水中固定底物技术大肠菌群酶底物法检测系统

水中粪大肠菌群(耐热大肠菌群)两种检测方法的比较研究摘要：本文采用固定底物酶底物法与传统多管发酵法对水中粪大肠菌群进行比对试验，比较两者检测结果的一致性。

结果表明，两种方法在结果一致性方面相关性好，无统计学意义上的显著性差异，与多管发酵法相比，酶底物法具有简便快速、结果准确、特异、实验过程污染的可能性低、无二次污染等优点。

关键词：固定底物酶底物法多管发酵法粪大肠菌群Comparative Study on Two Detection Methods of Fecal Coliform in Water (Thermotolerant Coliforms )Luo Yun Liuzhou Environmental Protection Monitoring Station, Guangxi 545001Abstract: This paper conducts a comparative test on fecal coliform in water with Defined Substrate Technology(DST) enzyme substrate technique and traditional Multiple-tube fermentation technique and compares the consistency of detection results. The result shows that both methods have a good correlation in the consistency of results and there is no significant difference in statistical sense. Compared to multiple-tube fermentation technique, enzyme substrate technique has such advantages as simplicity, rapidness, accurate result, specificity, low possibility of pollution in the experimental process and secondary pollution avoided.Key words: Defined Substrate Technology(DST) enzyme substrate technique; Multiple-tube fermentation technique; Fecal coliform粪大肠菌群（耐热大肠菌群）是水质污染的重要指标之一。

酶底物法检测水中粪大肠菌群方法验证摘要：本文对《水质总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定酶底物法》HJ1001 -2018、《生活饮用水标准检验方法》GB/T5750-2006进行了方法验证，以评价该两种检测方法是否适用于水中粪大肠菌群的检测工作，以确保该方法能够满足水中粪大肠菌群的测定。

关键词：粪大肠菌群；质控样品。

引言：试样与固定底物酶底物法（DST）采用大肠菌群能产生β—半乳糖苷酶分解ONPG使培养液呈黄色的原理，来判断水样中是否含耐热大肠菌群，大肠菌群的培养温度是44.5℃。

1.测定方法与参数（注：方法为酶底物法法，参数为质控样品）2.仪器与设备2.1恒温培养箱2.2冰箱2.3高压蒸汽灭菌锅2.4烘箱2.5量筒2.6吸管2.7程控定量封口机2.8 51孔或97孔定量盘2.9无菌水样瓶（100mL）2.10阳性比色盘2.11干热灭菌器3培养基和试剂3.1无菌水3.2科立德（固定底物技术酶底物法）检测试剂：MMO-MUG培养基。

4.样品的采集和保存4.1采样前准备：4.1.1采样瓶：高压灭菌瓶。

4.2样品采样及注意事项4.2.1将已灭菌和封包好的采样瓶，无论在什么条件下采样时，均要小心开启包封纸和瓶盖，避免瓶盖及瓶子颈部受杂菌污染。

4.2.2在采集江，河湖，库，地表水时，可握住瓶子底部直接将采样瓶插入水中，约距水面10-15厘米时，瓶口朝来水方向，使水样灌入瓶内。

如果没有水流，可握住瓶子水平前推，直至充满水样为止。

采样后，迅速盖上瓶盖和包装纸。

采样后，采样瓶内上不应留有一些空隙，一边检验前充分混匀水样。

4.2.3从自来水龙头采集样品时，不要选用漏水的水龙头，采水前可先将水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌或用75﹪酒精溶液消毒水龙头，然后将水龙头打开，放水数分钟后除去水管中的滞流杂质。

采水时控制水流速度小心接入瓶内。

4.2.4在同一采样点进行分层采样时，应自上向下进行，以免不同层次的干扰；同一采样点与理化检测项目同时采样时，应先采集细菌等检验样品，否则样品可能被污染，采样前，不得用水样刷洗采样瓶。

