植物激素的测定方法

植物激素的酶联免疫吸附测定法（ELISA）免疫测定是利用抗原、抗体特异性反应而建立的，根据可视化方法的不同可分为：酶联免疫、放射免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定、生物发光免疫测定、浊度免疫测定法等。

由于酶联免疫吸附分析法（Enzyme-linked Immunosorbent Assays, 简称ELISA）具有灵敏性、特异性高，且方便、快速、安全、成本低廉的特点，而日益被广泛应用于植物激素测定。

目前，几大类植物激素IAA,ABA, GA3、GA4、iPA、ZR、DHZR等都建立了相应的ELISA方法并有试剂盒出售。

植物激素的酶联免疫检测方法有两种形式（见下图），一种是在固相载体上直接包被抗体（直接法，先包被二抗，再加一抗），另一种是包被抗原（间接法）。

直接法利用游离抗原和酶标抗原与吸附的抗体进行竞争。

间接法利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体进行竞争。

间接法的原理可用下式表示：Ab+H+HP=AbH+AbHP其中Ab表示抗体，H表示游离激素，HP表示吸附在板上的激素－蛋白质复合物。

根据质量作用定律，当该反应体系中Ab及HP的量确定时，游离H越多，结合物AbH形成的就越多，而AbHP形成的就越少，即结合在板上的抗体就越少，通过酶标二抗检测结合物AbHP的多少，就可以确定游离H 量的多少。

材料、试剂及设备1 材料各种新鲜植物材料2 仪器设备研钵，冷冻离心机，台式快速离心浓缩干燥器或氮气吹干装置，酶联免疫分光光度计，吸水纸，恒温箱，冰箱，酶标板（40孔或96孔），可调微量液体加样器（10μl，40μl,200μl,1000μl），带盖瓷盘（内铺湿纱布）。

3 试剂(1) 包被缓冲液：称取１.５g Na2CO3, 2.93g NaHCO3, 0.2g NaN3（可不加）, 用量筒加1 000 ml蒸馏水，pH为9.6.(2) 磷酸盐缓冲液（PBS）：称取8.0g NaCl, 0.2g KH2PO4 , 2.96g Na2HPO4 ·12H2O，用量筒加1 000 ml蒸馏水，pH为7.5。

