药物分离试验

一、实验目的本实验旨在通过药物敏感试验，了解病原菌对各种抗生素的敏感性，为临床合理选用抗生素提供科学依据，以指导临床治疗，提高治疗效果。

二、实验原理药物敏感试验是微生物学实验中的一种重要方法，其原理是通过观察细菌在含有不同浓度抗生素的培养基上的生长情况，来判断细菌对该抗生素的敏感性。

当细菌对某种抗生素敏感时，其在含有该抗生素的培养基上生长受到抑制，形成抑菌圈；反之，当细菌对该抗生素不敏感时，其在含有该抗生素的培养基上仍能生长。

三、实验材料1. 样本：临床分离的细菌菌株2. 培养基：琼脂平板、肉汤培养基3. 抗生素：青霉素、链霉素、红霉素等4. 仪器：恒温培养箱、显微镜、酒精灯、镊子等5. 试剂：生理盐水、消毒液等四、实验方法1. 样本处理：将临床分离的细菌菌株接种于肉汤培养基中，37℃培养18-24小时，观察细菌生长情况。

2. 琼脂平板制备：将肉汤培养基加热融化，待冷却至50-55℃时，加入抗生素纸片，轻轻摇匀，倒入平板，待凝固。

3. 抑菌圈测定：将培养好的细菌菌株接种于琼脂平板上，37℃培养18-24小时，观察抑菌圈的形成情况。

4. 结果记录：记录不同抗生素对细菌的抑菌圈直径，并按抑菌圈直径大小进行敏感性分级。

五、实验结果1. 青霉素：抑菌圈直径为20mm，敏感；2. 链霉素：抑菌圈直径为15mm，中敏感；3. 红霉素：抑菌圈直径为10mm，低敏感。

六、实验讨论1. 通过本实验，我们了解到青霉素对所检测的细菌菌株具有较好的敏感性，可以作为一种治疗该菌株感染的抗生素选择。

2. 链霉素对所检测的细菌菌株具有中敏感，可以作为一种辅助治疗药物。

3. 红霉素对所检测的细菌菌株具有低敏感，不建议作为首选治疗药物。

4. 在临床治疗过程中，应根据药物敏感试验结果，合理选用抗生素，以减少耐药菌株的产生。

七、实验结论本实验通过药物敏感试验，成功检测了细菌对各种抗生素的敏感性，为临床合理选用抗生素提供了科学依据。

实验结果表明，青霉素对所检测的细菌菌株具有较好的敏感性，可以作为一种治疗该菌株感染的首选抗生素。

第三部分药物分析实验内容实验一葡萄糖的分析一、目的要求1.掌握氯化物、铁盐、重金属限度检查的方法、原理、反应条件及其计算；2.正确使用纳氏比色管。

二、方法原理1.氯化物中国药典对氯化物的检查是利用氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银白色浑浊液，与一定量标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银浑浊液比较，浊度不得更大。

2.铁盐铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，再与一定量标准铁溶液用同法处理后所呈的颜色进行比较，颜色不得更深。

3.重金属硫代乙酰胺在弱酸性(pH3．5醋酸盐缓冲液)条件下水解，产生硫化氢，与微量重金属离子生(以pb2+为代表)生成黄色到棕黑色的硫化物混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较,颜色不得更深。

三、操作步骤1.氯化物取本品0.6g，置50ml纳氏比色管中，加水溶解使成25ml，再加稀硝酸10ml；加水使成约40ml，摇匀，即得供试溶液。

另取标准氯化钠溶液（10µgCl-/ml）6.00ml，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成约40ml，摇匀，即得对照溶液。

于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1ml，用水稀释至50ml，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，观察比较，即得。

2.铁盐取本品2.0g，加水20ml溶解后，加硝酸3滴，缓缓煮沸5分钟，放冷，移至50ml纳氏比色管中，加水稀释使成45ml，加硫氰酸铵溶液（30→100）3ml，摇匀，如显色，与标准铁溶液（10µgFe/ml）2.00ml用同一方法制成的对照液比较，不得更深。

3.重金属取纳氏比色管两支，甲管中加标准铅溶液（10µgPb/ml）2.00ml与醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml后，加水稀释使成25ml。

取本品4.0g，置于乙管，加水适量溶解后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml，加水稀释使成25ml；再在甲乙两管中分别加入硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深（含重金属不得过百万分之五）。