接种量 （mL）
阳性孔数（个） 大孔 小孔
查表结果 （MPN/100mL）
检测结果 （MPN/L)
备注 XXXX-04-J071
分析人：
校核人：
审核人：
分析日期及时间：
XXXXXX 有限公司
2021 年 09 月 09 日颁布
水质总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌（酶底物法）分
析原始记录（续表）
培养温度℃培养时间 h 大肠埃希氏菌 黄色 无色
金黄色葡萄球菌 无色
培养温度℃培养时间 h 大肠埃希氏菌 黄色 无色
金黄色葡萄球菌 无色
培养温度℃培养时间 h 大肠埃希氏菌（耐热型） 黄色有荧光 无荧光
产气肠杆菌 无色
样品空白对照
样品编号
接种量 （mL）
阳性孔数（个） 大孔 小孔
接种量 （mL）
阳性孔数（个） 大孔 小孔
查表结果
（MPN/100mL）
检测结果
（MPN/L)
样品编号
接种量 （mL）
阳性孔数（个） 大孔 小孔
接种量 （mL）
阳性孔数（个） 大孔 小孔
接种量 （mL）
阳性孔数（个） 大孔 小孔
查表结果
（MPN/100mL）
检测结果
（MPN/L)
样品编号
接种量 （mL）
阳性孔数（个） 大孔 小孔
接种量 （mL）
检出限
10MPN/L
采样日期
样品描述
液态色澄清浑浊
样品种类 分析步骤
地表水地下水工业废水 生活污水 其他
环境条件
温度℃；湿度 RH%
1. 样品稀释：根据样品污染程度确定接种量，接种量为 10mL 时，取 10mL 样品加入到盛有

西安立科环保科技有限公司水质大肠菌群酶底物法检测系统介绍一、检测用途：酶底物法测定用途：用于检测水中总大肠菌群粪大肠菌群（耐热大肠菌群）和大肠埃希氏菌。

可用于检测水的类型：饮用水、水源水、废水、食品水、地表水、地下水、海水、瓶装水、中水、二次供水、管网水、畜牧用水、医疗用水等。

二、检测原理：酶底物法采用ONPG 和MUG 两种营养指示剂，这两种试剂分别可以被大肠菌群的β-半乳糖苷酶和大肠杆菌的β-葡糖醛酸酶分解代谢。

当大肠菌群在酶底物检测试剂中生长时，其使用β-半乳糖苷酶分解代谢ONPG，并使样品从无色变为黄色。

大肠杆菌使用β-葡糖醛酸酶分解代谢MUG 时，能够发出荧光。

三、优势特点：酶底物法为GB5750-2006收录的用于大肠杆菌检测标准方法，酶底物法是目前水中大肠杆菌检测的最先进方法，目前在发达国家水质大肠菌群检测分别占到95%和90%的市场，以其方便快捷，假阳性低，适用大量样品快速检测等优点正逐步被国内检测部门所认可。

相对于多管发酵和滤膜法，酶底物法检测步骤大大减少，而且对实验环境要求不高，检测时间可减少到24小时，在日常水样监测及应急监测中具有很好的应用前景，可及时检测，预防，最大限度的减少重大公共安全事故的发生几率。

以GB5750-2006中总大肠菌群测定为例，比较三种方法，如表所示。

表1 多管发酵法、滤膜法及酶底物法比较统计方法优势：1.无需在无菌室内操作。

2.手工操作时间小于1分钟。

3.无需培养基制备和大量玻璃器皿灭菌。

4.24小时即可完成定性定量分析，无需验证试验。

已经列入1.GB/T5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法》微生物指标。

产品特点：1.colitech酶底物法检测试剂，LK定量检测盘/定量孔板，LK定量瓶出厂前均已灭菌，客户可以直接放心使用。

2.colitech酶底物法检测试剂是我公司潜心研制并符合GB/T5750.12-2006的酶底物法培养基，假阳性和假阴性均优于传统方法。

微生物固定底物技术酶底物法测定仪原理：科立得--DST酶底物法是可在24小时内快速定量和定性检测“总大肠菌群及大肠埃希氏菌及粪大肠菌群”，其原理是利用了MMO-MUG特异性培养基的呈色和荧光反应，该方法比传统的滤膜法和多管法的假阳性和假阴性发生率更低，培养时间更短。

技术特点：1、DST酶底物法试剂完全符合《生活饮用水标准检验方法》的MMO-MUG 培养基，采用固定底物技术（DST）酶底物法，Snap包装。

200个/包。

能够精确检出100ml水样中单个的活性总大肠菌群和大肠埃希氏菌，以及粪大肠菌群，假阴性率低。

每个单位试剂可抑制200万个异养细菌，假阳性率低。

能够消除传统方法中的主观判断影响，准确性高于滤膜法及多管发酵法。

2006年被列入到《生活饮用水标准检验方法》（GB/T5750.12-2006），是国标认可的MMO-MUG培养基；经美国环保署的认可作为24 小时检验出厂水与源水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌或耐热大肠菌群（粪大肠菌群）的方法；通过水与废水检验的标准方法分析化学工作者协会 (AOAC) 、国际瓶装水协会 (IBWA) 及欧洲瓶装水协会 (EBWA)认证；中国、美国、加拿大、英国、德国、法国、日本、韩国、阿根廷、巴西、澳大利亚、新西兰、南非等50多国家及地区的饮用水，地表水，污水等检验标准。