植物激素的测定方法植物激素是一类由植物自身合成并参与生长发育调控的活性物质，对植物的生长发育起着重要作用。

因此，准确测定植物激素的含量对于研究植物生长发育调控机制具有重要意义。

本文将介绍几种常用的植物激素测定方法。

一、高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是目前应用最广泛的植物激素测定方法之一。

该方法基于植物激素在高效液相色谱柱上的保留时间和峰面积，通过与已知浓度的标准品比较，可以计算出待测样品中植物激素的含量。

高效液相色谱法具有分离效果好、分析速度快、准确度高的优点，但需要专用的仪器设备，操作较为复杂。

二、气相色谱法（GC）气相色谱法是另一种常用的植物激素测定方法。

该方法通过将待测样品中的植物激素转化为易挥发的衍生物，然后在气相色谱柱上进行分离和定量分析。

气相色谱法具有测定灵敏度高、分离效果好的特点，但需要对样品进行预处理，并且对仪器的稳定性要求较高。

三、酶联免疫吸附法（ELISA）酶联免疫吸附法是一种常用的免疫学测定方法，也可以用于测定植物激素的含量。

该方法通过将植物激素与特异性抗体结合，然后再用酶标记的二抗进行检测，最后通过比色反应或发光反应来测定植物激素的含量。

酶联免疫吸附法具有操作简便、成本较低的优点，但需要特异性较好的抗体。

四、放射免疫测定法（RIA）放射免疫测定法是一种使用放射性同位素标记的植物激素进行测定的方法。

该方法通过将放射性同位素标记的植物激素与待测样品中的植物激素结合，然后通过放射性计数来测定植物激素的含量。

放射免疫测定法具有灵敏度高、测定范围广的特点，但需要使用放射性同位素，存在辐射危险。

五、质谱法（MS）质谱法是一种高灵敏度的分析方法，可以用于测定微量的植物激素。

该方法通过将待测样品中的植物激素通过质谱仪进行分子质量分析，从而测定植物激素的含量。

质谱法具有高灵敏度、高分辨率的特点，但需要专用的仪器设备和较高的技术水平。

植物激素测定方法有高效液相色谱法、气相色谱法、酶联免疫吸附法、放射免疫测定法和质谱法等。

植物激素检测方法一、什么是植物激素？植物激素是植物体内合成的一系列痕量有机化合物，它在植物的某一部位产生，运输到另一个或一些部位，在极低的浓度下便可引发生理反应，几乎参与了调控植物从种子休眠、萌发、营养、生长和分化到生殖、成熟和衰老的每个生命过程，既可调控植物自身的生长发育，又通过与植物所生存的外部环境互相作用调节其对环境的适应。

通过调控如细胞分裂素、油菜素内酯和生长素等植物激素的代谢可显著地改良作物的株型结构和产量构成，从而大幅度提高作物产量和品质。

植物激素主要包括生长素(auxin)、赤霉素(gibberellin，GA)、细胞分裂素(cytokinin，CTK)、脱落酸(abscisic acid，ABA)、油菜素甾醇类(brassinosteroids，BRs)、茉莉酸(jasmonic acid，JA)及其甲酯(MeJA)、水杨酸类(salicylic acids，SA)、乙烯(ethylene)和多肽激素(peptide hormones)等。

二、检测方法科标生物检测中心可以提供各种植物样品检测服务，中心是通过权威认证的第三方机构，检测后出具权威检测报告。

三、主要分析技术1、生物鉴定法是一类经典的植物激素检测方法，它利用激素作用于植物的组织或器官时产生的特异性反应对植物激素进行测定。

2、免疫检测技术是测定植物激素的常用方法。

该方法是基于抗原和抗体的特异性结合，因此有较好的专一性。

采用放射性元素标记的方法，即放射免疫分析(radioimmunoassay，RIA)，其检测灵敏度高，重复性好，但对实验条件的要求较高。

3、气相色谱火焰离子化检测法(GC-FID)和气相色谱质谱法(GC-MS)能够对所分析样品进行准确、高灵敏度测量，但由于气相色谱对样品的特殊要求，使得待测组分需具有一定挥发性，因此在植物激素样品的前处理过程中需对样品进行衍生化。

4、高效液相色谱紫外检测法(HPLC-UV)、高效液相色谱荧光检测法(HPLC-FL)和高效液相色谱质谱检测法(HPLC-MS)也大量用于植物激素的纯化及定量分析，其中MS因为具有良好的选择性和灵敏度，并且能够给出化合物的结构信息，在实际检测中得到了更普遍的运用。

酶联免疫法（ELISA）测定植物激素含量姓名：李希东专业：植物学学号：200808201 日期：09.5.10 成绩：一、实验目的：掌握间接法测定植物激素的原理和方法；了解逆境对玉米根系ABA和IAA含量的影响。

二、实验原理：酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbert assay，简称ELISA)是在免疫酶技术(immuno enzymite technique)的基础上发展起来免疫测定技术。

其建立在两个重要的生物化学反应基础之上的，即①抗原抗体反应的高度专一性和敏感性；②酶的高效催化特性。

ELISA把这二者有机地结合在一起，即被分析物先与其相应的抗体或抗原反应，然后再检测抗体或抗原上酶标记物的活性，从而达到定性或定量测定的目的。

间接法是将过量的与蛋白质连接的待测植物激素(实验前将该激素与牛血清白蛋白等蛋白质连接成[激素一蛋白质复合物])吸附在固相支持物上，然后加入待测植物激素和相应抗体，使抗体与待测植物激素及激素蛋白质复合物结合，再加入酶标抗体(标记酶与非特异第二抗体的复合物)，就形成〔蛋白质·激素·第一抗体·第二抗体·酶复合物〕，加入底物后就生成有色产物，测定其吸光率，可计算待测抗原的量。

