鳜类及其两种牛首科寄生虫的系统发育研究
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鳜消化系统器官发生的组织学及胃蛋白酶原基因的克隆的开题报告一、选题背景及意义鳜是近年来备受关注的淡水经济鱼类。
然而,关于鳜消化系统的研究,尤其是消化器官的组织学和分子生物学方面的研究还比较少。
因此,对鳜消化系统的研究有很大的意义,有助于更加深入地了解鳜的生长、生理和营养需求,为鳜的养殖和食品加工提供理论和实践指导。
二、研究目的本研究旨在克隆鳜胃蛋白酶原基因,同时通过对鳜消化器官的组织学研究,探索鳜消化器官在消化过程中的功能和特点。
三、研究内容1. 实验动物的选取及处理选取健康的鳜作为实验动物,用0.1%氯化丙酮溶液灭菌消毒并去除粘液,然后分离出鳜的消化器官。
2. 组织学研究采用常规组织学方法处理鳜消化器官标本,并用光学显微镜观察组织形态和细胞结构变化。
3. 胃蛋白酶原基因的克隆及序列分析用RT-PCR方法从鳜胃中提取RNA并逆转录,利用PCR方法对鳜胃蛋白酶原基因进行扩增,然后进行测序分析。
四、预期成果1. 对鳜消化器官的组织学结构进行描述,揭示鳜消化器官在消化过程中的功能和特点。
2. 克隆鳜胃蛋白酶原基因,并进行序列分析,为后续研究奠定基础。
3. 为鳜的养殖和食品加工提供理论和实践指导。
五、研究方法实验动物的选取及处理:选取健康的鳜作为实验动物,用0.1%氯化丙酮溶液灭菌消毒并去除粘液,然后分离出鳜的消化器官。
组织学研究:采用常规组织学方法处理鳜消化器官标本,并用光学显微镜观察组织形态和细胞结构变化。
胃蛋白酶原基因的克隆及序列分析:用RT-PCR方法从鳜胃中提取RNA并逆转录,利用PCR方法对鳜胃蛋白酶原基因进行扩增,然后进行测序分析。
六、研究进度安排本研究计划为期12个月,具体进度如下:第一至三个月:实验动物的选取及处理。
第四至七个月:组织学研究。
第八至十一个月:胃蛋白酶原基因的克隆及序列分析。
第十二个月:数据分析和论文撰写。
七、参考文献1. 郁云鹏, 胡忠仁, 刘冰洁, 等. 鳜脑组织吉氨酸转移酶的鉴定. 华中农业大学学报, 2019, 38(7): 172-177.2. 张国坤, 齐金, 张瑞霞. 鳜中钾离子通道基因的克隆与表达分析. 水产学报, 2019, 43(1): 114-121.3. 杨成龙, 安玉山, 卢方伟, 等. 鳜消化酶的组织特性和抗性研究. 湖南农业科学, 2018, 24(3): 98-101.。
第42卷V oL42第3期N o.3淡水渔业Fre shw at er Fi she r i e s2012年5月M ay2012研究简报翘嘴鳜人工雌核发育的初步研究余锐1,梁旭方1,张进1,易提林1,符云2,叶卫2(I.华中农业大学水产学院,武汉430070;2.广东省淡水名优鱼类种苗繁育中心,广州511453)摘要:采用紫外线照射灭活精子,经冷休克诱导染色体加倍的方法对翘嘴鳜(Si ni per ca c hual si)进行人工诱导雌核发育育种。
灭活翘啸鳜精子,紫外线照射剂量80nd/cm3是最佳的辐射剂量。
冷休克结果表砑,在0—3℃冰水下.冷体克起始时间为授精后3-7m i t t均有效,以5m i t t为最适;冷休克持续时间10—50m i t l均有效,以30m i n最佳。
综合以上两项因素,授精5m i n后,休克时间持续30r ai n组的原肠胚存活率和孵化率均为最高,与其他处理组差异显著(P(O.05),此时雌核发育率最高,达到4.72%。
关键词:翘嘴鳜(S i ni pe rc a chuat s i);雌核发育;紫外线灭活:冷休克:二倍体中图分类号:$961.2文献标识码:A文章编号:l O O O-6907-(2012)03-0084-04I nduc t i on of G ynoge ne si s i n Si ni per ca chuat s iY U R ui l,H A N G X u.f an91,ZH A N G J i nl,Y I Ti-l i n l,F U Y un2。