1.HPLC法测定大鼠血浆中的山奈酚1.1目的要求1.掌握血浆样品的前处理方法。

2.熟悉方法回收率和萃取回收率实验操作和评价。

3.熟悉大鼠眼眶采血技术；熟悉方法学研究中其他评价内容。

1.2 主要实验材料与仪器山奈酚（Kaempferol）及其对照品，黄芩素（baicalein），抗坏血酸，肝素，β-葡萄糖醛酸苷酶（β-glucuronidase）和硫酸酯酶（sulfatase），分析纯甲醇，冰醋酸、无水乙醚，色谱纯乙腈；高效液相色谱仪，氮吹装置，恒温水浴，漩涡混合器，13000r/min台式离心机，不同规格移液枪（5, 20, 50, 100, 200, 1000μL）和容量瓶（10，25mL），5~10mL 具塞离心管若干；雄性SD大鼠（180~220g）。

1.3 实验原理山奈酚吸收进入体内后，多以二相代谢物葡萄糖醛酸苷和硫酸酯的形式存在。

由于山奈酚葡萄糖醛酸苷和硫酸酯的对照品难以获得，故采用加入硫酸酯和葡醛酸苷水解酶处理样品，使代谢物水解后测定苷元山奈酚的浓度。

实验以黄芩素为内标，HPLC法测定血浆中山奈酚浓度，对建立的方法进行方法学评价。

1.4 实验方法1.色谱条件：C18柱（250mm×4.6mm，5μm），配保护柱，柱温40℃；乙腈-0.5%冰醋酸（35:65）为流动相，流速1mL/min；检测波长370nm；进样量20μL。

2.溶液配制：取山奈酚对照品约2.5mg，精密称定，置25mL量瓶中，用甲醇溶解并定容。

精密吸取适量，分别用甲醇稀释成0.3、0.6、3、6、9、20和30μg/mL的标准系列溶液，置4℃冰箱保存。

另取黄芩素适量，精密称定，用甲醇溶解并定量稀释至0.1mg/mL的溶液，精密吸取1.5mL置10mL量瓶中，用甲醇定容，得内标溶液，置4℃冰箱保存。

3.血浆样品处理：取大鼠血浆样品120μL，加入甲醇20μL、1%冰醋酸（含2mg/mL抗坏血酸）32μL、β-葡萄糖醛酸苷酶（20U/mL）和硫酸酯酶（6U/mL）的混合水溶液50μL，37℃水浴温育30min后，加入内标溶液50μL，然后加无水乙醚2mL，漩涡混合5min，于12000r/min离心5min；取上清液在氮气流下挥干，残留物用100μL 甲醇复溶，12000r/min离心5min，取上清液进样分析。

（医疗药品管理）天然药物化学实验指导书实验一一叶秋碱的提取分离与NATURAL MEDICINAL CHEMISTRY（天然药物化学）EXPERIMENTAL GUIDENCE（实验指导书）Edited byRongmin Yu(于荣敏)Chunyan Yan(严春艳)Yin Yin(殷茵)College of Pharmacy, Jinan UniversityDecember 2006PREFACE天然药物化学实验是整个天然药物化学课的重要组成部分。

主要目的为：1通过实验，了解学生在课堂上所学的基本理论知识的理解和掌握情况，并进一步加深学生对理性知识的理解和掌握。

2通过实验，训练学生的基本操作技能，培养学生分析问题和解决问题的能力，使学生获得从事天然药物化学科研工作的基本训练。

3天然药物化学实验要求学生掌握以下技能：3.1提取分离方面：3.1.1掌握常用提取分离方法的原理及操作：包括液－固提取法（渗渍、渗漉、回流提取）、液－液萃取法（简单萃取法、梯度萃取法、反流分布法）、重结晶法等。

要求学生了解常见溶剂的性能，并能较好地选择提取溶剂。

3.1.2掌握纸层析、薄层层析、柱层析（包括吸附柱离子交换层析）的原理及基本操作。

了解气相层析、高效薄层及高效液相层析的基本操作。

3.2鉴定方面3.2.1化学方法A 掌握一般定性反应鉴定中的应用B 掌握重要衍生物（乙酰化物、甲基化物、生物碱盐等）的制备方法及其在结构鉴定中的应用。

C 了解重要降解反应的原理及应用。

如碱降解、霍夫曼降解、臭氧氧化等。

3.2.2 光谱方法了解UV,IR,NMR,MS在天然产物结构测定中的应用。

目前，要求学生能了解黄酮类化合物的UV,NMR波谱，蒽醌的IR以及麻黄生物碱的NMR谱特征。

3.2.3天然产物的结构修饰要求学生了解天然产物结构改造的意义，并能进行某些简单的结构修饰工作，如由小檗胺制备檗肌松。

通过实验逐步培养学生独立进行实验的能力。

实验一天然产物化学成分系统预试验天然产物中所含的化学成分种类很多，在深入研究之前应首先了解其中含有哪些类型的化学成分，如生物碱、皂苷、黄酮类等等。

这就需要进行各类化学成分的系统定性预试验。

或根据研究的需要进行单项预试法来初步判断。

一、实验目的与要求掌握未知成分的天然产物是怎样初步提取分离的，熟悉各主要成分的试管试验、沉淀反应和纸层析、薄层层析的方法并根据试验结果判断含有什么类型的化学成分。

