蒽酮比色法快速测定葡萄糖

蒽酮比色法，具体步骤一、仪器、试剂和材料1.仪器：电子天平，超声波清洗器，电热恒温水浴锅，抽滤设备，分光光度计，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液：l00 µg/mL(2)浓硫酸(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 mL浓H2SO4中。

当日配制使用。

3.材料：甜高粱，甘草二.操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：管号1234567葡萄糖标准液（mL）0.10.20.30.40.60.8蒸馏水（mL）10.90.80.70.60.40.2葡萄糖含量（µg）102030406080在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0mL，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。

自水浴沸腾起计时，准确煮沸l0 min，取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。

以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。

2.植物样品中可溶性糖的提取：将样品粉碎，105 ºC烘干至恒重，精确称取1~5 g，置于50mL三角瓶中，加沸水25mL，加盖，超声提取10 min，冷却后过滤（抽滤），残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤（抽滤），滤液收集在50mL容量瓶中，定容至刻度，得可溶性糖的提取液。

3.稀释：吸取提取液2mL，置于另一50mL容量瓶中，以蒸馏水定容，摇匀。

4.测定：吸取1 mL已稀释的提取液于试管中，加入4.0 mL蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水替代提取液。

以下操作同标准曲线制作。

根据A620平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量（µg）。

三、结果处理：C × V总× D样品含糖量（%）= ————————————— × 100%W × V测× 106其中：C——在标准曲线上查出的糖含量（µg），V总——提取液总体积（mL），V测——测定时取用体积（mL），D——稀释倍数，W——样品重量（g），106——样品重量单位由g换算成µg的倍数。

蒽酮比色法葡萄糖标准曲线操作方法(一)
蒽酮比色法葡萄糖标准曲线操作
引言
蒽酮比色法是一种常用的测定葡萄糖含量的方法，它通过测量葡
萄糖溶液与蒽酮反应产生的紫色溶液的吸光度，来推断葡萄糖的浓度。

本文将介绍如何操作蒽酮比色法来绘制葡萄糖的标准曲线。

实验材料准备
•蒽酮溶液
•mol/L 磷酸二氢钾溶液
•磷酸(pH=)
•葡萄糖溶液 (不同浓度)
•分光光度计
•塑料比色皿
•移液器
•艾氏试管 (10 mL)
实验步骤
1.准备一组葡萄糖标准溶液，包括不同浓度的葡萄糖溶液和纯磷酸
二氢钾溶液。

葡萄糖的浓度可选取为、、、、和 mg/mL，磷酸二氢钾的浓度为 mol/L。

2.取一定体积的葡萄糖标准溶液，加入到不同的艾氏试管中。

3.分别加入相同体积的磷酸，混合均匀。

4.将每个试管内的溶液均匀地倒入塑料比色皿中。

5.使用分光光度计，在波长为540 nm 处进行初始的零值调整。

6.依次测量每个标准溶液的吸光度，并记录数据。

7.将吸光度数据与标准溶液浓度建立线性回归，绘制葡萄糖的标准
曲线。

数据处理与分析
通过将吸光度数据与标准溶液浓度进行线性回归，可以得到葡萄糖标准曲线的方程式，并利用该方程式可以预测未知葡萄糖样品的浓度。

结论
蒽酮比色法是一种简单、快速而准确的测定葡萄糖含量的方法。

通过制备葡萄糖标准曲线，我们能够利用吸光度测量的数据推断未知葡萄糖样品的浓度。

这项实验不仅可用于葡萄糖测定，也可用于其他具有还原性的物质的测定。

啤酒中糖含量的测定蒽酮比色法测总糖一．实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。

该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。

一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。

二．仪器与药品1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液（l00 µg/ml）：精确称取100mg干燥葡萄糖，先用蒸馏水定容至100ml，再取出10ml定容至100ml；(2)浓硫酸；(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H2SO4中。

