂中极性较⼩的溶液C. 展开剂中极性较⼤的溶液D. ⽔2、硅胶⾊谱⼀般不适合于分离（）Ａ、⾹⾖素类化合物Ｂ、⽣物碱类化合物Ｃ、酸性化合物Ｄ、酯类化合物3、⽐⽔重的亲脂性有机溶剂有：A. CHCl3B. 苯C. Et2 OD. ⽯油醚4、利⽤溶剂较少提取有效成分较完全的⽅法是：Ａ、连续回流法Ｂ、加热回流法Ｃ、渗漉法Ｄ、浸渍法5、由甲戊⼆羟酸演变⽽成的化合物类型是A. 糖类B. 萜类C. 黄酮类D. ⽊脂素类6、调节溶液的pH改变分⼦的存在状态影响溶解度⽽实现分离的⽅法有A．醇提⽔沉法B．铅盐沉淀法C．碱提酸沉法D．醇提丙酮沉法7、与⽔不分层的有机溶剂有：A. CHCl3B. 丙酮C. Et2 OD. 正丁醇8、聚酰胺层析原理是A物理吸附B氢键吸附C分⼦筛效应D、化学吸附9、葡聚糖凝胶层析法属于排阻层析，在化合物分离过程中，先被洗脱下来的为：A. 杂质B. ⼩分⼦化合物C. ⼤分⼦化合物D. 两者同时下来三、判断对错1、某结晶物质经硅胶薄层层析，⽤⼀种展开剂展开，呈单⼀斑点，所以该晶体为⼀单体。

( )2、糖、蛋⽩质、脂质、核酸等为植物机体⽣命活动不可缺少的物质，因此称之为⼀次代谢产物。

（）3、⼆氧化碳超临界流体萃取⽅法提取挥发油，具有防⽌氧化、热解及提⾼品质的突出优点。

（）4、⾊谱法是分离中药成分单体最有效的⽅法（）5、铅盐沉淀法常⽤于中药⽣产中除去杂质。

（）6、植物成分的⽣物转化，可为⼀些化合物的结构修饰提供思路，提供新颖的先导化合物。

（）7、在活性筛选⽅法的指导下进⾏化合物的分离提取要求分离⼯作者与活性测试⼈员两个⽅⾯的配合。

此法最适用于大量样品的快速可重复的预试提取。
五、提取溶剂的选择
提取溶剂应不易形成人 为产物并具有低毒、低易燃 性和低爆炸性风险。
此外，选择的溶剂还应 便宜和易于蒸发回收，这在 大规模溶剂提取时尤为重要。
常用溶剂性质
第 3 节 经典的分离纯化方法
常用方法原理：根据物质的 溶解度差异 在两相溶剂中的分配比不同 吸附性差异 分子大小差别 离解程度不同
凝胶滤过法凝胶三维网状结构的分子筛超滤法分子大小不同引起的扩散速度的差别原理分子筛分离按分子由大到小顺序先后流出并得到分离应用蛋白质核酸多糖类等大分子的分离种类葡聚糖凝胶sephadexg在水中使用羟丙基葡聚糖凝胶sephadexlh们与水混合的溶剂中使用五离解程度不同和电泳法chchchchchsochchchchchso固定相流动相酸性物质和中性物质碱性物应用酸性碱性及两性化合分离模式试样强酸性阳离子交换树脂h流出液酸性和中性物流出液中性物质洗脱液酸性物质稀naoh溶液洗脱洗脱液碱性和两性物质nh水溶液洗脱流出液强碱性阴离子交换树脂oh碱性物质洗脱液两性物质稀hcl溶液洗脱有两个化合物酸通过弱碱性离子树脂柱时哪个先洗脱
要求研究者必须制定系统、严谨和全面的提取 分离方案才能使研究结构真实地反映天然药物 原有的药效活性
第 1 节 天然药物的提取分离过程
提取分离前的文献调研
1. 立题着眼点 1) 为什么要立题 2) 怎样做
2. 了解前人的研究工作 1) 做过研究没有? 2) 研究的深度和广度
3. 原植物的鉴定 1) 原植物的拉丁学名 2) 采集地点和时间 3) 药及部位 4) 民间药用情况
❖ 这些段可以是明显的、客观上相对独立的部分，如 液-液萃取中的两相，也可以是从色谱柱中依次流 出的分段洗脱物