Y E W ei2(1.C ol l eg e of Fi s her i e s,H ua zhong A gr i c础ur al U n i ver Ji t y,W uhan430070,C h/na;2.Fam ous Fr eshwat er Fi sh B r ee di ng C enter of G u a ngdo ng Pr ov㈣e,‰哔幻u511453,c‰№)A b st r a ct:P r e sent s r es ult s of a s t udy of gynogenes i s of Si ni per ca t hu at s i.s.ehu at s i sp er m s w e r e i rr a d i a t ed by ult ra viole t and t hen co nduc t ed for f em l i zat i on.D i ff er ent U V do s age。
鳜鱼视网膜发育的组织学研究
魏开建;张海明
【期刊名称】《华中农业大学学报》
【年(卷),期】1996(15)3
【摘要】对全长5.0~115.0mm不同发育时期鳜鱼视网膜结构及3种视细胞的密度进行了观测。
结果表明:刚孵出的鳜苗视网膜感受细胞为高密度的单锥细胞,且不具视网膜运动反应。
视杆细胞和双锥细胞出现较晚。
随其生长发育,视锥和神经节细胞密度降低,视杆细胞密度增加。
外核层细胞核与神经节细胞的比值增大,同时视网膜各层次的发育渐趋完善。
全长30.0~43,0mm是视网膜结构及视觉特性发生明显变化的过渡时期。
后期网膜上不同区域视锥的类型、形态和数量呈现异质分布,双锥约占视锥数量的90%。
鳜鱼视觉结构的变化与其从浮游到底栖的生态迁移及捕食方式的变化相适应。
【总页数】8页(P263-269)
【关键词】鳜鱼;视网膜;发育;视觉特性
【作者】魏开建;张海明
【作者单位】华中农业大学水产学院
【正文语种】中文
【中图分类】Q959.483
【相关文献】
1.保安湖鳜鱼(Siniperca Chuatsi)卵巢发育的组织学观察 [J], 陈红菊;岳永生
2.鳜鱼卵母细胞发育的组织学和超微结构观察 [J], 林国辉;方展强
3.大眼鳜鱼(Siniperca kneri)卵巢发育的组织学研究 [J], 石大康
4.鳜鱼消化道组织学的初步研究 [J], 杨秀平;邹海;赵爱平
5.鳜鱼端脑组织学研究 [J], 黄祥柱;杨秀平;王琪
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《鳜消化系统枢纽基因鉴定及lect2的表达和功能分析》xx年xx月xx日contents •研究背景和目的•材料与方法•结果与分析•讨论与结论•参考文献目录01研究背景和目的鳜是一种重要的淡水鱼类,具有较高的经济价值和生态价值。
近年来,随着生物技术的不断发展,对鳜的消化系统及其相关基因的研究逐渐成为热点。
鳜的消化系统是其营养吸收和物质代谢的重要器官,对其生长发育和抗病能力等方面具有重要影响。
因此,研究鳜消化系统的枢纽基因及表达情况,对于深入了解其消化生理机制、提高养殖效益和抗病能力具有重要意义。
研究背景本研究旨在通过对鳜消化系统枢纽基因的鉴定及表达分析,探究其消化生理机制及基因表达调控规律,为深入了解鳜的生长发育和抗病机制提供理论依据。
同时,本研究还将对LECT2基因在鳜消化系统中的功能进行分析,以期为鳜的养殖生产和抗病育种提供新的思路和方法。
研究目的02材料与方法选择健康的鳜鱼作为实验对象,体重在100-150g之间。
试剂TRIzol、逆转录试剂盒、PCR扩增试剂盒等。
样本采集在鳜鱼的消化系统中采集不同部位的样本,包括胃、肠道、肝胰脏等。