当日配制使用；(4)啤酒（不用处理）。

三．实验步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。

自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。

以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。

2.稀释：吸取啤酒1-2 m1稀释至500ml（先吸取2ml啤酒定容至100ml，再吸取10ml 已稀释的啤酒将其定容至50ml）即2ml→100ml→取出10ml→定容至100ml3.测定吸取1.00ml已稀释的啤酒于试管中，加入4.O ml蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水取代啤酒。

以下操作同标准曲线制作。

根据A620平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量（µg）。

四．数据记录与处理1.校准空白值2.标准曲线的绘制3.由上面表格可作出下面的曲线Y轴为校正后的A值X轴为葡萄糖的浓度4.待测啤酒编号7 8 9A 0.480 0.472 0.542校正后A值0.484 0.480 0.5465 .数据处理由标准曲线可得：A=7.1256C(*)啤酒的A的平均值为：（0.484+0.480+0.546）/3=0.503将0.503代入(*)式得:C=A÷7.1256=0.0706（mg/ml)则啤酒中总糖的含量为:0.0706×250=17.6（mg/ml)=1.8（g/100ml)。

植物可溶性糖(soluble sugar)测定:蒽酮比色法糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物。

在低浓度时，625nm的OD值与糖含量成正相关。

该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。

实验用品721型分光光度计，分析天平，研钵，恒温水浴锅，烧杯，刻度试管，大试管，移液管，漏斗，玻璃棒，试管架，吸耳球，滤纸试剂：活性炭，酒精（80%）葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每mL含糖为200μg的标准溶液。

蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。

稀硫酸溶液由760mL 浓硫酸（比重1.84）稀释成1000mL而成。

实验步骤1.可溶性糖的提取：称取0.5g的新鲜植物叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80℃水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。

在上清液中加0.5g活性炭，80℃水浴脱色30min，定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。

2.显色及比色：吸取上述糖提取液1mL，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。

从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数。

3.绘制标准曲线：取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、30、60、90、120、150、180μg。

按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625－糖浓度曲线，或进行直线回归求得直线方程。

试剂（ml) 管号1 2 3 4 5 6 7葡萄糖标准液 0 0.15 0.3 0.45 0.6 0.75 0.980%酒精 1.0 0.85 0.7 0.55 0.4 0.25 0.1蒽酮-硫酸试剂 5 5 5 5 5 5 5葡萄糖浓度（ul/ml) 0 30 60 90 120 150 180 样品中含糖量％：设V为植物样品稀释后的体积（m L）；C为提取液的含糖量(μg/ m L)；W为植物组织鲜重(g)可溶性糖含量％＝( C×V)/(W×106) ×100%可溶性糖(SS) 含量的测定: 根据赵世杰[20 ] 的方法。

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量
操作步骤
葡萄糖标准曲线的制作
取6支具塞试管，按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2个重复：
管号0 1 2 3 4 5
标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水/mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
在每支试管中立即加入蒽酮试剂4mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热10min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却10min。

在652nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。

以标准葡萄糖含量( g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。

样品的测定
将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。

在652nm波长下迅速测定各管吸光值。

根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。

Cri-J。

总糖测定——蒽酮比色法一、原理：单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，当含糖量在20～200mg/L范围内时，其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可比色定量。

二、试剂：1、10～100ppm葡萄糖系列标准溶液：称取1.0000g葡萄糖，用水定容至1000ml，从中吸取1、2、4、6、8、10ml分别移入100ml容量瓶中，用水定容，即得浓度为10、20、40、60、80、100ppm（ug/ml）葡萄糖系列标准溶液。

2、0.1%蒽酮溶液：称取0.1g蒽酮，溶于100ml72%硫酸中，贮存于棕色瓶中，于0～4℃下存放。

3、72%硫酸溶液。

三、测定方法：（一）样品处理：称取适量样品，用100ml水转移至250ml容量瓶，慢慢加入5ml乙酸锌和5ml亚铁氰化钾，沸水浴5～10min，定容，静置至上清，过滤。

