食品中胆固醇的测定
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食品中胆固醇含量测定方法的研究胆固醇是一种存在于人体细胞中,同时也存在于很多食物中的脂类,它在维持人体健康方面起着重要作用。
然而,高胆固醇摄入可能会导致心血管疾病的发生。
因此,了解食物中胆固醇含量的测定方法具有重要意义。
1. 传统测定方法传统的食品胆固醇含量测定方法是使用气相色谱法,该方法要求将样品中的胆固醇提取出来,并通过气相色谱仪分离和定量分析。
尽管该方法准确可靠,但其操作繁琐,耗时且昂贵。
因此,寻找更简单便捷的方法变得迫切。
2. 光谱测定方法近年来,一些研究者开始探索使用光谱技术测定食品中胆固醇含量。
例如,红外光谱和紫外-可见光谱可以准确地测定食品中的胆固醇含量。
这些光谱技术不需要样品前处理,操作简便,且可快速获得结果。
然而,这些光谱方法的准确性和可靠性仍需进一步验证。
3. 生物传感器测定方法生物传感器作为一种新兴的测定方法,被广泛应用于食品中营养成分的测定。
胆固醇传感器通过利用特定酶或抗体对胆固醇的选择性反应,来测定食品样品中胆固醇的含量。
此类方法具有操作简单、快速响应和高灵敏度等优点,但受到样品矩阵干扰的影响。
因此,相关研究需要进一步优化和完善。
4. 新兴技术的应用为了更好地测定食品中胆固醇含量,一些新兴技术也开始应用于相关研究中。
例如,质谱法能够快速准确地测定食品样品中的胆固醇含量,并能区别其同位素。
此外,核磁共振技术也可以被用来测定食品胆固醇含量,该方法无需样品前处理,且信息量丰富。
然而,这些新兴技术的耗材成本较高,仍需进一步的研究和开发。
总结起来,食品中胆固醇含量的测定方法不断发展和创新。
传统的气相色谱法虽然准确可靠,但操作繁琐。
一些新兴技术如光谱测定方法、生物传感器测定方法以及质谱法和核磁共振技术等也带来了便捷性和高灵敏度。
然而,这些方法仍需进一步验证和完善,以满足实际应用的需求。
随着科学技术的不断进步,相信未来一定会有更简单、快速和准确的方法用于测定食品中胆固醇含量,从而更好地保障人们身体健康。
食品中胆固醇的测定方法研究胆固醇是一种脂类物质,存在于动物源性食品中,如肉类、蛋类和奶制品中。
大量摄入胆固醇会增加心血管疾病的风险,因此对食品中胆固醇含量的准确测定具有重要意义。
本文将探讨当前用于测定食品中胆固醇的常见方法。
一、霉菌酶法霉菌酶法是目前广泛应用于胆固醇测定的方法之一。
该方法基于霉菌酶对胆固醇的选择性催化作用。
首先,将食品样品中的脂质提取出来,然后通过添加霉菌酶,使胆固醇转化为胆固醇酯。
接下来,通过酶反应或高效液相色谱等分析技术,测定出胆固醇的含量。
这种方法具有操作简单、结果可靠的优点,但也存在一些局限性。
由于霉菌酶只对胆固醇具有选择性催化作用,其他脂类物质可能会对测定结果产生干扰。
此外,该方法对样品的处理时间较长,且需要一些特殊试剂,增加了实验的复杂度。
二、氧化法氧化法是另一种常用的胆固醇测定方法。
这种方法利用氧化剂将胆固醇氧化为胆固酮,然后通过测定反应后的产物来确定胆固醇的含量。
目前常用的氧化剂包括酶、过氧化氢和碳氧化锌等。
氧化法具有测定速度快、操作简单的特点。
它适用于各种食品样品的胆固醇测定,且对其他脂类物质的干扰较小。
然而,氧化法可能会引起一些胆固醇的降解,从而影响测定结果的准确性。
此外,由于氧化剂的使用,需要一些特殊试剂和仪器设备,增加了实验的成本。
三、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种基于分子之间相互作用的测定方法。