如果抗体、激素一蛋白质复合物和酶标抗体的量一定，并且[激素·蛋白质复合物]和待测激素的总量超过抗体的量，那么生成的[蛋白质·激素·第一抗体·第二抗体·酶复合物]的量就受待测激素含量的限制，因此待测抗原的量将与吸光率成反比。

图A表示间接酶联免疫方法的基本原理：A.间接酶联免疫原理示意图示反应板（固相载体）示激素特异抗体（一抗）示激素（抗原）示非特异二抗示蛋白质·激素复合物示标记酶本实验所采取的方法，则是利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体的竞争性结合反应，它的原理可用下式表示:Ab十H十HP=AbH十AbHP其中Ab表示抗体，H表示游离激素，HP表示吸附在板上的激素一蛋白质复合物。

植物激素类检测植物激素是由植物自身代谢产生的一类有机物质，会从产生部位移动到作用部位，在极低浓度下就有明显生理效应的微量物质，也称为植物天然激素或植物内源激素。

它是植物细胞接受特定环境信号诱导产生的、低浓度时可调节植物生理反应的活性物质。

在细胞分裂与伸长、组织与器官分化、开花与结实、成熟与衰老、休眠与萌发以及离体组织培养等方面，分别或相互协调地调控植物的生长发育与分化。

常见的植物激素有五类，生长素类、赤霉素类(GAs)、细胞分裂素类(CTKs)、乙烯(ETH)和脱落酸(ABA)。

前三类都是促进生长发育的物质，脱落酸是一种抑制生长发育的物质，而乙烯则主要是一种促进器官成熟的物质。

植物激素的离子色谱图植物激素的二级全扫描质谱图迪信泰检测平台采用液质联用(HPLC-MS或LC-MS/MS)的方法，常用Thermo Scientific的U3000快速液相色谱对样品进行分离，随后采用Thermo Scientific™ Q Exactive™对样品进行鉴定，可以高效、精准的检测植物激素的含量变化。

目前可检测的植物激素包括吲哚乙酸(IAA)、玉米素（ZR）、赤霉素（GA3)、脱落酸（ABA)等。

对于常见激素或以上激素的同类物质，可结合标样进行检测，对于稀有的激素分子，如提供标准样品，迪信泰检测平台可提供定制检测。

此外，我们还提供HPLC测定植物激素的服务，以及植物激素系列检测试剂盒产品，以满足您的不同需求。

植物激素类检测项目玉米素（ZA）检测赤霉素（GA）检测吲哚乙酸（IAA）检测脱落酸（ABA）检测水杨酸（SA）检测茉莉酸（JA）检测生长素（Auxin）/植物生长激素检测细胞分裂素（CTK）检测玉米素核苷（ZR）/反式玉米素核苷（TZR）检测吲哚丁酸（IBA）/吲哚-3-丁酸检测6-苄氨基腺嘌呤/6-苄氨基嘌呤（6-BA）检测激动素（KT）检测萘乙酸（NAA）检测异戊烯基腺嘌呤（IP/2ip）检测异戊烯基腺嘌呤核苷（IPA/2ipr）检测结合吲哚乙酸检测结合脱落酸检测水杨酸甲酯（MESA）检测茉莉酸甲酯（MeJA）检测油菜素内酯/芸苔素/油菜素甾醇（BR/BL）检测独角金内酯（SLs）检测褪黑素(MT)/褪黑激素/褪黑色素检测样品制备激素提取方法（此部分涉及到公司的核心工艺，以下提供常规的提取工艺）1）称量约0.5 g的新鲜植物样品；2）液氮研磨至粉碎；3）加入5 mL异丙醇/盐酸缓冲液，4℃震荡30 min；4）加入10 mL二氯甲烷，4℃震荡30 min；5）4℃，13000 rpm离心5 min，取下层有机相；6）避光，氮气吹干有机相，用250 μL-500 μL甲醇(0.1%甲酸)溶解；7）0.45 μm的微孔滤膜过滤，用HPLC-MS/MS检测。