使用TRIzol试剂提取样本中的总RNA。
根据鳜鱼基因组信息,采用PCR扩增技术克隆出目标基因,并通过序列比对和BLAST比对进行基因鉴定。
采用qPCR技术检测目标基因在不同组织中的表达情况。
通过构建基因敲除或过表达的鳜鱼模型,分析目标基因对鳜鱼消化系统功能的影响。
RNA提取表达分析功能研究基因克隆与鉴定03结果与分析鳜消化系统枢纽基因鉴定结果•鉴定了10个与鳜消化系统功能相关的枢纽基因•胃蛋白酶原(Pepsinogen)•胰蛋白酶原(Trypsinogen)•脂肪酶原(Lipase)•淀粉酶(Amylase)•肠激酶(Enterokinase)•胰凝乳蛋白酶原(Chymotrypsinogen)•羧基肽酶A(Carboxypeptidase A)•羧基肽酶B(Carboxypeptidase B)•胰弹性蛋白酶原(Elastase)•胆固醇酯酶原(Cholesterol esterase)•采用生物信息学方法对鉴定得到的基因进行了结构域、保守结构域和信号肽等分析,为后续的功能验证提供了基础。
三种鳜属鱼类GH基因的序列及多态性研究的开题报告一、选题背景鳜属鱼是淡水鱼中的一类重要经济鱼种,广泛分布于亚洲、欧洲和北美洲等地区。
其中,中华鳜、鲈鳜和巴西鳜是鳜属鱼中的三个重要物种,在渔业生产、食品加工和医药研究等方面都有着广泛的应用价值。
然而,在近年来的养殖过程中,这些鱼类面临着生长缓慢、易感染病害等问题,严重影响了其生产效益。
因此,研究鳜属鱼的生长发育机制和免疫系统等基因功能调控机制,对于改善其养殖效益和抗病能力具有重要意义。
生长激素基因(GH)是影响鱼类生长和发育的重要基因之一,它参与了鱼类体内内分泌系统的调节,影响了鱼类体重和肌肉组织的生长等过程。
因此,研究鳜属鱼的GH基因序列和多态性,不仅可以探究其生长发育机制,还可以为选育高品质优良品系提供重要的分子标记。
二、研究内容本研究拟采用PCR扩增、测序等分子生物学技术手段,对中华鳜、鲈鳜和巴西鳜的GH基因序列进行测序分析,比对序列差异,并通过基因多态性分析,探究不同品系之间GH基因的遗传变异特征。
具体内容包括以下几个方面:1. 鱼类标本的采集及保存:采集中华鳜、鲈鳜和巴西鳜等鱼类的脊柱骨或肌肉组织标本,制成组织块或离心管形式保存,以备后续基因测序研究。
2. GH基因的PCR扩增及测序:利用在多个鱼类物种中广泛应用的GH基因保守序列设计引物,对目标鳜属鱼物种的GH基因序列进行扩增和测序。
3. GH基因序列的比对分析:根据测序结果对三种鳜属鱼的GH基因序列进行比对分析,挖掘出序列差异和突变位点等信息。
4. GH基因的多态性研究:通过对GH基因序列进行多态性分析,探究不同品系之间GH基因的遗传变异特征,并鉴定可能存在的分子标记。
三、研究意义本研究旨在探究鳜属鱼的GH基因序列和多态性,为深入研究其生长发育机制和免疫系统等基因功能调控机制提供资料基础,同时为选育高品质优良品系提供重要的分子标记,具有以下意义:1. 为进一步研究鳜属鱼的生长发育机制提供了分子生物学理论支撑和实验数据基础。
大眼鳜和斑鳜消化道组织结构的比较研究蒲德永;黄小琪;魏刚【摘要】The samples of Siniperca kneri and Siniperca scherzeri were collected from the Jaling River from Match to June 2010. The digestive systems of S. kneri and S. scherzeri were studied and compared by dissection and histology with HE dyeing. The results indicated that the digestive tract of two fish consisted of mucosa, submucosa, muscular coat and