二、基本原理利用各类成分的颜色反应和沉淀反应，对天然产物的提取液进行检查可以初步判断其中的化学成分。

由于提取液大多数颜色较深，影响对颜色变化的观察，可以使用薄层层析（TLC）或纸层析（PC）等方法对天然产物的提取液进行初步分离，再进一步检查。

三、实验内容：利用不同成分在各种溶剂中的溶解度的不同，一般可采用以下3种溶剂分别提取，试验。

1．水浸液：取中草药粗粉5 g加水60 ml，在50~60℃的水浴上加热1小时，过滤，滤液进行下列试验。

下糖鉴定（1）α-萘酚一硫酸试剂检查还原糖。

①溶液I：10％α-萘酚乙醇溶液。

溶液II：硫酸。

取1ml样品的稀乙醇溶液或水溶液，加入溶液I 2滴～3滴，混匀，沿试管壁缓缓加入少量溶液II，二液面交界处产生紫红色环为阳性反应。

（2）斐林试剂检查还原糖。

溶液I：6．93g结晶硫酸铜溶于100ml水中。

溶液II：34．6g酒石酸钾钠、10g氢氧化钠溶于100ml水中。

取1ml样品热水提取液，加入4滴～5滴用时配制的溶液I、II等量混合液，在沸水浴中加热数分钟，产生砖红色沉淀为阳性反应。

如检查多糖和苷，取1ml样品水提液，加入1m110% 盐酸溶液，在沸水浴上加热10min，过滤，（成盐去除杂质）再用10％氢氧化钠溶液调至中性，按上述方法检查还原糖。

或者直接用高效液相色谱看色谱图。

酚类鉴定试剂（1）三氯化铁试剂检查酚类化合物、鞣质1％～5％三氯化铁水溶液或乙醇溶液，加盐酸酸化。

取1ml样品的乙醇溶液，加入试剂1滴～2滴，显绿、蓝绿或暗紫色为阳性反应。

药物鉴别试验的方法
药物鉴别试验是药品质量控制中必不可少的一环，主要用于鉴别药物的真实性、纯度和质量等方面。

下面我们介绍几种常见的药物鉴别试验方法。

1. 外观鉴别
外观鉴别是通过观察药物的外观特征来判断药物的真伪和质量。

例如，可以通过观察药物的颜色、形状、大小、表面光洁度等特征来判断药物是否符合标准。

但这种方法的准确性较低，只能作为初步鉴别手段。

2. 化学反应鉴别
化学反应鉴别是通过药物与特定试剂的化学反应来鉴别药物的
真伪和质量。

例如，可以使用费林试剂来检测药物是否含有苯丙氨酸，使用碘液来检测药物是否含有淀粉等。

这种方法操作简单，结果明显，但需要注意选择合适的试剂和反应条件。

3. 光谱鉴别
光谱鉴别是通过测量药物的光谱特性来鉴别药物的真伪和质量。

例如，可以使用红外光谱法来检测药物的分子结构，使用紫外 - 可见光谱法来检测药物的吸收光谱等。

这种方法具有较高的准确性和灵敏度，但需要专业的光谱仪器和操作技能。

4. 色谱鉴别
色谱鉴别是通过药物在色谱柱上的分离和检测来鉴别药物的真
伪和质量。

例如，可以使用薄层色谱法来检测药物的成分和纯度，使
用高效液相色谱法来检测药物的含量和杂质等。

这种方法具有较高的准确性和分辨率，但需要专业的色谱仪器和操作技能。

药物鉴别试验是保证药品质量的重要手段，不同的鉴别方法具有不同的优缺点，需要根据实际情况选择合适的方法。

教科园地155大黄中游离蔥醍提取、分离试验与教学改革◊铜仁职业技术学院药学院刘芸杨颖夏俊丽唐文文罗立娅刘彦彦为了更好的提高天然药物化学实验教学效果和配合教学改革。

本文以大黄的提取和分离为例，引导学生设计实验方案，做到教师为辅，学生为主体，调动主体学习的自主性，培养主体独立解决问题的能力，分析了实验教学中易犯错误及改进，探讨实验教学改革的新路径。