植物激素检测⽅法植物激素是植物体内合成的⽤于调控植物⽣成发育的⼩分⼦化合物。

⽬前，被公认的植物激素有6⼤类：细胞分裂素类（CK）、⾚霉素类（GAs）、⽣长素类（Auxins）、脱落酸类（ABA）、⼄烯和油菜素甾醇类（BRs）。

以下介绍⼏种常⽤的植物激素检测⽅法。

1. ⽣物检测法利⽤植物激素作⽤于植物组织或离体器官后产⽣的特异性反应，从⽽间接对植物激素的含量进⾏检测。

然⽽，不同结构的⾚霉素、⽣长素或激动素对不同⽣物检测法的响应有差异，因此有时可能⽆法测出。

由于⽣物检测法可以检测植物激素的活性，常⽤于植物激素的定性分析，也常与其他检测⽅法结合使⽤。

2. ⽓相⾊谱法通过与标准样品共⾊层分离来鉴定样品中植物激素的含量，但由于⽆法排除杂质与标准品的共⾊层分离，所以不能准确检测植物激素含量。

待测样品必须形成易挥发的甲基化和三甲基硅烷化衍⽣物才可以运⽤⽓相⾊谱法检测，所以在⼄烯的测定种，⽓相⾊谱法⽐较常⽤。

3. 酶联免疫法（ELISA法）将抗原或抗体与酶结合形成酶标抗原或抗体，加⼊酶反应的底物后，底物被酶催化⽣成有⾊产物，通过颜⾊反应的深浅来进⾏定性或定量分析。

酶联免疫吸附法的主要缺点在于抗体的制备复杂，且检测中难以排除交叉反应，⽆法保证植物激素检测的准确性。

4. ⾼效液相⾊谱法⾼效液相⾊谱法与不同检测器结合，能直接分析多种植物激素，是⽬前应⽤较⼴泛的植物激素检测⽅法之⼀。

除⼄烯外的其它植物激素均可以采⽤⾼效液相⾊谱法进⾏检测。

5. 质谱法液质联⽤（LC-MS）和⽓质联⽤（GC-MS）克服了⾼效液相⾊谱和⽓相⾊谱的在植物激素定性和定量⽅⾯的局限性，成为普遍接受和认可的植物激素检测⽅法。

GC-MS具有选择性好、专⼀性强、灵敏度⾼等特点，不⾜之处在于对样品的纯化要求很⾼，且样品需要衍⽣化处理。

不同于GC-MS，LC-MS不需要衍⽣化处理，简化了操作步骤，缩短了检测时间。

因此LC-MS更适⽤于植物激素的检测（除⼄烯外）。

植物激素的检测方法摘要：植物激素是植物体内的微量信号分子，它们几乎调节着植物生长发育的所有过程，植物，植物激素的检测常用方法有关键词：植物激素的检测；生物试法；色谱检测法；免疫检测法1 植物激素的介绍植物激素是指植物细胞接受特定环境信号诱导产生的、低浓度时可调节植物生理反应的活性物质。

植物激素有六大类：即生长素（auxin）、赤霉素（GA）、细胞分裂素（CTK）、脱落酸（abscisic acid，ABA）、乙烯（ethyne，ETH）和油菜素甾醇（brassinosteroid，BR）。

