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降糖类中成药及保健品中添加化学药物的检测方法.随茶叶品质的下降而降低。
从结果可以看出, 个因素的显著性依次为.即提取温度提取时间溶剂倍数。
经正交试验优化的讨论提取条件为,即提取温度为℃、溶剂倍数 : 、提通过单因素试验发现,茶多酚提取率随温度的上升而增取时间 ,提取次。
高,但随温度升高,提取率上升幅度减少。
当温度高于℃. 不同等级绿茶的比拟分别称取一~五级不同级别绿时,提取率有下降趋势。
这说明茶多酚溶解度随温度上升而增大,但随着提取液中茶多酚浓度的进步,提取过程传质推动茶各 ,用上述最正确提取条件提取,实验结果见表。
表不同级别绿茶有效成分的比拟力减小,并且茶多酚的氧化程度也有所增加。
因此提取温度不宜过高。
本文经正交试验,优选的提取条件提取温度为℃、溶剂倍数 :、提取时间 ,提取次。
茶叶中有效成分的含量随茶叶等级的下降而降低。
参考文献安徽农学院主编.茶叶生物化学 .北京:农业出版社,. .由表可知一级绿茶茶多酚、咖啡碱、氨基酸的提取率均..., , . ?.是最大的。
茶叶中的主要成效成分茶多酚和咖啡碱的提取率福建省中医药研究所等 .茶报., : . .降糖类中成药及保健品中添加化学药物的检测方法薛士荣天津市大港药检所天津力工具。
科学研究工作者在这一方面做了大量工作对目前市场上常见的非法添加降糖类化学药物的检验方法进展探究。
本文针对降糖类中成药及保健品制剂中非法添加化学药物所采用的薄层色谱、高效液相色谱、色谱联用等一系列不断开展的检测技术的研究应用。
一方面为药品检验工作者提供了便捷快速的筛查、定性、定量检测。
另一方面为打击药品制假和保障人民用药平安提供有力的技术支持。
关键词:降糖类中成药及保健品;化学药物;检测;应用中圉分类号: . 文献标识码: 文章编号:一 . .根据调查,我国周岁以上人群糖尿病患病率为薄层色谱技术是快速初筛中药制剂及保健品中非法添加. %,降糖产品在人群中拥有很大的市场。
某些不法商贩利化学药物的简便定性方法。
糖尿病患者适用型保健食品中添加化学药物的检测方法概况发布时间：2021-09-01T10:43:04.597Z 来源：《健康世界》2021年11期作者：蒲国军[导读] 结合工作实践，本文对近年来糖尿病患者适用型保健食品中添加化学药物的检测方法进行总结蒲国军新疆阿勒泰地区食品药品检验所，新疆阿勒泰 836500【摘要】结合工作实践，本文对近年来糖尿病患者适用型保健食品中添加化学药物的检测方法进行总结。
糖尿病患者适用型保健食品中非法添加的化学药物主要是降糖化学药物，包括磺脲类、胰岛素增敏剂、双胍类、α-葡萄糖苷酶抑制剂等。
检测方法主要有理化分析法、红外光谱法、拉曼光谱法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、气相色谱仪-质谱联用等。
理化分析只能用于初筛；对于现场快速分析和筛查，红外光谱法和拉曼光谱法等方法较为适用；对于实验室的精确筛查和定量，可结合使用高效液相色谱法和液相色谱-质谱联用等方法。
本文综述了糖尿病患者适用型保健食品中添加化学药物的检测技术的研究进展，为检测保健食品非法添加化学药物提供技术参考。
【关键词】糖尿病；保健食品；非法添加；化学药物；检测技术糖尿病需要持续的医疗干预及患者不断的自我监控，以避免糖尿病急性并发症及减少慢性并发症的发生。
由于担心长时间服用降糖西药不良反应较大，很多糖尿病患者在长期服用降糖药的同时往往使用糖尿病患者适用型保健食品，以期达到稳定血糖，减少降糖药物不良反应的目的[1]。
出于利益驱动，一些不法厂商在糖尿病患者适用型保健食品非法添加降糖化学药物以增加产品功效。
患者在不知情的情况下长期大量服用保健食品，可能造成严重的不良反应。