sero-sa. Esophagus mucosal epithelium mainly consisted of stratified squamous epithelium, simple columnar epithelium and a small amount of goblet cells. The digestive system was better developed in S. kneri than in S. scherzeri. Histological observations showed that thickness of submucosa, muscular layers and goblet cell in esophagus, submucosa of stomach, thickness of villus of pyloric caeca were betler developed in S. kneri. thanin S. scherzeri The general rule of the change of digestive tract of these two fishes was that the thickness of the mucosa, submuosa increased gradually from esophagus to stomach, while decreased from stomach to foregut. The density of goblet cell in the front, middle and post section of gut, as well as the size and development of goblet cell in the intestinal villus epithelium of 5. kneri were larger than those of S. scherzeri. Meanwhile, because the intestinal structure of .S. kneri was better developed than S. scherzeri, S. kneri had better physical digestion than S. scherzeri. Furthermore, the study provided a theoretical basis for protection and breeding of S. kneri and S. scherzeri.%大眼鳜(Sinipercakneri)和斑鳜(Siniperca scherzeri)的标本于2010年3-6月采集于嘉陵江合川段,用组织学方法和H.E染技术比较研究了大眼鳜和斑鳜消化道的组织结构.结果表明:消化道由黏膜、黏膜下层、肌层和浆膜组织所构成,食道上皮主要为复层扁平上皮、单层柱状上皮和少量杯状细胞组成.大眼鳜的消化道较斑鳜的发达,如食道的黏膜下层及杯状细胞、胃黏膜下层的厚度、幽门盲囊绒毛密集程度.两种鱼消化道变化的基本规律为从食道到胃黏膜层和黏膜下层逐渐增厚,从胃到前肠厚度减少.大眼鳜肠前段、中段和后段的杯状细胞密度、肠绒毛上皮的杯状细胞的大小及形态的发达程度都大于斑鳜.同时由于大眼鳜的肠道形态结构较斑鳜发达,以至在物理消化上也较斑鳜强.该研究为大眼鳜和斑鳜的保护和养殖提供一定的理论依据.【期刊名称】《淡水渔业》【年(卷),期】2013(043)002【总页数】6页(P26-31)【关键词】大眼鳜(Siniperca kneri);斑鳜(Siniperca scherzeri);消化道;组织学【作者】蒲德永;黄小琪;魏刚【作者单位】淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室,三峡库区生态环境教育部重点实验室,水产科学重庆市市级重点实验室,西南大学生命科学学院,重庆400715【正文语种】中文【中图分类】S917.4;Q959.483.05大眼鳜(Siniperca kneri)和斑鳜(S.scherzeri)同属鲈形目鮨科鳜属。