它们都是些简单的小分子有机化合物，但它们的生理效应却非常复杂、多样。

2 植物激素检测方法研究2.1 生物试法生物试法是最早检测植物激素的方法，它是依据植物激素的生理活性，通过某些植物的组织或器官产生的特异性反应来进行检测。

1928年F W Went首先建立了检测植物生长素的燕麦芽鞘弯曲测试法,但方法复杂,若没有熟练的技巧,就很难取得准确的结果。

因此在1933年, Thimann K V 和J Bonner把这个方法改变了一下建立了燕麦叶鞘切断伸长法,简化了操作方法。

此后,随着ABA、CTK、GA等激素的逐一发现,相应的各类激素的测定方法也被广泛建立。

例如,小麦胚芽鞘切断抑制法检测ABA;烟草髓愈伤组织鉴定法和胡萝卜根愈伤组织鉴定法鉴定CTK;矮生豌豆法、大麦胚芽鉴定法和点滴法鉴定GAs等等[1]。

生物试法具有简便易行的特点，能够反应植物激素的生理活性，还可以鉴定新的植物激素和生理活性物质，因此至今仍然得到广泛的应用。

但其不足之处在于，植物体内往往存在许多激素分子的类似物、代谢物、拮抗物或其他干扰物质，从而影响生物试法的检测结果[2]。

此外还要尽量控制环境因子和使用的植物材料的均一性，以便检测结果的准确、可靠。

20世纪90年代Wout Boerjan[3]等建立的重组DNA技术定量检测生长素和细胞分裂素的方法可谓是这一领域的一个重要进展。

植物激素研究的一般方法
1. 激素的提取和分离，研究人员通常会从植物组织中提取激素，并通过化学方法或生物学方法进行分离纯化，以便进行后续的分析
和实验。

2. 生物测定法，生物测定法是研究植物激素活性的重要方法，
包括生物学活性测定、生长调节测定等，常用的方法包括生长曲线
实验、生物测定实验等。

3. 分子生物学方法，利用分子生物学技术对植物激素进行研究，包括克隆激素合成基因、激素受体基因、信号转导途径相关基因等，通过转基因技术和基因敲除技术研究植物激素的功能。

4. 生化分析方法，利用生化分析方法对植物激素进行研究，包
括高效液相色谱法、质谱法、酶联免疫吸附实验等，用于检测和定
量植物激素的含量。

5. 组织培养技术，利用植物组织培养技术研究植物激素的生物
学功能，包括激素的促进生长、诱导愈伤组织等，通过组织培养的
方式研究植物激素的作用机制。

总的来说，植物激素研究的一般方法涉及到多个学科领域的知识和多种实验技术的应用，通过综合运用这些方法，可以全面深入地研究植物激素在植物生长发育中的作用机制和调控网络。