年全球使用量超过数千万次，美国90%以上的实验室使用科立得试剂。

2、定量盘Quanti-tray或Quanti-tray 2000定量盘Quanti-tray（51孔定量盘），有50个标准孔格，1个大孔格。

无须稀释可检测200MPN/100ml总大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪大肠菌群Quanti-tray2000（97孔定量盘），有48个标准孔格，1个大孔格和48个小孔格，无须稀释可检测2419MPN/100ml总大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪大肠菌群3、无菌取样瓶含10%硫代硫酸钠10ml的无菌取样瓶，可定量100ml水样4、2009D程控定量封口机与符合《生活饮用水标准检验方法》固定底物技术（DST）酶底物法的MMO-MUG培养基配套使用的2009D程控定量封口机。

用 封 口机封 口。放 入 ４４．５ ℃±Ｏ．５ ℃培养 箱 中培 养 ２４小 时后进 行 结 果 判读 ，如 果结 果为 可疑 阳性 ，可 延长 培养 时 间到 ２８小时 ，超 过 ２８小 时之 后 出现 的颜 色反 应不 作 为阳性 结 果 。将 培养 ２４小 时
之 后 的定 量盘 取 出观 察 ，如果 孔 穴 内的水 样变 成黄 色 ，颜 色大 于 等 于 比色 盘颜 色 ，则表 示 该孔 穴 中含 有耐 热 大肠菌 群 。计 算有 黄
不能 对水 体 的卫生 学状 况 作 出快 速 评价 ，制 约其 应用 Ｉ１－２］。因此 ， 采用 快速 简 便的 检测 方法 十 分必 要 。与传 统方 法 相 比， 陶定酶 底
物法 可 以较 好的 弥补 传 统 疗法的 不足 ， 其具 有操 作简 便 易行 ，分 析速度 快 ， 高精 度 ，低 消耗 ，灵 活多 样 的特 点 ，适 用 于完 成大 批 量的 样 品分 析测 试工 作 ，可有 效 提高 水质 中 粪大肠 菌 群测 定 的准
热 大肠 菌群 的方 法 ｆ 。 酶底物 法 采用 ９７孔 定量 盘 ，此方 法是 一种 基于 ＭＰＮ 的方法 。
检 测所 需 水样 为 ｌｏｏ ｍＬ。用 １００ ｍＬ的无 菌取样 瓶量 取 １ｏ０ ｍＬ 水 样 ，加 入试 剂 ，混 摇 均 匀使 之 完全 溶 解 ，将 水 样 全部 倒 入 ９７ 孔 无 菌 定量盘 内， 以手抚 平 定量盘 背 面 以赶 除孔穴 内气泡 ，然 后
【中 图分 类号 】ＴＱ
［文 献标识 码］Ａ
【文 章编 １００７—１８６５（２０１７）１４·００８８—０２
Ｍ ｅｔｈｏｄ Ｖ＿ ｅｒｉｆ ｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｈｅｒｍ ｏｔｏｌｅｒａｎｔ Ｃｏｌｉｆｏｒｍ Ｂａｃｔｅｒｉａ Ｄ ｅｔｅｒｍ ｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ Ｗ ａｔｅｒ ｂｙ Ｅｎｚｙｍ ｅ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ

浅述酶底物法快速测定地表水中总大肠菌群与大肠埃希氏菌摘要：根据《生活饮用水卫生标准》中对微生物指示菌检测的方法要求，提出采取精确、快速、可靠的总大肠菌群及大肠埃希氏菌检测方法，通过试验方法对比、实际水样检测，比较酶底物法与多管发酵法、滤膜法用于生活饮用水地表水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的检测结果。

实验结果表明，酶底物法能够快速检测地表水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌，结果精确、快速、可靠，并认为在控制流行疾病的发生传播，从而保障公众健康安全有重要的预报价值和科学意义，同时鉴于我省大多数自来水公司的水质检测还没有增加此方法,建议今后该方法应得到普及和应用。

关键词：总大肠菌群；大肠埃希氏菌；酶底物法我国新的国家《生活饮用水卫生标准》（GB 5749-2006）中对生活饮用水、水源水、地表水等进行卫生评价时，总大肠菌群（Total coliforms）和大肠埃希氏菌（Escherichia coli）是判定水质是否被粪便污染的两个重要指标，尤其是大肠埃希氏菌是粪便污染最有意义的指示菌，已被世界上许多组织、国家和地区使用。