天然药物提取分离方法
1、硅胶色谱和氧化铝色谱 ------极性吸附剂
1）吸附三要素：吸附剂、溶质、溶剂
天然药物提取分离方法
2）吸附特点：
① 对极性物质的亲和力强
② 上样：用极性弱的溶剂 ③ 洗脱时：用极性较强的溶剂
3）分离依据：
化合物极性差异越大，吸附性差异越大， 则分离效果越好。
天然药物提取分离方法
（四）、超声波辅助提取法
原理：空化作用和搅拌作用 特点：①不改变有效成分的化学结构
②提高提取效率
天然药物提取分离方法
二、分离方法 （一）根据溶解度差异分离
1、改变温度引起物质溶解度改变进行分离 主要包括：结晶与重结晶
待分离的物质
溶于选择的溶剂，加热成饱和溶液，过滤
溶液
放置（冷藏）析晶，过滤
粗结晶
石油醚＜四氯化碳＜苯＜二氯甲烷＜氯仿＜乙醚 ＜乙酸乙酯＜正丁醇＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水
亲水性（极性）：小 → 大 亲脂性（非极刑）：大 → 小 比水重的有机溶剂：三氯甲烷 与水分层的有机溶剂：石油醚→正丁醇 与水可以任意比例混溶的有机溶剂：丙酮→甲醇
天然药物提取分离方法
2、化合物的极性判断
① 常见官能团极性比较 羧基＞酚羟基＞醇羟基＞氨基＞酰氨基 ＞醛、酮＞酯基＞醚基＞烯基＞烷基
天然药物提取分离方法
3）渗漉法
基本过程： 药材浸润→装筒→浸渍→渗漉
天然药物提取分离方法
（二）、蒸馏法 适用于挥发性物质的提取，如挥
发油、小分子的香豆素类、小分子的 醌类成分。
天然药物提取分离方法
天然药物提取分离方法
（三）、升华法 适用于遇热挥发，遇冷凝固的物质。
如樟脑、咖啡因。
咖啡因
天然药物提取分离方法

天然药物化学考试题绪论回答下列问题:1. 简述中药有效成分常用的提取、分离方法。

2. 简述溶剂提取法的原理。

为何采用递增极性的溶剂进行逐步提取？3. 请将常用溶剂按极性由弱到强排序。

并指出哪些溶剂与水混溶？哪些溶剂与水不分层？4. 采用溶剂法提取中药有效成分时，如何选择溶剂？5. 水、乙醇、石油醚各属于什么性质溶剂？有何优缺点？6. “水提醇沉”和“醇提水沉”各除去什么杂质？保留哪些成分？7. 下列溶剂系统是互溶还是分层？何者在上层？何者在下层？①正丁醇-水；②丙酮-水；③丙酮-乙醇；④氯仿-水；⑤乙酸乙脂-水；⑥吡啶-水；⑦石油醚-含水甲醇；⑧苯-甲醇。

8. 简述影响溶剂提取法的因素。

为什么药材粉碎过细，反而影响提取效率？为什么不必要无限制延长提取时间？9. 举例说明酸碱溶剂法在中药有效成分分离中的应用。

10. 溶剂分配法的基本原理是什么？在实际工作中如何选择溶剂？11. 吸附色谱分离中药化学成分的原理是什么？简述硅胶、氧化铝、聚酰胺、活性炭这四种吸附剂的主要用途和特点。

12. 简述凝胶过滤色谱的原理。

SephadexLH-20与Sephadex G有何区别？在中药有效成分分离中有何应用？13. 简述离子交换色谱法的分离原理及应用。

14. 大孔树脂色谱分离中药化学成分有何特点？简述其操作过程。

15. 简述分配色谱的分离原理。

用水为固定相的纸色谱和用水为固定相的硅胶分配色谱，展开剂应如何处理？16. 在对中药化学成分进行结构测定之前，如何检查其纯度？17. 简述确定化合物分子式的方法。

18. 简述IR、UV、NMR、MS在测定中药化学成分结构中的应用。

19. 从某中药中分离得到一种结晶性化合物，如何弄清它的化学结构？(c) 2008 中国药科大学中药学院.(c) 2008 中国药科大学中药学院.(c) 2008 中国药科大学中药学院.萜类化合物习题三萜及其苷类习题问答题 1. 为什么含有皂苷的中药一般不能作成注射剂？为什么含人参皂苷能作成注射剂？ 2. 简述三萜皂苷的检识方法。