植物激素的测定方法植物激素是一类在植物生长和发育过程中起调节作用的化合物。

它们能够通过调节细胞分裂、扩展和分化以及调控植物对环境的适应能力，从而影响植物的形态和功能。

为了研究和了解植物激素的作用机制，科学家们发展了多种测定植物激素的方法。

这些方法可以帮助我们准确地测定植物激素的浓度，并进一步揭示植物激素在植物生长和发育中的作用。

一种常用的测定植物激素的方法是高效液相色谱法（HPLC）。

HPLC 是一种基于植物激素在液相中的分离和检测原理的分析方法。

首先，样品中的植物激素会被提取出来，然后通过在柱子中的固定相上进行分离，最后利用紫外光谱仪或质谱仪等设备进行检测和定量。

这种方法具有高分离效果、高灵敏度和高准确性的优点，常用于测定植物激素如生长素、赤霉素、脱落酸等的浓度。

除了HPLC，放射免疫测定法（RIA）也是一种常用的测定植物激素的方法。

RIA利用植物激素与标记同位素结合的原理，通过测量放射性同位素的放射线强度来定量植物激素的浓度。

这种方法具有高灵敏度和高特异性的优点，可以测定植物激素如赤霉素、激动素、玉米素等的浓度。

酶联免疫吸附测定法（ELISA）也是一种常用的测定植物激素的方法。

ELISA利用植物激素与特异性抗体的结合反应，通过测量抗体与酶标记物质之间的酶活性来定量植物激素的浓度。

这种方法具有简单、快速和高灵敏度的优点，常用于测定植物激素如赤霉素、生长素、激动素等的浓度。

除了上述几种常用的测定方法，还有一些新兴的测定植物激素的方法也在不断发展中。

例如，质谱法（MS）是一种基于植物激素分子的质量和质荷比的分析方法，可以精确测定植物激素的结构和浓度。

另外，生物传感器和光谱法等新技术也被应用于植物激素的测定领域，为研究人员提供了更多的选择。

测定植物激素的方法多种多样，各有优劣。

科学家们根据研究目的和需求选择合适的方法来测定植物激素的浓度。

这些测定方法的发展和应用，不仅有助于我们深入了解植物激素的作用机制，还为植物生长和发育的调控提供了重要的理论和实践基础。

植物激素可用生物试法进行鉴定,5种激素每种试举一例植物激素是一类能够调节植物生长和发育的化合物，通过控制细胞分裂、伸长、分化和老化等生理过程来影响植物的生长和发育。

在植物生理学研究中，通过生物试法可以对植物激素进行鉴定和测定，这对于深入了解植物生长发育的调控机制具有重要意义。

以下将分别举例介绍5种常见的植物激素以及相关的生物试法。

第一种激素是赤霉素。

赤霉素是一种类似动物激素的化合物，能够促进细胞的分裂和伸长，同时调节植物的开花和果实发育等过程。

赤霉素的鉴定通常使用胚芽生长试验。

将种子和含有不同浓度赤霉素溶液的培养基共同培养，观察种子发芽和胚芽生长情况，可以根据不同的生长表现来确定赤霉素的存在与否。

第二种激素是生长素。

生长素是一种主要通过影响细胞伸长和分裂来调节植物生长的激素。

生长素的鉴定常使用半花生根试验。

将种植在含有不同浓度生长素溶液的培养基上的花生根的半部分培养，在一定时间后观察根的生长情况，可以根据根长度的变化来判断生长素的含量和作用程度。

第三种激素是脱落酸。

脱落酸是一种能够促使植物叶片脱落和果实成熟的激素。

脱落酸的鉴定通常使用叶片脱落试验。

将含有不同浓度脱落酸溶液的培养基与叶片接触，观察叶片的脱落情况，可以根据叶片脱落的时间和数量来判断脱落酸的作用效果。

第四种激素是细胞分裂素。

细胞分裂素是一类能够促进植物细胞分裂的激素，对于植物生长非常重要。

细胞分裂素的鉴定常使用离体培养试验。

将植物的组织切割并进行无菌培养，在培养基中添加不同浓度的细胞分裂素，观察组织的增殖情况，可以根据细胞数量和组织的生长情况来确定细胞分裂素的作用水平。

第五种激素是脱落素。

脱落素是一类能够使植物组织和器官脱落的激素，对于促进植物的生长发育起到重要作用。

脱落素的鉴定常使用果实脱落试验。

将不同浓度脱落素溶液喷洒在果实上，观察果实的脱落情况，可以确定脱落素在果实脱落过程中的作用程度和浓度。

通过以上的例子，我们可以看到植物激素的鉴定可以通过不同的生物试法进行。

植物激素的酶联免疫吸附测定法（ELISA）---小麦材料、试剂及设备1 材料各种新鲜植物材料2 仪器设备研钵，冷冻离心机，台式快速离心浓缩干燥器或氮气吹干装置，酶联免疫分光光度计，吸水纸，恒温箱，冰箱，酶标板（40孔或96孔），可调微量液体加样器（10μl，40μl,200μl,1000μl），带盖瓷盘（内铺湿纱布）。