该方法将胆固醇和其他脂类物质分离,然后通过检测分离出来的胆固醇来确定其含量。
高效液相色谱法可使用不同的检测器,如紫外检测器、荧光检测器和质谱检测器等。
高效液相色谱法具有分离效果好、测定结果准确的优点。
它可以对不同样品中的胆固醇进行定量分析,且对其他脂类物质的干扰较小。
然而,该方法的操作较为复杂,需要较长时间进行样品的处理和分析。
此外,高效液相色谱法需要一些昂贵的仪器设备和试剂,增加了实验的成本。
综上所述,目前主要有霉菌酶法、氧化法和高效液相色谱法等用于食品中胆固醇测定的方法。
法测定鸡蛋中胆固醇含量一、原理当固醇类化合物与酸作用时,可脱水并发生聚合反应,产生颜色物质。
因此可先对食品样品进行皂化和提取,用硫磷铁试剂作为显色剂,测定食品中胆固醇的含量。
在样品的冰乙酸提取液中加磷硫铁试剂,胆固醇与试剂反应产生紫红色化合物,颜色的深浅与胆固醇的量成正比,可用分光光度计在波长560nm•处测定。
二、实验仪器及试材1.仪器:分光光度计、水浴锅2.试剂:本实验用水均需用蒸馏水或去离子水。
试剂纯度均为分析纯。
(1)石油醚(沸点30-60℃)、无水乙醇、冰乙酸。
(2)50%氢氧化钾溶液:称取50g氢氧化钾,用蒸馏水溶解,并稀释至100mL。
(3)25%氯化钠溶液:称取25g氯化钠,用蒸馏水溶解,并稀释至100mL。
(4)10% 三氯化铁溶液:将10g FeCl3·6 H2O溶于磷酸中,定容至100 mL,储于棕色瓶中,冷藏保存。
(5)磷硫铁试剂:取10% 三氯化铁溶液1.5mL于100mL棕色容量瓶内,加浓硫酸定容至刻度。
(6)胆固醇标准储液:准确称取胆固醇100mg,溶于冰乙酸中,定容至100mL。
(7)胆固醇标准溶液:临用前将储液用冰乙酸稀释10倍。
三、实验方法与步骤1.样品胆固醇提取准确称取充分混匀的鸡蛋约0.20g于25mL具塞比色管中,加入0.5mL50%氢氧化钾溶液和4.5mL无水乙醇,振荡混匀,在80℃恒温水浴中皂化20min。
皂化时每隔5min振摇一次使皂化完全。
皂化完毕,取出比色管,冷却。
加入3mL 25%氯化钠溶液后再加入10mL石油醚,盖紧玻璃塞,振摇1min,静置分层。
取上层石油醚液1mL,置于25mL具塞比色管内,在65℃水浴中让石油醚自然挥发干,加入4mL冰乙酸,轻摇使胆固醇溶解,待测。
2.样品和标准胆固醇含量测定另取两支25mL具塞比色管,一支(空白管)加入4mL冰乙酸,一支(标准管)加入1mL胆固醇标准溶液(0.1mg/mL)和3mL冰乙酸。
包括样品管,各管分别加入2mL磷硫铁试剂,混匀,25℃放置20min后在560nm波长下比色。
实验一:食品中胆固醇的测定实验一:食品中胆固醇的测定一、实验目的1. 通过本实验的学习,使学生了解测定食品中胆固醇的意义。
通过本实验的学习,使学生了解测定食品中胆固醇的意义。
2. 通过本实验的学习,使学生掌握紫外-可见分光光度检测方法。
二、实验内容1. 样品制备。
样品制备。
2. 分光光度法检测。
三、实验要求采用集中授课形式组织教学。
采用集中授课形式组织教学。
四、实验准备 1. 样品制备及操作。
样品制备及操作。
2. 紫外-可见分光光度仪的使用方法。
紫外-可见分光光度仪的使用方法。
五、实验原理、方法和手段1. 实验原理实验原理当固醇类化合物与酸作用时,当固醇类化合物与酸作用时,可脱水并发生聚合发应,可脱水并发生聚合发应,可脱水并发生聚合发应,产生有颜色的物质。
产生有颜色的物质。
产生有颜色的物质。
据据此可先对食品样品进行提取和皂化,而后用硫酸铁铵试剂作为显色剂,测定食品中胆固醇的含量。
胆固醇的含量。
2. 实验方法和手段实验方法和手段食品样品的制备,分光光度计的使用。