为更好地打击保健品非法添加化药的违法行为，本文对近年来糖尿病患者适用型保健食品中非法添加化药的类别、非法添加化学药物的检测方法进行总结，以求为相关监管部门提供文献支持，从而保护消费者的合法权益和身体健康。
1 糖尿病患者适用型保健食品中添加化学药物目前，已经从糖尿病患者适用型保健食品中中筛查出的，或已经建立筛查方法的潜在添加药物有[2]：非磺脲类胰岛素促泌剂（包括瑞格列奈、米格列奈、那格列奈）；磺脲类胰岛素促泌剂（包括妥拉磺脲、醋酸己脲、甲苯磺丁脲、格列美脲、格列吡嗪、格列波脲）；双胍类（包括二甲双胍、丁二胍）；胰岛素增敏剂（包括罗格列酮、曲格列酮）；α-葡萄糖苷酶抑制剂（包括阿卡波糖、米格列醇）。
NIR快速筛选降糖类中药及保健食品中非法添加盐酸二甲双胍的方法研究田国贺;王梓巍;单元春【摘要】目的:运用近红外光谱(NIR)法对降糖类中药及保健食品中非法添加盐酸二甲双胍进行快速筛选.方法:采用逆向思维方法,以盐酸二甲双胍对照品NIR图谱作为参照光谱,与降糖药NIR光谱比对,建立对照品与中药制剂及保健食品的相关系数,快速筛查中成药及保健食品中是否非法添加了盐酸二甲双胍,经液相色谱-质谱联用定性后,将法定检验结果与近红外光谱结合,建立NIR检验模型.结果:用该检验模型对已知法定方法检测结果的样品进行筛选,准确率高达97％.结论:建立的应急模型具有方法简单、快速、易操作等特点,适用于大量样品的快速筛选.【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2014(016)001【总页数】4页(P17-20)【关键词】近红外光谱(NIR);快速检测;非法添加;盐酸二甲双胍【作者】田国贺;王梓巍;单元春【作者单位】吉林省食品药品检验所,吉林长春130033;吉林省食品药品检验所,吉林长春130033;吉林省疾病预防控制中心,吉林长春130062【正文语种】中文中药制剂是中医临床用药的主要手段，其以疗效独特、不良反应小等优势日益受到世人关注，但是近年来一些非法厂商为了牟取利益，在宣称是纯中药制剂的糖尿病药品或保健食品中非法添加降糖类化学物质，由于添加量比较随意，毒副作用无法控制，因此若患者在不知情的情况下长期、大量服用这样所谓的纯中药降糖制剂，会使药品用量掌握不当，反而产生不可预知的不良反应，严重的甚至威胁到患者的生命安全[1]。
盐酸二甲双胍是临床常用的降糖类化学药，降糖类中药及保健食品中非法添加盐酸二甲双胍的浓度约0.58%～1.08%[2]，虽然目前报道了许多实验方法[3-5]用于检测非法添加的盐酸二甲双胍，但都需要耗费大量的检验资源且不能满足快速筛查的要求[6]。
近红外光谱法(NIR)是一种快速无损检测的绿色分析方法[7-8]，利用NIR技术快速检测降糖类中药及保健品中非法添加盐酸二甲双胍的方法鲜见报道。
行业研究T echno logy科技利用精密仪器快速检测降糖类保健食品中非法添加化学品的相关技术现状研究糖尿病是常见慢性病之一，现代医学还无法治愈糖尿病，因此糖尿病患者不得不终身服药，各种形式的降糖保健品应运而生。
我国《食品安全法》明确规定，保健食品不得添加化学药品，但仍有不少具有降血糖功效的保健食品被检出含有非法添加的化学成分。
这种非法添加的行为，对公众健康造成了巨大危害。
本文对近年来降糖类中成药和保健食品中非法添加化学药物的仪器检测技术进行研究对比，以其为相关检测部门提供理论参考，消费者身体健康及合法权益受到保护。
保健食品《保健食品管理办法》中对保健食品的定义是“保健食品系指表明具有特定保健功能的食品。
即适宜于特定人群食用，具有调节机体功能，不以治疗疾病为目的食品”。
降糖类保健食品中的非法添加化学药品不法商家为谋取不正当利益，违反国家法律法规，未经国家有关部门的批准或允许，在健康产品中人为添加具有一定功能的化学成分，以达到增强产品特定功效的目的即视为非法添加。