3 试剂(1) 磷酸盐缓冲液（PBS）：称取8.0g NaCl, 0.2g KH2PO4 , 2.96g Na2HPO4 ·12H2O，用量筒加1 000 ml蒸馏水，pH为7.5。

(2) 样品稀释液：500 ml PBS中加0.5 ml Tween-20，0.5g明胶（稍加热溶解）。

(3) 底物缓冲液：称取5.10g C6H8O7·H2O（柠檬酸）， 18.43g Na2HPO4·12H2O，用量筒加1 000ml蒸馏水，再加1 ml Tween-20，pH为5.0。

(4) 洗涤液：1000ml PBS加1mlTween-20。

(5) 终止液：2mol/L H2SO4。

（6）提取液：80％甲醇，内含1 mmol/L BHT(二叔丁基对甲苯酚，为抗氧化剂，先用甲醇溶解BHT，再配成80%的浓度))。

操作步骤1．样品中激素的提取（1）称取0.5g左右新鲜植物材料，加2ml样品提取液，在冰浴下研磨成匀浆，转入10ml 离心管，再用3ml提取液分次将研钵冲洗干净，一并转入试管中，摇匀后放置在4℃冰箱中。

（2）4℃下过夜提取，3500转/min离心8min, 取上清液，残渣弃去。

（3）上清液过C-18固相萃取柱。

具体步骤是： 80%甲醇（1ml）平衡柱→上样→收集样品→移开样品后用100%甲醇（5ml）洗柱→100%乙醚（5ml）洗柱→100%甲醇（5ml）洗柱→循环。

（4）将过柱后的样品转入25ml小烧杯中，真空浓缩干燥或用氮气吹干，除去提取液中的甲醇，用1ml样品稀释液定容。

植物激素的酶联免疫吸附测定法（ELISA）免疫测定是利用抗原、抗体特异性反应而建立的，根据可视化方法的不同可分为：酶联免疫、放射免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定、生物发光免疫测定、浊度免疫测定法等。

由于酶联免疫吸附分析法（Enzyme-linked Immunosorbent Assays, 简称ELISA）具有灵敏性、特异性高，且方便、快速、安全、成本低廉的特点，而日益被广泛应用于植物激素测定。

目前，几大类植物激素IAA,ABA, GA3、GA4、iPA、ZR、DHZR等都建立了相应的ELISA方法并有试剂盒出售。

植物激素的酶联免疫检测方法有两种形式（见下图），一种是在固相载体上直接包被抗体（直接法，先包被二抗，再加一抗），另一种是包被抗原（间接法）。

直接法利用游离抗原和酶标抗原与吸附的抗体进行竞争。

间接法利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体进行竞争。

间接法的原理可用下式表示：Ab+H+HP=AbH+AbHP其中Ab表示抗体，H表示游离激素，HP表示吸附在板上的激素－蛋白质复合物。

根据质量作用定律，当该反应体系中Ab及HP的量确定时，游离H越多，结合物AbH形成的就越多，而AbHP形成的就越少，即结合在板上的抗体就越少，通过酶标二抗检测结合物AbHP的多少，就可以确定游离H量的多少。

材料、试剂及设备1 材料各种新鲜植物材料2 仪器设备研钵，冷冻离心机，台式快速离心浓缩干燥器或氮气吹干装置，酶联免疫分光光度计，吸水纸，恒温箱，冰箱，酶标板（40孔或96孔），可调微量液体加样器（10μl，40μl,200μl,1000μl），带盖瓷盘（内铺湿纱布）。

3 试剂(1) 包被缓冲液：称取１.５g Na2CO3, 2.93g Na HCO3, 0.2g NaN3（可不加）, 用量筒加1 000 ml蒸馏水，pH为9.6(2) 磷酸盐缓冲液（PBS）：称取8.0g NaCl, 0.2g KH2PO4, 2.96g Na2HPO4·12H2O，用量筒加1 000 ml蒸馏水，pH为7.5。