根据估计含糖量，去滤液进行稀释，使糖含量在20～80mg/L范围内。

（二）测定吸取系列标准溶液、样品溶液（含糖20～80ppm）、蒸馏水（空白）各2ml，分别加入具塞比色管中，沿管壁各加入蒽酮试剂10ml，立即摇匀，放入沸水浴中准确加热10min，取出，迅速冷却至室温，在暗处放置10min，用1cm比色杯，以零管调仪器零点，在620nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。

根据样品溶液的吸光度查标准曲线，得糖含量。

四、结果计算：总糖（以葡萄糖计，%）=c×稀释倍数×10-4式中：c：从标准曲线查得的糖浓度，ppm（ug/ml）；10-4：将ppm换算为%的系数五、说明与讨论1、该法是微量法，适合于含微量碳水化合物的样品，具有灵敏度高，试剂用量少等优点。

2、该法按操作的不同可分为几种，主要差别于蒽酮试剂中硫酸的浓度（66～95%），取样量（1～5ml）、蒽酮试剂用量（5～20ml）、沸水浴中反应时间（6～15min）和显色时间（10～30min）。

这几个操作条件之间是有联系的，不能随意改变其中任何一个，否则将影响分析结果。

蒽酮比色法蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。

蒽酮可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。

本法多用于测定糖原的含量，也可用于测定葡萄糖的含量。

蒽酮比色法测糖试验蒽酮比色法测定多糖含量1、蒽酮比色法测糖试验一实验目的掌握蒽酮比色法测糖的原理和方法二实验原理蒽酮可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。

三实验器材及试剂马铃薯干粉可调试移液器或移液管可见分光光度计（723型）电子分析天平水浴锅电炉子蒽酮试剂：取2g蒽酮溶解到80%H2SO4中，以80%H2SO4定容到1000ml，当日配制使用。

标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）：100mg葡萄糖溶解到蒸馏水中，定容到1000ml 备用。

四、操作1.制作标准曲线取7支干燥洁净的试管，按表1顺序加入试剂，进行测定。

以吸光度值为纵坐标，各标准溶液浓度（mg/ml ）为横坐标作图得标准曲线。

表1 蒽酮比色法定糖——标准曲线的制作沸水浴中准确煮沸10min，取出用流水冷却，室温放10min,于620nm处比色葡萄糖浓度（mg/ml）2.样品含量的测定样品液的制作：精确称取马铃薯干粉0.1g置于锥形瓶中—→加入30ml沸水—→沸水浴30min（不时摇动）—→取出，3000rpm离心10min（或过滤）—→反复洗涤残渣2次—→合并滤液—→冷却至室温—→定容到50ml的锥形瓶中—→再从中取出1ml，再定容到10ml的容量瓶中样品液的测定：（1）取4支试管，按照表2加样（加蒽酮时需要冰水浴5min冷却）表2 蒽酮比色法定糖——样品的测定（2）加样冷却完成后置沸水中煮沸10min，取出流水冷却放置10min，620nm 处比色测量各管OD值。

（3）以1号试管作为调零管，2、3、4号管的OD值取平均后从标准曲线上查出样品液相应的含糖量。

3．结果计算：C×Vw = ————×100%m，式中w：糖的质量分数（%）C：从标准曲线中查出的糖质量分数（mg/ml）V：样品稀释后的体积（ml）m：样品的质量（ml）2、蒽酮比色法测定多糖含量一试验原理植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外，其含量也随之发生变化。

总糖测定——蒽酮比色法一、原理：单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，当含糖量在20～200mg/L范围内时，其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可比色定量。

二、试剂：1、10～100ppm葡萄糖系列标准溶液：称取1.0000g葡萄糖，用水定容至1000ml，从中吸取1、2、4、6、8、10ml分别移入100ml容量瓶中，用水定容，即得浓度为10、20、40、60、80、100ppm（ug/ml）葡萄糖系列标准溶液。

2、0.1%蒽酮溶液：称取0.1g蒽酮，溶于100ml72%硫酸中，贮存于棕色瓶中，于0～4℃下存放。

3、72%硫酸溶液。

三、测定方法：（一）样品处理：称取适量样品，用100ml水转移至250ml容量瓶，慢慢加入5ml乙酸锌和5ml亚铁氰化钾，沸水浴5～10min，定容，静置至上清，过滤。