食品样品的制备,分光光度计的使用。
六、实验条件1. 主要仪器主要仪器 A . 电子天平(1/10000)B . 电热恒温水浴电热恒温水浴C . 电动振荡器电动振荡器D . 具塞比色管:10 mL 、25 mL E . 吸量管:2.0 mL2. 试剂试剂A. 石油醚石油醚B. 无水乙醇无水乙醇C. 浓硫酸浓硫酸D. 冰乙酸:优级纯冰乙酸:优级纯E. 磷酸磷酸F . 胆固醇标准物质胆固醇标准物质G . 胆固醇标准液。
胆固醇标准储备液(1 mg/mL ):准确称取胆固醇100 mg ,溶于冰乙酸中,并定容至100 100 mLmL 。
此溶液至少在2个月内保持稳定。
胆固醇标准使用液(100 m g/mL ):吸取胆固醇标准储备液10 mL ,用冰乙酸定容至100 mL 。
此液用时临时配制。
液用时临时配制。
H. 铁矾显色剂。
铁矾储备液:溶解4.463 g 硫酸铁铵[FeNH 4(SO 4)2•H 2O]于100 mL 85%磷酸中,贮于干燥器内,此液在室温下稳定。
食品安全国家标准食品中胆固醇的测定1范围本标准规定了食品中胆固醇的测定方法㊂本标准适用于食品中胆固醇的测定,第一法气相色谱法适用于肉及肉制品㊁蛋及蛋制品㊁乳及乳制品等各类动物性食品以及植物油脂中胆固醇的测定;第二法高效液相色谱法适用于肉及肉制品㊁蛋及蛋制品㊁乳及乳制品等各类动物性食品中胆固醇的测定;第三法比色法适用于肉及肉制品㊁蛋及蛋制品等动物性食品中胆固醇的测定㊂第一法气相色谱法2原理样品经无水乙醇-氢氧化钾溶液皂化,石油醚和无水乙醚混合提取,提取液浓缩至干,无水乙醇溶解定容后,采用气相色谱法检测,外标法定量㊂3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的一级水㊂3.1试剂3.1.1甲醇(C H3O H):色谱纯㊂3.1.2无水乙醇(C2H5OH)㊂3.1.3石油醚:沸程30ħ~60ħ㊂3.1.4无水乙醚(C4H10O)㊂3.1.5无水硫酸钠(N a2S O4)㊂3.1.6氢氧化钾(K O H)㊂3.2试剂配制3.2.160%氢氧化钾溶液:称取60g氢氧化钾,缓慢加水溶解,并定容至100m L㊂3.2.2石油醚-无水乙醚混合液(1+1,体积比):将石油醚和无水乙醚等体积混合均匀㊂3.3标准品胆固醇标准品(C27H46O,C A S号:57-88-5):纯度ȡ99%㊂3.4标准溶液配制3.4.1胆固醇标准储备液(1.0m g/m L)称取胆固醇标准品0.05g(精确至0.1m g),用无水乙醇溶解并定容至50m L,放置0ħ~4ħ密封可贮藏半年㊂3.4.2胆固醇标准系列工作液分别吸取标准储备液(1.0m g/m L)25μL㊁50μL㊁100μL㊁500μL㊁2000μL,用无水乙醇定容至10m L,该标准系列工作液的浓度分别为2.5μg/m L㊁5μg/m L㊁10μg/m L㊁50μg/m L㊁200μg/m L㊂现用现配㊂4仪器和设备4.1气相色谱仪:配有氢火焰离子化检测器(F I D)㊂4.2电子天平:感量为1m g和0.1m g㊂4.3匀浆机㊂4.4皂化装置㊂5分析步骤5.1试样制备5.1.1肉及肉制品等各类固体试样取样品的可食部分200g进行均质㊂将试样装入密封的容器里,防止变质和成分变化㊂试样应在均质化24h内尽快分析㊂5.1.2植物油脂㊁乳品等液体试样取混匀后的均匀液体试样装入密封容器里待测㊂5.2样品处理5.2.1皂化称取制备后的样品0.25g~10g(准确至0.001g,胆固醇含量约为0.5m g~5m g),于250m L圆底烧瓶中,加入30m L无水乙醇,10m