新的国家《生活饮用水卫生标准》中加入大肠埃希氏菌指标，限值为100mL 不得检出大肠埃希氏菌。

并注明：若检出总大肠菌群，必须进行耐热大肠菌群或大肠埃希氏菌检测。

若水样中检出耐热大肠菌群或大肠埃希氏菌，则说明水质可能受到严重污染，必须采取相应措施。

目前，新国标中对总大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定有三种标准方法，多管发酵法、滤膜法和酶底物法，其中多管发酵法和滤膜法是目前常用的传统检测方法，这两种方法设备简单，试验步骤较为繁琐，对操作人员专业水平要求较高，不利于应急检测，和对水的卫生学状况做出快速评价。

酶底物法检测水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌具有操作方便、快速；干预性结果容易判断等特点，适用于水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的快速检测，对于及时准确的监测饮用水、地表水和水源水粪便污染状况，从而有效预报和控制流行疾病的发生与传播有重要意义。

环境科学导刊http: //hjkxdk. . cn 2017，36 (5)CN53 -1205/X ISSN1673 -9655固定酶底物法测定水中粪大肠菌群的优点及影响因素杨晓冉，朱超，张付海，胡雅琴，张敏(安徽省环境监测中心站，安徽合肥230061)摘要：使用酶底物法和多管发酵法检测水质中的粪大肠菌群，结果表明，两种方法在统计学上并无 显著差异。

酶底物法具有操作快速简便的优点，检测灵敏度也高于多管发酵法。

酶底物法可以采用成品的 培养基及试剂，操作方便，无需确认试验，20 h即可判断水样中粪大肠菌群的MPN值，实验环境是否无 菌对酶底物法测定水中粪大肠菌群的影响不大，但是培养温度对结果影响较大。

关键词：粪大肠菌群；环境监测；酶底物法；多管发酵法；快速检测；影响因素中图分类号：X83 文献标志码：A文章编号：16乃-9655 (2〇n)05-O O87-〇4粪大肠菌群（Fecalcoliform)主要来自粪便，它在44 ~ 44. 5°C的高温条件下仍可生长繁殖并发 酵乳糖产酸产气，其他特性均与总大肠菌群(Totalcoliform)相同。

因此，可用提高培养温度 的方法造成不利于来自自然环境的大肠菌群生长的条件，使培养出来的菌主要为来自粪便中的大 肠菌群，从而更准确地反映出水质受粪便污染的情况。

粪大肠菌群细菌在卫生学上具有重要的意义。

目前水中粪大肠杆菌群（耐热大肠菌群）的检测方法主要有传统的多管发酵法和滤膜法，并且 已经列入环保行业标准方法，此两种传统方法被国 内环境检测部门广泛采用。

传统方法实验操做需要 较多的试剂和器材，步骤繁琐，检测周期较长，培 养基保存时间短，阳性结果需验证试验，对实验环 境的无菌程度要求也比较高，不能对水的卫生学状 况做出快速评价，制约了其应用。

固定底物酶底物法利用大肠菌群细菌能产生P -半乳糖苷酶（P-D galactosidase)分解 ONPG (Ortho- nitrophenyl- p - D galactopyranoside)使培养液呈黄色，来判断水样中是否含有大肠菌群、粪大肠菌群（耐热大肠菌群）。

固定底物技术酶底物法技术参数微⽣物固定底物技术酶底物法测定仪原理：科⽴得--DST酶底物法是可在24⼩时内快速定量和定性检测“总⼤肠菌群及⼤肠埃希⽒菌及粪⼤肠菌群”，其原理是利⽤了MMO-MUG特异性培养基的呈⾊和荧光反应，该⽅法⽐传统的滤膜法和多管法的假阳性和假阴性发⽣率更低，培养时间更短。

