专题二课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数和3分解纤维素的微生物的分离的导学与答案(最新整理)
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课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数要点展示1.研究培养基对微生物的选择作用,进行微生物数量的测定。
2.能利用选择培养基分离细菌,运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。
要点突破一、理论基础1.筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理:人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH等),同时或其他微生物生长。
(2)选择培养基:在微生物学中,将允许种类的微生物生长,同时和其他种类微生物生长的培养基,称作选择培养基。
(3)配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。
例如,培养基中不加入有机物可以选择培养微生物;培养基中不加入氮元素,可以选择培养;的微生物.加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。
2.统计菌落数目(1)测定微生物数量的常用方法有和。
(2)稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个。
通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。
为了保证结果准确,一般选择菌落数在的平板进行计数。
此外,测定微生物数量的常用方法还有直接计数。
3.设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响,提高实验结果的。
例如为了排除培养基是否被杂菌污染了,需以培养的培养基作为空白对照。
二、实验设计关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下:1.取样:从肥沃、湿润的土壤中取样。
应先 3 cm左右,再取样,将样品装入事先准备好的中。
2.制备:准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基将菌液稀释相同的倍数,在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显选择培养基上的数目,因此,牛肉膏蛋白胨培养基可以作为,用来判断选择培养基是否起到了选择作用。
3.微生物的与观察将10g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL),充分摇匀,吸取上清液,转移至盛有的生理盐水的无菌大试管中,将土样以1、101、102……依次等比稀释至107稀释度,并按照由107~103稀释度的顺序分别吸取进行平板涂布操作。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数研究思路(一)筛选菌株1、尿素是一种重要的氮肥,农作物(能,不能)直接吸收利用,而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为,这是因为细菌能合成。
2、PCR技术中使用的耐高温的酶是,它是从中分离出来的。
科学家能从中把筛选出来是因为,这样也适用于实验室中微生物的筛选,原理是_ 。
点评:生物适应一定环境,环境对生物具有作用。
所以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。
〖本课题使用的培养基——见旁栏资料〗〖思考1〗在该培养基配方中,为微生物的生长提供碳源的是,提供氮源的的是,琼脂的作用是。
〖思考2〗该培养基对微生物(具有,不具有)选择作用。
如果具有,其选择机制是。
3、选择培养基是指特定种类的微生物生长,同时其他种类微生物生长的培养基(二)统计菌落数目1、在统计菌落数目时,常用来统计样品中活菌数目的方法是。
除此之外,也是测定微生物数量的常用方法。
【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。
公式:观察到的红细胞平均数∶观察到的细菌平均数=红细胞含量∶细菌含量2、统计菌落数目的理论依据是:当样品的稀释度足够时,_ 。
通过统计,就能推测出样品中大约含有多少活菌。
因此,恰当的是成功地统计菌落数目的关键。
3、.为保证统计结果准确,通常将都涂布在平板上,培养后再选择的平板进行计数。
4、在设计实验时,一定要涂布至少个平板作为重复组,才能增强实验的说服力和准确性。
在分析实验结果时,一定要考虑所设置的重复组的结果,结果,意味着操作有误,需要重新实验。
〖思考3〗统计某一稀释度下平板上的菌落数,最好能统计3个平板,计算出平板菌落数的平均值从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是_ 〖思考4〗第位同学的结果接近真实值。
你认为这两位同学的实验需要改进的操作是第一位同学需;第二位同学_ 。
5、统计的菌落数比活菌的实际数目。
因为当两个或多个细胞时,平板上观察到的只是菌落。
因此,统计结果一般用来表示。