L60%氢氧化钾溶液,混匀㊂将试样在100ħ磁力搅拌加热电热套皂化回流1h,不时振荡防止试样黏附在瓶壁上,皂化结束后,用5m L无水乙醇自冷凝管顶端冲洗其内部,取下圆底烧瓶,用流水冷却至室温㊂5.2.2提取定量转移全部皂化液于250m L分液漏斗中,用30m L水分2次~3次冲洗圆底烧瓶,洗液并入分液漏斗,再用40m L石油醚-无水乙醚混合液(1+1,体积比)分2次~3次冲洗圆底烧瓶并入分液漏斗,振摇2m i n,静置,分层㊂转移水相,合并三次有机相,用水每次100m L洗涤提取液至中性,初次水洗时轻轻旋摇,防止乳化,提取液通过约10g无水硫酸钠脱水转移到150m L平底烧瓶中㊂5.2.3浓缩将上述平底烧瓶中的提取液在真空条件下蒸发至近干,用无水乙醇溶解并定容至5m L,待气相色谱仪测定㊂不同试样的前处理需要同时做空白试验㊂5.3测定5.3.1仪器参考条件a)色谱柱:D B-5弹性石英毛细管柱,柱长30m,内径0.32mm,粒径0.25μm,或同等性能的色谱柱;b)载气:高纯氮气,纯度ȡ99.999%;恒流2.4m L/m i n;c)柱温(程序升温):初始温度为200ħ,保持1m i n,以30ħ/m i n速率升至280ħ,保持10m i n;d)进样口温度280ħ;e)检测器温度:290ħ;f)进样量:1μL;g)进样方式:不分流进样,进样1m i n后开阀;h)空气流量:350m L/m i n;i)氢气流量:30m L/m i n㊂5.3.2标准曲线的制作分别取胆固醇标准系列工作液注入气相色谱仪,在上述色谱条件下测定标准溶液的响应值(峰面积),以浓度为横坐标㊁峰面积为纵坐标,制作标准曲线㊂5.3.3测定试样溶液注入气相色谱仪,测定峰面积,由标准曲线得到试样溶液中胆固醇的浓度㊂根据保留时间定性,外标法定量㊂胆固醇标准溶液的色谱图见图A.1㊂6分析结果的表述试样中胆固醇的含量按式(1)计算:(1)X=ρˑVmˑ1000ˑ100式中:X 试样中胆固醇含量,单位为毫克每百克(m g/100g);ρ 试样溶液中胆固醇的浓度,单位为微克每毫升(μg/m L);V 试样溶液最终定容的体积,单位为毫升(m L);m 试样质量,单位为克(g);1000㊁100 换算系数㊂计算结果应扣除空白㊂结果保留三位有效数字㊂7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%㊂8其他当称样量为0.5g,定容体积为5.0m L,方法的检出限为0.3m g/100g,定量限为1.0m g/100g㊂第二法高效液相色谱法9原理样品经无水乙醇-氢氧化钾溶液皂化,石油醚和无水乙醚混合提取,提取液浓缩至干,无水乙醇溶解定容后,采用高效液相色谱仪检测,外标法定量㊂10试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的一级水㊂10.1试剂10.1.1甲醇(C H3O H):色谱纯㊂10.1.2无水乙醇(C2H5O H)㊂10.1.3石油醚:沸程30ħ~60ħ㊂10.1.4无水乙醚(C4H10O)㊂10.1.5无水硫酸钠(N a2S O4)㊂10.1.6氢氧化钾(K O H)㊂10.2试剂配制10.2.160%氢氧化钾溶液:称取60g氢氧化钾,缓慢加水溶解,并定容至100m L㊂10.2.2石油醚-无水乙醚混合液(1+1,体积比):将石油醚和无水乙醚等体积混合均匀㊂10.3标准品胆固醇标准品(C27H46O,C A S号:57-88-5):纯度ȡ99%㊂10.4标准溶液配制10.4.1胆固醇标准储备液(1.0m g/m L):称取胆固醇标准品0.05g(精确至0.1m g),用无水乙醇溶解并定容至50m