技术特点：1、DST酶底物法试剂完全符合《⽣活饮⽤⽔标准检验⽅法》的MMO-MUG 培养基，采⽤固定底物技术（DST）酶底物法，Snap包装。

200个/包。

能够精确检出100ml⽔样中单个的活性总⼤肠菌群和⼤肠埃希⽒菌，以及粪⼤肠菌群，假阴性率低。

每个单位试剂可抑制200万个异养细菌，假阳性率低。

能够消除传统⽅法中的主观判断影响，准确性⾼于滤膜法及多管发酵法。

2006年被列⼊到《⽣活饮⽤⽔标准检验⽅法》（GB/T5750.12-2006），是国标认可的MMO-MUG培养基；经美国环保署的认可作为24 ⼩时检验出⼚⽔与源⽔中总⼤肠菌群和⼤肠埃希⽒菌或耐热⼤肠菌群（粪⼤肠菌群）的⽅法；通过⽔与废⽔检验的标准⽅法分析化学⼯作者协会 (AOAC) 、国际瓶装⽔协会 (IBWA) 及欧洲瓶装⽔协会 (EBWA)认证；中国、美国、加拿⼤、英国、德国、法国、⽇本、韩国、阿根廷、巴西、澳⼤利亚、新西兰、南⾮等50多国家及地区的饮⽤⽔，地表⽔，污⽔等检验标准。

年全球使⽤量超过数千万次，美国90%以上的实验室使⽤科⽴得试剂。

2、定量盘Quanti-tray或Quanti-tray 2000定量盘Quanti-tray（51孔定量盘），有50个标准孔格，1个⼤孔格。

⽆须稀释可检测200MPN/100ml总⼤肠菌群和⼤肠埃希⽒菌或粪⼤肠菌群Quanti-tray2000（97孔定量盘），有48个标准孔格，1个⼤孔格和48个⼩孔格，⽆须稀释可检测2419MPN/100ml总⼤肠菌群和⼤肠埃希⽒菌或粪⼤肠菌群3、⽆菌取样瓶含10%硫代硫酸钠10ml的⽆菌取样瓶，可定量100ml⽔样4、2009D程控定量封⼝机与符合《⽣活饮⽤⽔标准检验⽅法》固定底物技术（DST）酶底物法的MMO-MUG培养基配套使⽤的2009D程控定量封⼝机。

水中大肠菌群快速检测方法－酶底物法与多管发酵法的比较《卫生研究》2006第3期孙宗科丁培薛金荣陈西平1吴榕2张雅婕3张淑红4遇晓杰5中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所，北京100021摘要：目的比较酶底物法与多管发酵法用于水中大肠菌群的检测。

方法应用加标试验和实际水样检测的方式，比较酶底物法与多管发酵法用于水中大肠菌群检测结果的一致性，以及假阳性率。

结果酶底物法与多管发酵法用于水中大肠菌群检测结果具有一致性，假阳性率无统计学意义的差别。

结论酶底物法可以用作评价水质微生物污染的标准方法。

关键词：大肠菌群酶底物法多管发酵法快速检测Comparison between rapid detection method of enzyme substrate technique and multiple-tube fermentation technique in water coliform bacteria detectionSun Zongke, Wu Rong, Chen Xiping, et al.Institute for Environment Hygiene and Health Related Product Safety, Chinese Centerfor Disease Control and Prevention, Beijing 100021, ChinaAbstract：In order to compare between rapid detection method of enzyme substrate technique and multiple-tube fermentation technique in water coliform bacteria detection, inoculated and real water samples are included in this experiment.Results demonstrate that enzyme substrate technique shows equivalence with multiple-tube fermentation technique. It is suggested that enzyme substrate technique can be used as a standard method for water microbiological safety evaluation.Key words：coliform bacteria, enzyme substrate technique,multiple-tube fermentation technique, rapid detection目前我国对生活饮用水、水源水、地表水等进行卫生学评价，检测的指标为大肠菌群（coliform bacteria）和粪大肠菌群(faecal coliforms)，以这两种指标作为粪便污染的指示菌。

酶底物光谱法与酶底物法检测水中大肠菌群的比较分析
王莉莉
【期刊名称】《净水技术》
【年(卷),期】2024(43)3
【摘要】采用新型酶底物光谱法和酶底物法对不同类型水样中总大肠菌群、大肠埃希氏菌及粪大肠菌群指标进行同步检测。

两种方法各有优势,采用SPSS软件对检测结果处理后进行配对t检验,结果显示:两组总大肠菌群的数据P=0.057,相关系数r=0.904;两组大肠埃希氏菌的数据P=0.593,相关系数r=0.972;两组粪大肠菌群的数据P=0.136,相关系数r=0.986,表明两种检测方法具有相关性,且没有统计学意义上的显著性差异。