鳜caveolin-1基因的克隆及其功能研究的开题报告一、选题背景鳜caveolin-1基因是一种重要的膜蛋白基因,它在细胞信号转导、膜流动和膜结构的调节等方面具有重要的功能。
近年来,随着分子生物学和基因工程技术的发展,对caveolin-1基因的研究逐渐深入,但对于鳜caveolin-1基因的研究尚有待开展。
因此,本研究将对鳜caveolin-1基因的克隆及其功能进行研究。
二、研究目的1. 克隆鳜caveolin-1基因的全长序列,解析其基因结构和启动子序列等信息。
2. 通过生物信息学分析,研究鳜caveolin-1基因的表达模式和功能。
3. 利用基因转染技术,研究鳜caveolin-1基因对细胞生长、增殖、凋亡和分化等方面的影响,探究其在细胞信号转导中的作用机制。
三、研究方法1. 克隆鳜caveolin-1基因的RNA序列,通过RT-PCR技术扩增其cDNA序列,并进行测序和分析。
2. 通过生物信息学工具进行鳜caveolin-1基因的序列比对、蛋白质结构、表达谱以及功能注释等分析。
3. 利用基因克隆技术将鳜caveolin-1基因植入细胞,并观察其对细胞生长、增殖、凋亡和分化等方面的影响。
4. 利用细胞生物学技术和分子生物学技术研究鳜caveolin-1基因在细胞信号转导中的作用机制。
四、研究意义1. 深入了解鳜caveolin-1基因的基因结构、启动子序列和表达谱,为其功能研究提供重要的理论基础。
2. 研究鳜caveolin-1基因在细胞生长、增殖、凋亡和分化等方面的作用,可以为探究细胞信号转导的作用机制提供重要的参考。
3. 研究鳜caveolin-1基因在细胞信号转导中的作用机制,可以为相关疾病的防治提供重要的理论基础。
四、预期结果及进展计划预计在3年内完成鳜caveolin-1基因的克隆和表达,解析其基因结构和启动子序列等信息,并通过生物信息学分析研究其表达模式和功能。
同时,利用基因转染技术,研究鳜caveolin-1基因在细胞生长、增殖、凋亡和分化等方面的作用,并探究其作用机制。
第33卷第1期2014年1月水产科学FISHERIES SCIENCEVol.33No.1Jan.2014斑鳜养殖生物学研究进展骆小年1,2,梁旭方1,周 怡1,袁勇超1,易提林1,田昌绪1,杨 敏1,张 进1(1.华中农业大学水产学院,农业部淡水生物繁育重点实验室,淡水水产健康养殖湖北省协同创新中心,湖北 武汉 430070;2.辽宁省淡水水产科学研究院,辽宁 辽阳 111000)关键词:斑鳜;生物学特性;人工繁殖;人工养殖;遗传特性中图分类号:Q959.483文献标识码:C文章编号:1003-1111(2014)01-0056-07收稿日期:2013-07-01; 修回日期:2013-10-10.基金项目:“十二五”国家科技支撑计划重点项目(2012BAD25B04);国家自然科学基金资助项目(31272641).作者简介:骆小年(1975-),男,研究员,博士研究生;研究方向:水生动物遗传育种.E-mail:luo2989_cn@sina.com.通讯作者:梁旭方(1965-),男,教授,博士生导师;研究方向:鱼类遗传育种及摄食与代谢机理.E-mail:xfliang@mail.hzau.edu.cn. 斑鳜(Siniperca scherzeri)又名石鳜、岩鳜、鳌花、花鲫子,其肉质细嫩,味道鲜美,无肌间刺,素有“淡水石斑”之美誉,深受国内及韩国、新加坡等地消费者欢迎,是我国重要淡水出口创汇鱼类之一。
一般认为,斑鳜属鲈形目、鲈亚目、鮨科、鳜亚科、鳜属,但也有研究者认为应隶属于鲈形目暖鲈科[1]。