L,放置0ħ~4ħ密封可贮藏半年㊂10.4.2胆固醇标准系列工作液:分别吸取标准储备液(1.0m g/m L)25μL㊁50μL㊁100μL㊁500μL㊁2000μL,用无水乙醇定容至10m L,该标准系列工作液的浓度分别为2.5μg/m L㊁5μg/m L㊁10μg/m L㊁50μg/m L㊁200μg/m L㊂现用现配㊂11仪器和设备11.1匀浆机㊂11.2高效液相色谱仪:配有紫外检测器或相当的检测器㊂11.3电子天平:感量为1m g和0.1m g㊂12分析步骤12.1试样制备12.1.1肉及肉制品等各类固体试样样品取可食部分200g,使用绞肉机或匀浆机将试样均质㊂将试样装入密封的容器里,防止变质和成分变化㊂试样应在均质化24h内尽快分析㊂12.1.2乳品等液体试样取混匀后的均匀液体试样装入密封容器里待测㊂12.2样品处理12.2.1皂化称取制备后的样品0.25g~10g(精确至0.001g,胆固醇含量约为0.5m g~5m g),于250m L圆底烧瓶中,加入30m L无水乙醇,10m L60%氢氧化钾溶液,混匀㊂将试样在100ħ磁力搅拌加热电热套皂化回流1h,不时振荡防止试样黏附在瓶壁上,皂化结束后,用5m L无水乙醇自冷凝管顶端冲洗其内部,取下圆底烧瓶,用流水冷却至室温㊂12.2.2提取定量转移全部皂化液于250m L分液漏斗中,用30m L水分2次~3次冲洗圆底烧瓶,洗液并入分液漏斗,再用40m L石油醚-无水乙醚混合液(1+1,体积比)分2次~3次冲洗圆底烧瓶并入分液漏斗,振摇2m i n,静置,分层㊂转移水相,合并三次有机相,用水每次100m L洗涤提取液至中性,初次水洗时轻轻旋摇,防止乳化,提取液通过约10g无水硫酸钠脱水转移到150m L平底烧瓶中㊂12.2.3浓缩将上述平底烧瓶中的提取液在真空条件下蒸发至近干,用无水乙醇溶解并定容至5m L,溶液通过0.45μm过滤膜,收集滤液于进样瓶中,待高效液相色谱仪测定㊂不同试样的前处理需要同时做空白试验㊂12.3测定12.3.1仪器参考条件a)色谱柱:C18反相色谱柱,柱长4.6mm,内径150mm,粒径5μm,或同等性能的色谱柱;b)柱温:38ħ;c)流动相:甲醇;d)流速:1.0m L/m i n;e)测定波长:205n m;f)进样量:10μL㊂12.3.2标准曲线的制作分别取10μL胆固醇标准工作液注入高效液相色谱仪,在上述色谱条件下测定标准溶液的响应值(峰面积),以浓度为横坐标㊁峰面积为纵坐标,制作标准曲线㊂12.3.3测定将10μL试样溶液注入高效液相色谱仪,测定峰面积,由标准曲线得到试样溶液中胆固醇的浓度㊂胆固醇标准溶液的色谱图见图A.2㊂13分析结果的表述试样中胆固醇的含量按式(2)计算:(2)X=ρˑVmˑ1000ˑ100式中:X 试样中胆固醇的含量,单位为毫克每百克(m g/100g);ρ 试样溶液中胆固醇的浓度,单位为微克每毫升(μg/m L);V 试样溶液定容体积,单位为毫升(m L);m 试样质量,单位为克(g);1000㊁100 换算系数㊂计算结果应扣除空白㊂结果保留三位有效数字㊂14精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%㊂15其他当称样量为1g,定容体积为5m L,方法的检出限为0.64m g/100g,定量限为2.1m g/100g㊂第三法比色法16原理样品进行脂肪提取后的油脂,经无水乙醇-氢氧化钾溶液皂化,用石油醚提取,浓缩后加入冰乙酸,以硫酸铁铵试剂作为显色剂,采用分光光度计,在560n m~575n m波长下检测,外标法定量㊂17试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的三级水㊂17.1试剂17.1.1无水乙醇(C2H5O H)㊂17.1.2石油醚:沸程30ħ~60ħ㊂17.1.3硫酸(H2S O4)㊂17.1.4冰乙酸(C2H4O2):优级纯㊂17.1.5磷酸(H3P O4)㊂。