专题2 微生物的培养与应用课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(高二生物)第1课时研究思路分离原理【学习目标】1 学生预习教材P21 “(一)筛选菌株”,能够整理归纳出实验室筛选微生物的原理,能简单描述如何能得到耐高温的DNA聚合酶,如何分离Taq细菌。
2 学生预习教材P22结合右侧培养基配方基的内容,结合培养基配置及分类能整理归纳选择性培养基的原理及配制要求3学生预习教材P21“课题背景”内容结合选择性培养基的作用能阐述分离分解尿素的细菌的原理及培养基配置中各物质提供的成分3学生预习教材P22,整理归纳统计菌落数目的方法4课堂上通过教师提示,学生合作探究,学生能够对统计菌落数目的方法进行区别,填表整理归纳两种方法的比较5课堂上通过观看视频,学生能够掌握统计菌落数目的正确操作与计算6课堂上通过教师提示,学生合作探究,学生能够正确的设置实验对照重点选择性培养基的配制,菌落数目的统计难点菌落数目的统计【课前预习】一筛选菌株阅读教材P21 “(一)筛选菌株”,整理归纳出筛选菌株的基础知识1筛选菌株(1) 自然界中目的菌株的筛选①原理:根据目的菌对的要求,到相应的环境中去找。
②实例:DNA多聚酶链式反应(PCR)是一项的技术,要求使用。
能产生耐高温的TaqDNA聚合酶的就是从热泉中筛选出来的(2)实验室中微生物筛选的原理人为提供有利于________生长的条件(包括营养、温度、pH等),同时________或________其他微生物生长。
(2)分解尿素的细菌的分离原理尿素是一种农业,只有被分解成之后,才能被植物吸收利用。
土壤中的细菌之所以能分解尿素,是因为它们体内能合成________,将尿素分解的反应式是_________________________________________。
2选择培养基在微生物学中,将允许__________种类的微生物生长,同时________或________其他种类微生物生长的培养基,称做选择培养基。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数一、筛选菌株的思路1、自然界中目的菌株的筛选(1)原理:根据对生存环境的要求,到相应的环境中去寻找。
2、实验室中目的菌株的筛选(1)原理:人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等),同时抑制或阻止其他微生物的生长。
(2)方法:利用选择培养基分离。
选择培养基:允许特定种类的微生物生长,同时阻止或抑制其他种类微生物生长的培养基。
尿素是一种重要的农业氮肥,尿素不能直接被农作物吸收,只有通过土壤中的细菌将尿素分解为氨后,才能被植物利用,土壤中的细菌之所以能分解尿素,是因为它们能合成脲酶。
可以利用这一特点,将其从土壤中筛选出来。
(3)实例:①以尿素作为唯一氮源的培养基可以分离出分解尿素的细菌,因为只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,利用其中的氮元素。
②加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。
③加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。
④无氮源培养基可以分离固氮微生物。
⑤石油是唯一碳源的培养基,可以分离能消除石油污染的微生物。
⑥将培养基放在高温环境中培养,分离耐高温的微生物。
二、统计菌落数目1、常用来统计样品中活菌数目的方法是稀释涂布平板法。
(1)原理:样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有的活菌数。
(2)计算公式:每克样品中的菌株数=培养基上平均菌落数×稀释倍数÷涂布液体积,即(C÷V)×M。
(3)注意事项:a.为了保证结果准确,每个稀释度涂布至少 3 个平板作为实验重复,求其平均值(平行重复原则)。
选择菌落数在 30~300 的平板进行计数。
设置重复实验的目的是:排除偶然因素对实验结果的影响。
b.稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。
原因是当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。
因此,统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
专题2 微生物的培养与应用课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学设计金堂县竹篙中学谭善财2013-3-16一.本节课内容的总体目标二、教学重点与难点课题重点:对土样的选取和选择培养基的配制课题难点:对分解尿素的细菌的计数三、课时: 1h四、本课题内容标准1、研究培养基对微生物的选择作用,“研究”属于知识性领域的目标动词,应用水平2、进行微生物的分离,“进行”属于技能性领域目标动词,独立操作水平3、测定某种微生物的数量,“测定”属于技能性领域目标动词,独立操作水平。
五、本课题研究思路六、教学思路:七、教学流程八、教学过程教学内容教师活动学生活动 设计意图复习提问1.微生物最常用的两种接种方法是什么?2.什么稀释涂布平板法?其目的是什么? 学生回忆 为细菌计数原理、操作做好铺垫导入课题 引导学生阅读“课题背景”知识,提出的问题。
学生自主学习 回答问题创设情景,引入新课,使学生明确分解尿素的细菌的重要性,突出课题的必要性研究思路1、筛选菌株1、教师让学生阅读课本P21,讲解:DNA聚合酶作用,发现过程。
引导学生得到启示根据它对生存环境的要求,到相应的环境中去寻找(即自然界筛选)。