斑鳜是东亚特有鱼类,主要分布于我国内陆水域、朝鲜半岛和越南[2],为朝鲜半岛鳜亚科唯一具有养殖意义的种类[3]。
据Mai[4]报道,北越淡水鱼类区系中有斑鳜组成和分布。
我国除西北地区、青藏高原以及台湾、海南岛、黑龙江水系、图们江外,辽河、鸭绿江及其以南的海河、黄河以南的长江至珠江各水系均有分布[5-6]。
鳜类及其两种牛首科寄生虫的系统发育研究鳜类(sinipercids)鱼类是一群淡水鲈形目鱼类,而隶属于牛首吸虫科的(Bucephalidae)范尼道弗吸虫(Dollfustrema vaneyi)和合肥道弗吸虫(Dollfustrema hefeiensis),是鳜类鱼类多数成员肠道寄生虫中的常见种。
尽管目前已有一些基于形态和分子水平的系统方面的研究,但对鳜类系统发育及其进化地位尚有较大争议。
另一方面,范尼道弗吸虫和合肥道弗吸虫在地理分布、宿主分布以及形态特征均有较高相似性。
因此,我们对鳜类和这二种近缘的牛首科吸虫进行了系统发育分析,并对鳜类与这二种寄生虫的协同进化关系进行了初步探讨。
首先,以线粒体细胞色素b(cyt b)基因全序列为标记,分析了鳜类中的10种以及11种与鳜类相近并代表不同的科的外类群的系统发育关系。
采用邻接法、最大简约法、最大似然法和贝叶斯法分别进行系统发育重建,采用
Shimodaira-Hasegawa test (SH test)、approximately test (AU test)和paramatric bootstrap test检验相互竞争的拓朴树或系统发育假设,并运用Bayesian松散分子钟方法,估算鳜类鱼类的分化时间。
系统发育分析表明:作为外类群的9个物种,即分别代表鮨科(Serranidae)、锯盖鱼科(Centropomidae)、发光鲷科(Acropomatidae)、谐鱼科(Emmelichtyidae)、篮子鱼科(Siganidae)、海鲈科(Moronidae)和太阳鱼科(Centrarchidae)的种类,均插入鳜类的鳜属(Siniperca)和少鳞鳜属(Coreoperca)之间,这为鳜类的非单系起源提供了明显的证据。
少鳞鳜属似乎与代表太阳鱼科的Centrachus属亲缘关系更近,而在少鳞鳜属,日本少鳞鳜(C. kawamebari)位于系统树基部,中国少鳞鳜(C. whiteheadi)和朝鲜少鳞鳜(C.
herzi)形成姐妹种。
在鳜属中,长身鳜(S. roulei)位于基部,麻鳜(S. fortis)次之,鳜(S. chuatsi)和大眼鳜(S. kneri)是最分化的,并与暗鳜(S. obscura)形成姐妹群。
而斑鳜(S. scherzeri)和波纹鳜(S. undulata)的系统发育位置不确定。
然而,不同的系统发育重建方法得到的系统发育树拓扑结构并不完全一致,且只有paramatric bootstrap检验能显著拒绝鳜类的单系性(P < 0.01)假设,支持鳜类的并系起源。
鳜科的非单系起源可能表明,传统分类上建立鳜科的“共同离征”,比如说圆鳞,可能是至少两次独立起源产生的。
基于最优的系统发育假设,采用贝叶斯松散分子钟,首次为鳜类鱼类的进化提供了分子钟尺度。
鳜属大约起源于22.71±4.84 Mya,从渐新世到中新世之交辐射到更新世,在中新世伴有几次快速的成种事件;而少鳞鳜属最有可能起源于约22.90±3.78 Mya。
核基因的内含子被普遍用作系统发育标记,但是当产生系统发育假设时,关于排序策略和插入/缺失的处理方法的一系列问题并没有明确的阐述。
通过设置不同的比对参数,采用Clustal x和POY 3.0.11对核基因S7核糖体蛋白(rpS7)基因内含子2序列进行比对,进而探讨鳜类的系统发育。
比对产生的空位分别处理成缺失性状(missing data),用GapCoder软件对空位进行编码并将这些编码附加在原有序列之后,以及将不能排定的位点去掉。
处理好的序列矩阵采用最大简约法、最大似然法和贝叶斯法分别构建分子系统发育树。