45.4.10AOAC 官方方法994.10食品中的胆固醇直接皂化——气相色谱法1994年首次实施(适用于每100克食品中含有≥1mg的胆固醇的测定)见表994.10,实验室研究的结果支持该方法的验收。
A.原理试样的脂质在高温下经无水乙醇-氢氧化钾溶液皂化。
不皂化的部分含有胆固醇和其它甾醇用甲苯萃取。
甾醇衍生于三甲基甲硅烷(TMS)醚,然后用气相色谱仪进行定量。
B.仪器(a)离心管——15mL,Pyrex No.13. 硅烷化管如下:用10%的氢氟酸装满管,静置10分钟。
先用水冲洗管,然后用无水甲醇冲洗。
在氮气流中干燥管。
在甲苯中,将管装满10%六甲基二硅烷(HMDS),静置1小时。
先用甲苯冲洗管,然后用无水甲醇冲洗。
管在使用前放入100℃的烘箱干燥。
也可用商用silinizing试剂替代。
每次重复使用前,都要用水,乙醇,己烷和丙酮清洗管,以及在100℃烘箱中干燥。
如果没有强碱清洗,管可以在重复使用而不需resilylation。
再次硅烷化管需至少6个月。
(b)气相色谱仪(GC)——FID检测器,毛细管柱,分流模式,25m×0.32mm×0.17μm膜厚度,交联5%苯基- 甲基聚硅氧烷或甲基硅氧烷胶(例如,Hewlett Packard No.HP-5, Ultra 2, 或HP-1),在80-100网Supelco包装上拆分充满10% SP 2100的衬管,和2斜坡烘箱温度编程(Hewlett Packard Model 5890A)。
操作条件:温度——注射器250℃、检测器300℃、分析柱190℃,保持2分钟;增加20℃/分钟到230℃,保持3分钟;增加40℃/分钟到225℃,保持25分钟。
流速:氦—柱约2毫升每分钟,分流孔约30毫升每分钟,清洗孔约3毫升每分钟,辅助补充气约20毫升每分钟;氢气—约35毫升每分钟;空气约280毫升每分钟。
(c)旋转式汽化器——浓度瓶和金属轴之间的玻璃冷凝器烧瓶。
化学实验测定某种食品中胆固醇含量随着人们对健康的日益关注,食品中的营养成分成为了大家关注的重点之一。
胆固醇作为一种常见的脂质,其摄入量过高可能会对人体健康产生负面影响。
因此,准确测定食品中的胆固醇含量对于保持身体健康至关重要。
在本文中,将介绍一种化学实验方法,用于测定某种食品中胆固醇含量的准确性。
实验材料和仪器1. 某种食品样品2. 石油醚(溶剂)3. 乙醇4. 无水硫酸铜5. 对氯苯甲酸6. 硫酸亚铁(0.1M)7. 高锰酸钾溶液(0.01M)8. 硝酸钾溶液(2%)9. 烧杯、试管、滴定管、移液管、天平等实验器材实验步骤第一步:样品准备1. 取食品样品适量,将其研磨成粉末状。
2. 称取2g食品粉末,放入玻璃烧杯中。
第二步:提取胆固醇1. 向烧杯中加入15mL石油醚,搅拌10分钟,使样品中的胆固醇充分溶解于石油醚中。
2. 将石油醚层转移至试管中。
第三步:胆固醇的定量分析1. 在试管中加入3mL乙醇,将其蒸发干净。
2. 在试管中加入2mL无水硫酸铜,并用试管架加热,使其变为蓝色。
3. 加入0.3g对氯苯甲酸,继续加热,使试管中的液体变为红色。
4. 将试管放置至水浴中冷却4分钟。
5. 加入1mL 0.1M硫酸亚铁,迅速滴定0.01M高锰酸钾溶液,直到试管中液体变为淡黄色。
记录滴定所需的高锰酸钾溶液体积V1。