根据估计含糖量，去滤液进行稀释，使糖含量在20～80mg/L范围内。

（二）测定吸取系列标准溶液、样品溶液（含糖20～80ppm）、蒸馏水（空白）各2ml，分别加入具塞比色管中，沿管壁各加入蒽酮试剂10ml，立即摇匀，放入沸水浴中准确加热10min，取出，迅速冷却至室温，在暗处放置10min，用1cm比色杯，以零管调仪器零点，在620nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。

根据样品溶液的吸光度查标准曲线，得糖含量。

四、结果计算：总糖（以葡萄糖计，%）=c×稀释倍数×10-4式中：c：从标准曲线查得的糖浓度，ppm（ug/ml）；10-4：将ppm换算为%的系数五、说明与讨论1、该法是微量法，适合于含微量碳水化合物的样品，具有灵敏度高，试剂用量少等优点。

2、该法按操作的不同可分为几种，主要差别于蒽酮试剂中硫酸的浓度（66～95%），取样量（1～5ml）、蒽酮试剂用量（5～20ml）、沸水浴中反应时间（6～15min）和显色时间（10～30min）。

这几个操作条件之间是有联系的，不能随意改变其中任何一个，否则将影响分析结果。

实验一总糖的测定-蒽酮比色法一、实验目的（1）学习蒽酮比色定糖法的原理和方法。

（2）学习723型分光光度计的原理和操作方法。

二、实验原理总糖是指样品中的还原糖及在本法测定条件下水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。

蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。

其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糠醛衍生物后与蒽酮（C14H10O）缩合成蓝色化合物。

溶液含糖量在每毫升150微克以内，与蒽酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。

蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接起作用，样品不必经过水解。

三、实验材料、器材与试剂1、材料白薯。

2、器材（1）试管（或具塞试管）及试管架；（2）吸量管；（3）沸水浴；（4）冰浴；（5）723型分光光度计。

2、试剂（1）蒽酮试剂：称取100mg蒽酮溶于100mL98%硫酸溶液（A.R）中，用时配制。

（2）葡萄糖标准溶液（100μg/mL）:精确称取100mg干燥葡萄糖，用蒸馏水定容至1000mL。

（3）样品溶液：称取500g市售白薯，洗净切碎后用多功能食品加工机磨成浆，4层纱布压滤、弃滤液留渣，将渣放入烘箱内80℃～85℃烘干后，再用植物粉碎机（微型）研细，过筛区100目筛下物为待测样品。

（也可用市售红薯面粉代替）取样品在烘箱内150烘干，恒重后，精确称取1～5g，置于锥形瓶中，加入80mL沸蒸馏水，放入沸水浴。

不时摇动，提取半小时。

取出立即过滤，残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤，合并滤液。

冷却至室温，用蒸馏水定容至100mL。

四、实验方法(1)制作标准曲线取7支干燥洁净的试管，编号后按下表操作。

每管加入葡萄糖标准液和谁后立即混匀，迅速置于冰浴中，待各管都加入蒽酮试剂后，同时置于沸水浴中，准确加热7分钟，立即取出置于冰浴中迅速冷却。

待各管溶液达室温后，用1cm厚度的比色皿，以第一管为空白，在620nm处迅速测其余各管的光吸收值。

然后以第2～7管溶液含糖量μg数为横坐标，吸光度（A620nm）为纵坐标，画出含糖量与A620nm 的相关标准曲线。

蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量一. 实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。

该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

该法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定。

二. 试剂器材蒽酮试剂：精密称取0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀。

当日配制使用；葡萄糖标准液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。

三. 操作步骤葡萄糖标准曲线的制作取7支具塞试管，按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2-3个重复：管号0 1 2 3 4 5 6标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min。

在625nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。

以标准葡萄糖含量( g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。

样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。

取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。

在625nm波长下迅速测定各管吸光值。

根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。

四. 注意事项该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。