过柱子的经验总结单一溶剂的极性大小顺序为：石油醚（小）→环己烷→四氯化碳→三氯乙烯→苯→甲苯→二氯甲烷→氯仿→乙醚→乙酸乙酯→乙酸甲酯→丙酮→正丙醇→甲醇→吡啶→乙酸（大）混合溶剂的极性顺序：苯∶氯仿（1+1）→环己烷∶乙酸乙酯（8+2）→氯仿∶丙酮（95+5）→苯∶丙酮（9+1）→苯∶乙酸乙酯（8+2）→氯仿∶乙醚（9+1）→苯∶甲醇（95+5）→苯∶乙醚（6+4）→环己烷∶乙酸乙酯（1+1）→氯仿∶乙醚（8+2）→氯仿∶甲醇（99+1）→苯∶甲醇（9+1）→氯仿∶丙酮（85+15）→苯∶乙醚（4+6）→苯∶乙酸乙酯（1+1）→氯仿∶甲醇（95+5）→氯仿∶丙酮（7+3）→苯∶乙酸乙酯（3+7）→苯∶乙醚（1+9）→乙醚∶甲醇（99+1）→乙酸乙酯∶甲醇（99+1）→苯∶丙酮（1+1）→氯仿∶甲醇（9+1）过柱子经验总结1, 选柱子:现在见到的柱子径高比一般在 1:5-10.2, 称量:100-300 目硅胶,称 30-70 倍于上样量;如果极难分,也可以用 100 倍量的硅胶书中写硅胶量是样品量的 30-40 倍,具体的选择要具体分析.如果所需组分和杂质分的比较开(是指在所需组分 Rf 在 0.2--0.4,杂质相差 0.1 以上) ,就可以少用硅胶.3, 选洗脱剂:一般淋洗剂是采用 TLC 分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂.极性小的用乙酸乙酯:石油醚系统;极性较大的用甲醇:氯仿系统;极性大的用甲醇:水:正丁醇:醋酸系统.要使所需点在 Rf 值在 0.2-0.3 左右的比较好.常用溶剂的极性顺序:石油醚<环己烷/己烷<苯乙醚<氯仿<乙酸乙酯 <正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<水. 一般把两种溶剂混合时, 采用高极性/低极性的体积比为 1/3 的混合溶剂. 拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸. 乙酸乙酯/石油醚= 4:1 可用 TLC 分开.乙酸乙酯和石油醚(60-90).4, 搅成匀浆:先把硅胶泡在烧杯中,用干硅胶体积一倍的溶剂泡,用超声波超半个小时,中间看到气泡时用玻璃棒搅一下.如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系,就用石油醚拌;如果洗脱剂是氯仿/醇体系,就用氯仿拌.5, 装柱: A, 用溶剂把柱子饱和一次, 因为溶剂和硅胶饱和时放出的热量可能使产品分解. B,将柱底用棉花塞紧,不必用海沙,加入约 1/3 体积石油醚(氯仿),装上蓄液球,打开柱下活塞,将匀浆一次倾入蓄液球内.随着沉降,会有一些硅胶沾在蓄液球内,用石油醚(氯仿)将其冲入柱中. C,装柱时一定要保证无气泡,同时敲打柱体使柱体更均匀,紧凑,装毕,用洗脱液冲三次.6, 压实:装柱完后,加入更多的石油醚,用双联球或气泵加压,直至流速恒定. 柱床约被压缩至 9/10 体积.无论走常压柱或加压柱,都应进行这一步,可使分离度提高很多,且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂.7, 上样:干法湿法都可以. A,在硅胶上层加少量无水硫酸钠(以免样品被洗脱剂冲散)取适量样溶液上样.上样后,加入一些洗脱剂,再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面.然后就可以放心地加入大量洗脱剂,而不会冲坏硅胶表面. B,用少量的溶剂溶样品加样,加完后将下面的活塞打开,待溶剂层下降至石英砂面时,再加少量的低极性溶剂,然后再打开活塞,如此两三次,一般石英砂就基本是白色的了.加入淋洗剂,一开始不要加压,等溶样品的溶剂和样品层有一段距离(2～4cm 就够了) ,再加压,这样避免了溶剂(如二氯甲烷等)夹带样品快速下行.8, 过柱和收集:柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡.太低的洗脱强度并不好,推荐用梯度洗脱.收集的例子:10mg 上样量,1g 硅胶 H,0.5ml 收集馏分;1-2g 上样量,50g 硅胶(200-300 目) ,20-50ml 收集馏分.接收瓶一定要用可密封的.柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂,会被淋洗剂带到产品中的.9, 用少量的溶剂溶样品加样,加完后将下面的活塞打开.10,检测.要更多地使用专用喷显剂,如果仅用紫外灯,会损失较多产品,紫外的灵敏度一般比喷显剂底 1-2 个数量级.11, 送谱. 收集的产品旋干, 在送谱前通常需要重结晶. 如果样品太少或为液体, 可过一小凝胶柱,作为送谱前的最后纯化手段.可除去氢谱 1.5ppm 左右所谓的 "硅胶"峰.过柱子的经验常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。

常用有机溶剂的极性由强到弱的顺序为：
（水）>乙腈>甲醇>乙酸>乙醇>异丙醇>丙酮>二氧六环>正丁醇>正戊醇>乙酸乙酯>乙醚>硝基甲烷>二氯甲烷>苯>甲苯>二甲苯>四氯化碳>二硫化碳>环已烷>正已烷（石油醚）>正庚烷。

剂洗脱能力：对于反相填料（如C18），溶剂洗脱能力由强到弱依次为：
己烷>甲烷>氯仿>二氯甲烷>乙醚>丙酮>乙腈>甲醇>水
对于正相填料（如硅胶），溶剂洗脱能力正相反，由强到弱依次为：水>甲醇>乙腈>丙酮>乙醚>二氯甲烷>氯仿>甲烷>己烷常用溶剂的极性顺序为：石油醚＜已烷＜环已烷＜四氯化碳<三氯乙烯<二硫化碳<甲苯<＜苯＜二氯甲烷＜氯仿＜乙醚＜乙酸乙酯
＜丙酮<丙醇<乙醇＜甲醇＜乙腈＜水<吡啶<乙酸。

溶剂的极性
溶剂的极性大小,可用溶剂强度表示,溶剂强度大致如下：
呋喃＜二氧六烷＜丙酮＜醋酸乙酯＜乙腈＜甲醇＜水
正庚烷＜正已烷＜环已烷＜C C L4＜苯＜乙醚＜C H C L3<C H2C L2＜四氢。