2、实验室中微生物的筛选原理实验室筛选:人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等),同时抑制或阻止其他微生物生长。
3、教师展示各种筛选菌株方法的多媒体图片:黄石公园热泉海底火山大肠杆菌显色培养基实验室筛选SARS菌株4、培养基选择分解尿素的微生物的原理:培养基的氮源为尿素,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿1、DNA聚合酶发现过程,同学们得到什么启示?2.学生讨论为什么Taq细菌能从热泉中筛选出来吗?3、学生阅读课本P22侧边栏关于本课题使用的培养基成分相关内容,讨论并回答提供碳源和氮源的分别是什么物质。
4.学生分析讨论,以尿素为唯一氮源的培养基能否筛选出分解尿素的细菌3、学生观看教师展示的多媒体图片。
4、学生讨论培养基如何对微生物进行筛选。
专题二课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、课题背景:1.尿素只有被分解成之后,才能被植物吸收利用。
反应式2.以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象,要达到的两个主要目的是:⑴;⑵。
3.PCR()是一种在体外将。
此项技术此项技术的自动化,要求使用(Taq)。
一、理论基础1.筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理:人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH 等),同时或其他微生物生长。
(2)选择培养基:在微生物学中,将允许种类的微生物生长,同时和其他种类微生物生长的培养基,称作选择培养基。
(3)配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。
例如,培养基中不加入有机物可以选择培养微生物;培养基中不加入氮元素,可以选择培养;的微生物.加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。
2.统计菌落数目(1)常用来统计样品中活菌数目的方法是法。
除此之外,也是测定微生物数量的常用方法,缺点是。
(2)稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个。
通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。
为了保证结果准确,一般选择菌落数在的平板进行计数。
(3)一般来说,统计的菌落数往往比活菌的实际数目。
这是因为。
因此,统计结果一般用而不是活菌数来表示。
3.设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响,提高实验结果的。
例如为了排除培养基是否被杂菌污染了,需以培养的培养基作为空白对照。
二、实验设计(1)、实验设计包括的内容有:、、和,具体的实验步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。
(2)、根据图示2-7填写以下实验流程:(3)、关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下:1.取样:从肥沃、湿润的土壤中取样。
应先 3 cm左右,再取样,将样品装入事先准备好的中。
2.制备:准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基,将菌液稀释相同的倍数,在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显选择培养基上的数目,因此,牛肉膏蛋白胨培养基可以作为,用来判断选择培养基是否起到了选择作用。
专题二课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数【基础知识】一、理论基础1.筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理:人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH 等),同时或其他微生物生长。
(2)选择培养基:在微生物学中,将允许种类的微生物生长,同时和其他种类微生物生长的培养基,称作选择培养基。
(3)配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。
例如,培养基中不加入有机物可以选择培养微生物;培养基中不加入氮元素,可以选择培养;的微生物.加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。
2.统计菌落数目(1)测定微生物数量的常用方法有和。
(2)稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个。
通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。
为了保证结果准确,一般选择菌落数在的平板进行计数。
此外,测定微生物数量的常用方法还有直接计数。
3.设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响,提高实验结果的。
例如为了排除培养基是否被杂菌污染了,需以培养的培养基作为空白对照。