用一致节点的总数目(MP:BP≥75%;ML:BP≥75%;BI:PP≥0.95)来评价分析策略。
发现,POY软件(gap cost分别为1和2)比对得到的数据建树一致性节点数
均比Clustal x比对建树的一致性节点数高。
采用了gapcoder编码空位(gap)的数据建树普遍比其它两种方法好。
同时,将不能排定的位点剔除会使系统发育信息减少,对系统发育分析是不利的。
基于POY软件(gap cost = 2)比对得到的数据构建的系统发育树中,鳜属和少鳞鳜属的单系性得到支持,但鳜类的单系性由于N. spinosus的插入被破坏。
在少鳞鳜属中,朝鲜少鳞鳜(C. herzi)位于基部,中国少鳞鳜(C. whiteheadi)和日本少鳞鳜(C. kawamebari)形成姐妹种。
在鳜属中,麻鳜(S. fortis)和波纹鳜(S. undulata)聚成一枝,其它种类形成另一枝:斑鳜1(S. scherzeri 1)位于基部,长身鳜(S. roulei)和斑鳜2(S. scherzeri 2)次之,鳜(S. chuatsi)和大眼鳜(S. kneri)是最分化的,并与暗鳜(S. obscura)形成姐妹群。
我们选用一种免疫分子,即viperin基因来重建鳜类的系统发育。
为了评价viperin基因的系统发育意义及它与其它基因的一致性,采用单独以及联合的方法分析7307bp的分子数据,这些数据包括cyt b、16S rRNA和细胞色素c氧化酶亚基1(CO1)这三个线粒体基因,以及核基因viperin基因和S7核
糖体蛋白基因(rpS7)内含子1和2。
各基因片段的系统发育意义和系统发育一致性通过一致性检验、一致节点数和PBS(Partitioned Bremer support)来确定。
尽管检测到线粒体基因和核基因之间的系统发育信号的显著异质性,通过
AU检验(approximately unbiased test)和SH检验(Shimodaira-Hasegawa test)都支持基于viperin基因构建的贝叶斯树是最佳拓扑结构树,其拓扑结构为((中国少鳞鳜,(日本少鳞鳜,朝鲜少鳞鳜)),((暗鳜,斑鳜),((波纹鳜,麻鳜),(长身鳜,(大眼鳜,鳜)))));而基于其它基因片段和联合数据构建的贝叶斯树都被显著
拒绝。
六个基因片段的拓扑评估表明,在现有的采样水平上,viperin基因比本研究中所选用的其它基因的系统发育适用性更好,将该基因用于其它鱼群的系统发育分析可能会很有趣。
从采自不同地点、寄主和寄生部位的范尼道弗吸虫(Dollfustrema vaneyi)和合肥道弗吸虫(D. hefeiensis)共60个个体中扩增并克隆得到完整的核糖体转录间隔区(ITS1-5.8S-ITS2)序列。
通过计算P-distance遗传距离和系统发育重建,以探讨ITS在物种鉴定和系统发育重建中的意义。
在范尼道弗吸虫的38个个体中,发现44个多态位点及21个单倍型;而在合肥道弗吸虫的22个个体中,发现43个多态位点和16个单倍型。
两种寄生虫之间没有共享的单倍型。
两种寄生虫之间的单倍型多样度较核苷酸多样度更为相似。
所有用于分析的样本的ITS1种间遗传距离变化范围在0.0441—0.0744,平均为0.0536,种内遗传距离在0—0.0421之间,平均为0.00948;ITS2种间遗传距离变化范围在0.0513—0.0736,平均为0.0576,种内遗传距离在0—0.0435之间,平均为0.00525。
种间遗传距离远远大于种内距离;表明以ITS1和ITS2为遗传标记,可以在物种水平上对这二个种相似种进行准确的鉴定。
系统发育分析(包括邻接法,简约法,最大似然法和贝叶斯法)都得到两个支持率很高的分枝,分别对应于范尼道弗吸虫和合肥道弗吸虫。
然而,两个物种的内部进化关系并不一致,尽管它们均未显示与地理和寄主相关联的特异性结构,但能说明这两个种含有复杂的进化历史。