反硝化细菌精品PPT课件
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硝化反硝化A、硝化反应过程:在有氧条件下,氨氮被硝化细菌所氧化成为亚硝酸盐和硝酸盐。
他包括两个基本反应步骤:由亚硝酸菌(Nitrosomonas sp)参与将氨氮转化为亚硝酸盐的反应;硝酸菌(Nitrobacter sp)参与的将亚硝酸盐转化为硝酸盐的反应,亚硝酸菌和硝酸菌都是化能⾃养菌,它们利⽤CO2、CO32-、HCO3-等做为碳源,通过NH3、NH4+、或NO2-的氧化还原反应获得能量。
硝化反应过程需要在好氧(Aerobic或Oxic)条件下进⾏,并以氧做为电⼦受体,氮元素做为电⼦供体。
其相应的反应式为:亚硝化反应⽅程式:55NH4++76O2+109HCO3→C5H7O2N﹢54NO2-+57H2O+104H2CO3硝化反应⽅程式:400NO2-+195O2+NH4-+4H2CO3+HCO3-→C5H7O2N+400NO3-+3H2O硝化过程总反应式:NH4-+1.83O2+1.98HCO3→0.021C5H7O2N+0.98NO3-+1.04H2O+1.884H2CO3通过上述反应过程的物料衡算可知,在硝化反应过程中,将1克氨氮氧化为硝酸盐氮需好氧4.57克(其中亚硝化反应需耗氧3.43克,硝化反应耗氧量为1.14克),同时约需耗7.14克重碳酸盐(以CaCO3计)碱度。
在硝化反应过程中,氮元素的转化经历了以下⼏个过程:氨离⼦NH4-→羟胺NH2OH→硝酰基NOH→亚硝酸盐NO2-→硝酸盐NO3-。
B、反硝化反应过程:在缺氧条件下,利⽤反硝化菌将亚硝酸盐和硝酸盐还原为氮⽓⽽从⽆⽔中逸出,从⽽达到除氮的⽬的。
反硝化是将硝化反应过程中产⽣的硝酸盐和亚硝酸盐还原成氮⽓的过程,反硝化菌是⼀类化能异养兼性缺氧型微⽣物。
当有分⼦态氧存在时,反硝化菌氧化分解有机物,利⽤分⼦氧作为最终电⼦受体,当⽆分⼦态氧存在时,反硝化细菌利⽤硝酸盐和亚硝酸盐中的N3+和N5+做为电⼦受体,O2-作为受氢体⽣成⽔和OH-碱度,有机物则作为碳源提供电⼦供体提供能量并得到氧化稳定,由此可知反硝化反应须在缺氧条件下进⾏。
1.筛选出的反硝化细菌的鉴定2.2.4.1菌落形态观察将反硝化细菌于LB固体培养基上,28℃培养48h观察菌落形态。
2.2.4.2革兰氏染色以18一24h培养物涂片,干燥后火焰固定,结晶紫染色1.min,水洗,卢氏碘液媒染1min,水洗,95%乙醇脱色20Sec一25Sec,水洗,番红复染5min,水洗,晾干,用油镜观察菌体形态和革兰氏染色反应,以枯草芽抱杆菌和大肠菌作为对照菌株。
2.2.4.3接触酶(过氧化氢酶)试验取1mLH2o:放在菌苔上,或者在干净的载玻片上将菌苔与一环HZO:混合如果立即产生气泡则为过氧化氢酶阳性,否则为阴性。
2.2.4.4产硫化氢试验向牛肉膏蛋白陈培养基中加入0.01%肤氨酸或者半肤氨酸。
接种后,用管棉塞夹住一醋酸铅滤纸条(用5%的醋酸铅浸泡滤纸条,烘干后高温灭菌,烘干后使用),纸条下端接近液面但不接触溶液。
28℃培养2一7天,每天观察。
如果醋酸铅纸条下端变成黑色,表明产生硫化氢。
如果培养7天后,纸条仍未黑,在培养液中加入0.5rnL2mol几HCI,立即塞上棉塞和醋酸铅纸条,如纸变黑,仍按产生硫化氢处理。
2.2.4.5葡萄糖氧化发酵试验培养基:蛋白脉29,NaCI59,KZHPO40.39,琼脂3一59,澳百里酚蓝(1的水溶液)3mL,葡萄糖109,水1000mL,pH7.0一7.4。
分装到小试管,使培养基高度约为3一4cm,使溶液呈明显的蓝绿色到绿色宜,121℃灭菌30而n后,使试管直立冷却。
以18一24h的培养物穿刺接种,培养约12h后开始观察。
如果产酸变色培养基表面开始向下扩散,就属于氧化菌;如果产酸变色自接种线自下而上发生,则属于发酵菌。
2.2.4.6明胶液化试验培养基:蛋白陈59,明胶1209,水1000mL,pH7.2一7.4,分装小试管,115’C灭菌20min。
穿刺接种,28OC培养48h后观察培养基有无液化现象及液化后的形状。
胶在低于20℃时凝固,高于25OC时液化,放在冰浴中观察。