二、实验设计关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下:1.取样:从肥沃、湿润的土壤中取样。
应先 3 cm 左右,再取样,将样品装入事先准备好的中。
2.制备:准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基,将菌液稀释相同的倍数,在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显选择培养基上的数目,因此,牛肉膏蛋白胨培养基可以作为,用来判断选择培养基是否起到了选择作用。
3.微生物的与观察将10g 土样加入盛有90 mL 无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL),充分摇匀,吸取上清液,转移至盛有的生理盐水的无菌大试管中,将土样以1、101、102……依次等比稀释至107稀释度,并按照由107~103稀释度的顺序分别吸取进行平板涂布操作。
每个稀释度下需要3 个选择培养基、1个牛肉膏蛋白胨培养基。
将涂布好的培养皿放在30℃温度下培养,及时观察和记录。
挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含培养基的斜面中,观察能否产生如教材中图2-lO 的颜色反应。
4.细菌的计数当菌落数目稳定时,选取菌落数在的平板进行计数。
在同一稀释度下,至少对3 个平板进行重复计数,然后求出,并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。
三:思考与讨论(1)如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数?(2)为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度?测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量,选用的稀释范围相同吗?(3)P183 在该培养基的配方中,为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质?(4)P183 这种培养基对微生物是否具有选择作用?如果有,又是如何进行选择的?(5)P183 你认为哪位同学的结果接近真实值?你认为这两位同学的实验需要改进吗?如果需要,如何改进?(6)P183 你能通过设置对照,帮助 A 同学排除上述两个可能影响实验结果的因素吗?专题 2 课题 3 分解纤维素的微生物的分离基础知识一、纤维素与纤维素酶1.纤维素的化学组成:三种元素,是一种糖。
2.纤维素的分布:是自然界中纤维素含量最高的天然产物,此外,木材、作物秸秆等也富含纤维素。
3.纤维素酶的作用:纤维素酶是一种,一般认为它至少包括三种组分,即酶、酶酶,前两种酶使纤维素分解成,第三种酶将纤维二糖分解成。
二、纤维素分解菌的筛选1.筛选方法:染色法。
2.筛选原理:刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成,但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应,当纤维素被纤维素酶分解后,红色复合物无法形成,出现以为中心的透明圈,我们可以通过来筛选纤维素分解菌。
三、试验设计土壤中纤维素分解菌的分离的实验方案:分解纤维素的微生物的分离的试验流程、、、、1.土壤取样:采集土样时,应选择富含的环境。
2.选择培养:阅读资料二“选择培养基”,回答以下三个问题:〖思考1〗纤维素分解菌选择培养基属于培养基,原因是什么?。
〖思考 2〗培养基选择作用机制是什么?〖思考 3〗若设置一个对照实验说明选择培养的作用,应控制的变量是什么?(1)目的:增加纤维素分解菌的,以确保能够从样品中分离到所需要的微生物。
(2)制备选择培养基:参照课本旁栏中的比例配制。
(3)选择培养:称取土样20 g,在无菌条件下加入装有30mL 培养基的锥形瓶中,将锥形瓶固定在上,在一定温度下振荡培养1~2 d,直至培养液变。
也可重复选择培养。
(4)梯度稀释:依次将培养液稀释 101~107倍。
思考是如何操作的?(5)将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上<1>制备培养基:参照课本旁栏中的比例。
<2>倒平板操作。
<3>涂布平板:将稀释度为104~106 的菌悬液各取 0.1 mL 涂布在平板培养基上,30℃倒置培养。
(6)刚果红染色法:挑选产生的菌落,一般即为分解纤维素的菌落。
〖思考 4〗本实验流程与尿素分解菌的分离实验流程有哪些异同?3.刚果红染色法:常用的刚果红染色法有两种即两种方法的优点与不足:〖思考 5〗为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物?四:结果分析与评价1为了确定分离得到的是纤维素分解菌,还需要进行实验,纤维素酶的发酵方法有发酵和发酵。
2纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的含量进行定量测定。
典型例题分析【例 1】分析下面培养基的配方:KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H20、葡萄糖、尿素、琼脂。
请回答: (1)在该培养基的配方中,为微生物的生长提供碳源和氮源的分别和。