计算胆固醇含量所含胆固醇质量 = (V1 × 0.01 ×被试样品质量 × 1000) / (2 × 0.3)实验注意事项1. 实验操作中需要保持实验环境干燥,以免水分与试剂发生反应影响实验结果。
2. 操作时需佩戴手套、护目镜等防护用具,以防实验中的化学品对身体造成伤害。
3. 称量操作应准确,以保证实验数据的精确性。
实验结果与讨论通过以上实验步骤,我们可以得到食品样品中胆固醇的含量。
胆固醇是食品中常见的脂质成分,其含量的准确测定对于人们控制饮食、保持心血管健康至关重要。
食品中胆固醇的测定
食物中胆固醇的测定方法主要有气相色谱法和比色法。
色谱法必须具备气相色谱仪,此仪器价格昂贵,故在国内不易普及,因此选用经济、简便、实用的比色法进行食物中胆固醇的测定。
比色法
1.原理
固醇类化合物与酸试剂作用,可脱水,发生聚合反应并产生强的颜色反应。
2.适用范围
此方法适用于动物性食物中胆固醇的测定。
3.仪器
(1)实验室常用设备
(2)分光光度计
(3)电热恒温水浴
4.试剂
所有试剂,如未注明规格,均指分析纯,所有实验用水,均为蒸馏水。
(1)石油醚
(2)无水乙醇
(3)浓硫酸
(4)冰乙酸(优级纯)
(5)磷酸
(6)胆固醇标准(美国Sigma公司)
标准储备液:准确称取胆固醇100mg,(胆固醇标准开启后放在干燥器内)溶于冰乙酸中,并定溶至100ml。
其浓度为1g/L。
可保存2个月。
标准工作液:取标准储备液10ml,用冰乙酸定溶至100ml。
其浓度为0.1g/L。
此液用时临时配制。
(7)铁矾显色液:
储备液:溶解4.463克硫酸铁铵〔FeNH4(SO4)2·12H2O〕于100ml 85%磷酸中贮于干燥器内,此溶液在室温中稳定。
* 铁矾储备液须在实验前两周配制,因硫酸铁铵不易溶解,每天要进行短时间的振摇待溶质完全溶于磷酸后再定溶到体积。
工作液:吸取储备液10ml用浓硫酸稀释到100ml。
贮于干燥器内。
(8)氢氧化钾50%溶液:溶解50g氢氧化钾于水中,定溶至100ml。
(9)氯化钠5%溶液:溶解5克氯化钠于水中,定溶至100ml。
(10)纯氮(99.99%)
5.操作步骤
5.1样品脂肪的提取与测定:根据食物种类分别用索氏提取法、研磨法和罗高氏法提取脂肪,
并计算出每100克食物中脂肪含量。
5.2样品胆固醇的测定:准确称取提取的油脂3-4滴(约含胆固醇300-500μg)取样量可按样品中胆固醇的浓度增减。
置于25ml试管内,加入4ml无水乙醇,0.5ml50%氢氧化钾,在65℃恒温水浴中皂化1小时。
皂化时每隔20-30分钟振摇一次使皂化完全。
皂化完毕,取出试管,冷却。
加入3ml 5%氯化钠、10ml石油醚,盖紧玻璃塞,振摇2分钟,静置分层(一般需1小时以上)。
取上层石油醚2ml,置于10ml具玻璃塞的试管内,在65℃恒温水浴中用氮气吹干,加入4ml冰乙酸,2ml铁矾显色液,混匀,放置15分钟后560-575nm下比色。
5.3标准曲线:准确吸取胆固醇工作液0;0.5;1.0;1.5;2.0ml分别置于10ml试管内,在各管内加入冰乙酸,使总体积达4ml。
沿管壁加2ml铁矾显色液,混匀,在15-90分钟内,560-575nm下比色。
6.分析结果
样品中胆固醇含量(mg/100g)=C×V/V'×1/W×F/1000
式中
C=测得的光密度值在胆固醇标准曲线上显示的胆固醇量(μg)
V=石油醚总体积(ml)
V'=取出的石油醚体积(ml)
W=称取油脂重量(g)
F=样品的脂肪含量(g/100g)
1/1000=折算成每100克食物中胆固醇的毫克数。
7.注意事项
同一实验室同时或连续两次测定结果之差不得超过平均值的10%。