采用酶底物光谱法检测有证质控样品,总大肠菌群、大肠埃希氏菌、粪大肠菌群的检测结果均在质控样真值范围内,证明该方法检测准确度符合要求。

酶底物光谱法与酶底物法相比,反应原理类似,操作更加简便,具有仪器自动化和智能化快速检测、判读、存储、联网传输数据等优点,可满足实验室常规检测需求,在应急突发事件现场检测方面有较强的运用前景和优势。

【总页数】7页(P187-193)
【作者】王莉莉
【作者单位】广西北投环保水务集团有限公司;南宁市水安全工程技术研究中心【正文语种】中文
【中图分类】TU991
【相关文献】
1.固定底物酶底物法与多管发酵法和快速纸片法测定水中粪大肠菌群(耐热大肠菌群)的比较
2.水中粪大肠菌群快速检测方法-固定底物酶底物法与多管发酵法的比较
3.饮用水中总大肠菌群的检测方法应用--滤膜法和酶底物法的比较分析
4.滤膜法与固定底物酶底物法测定地表水中粪大肠菌群的比较研究
5.滤膜法与酶底物法检测污水中粪大肠菌群的比较分析
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固定酶底物法测定生活饮用水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌精密度分析摘要：总大肠菌群目前作为评价水质的一项指标，是反映水样是否受到粪便污染的指标。

固定酶底物法是从美国引进的一种大肠杆菌新型检测方法。

该方法采用酶底物法测定生活饮用水中的总大肠菌群、大肠埃希氏菌，分析了不同浓度水样的精密度，低浓度水样的精密度为，1.6%、2.0%;中浓度水样的精密度为1.3%、1.8%;高浓度水样的精密度为2.0%、4.3%;阳性标准菌株的精密度均为0.86%。

关键词：酶底物法总大肠菌群大肠埃希氏菌精密度微生物常規检测指标为总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌。

它们均可作为检验肠道致病菌的指示菌，是进行卫生学评价的重要内容。

总大肠菌群是指一群在37 ℃培养24 h，能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌[1]。

总大肠菌群目前作为评价水质的一项指标，是反映水样是否受到粪便污染的指标[2]。

生活饮用水中针对大肠菌群、大肠埃希菌等的检测技术主要包括乳糖蛋白胨多管发酵法、滤膜法、固体酶底物法[3] ，其中多管发酵法为仲裁法[4]。

固定酶底物法[5]是从美国引进我国的一种大肠杆菌检测方法，此方法简单、方便、快速、无培养基的制作与干扰等优点[6]。

目前被美国、欧洲及大部分亚洲国家广泛应用于水中总大肠菌群、粪大肠菌群（耐热大肠菌群）及大肠埃希氏菌的检测。

并通过美国EPA、《水与废水标准检测方法》以及我国《生活饮用水标准检验方法》认证[7]。

1 实验部分1.1 材料与试剂1.1.1试剂在该实验中酶底物法所用酶底物法检测试剂 MMO-MUG 培养基，无菌定量瓶（带100 mL刻度），51孔定量检测盘均购买于西安立科环保科技有限公司。

1.1.2仪器设备隔水式恒温培养箱型号：GHP-9270，高压蒸汽灭菌器型号：LDZX-50KBS，程控定量封口机型号：LK-2010，手提式暗箱紫外分析仪型号：ZK-5。

1.1.3 标准菌株阳性标准菌株：大肠埃希菌菌种号CMCC（B）44102 来源：南京便诊生物科技有限公司;阴性标准菌株：铜绿假单胞菌菌种号CICC 21636来源：中国工业菌种保藏中心。

水检测底物酶法测生活饮用水大肠菌群摘要：由于传统方法在检测水中大肠菌群和大肠埃希氏菌需要48小时左右,且操作过程复杂,难以掌握。

现介绍一种快速简便的检测方法，根据生活饮用水国家卫生标准（gb/t5750-2021）中推荐的固定底物技术酶底物法可购买到市售化产品idexx公司的colilert试剂[1]。

用于检测100ml水样，只需手工操作2分钟，即可在24小时内同时定量检测出大肠菌群和大肠埃希氏菌。

此方法大大的减少了工作量，避免了使用多管法的逐级稀释带来的操作误差；也避免了使用滤膜法时肉眼读数的人为误差，所以其假阳性率和假阴性率都比传统方法低。

由于24小时内就得到结果，可以很好的用于突发事件应急。

关键词：大肠菌群大肠埃希氏菌固定底物技术酶底物法colilert试剂目前我国对生活饮用水、水源水、地表水等展开卫生学评价，检测的指标为大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪大肠菌群（耐磨大肠菌群），以这些指标做为粪便污染的指示菌。