(2)想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用?如果具有,又是如何进行选择的?【例2】用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数,在对应稀释倍数为106的培养基中得到以下几种统计结果,正确的是…()A.涂布了一个平板,统计的菌落数是 230B.涂布了两个平板,统计的菌落数是 215 和 260,取平均值 238C.涂布了三个平板,统计的菌落数分别是 21、212 和2 墨6,取平均值 163D.涂布了三个平板,统计的菌落数分别是 2l0、240 和250,取平均值 233【例3】用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是 ( )A.未接种的选择培养基B.未接种的牛肉膏蛋白胨(全营养)培养基C.接种了的牛肉膏蛋白胨(全营养)培养基D.接种了的选择培养基【例4】纤维素酶可以将下列哪种物质分解…………()A.牛肉片B.鱼片C.滤纸条D.塑料条【例5】在加入刚果红的培养基中出现透明圈的菌落是……………………()A.分解尿素的细菌B.硝化细菌C.分解纤维素的细菌D.乳酸菌【例6】本实验关于选择培养目的叙述正确的是…()A.可以增加纤维素分解菌的浓度B.可以减少纤维素分解菌的浓度C.所用培养基是固体培养基D.所用培养基是平板培养基基础自测1.PCR 技术要求使用耐高温的DNA 聚合酶,这种酶要能忍受93℃左右的高温。
如果请你来寻找这种耐高温的酶,你会去哪里寻找………()A.土壤中B.海水中C.热泉中D.冷库中2.下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是………………()A.KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、尿素、琼脂、水B.KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、琼脂、水C.KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、尿素、琼脂、水D.KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水;3.某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234,那么每克样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL)…()A.2.34×108B.2.34×109C.234 D.23.44.在做分离分解尿素的细菌实验时,A 同学从对应106培养基上筛选出大约150 个菌落,而其他同学只选择出大约50 个菌落。
A 同学的结果产生原因( )①由于土样不同②由于培养基污染③由于操作失误④没有设置对照A.①②③B.②③④C.①③④D.①②④5.关于土壤取样的叙述错误的是………()A.土壤取样,应选取肥沃、湿润的土壤B.先铲去表层土 3cm 左右,再取样C.取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌D.应在火焰旁称取土壤6.下列材料中纤维素含量最高的是( )A.杨树B.小麦C.玉米D.棉花7.纤维素酶能够分解()A.纤维素的微生物B.淀粉的微生物 C.纤维素D.淀粉8.刚果红能与哪项物质形成红色复合物( )A.纤维二糖B.纤维素C.葡萄糖D.麦芽糖专题二课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、1(1)目的菌珠抑制阻止(2)特定抑制阻止(3)自养能固氮的微生物;2(1)有稀释涂布平板法和显微镜直接计数。
(2).稀释度细菌30-300 显微镜3.非测试因素可信度无杂菌污染二、1. 土壤,铲去表层土。
2. 培养基多于对照 3.培养 1ml 9ml 0.1mL 4.30-300 平均数三:思考与讨论(1)统计某一稀释度下平板上的菌落数,最好能统计 3 个平板,计算出平板菌落数的平均值,然后按课本旁栏的公式进行计算(2)这是因为土壤中各类微生物的数量(单位:株/kg)是不同的,例如在干旱土壤中的上层样本中:好氧及兼性厌氧细菌数约为 2185 万,放线菌数约为 477 万,霉菌数约为 23.1 万。
因此,为获得不同类型的微生物,就需要按不同的稀释度进行分离,同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。
*(3)提供碳源的是葡萄糖,提供氮源的的是尿素(4)具有只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长。
(5)第二位同学的结果接近真实值改进的操作是第一位同学需设置重复实验组;第二位同学统计的三个菌落数相差太大,说明操作有误,需重新实验。
(6)方案 1:其他同学用 A 同学的土样进行实验。
方案 2:A 同学以不接种的培养基作为空白对照。
专题 2 课题 3 分解纤维素的微生物的分离[参考答案]:一、1.C H O多糖2.棉花3.复合酶C1C x葡萄糖苷纤维二糖葡萄糖二1.刚果红2.红色复合物,纤维素分解菌,是否产生透明圈三、(流程参考课本P138)1.纤维素2〖思考 1〗液体,没有添加琼脂成分.〖思考 2〗以纤维素粉为唯一碳源,只有纤维素分解菌才能生存。
〖思考 3〗将纤维素粉改为葡萄糖。
(1)纯度(3).摇床混浊(4)参照专题1的稀释操作,(6).透明圈〖思考 4〗尿素分解菌的分离实验流程是将土样制成的菌悬液直接涂布在选择培养基上;本课题通过选择培养使细菌增殖后,再涂布在鉴别培养基上。