天然药物化学研究天然药物化学可以开辟扩大药物资源、促进新药开发，控制天然药物及其制剂的质量，探索天然药物预防治疗病原理，改进药物剂型，提高临床疗效，为天然药物炮制提供现代科学依据3」。

天然药物化学实验可帮助学生主体巩固理论，具备发现、解决问题能力，培养想动手能动手的学生，使其今后能胜任工作岗位和为祖国传统医药事业做贡献的需求。

在教师讲解基础理论的基础上，学生自主设计实验，教师修改实验方案，实验验证，对结果进行分析讨论，并发现、解决过程中出现的问题的方式叭充分调动学生主体学习的自主性，发挥其创造性，解决问题的能力。

1实验背景大黄为药用大黄、掌叶大黄、唐古特大黄的干燥根茎和根。

其中含2%~5%的多种类型的蔥醍类物质及其昔。

大黄恿醞具有广泛生理和药理活性，它具有致泻、抑菌、利尿、抗癌作用。

抑菌成分为游离性恵醍，致泻成分为结合性蔥醍昔类。

2实验步骤设计2.1确定实验选题在完成了“槐米中芦丁的提取与分离”实验取得一定效果后，再次选题考虑高职学生对蔥醍理论掌握程度、学生兴趣等因素，确定以“大黄中游离蔺醍提取与分离”为主题。

大黄蔥醍昔经酸水解可成昔元和糖类，大黄蔥醍昔元易溶于三氯甲烷，故可用来提取大黄蔥醍昔元。

化学结构大黄恿醞昔元和芦丁类似，大黄恿醞含有多个酚轻基，呈酸性，但各轻基恿醞类化合物酸性不同（根据酸性强弱，可溶于不同的碱），采用pH梯度萃取法将各单体昔元进行分离。

学生在回忆芦丁实验后，教师可以对实验目的和要求等进行讲解，学生主体对实验步剧礎计。

2.2设计实验方案实验前，进行分组：每组4~5名学生，设组长一名，组长负责组织制定实验方案并对成员的具体工作进行分工。

以此鉴别烟酸，反应式为:以此鉴别烟酸，反应式为: 药物分析实验指导书实验一烟酸原料药的鉴别实验一、实验目的1、 掌握鉴别烟酸的原理及方法2、 掌握紫外分光光度法鉴别烟酸的方法原理及紫外吸收图谱的解析3、 熟悉紫外分光光度计的操作要点及紫外分光光度法效能指标评价的内容 与要求、实验原理1、鉴别反应（1）烟酸加2,4-二硝基氯苯加热溶化后，生成季铵化合物，再加乙醇制氢 氧化钾溶液，即显紫红色，本反应需在无水的条件下进行（2）烟酸与氢氧化钠发生酸碱中和反应，遇石蕊试纸显中性，遇硫酸铜生 成淡蓝色烟酸酮沉淀，（3）烟酸加水溶解后，照紫外-可见分光光度法测定，在262nm 的波长处有 最大吸收，在237nm 的波长处有最小吸收，且237nm 波长处的吸光度与262nm 波 长处的吸光度的比值应为 0.35〜0.39 ;而烟酰胺也在262nm 的波长处有最大吸 收，在245nm 波长处有最小吸收，在+ NaOHA254nm/A262nn为0.63〜0.67。

因此可用该方法来区别烟酸和烟酰胺。

三、实验内容与操作（一）仪器和试剂1、仪器紫外分光光度计、配对比色杯一对、试管（25ml，2 支）、电炉、药物天平、烧杯（50ml, 2只）、容量瓶（100ml、10ml各2只）、移液管（1ml, 2 只）、乳钵（小号1 个，配乳槌）。

2、试剂烟酸、0.4%氢氧化钠试液（取氢氧化钠0.4g，加水使溶解成100ml，即得）、2,4-二硝基氯苯、乙醇制氢氧化钾试液（取氢氧化钾3.5g，加100ml95% 乙醇使溶解，静止后取上清液）、硫酸铜溶液（取硫酸铜12.5g ，加水溶解成100ml，即得），蒸馏水、95%乙醇（二）实验步骤1 、鉴别（1）取烟酸约4mg，加2,4-二硝基氯苯8mg研匀，置试管中，缓缓加热溶化后，再加热数秒钟，放冷，加乙醇制氢氧化钾试液3ml，即显紫红色。

（2）取烟酸约50mg加水20ml溶解后，滴加0.4%氢氧化钠溶液至遇石蕊试纸显中性反应，加硫酸铜试液3ml，即缓缓析出淡蓝色沉淀。