使用的标准检测方法为曝气法和多管及发酵法。

但这两种方法检测时间相对较长，须要48—72小时，须要检验试验，试验步骤较为繁杂，所以无法对水的卫生学状况作出快速评价。

因此，使用快速方便快捷的检测方法十分必要。

紧固地物技术酶底物法可以较好的填补传统方法的严重不足。

2.原理[1]：紧固底物技术酶底物法（definedsubstratetechnology）使用大肠菌群细菌能够产生β-半乳糖苷酶（β-d-galactosidase）水解onpg（ortho-nitrophenyl-β-d-galactopyranoside）并使培养液呈圆形黄色，以及大肠埃希氏菌产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）水解mug（4-methyl-umbelliferyl-β-d-glucuronide）使培养液在波长366nm紫外光下产生荧光的原理，来判断水样中是否含有大肠菌群及大肠埃希氏菌。

固定底物技术酶底物法可以选用国标中推荐粉状培养基（idexx公司的coiliert试剂）来进行简便的操作；无需确认试验；固定底物技术酶底物法检测时间短，只需24小时即可同时定量出水样中大肠菌群和大肠埃希氏菌的mpn值。

水质大肠菌群检测标准和检测方法一、水质大肠菌群检测标准。

1.1 首先啊，咱得知道，在不同的用水场景下，大肠菌群的检测标准是不一样的。

比如说，咱们日常生活里的饮用水，那对大肠菌群的要求就非常严格。

按照国家标准啊，饮用水里的大肠菌群数那得是每100毫升不得检出。

这就好比是在一个干干净净的房间里，连一粒灰尘都不允许有，就是这么严格。

为啥呢？因为大肠菌群要是出现在饮用水里，那可就意味着这水可能被粪便污染了，这喝到肚子里，那还了得，简直就是“病从口入”的典型啊。

1.2 再看一些用于灌溉农作物的水，虽然要求没有饮用水那么严苛，但也有明确的标准。

一般来说，允许有一定数量的大肠菌群存在，但这个数量也是被严格限制的。

就像是在农田里，虽然不是像饮用水那样要求一尘不染，但也不能太“乌烟瘴气”，毕竟这水要是大肠菌群太多，也可能影响农作物的生长，甚至会让农作物带上病菌，这可就是“城门失火，殃及池鱼”了。

二、水质大肠菌群检测方法。

2.1 多管发酵法是一种很常用的方法。

这就像是一场细菌的“大排查”。

首先呢，把水样接种到含有乳糖的培养基里。

这乳糖啊，就像是给大肠菌群准备的“美食”。

然后呢，把接种后的培养基放在合适的温度下培养，一般是37摄氏度左右，这个温度就像是大肠菌群最爱的“安乐窝”温度。

如果水样里有大肠菌群，它们就会在这个培养基里大量繁殖，分解乳糖，产生气体和酸。

这个过程就像是大肠菌群在培养基里“开派对”一样，它们产生的气体就会让小导管里出现气泡，这时候我们就可以初步判断有大肠菌群存在了。

2.2 还有滤膜法。

这个方法有点像“筛沙子”。

把水样通过特制的滤膜，大肠菌群就会被截留在滤膜上。

然后把滤膜放到含有营养成分的培养基上培养。

经过一段时间的培养，大肠菌群就会在滤膜上形成一个个的小菌落。

这就好比是在一片空旷的土地上，大肠菌群建立起了自己的一个个“小部落”。

我们通过观察这些小菌落的数量和特征，就能知道水样里大肠菌群的情况了。

2.3 酶底物法也是一种比较新颖的检测方法。

在线酶底物法检测地表水中粪大肠菌群的适用性分析龚海燕【摘要】Combining with the relevant research on the detection of fecal coliforms using enzyme substrate technique,using online enzyme substrate monitoring method and standard methods-multiple tube fermenta⁃tion method,this article detected fecal coliforms in a river located in Shanghai and discussed the applicabil⁃ity of online enzyme substrate monitoring method on fecal coliforms detection in surface water. The results showed that there was no statistically significant difference(P>0.05)between this two methods. Compared with the multiple tube fermentationmethod,online enzyme substrate monitoring method has high specificity, short detection time,automatic sampling,automatic detection,little secondary pollution,can realize the real-time monitoring of surface water,drinking water and other important water source,which plays an important role in surface water quality monitoring and health evaluation.%结合酶底物法检测粪大肠菌群的相关研究，运用酶底物在线监测系统对上海市某河段进行检测，用标准方法-多管发酵法进行同步检测，讨论在线酶底物法在地表水中检测粪大肠菌群的适用性。

伴随我国社会的日益进步袁 酶底物法现如今也获得了广 泛地运用遥 酶底物法能够有效地去评测日常饮用水中的总大 肠菌群以及耐热大肠菌等菌体袁 也能够在同一个阶段一起监 测饮用水中大肠埃希菌等菌体袁采取这一手段的便捷程度尧灵 巧程度较高袁同时也拥有很强地抑制杂菌侵扰的功能袁可以不 要求再次地进行确认试验袁 报告水样的评测结论地导出一般 也只需要 24-28h 之间袁因其检测的周期较为短暂袁与其他的
对此袁 本文将对 97 孔以及 51 孔定量盘酶底物法检测日 常生活饮用水中总大肠菌群尧大肠埃希菌尧耐热大肠菌群结果 予以详尽地试验比较解析袁 希冀所得出的有关结论能够向后 续的相关研究者提供一定的参考意义遥
2 使用材料及其试验手段
2.1 使用样品的选取
质监测标准无法借助设备直接测量读出袁 必须采样后在实验 室内才能完成水质的测算遥 因此袁本系统还增加了水质分析管 理模块袁用于对实验室内完成的水质监测结果的更新遥
渊1冤实时数据采集引擎院首先本化工厂所有污水检测点所 采集的水质相关数据会存储在所属污水处理厂的关系数据库
当中袁在进行系统部署之后袁利用 Sqoop 可以将如上的历史数 据导入到 HDFS 当中遥这样袁就可以利用 Fum 额的实时数据采 集引擎实现对实时污水数据的存储遥
渊2冤基于 Hadoop HDFS 的大数据存储文件系统院由于实
渊4冤大数据分析院由于大量的终端传感器设备每时每刻都 在对污水进行水质检测袁 导致传输到系统当中的数据量十分 庞大袁必须采取有效的措施对这些数据进行处理遥 利用大数据 分析模块袁不仅可以实现对数据的初步处理袁完成冗余尧错误 数据的剔除操作袁而且还能利用相关的指标测量方法袁对数据 进行深度的分析计算袁 并以图表的形式将水质检测结果展出 来袁有效的提高了相关工作者的工作效率遥

酶底物法检测水中总大肠菌群田立平; 邢峰杰; 王晓波【期刊名称】《《供水技术》》【年(卷),期】2019(013)003【总页数】3页(P56-58)【关键词】总大肠菌群; 酶底物法; 影响因素【作者】田立平; 邢峰杰; 王晓波【作者单位】潍坊市市政公用事业管理处山东潍坊 261041【正文语种】中文【中图分类】O661与传统的多管发酵法、滤膜法相比，采用酶底物法检测总大肠菌群具有操作简便、检测时间短、无需进行确认试验等优势，广泛应用于水质检测等行业。

酶底物法和滤膜法、多管发酵法对总大肠菌群的检测结果具有一致性，不存在统计学差异[1-4]。

笔者结合实际情况，对酶底物法检测总大肠菌群过程中的质量控制因素进行了研究，以期为今后的工作提供参考与支持。

1 材料与方法1.1 材料与仪器科立得试剂、97孔定量盘、97孔阳性比色盘、程控定量封口机、DHP-9080电热恒温培养箱。

实验室用水：采用MilliPore纯水系统制备纯水，经平皿计数等实验检测符合实验要求。

使用时用121 ℃高压蒸汽灭菌20 min，制成无菌水。

1.2 样品来源潍坊市峡山水库地表水、潍坊市某地区地下水、潍坊市中心市区管网水以及饮用水总大肠菌群质控标样(批号为022718-1和021518)。

1.3 检测方法根据《生活饮用水标准检验方法》(GB/T 5750.12—2006)中的酶底物法和《城镇污水水质标准检验方法》(CJ//T 51—2018)中的酶底物法进行检测。

2 结果与分析在采用酶底物法检测饮用水总大肠菌群过程中，实验室内的质量控制硬件主要包括电热恒温培养箱、冰箱、立式高压蒸汽灭菌器以及培养基等。

在电热恒温培养箱和冰箱的使用过程中，采用检定合格的温度记录仪测定温度，控制箱内温度与设定温度差在±0.5 ℃内；定期用化学指示卡或者生物灭菌指示剂，检测立式压力蒸汽灭菌器的灭菌效果；培养基例如科立得试剂在使用前，进行大肠埃希氏菌标准菌株阳性实验和无菌性测试。