治疗糖尿病的保健食品多数显效缓慢，而添加有降糖功效的违禁化学药品后，疗效迅速，但若长期服用会引起较严重的副作用。
在降糖类保健品中常见的非法添加化学药品有盐酸二甲双胍、盐酸苯乙双胍、盐酸丁二胍、盐酸比格列酮、甲苯磺丁脲、格列本脲和格列齐特等。
这些化学药物是用于医治糖尿病的常用药，降糖效果明显，但长期大量服用，会造成低血糖和肾功能损害，甚至导致死亡。
降糖类保健食品中非法添加的常用仪器检测技术髙效液相色谱法（LC）。
刘畅等人采用HPLC技术,建立了降糖保健品中违禁添加的格列美脲、格列吡嗪、格列本脲、盐酸吡格列酮、瑞格列奈、格列齐特、格列喹酮、盐酸二甲双胍及盐酸苯乙双胍等9种降糖化学药物的检测方法，采用TIANHE Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),甲醇-0.1%磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值至3.0±0.05)(70∶30)为流动相检测分析格列类及其他类药物,甲醇-离子对试液为流动相检测分析双胍类药物。
卡格净列说明书整理表姓名:职业工种:申请级别:受理机构:填报日期:附件1食品中二甲双胍等非食品用化学物质的测定BJS 2019011.范围本标准规定了食品（含特殊食品）中二甲双胍、苯乙双胍、丁二胍、伏格列波糖、阿卡波糖、维达列汀、罗格列酮、西他列汀、吡格列酮、氯磺丙脲、达格列净、格列吡嗪、甲苯磺丁脲、醋磺己脲、妥拉磺脲、瑞格列奈、卡格列净、格列齐特、格列波脲、格列本脲、那格列奈、格列美脲、曲格列酮、格列喹酮、莫格他唑、GW501516、环格列酮等27种非食品用化学物质的高效液相色谱-串联质谱测定方法。
本标准适用于茶叶、奶粉、饼干、酒、饮料等食品（包括上述类似基质的片剂、胶囊剂等形式的特殊食品）中二甲双胍等27种非食品用化学物质的测定。
2.原理试样粉碎后经甲醇超声提取，过滤后，上清液供高效液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。
3.试剂和材料除另有规定，本方法所用试剂均为分析纯或以上规格，水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂3.1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。
3.1.2 甲酸（HCOOH）：色谱纯。
3.1.3 甲酸铵（HCOONH4）：色谱纯。
3.1.4 甲醇（CH3OH）：分析纯。
3.2溶液配制3.2.1 0.1%甲酸水溶液：量取甲酸（3.1.2）1 mL，用水稀释至1000 mL，用滤膜（4.2）过滤后备用。
3.2.2 5 mmol/L甲酸铵水溶液：称取甲酸铵（3.1.3）0.315 g，用水稀释至1000 mL，用滤膜（4.2）过滤后备用。
3.2.3 5 mmol/L甲酸铵乙腈溶液：称取甲酸铵（3.1.3）0.315 g，加水50 mL溶解后，用乙腈稀释至1000 mL，用滤膜（4.2）过滤后备用。
3.3标准品苯乙双胍、丁二胍、二甲双胍、伏格列波糖、阿卡波糖、维达列汀、罗格列酮、西他列汀、吡格列酮、氯磺丙脲、达格列净、格列吡嗪、甲苯磺丁脲、醋磺己脲、妥拉磺脲、瑞格列奈、卡格列净、格列齐特、格列波脲、格列本脲、那格列奈、格列美脲、曲格列酮、格列喹酮、莫格他唑、GW501516、环格列酮标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量详见附录A中的表A.1，各标准品纯度均≥95%。
图3 GF254薄层板检出限检出结果3.2 方法特点该文所选用的T LC法操作简便、重现性好、灵敏度高，可作为基层药监部门检查降糖类药品与保健食品中含有二胍类成分的快速筛选方法；所选的展开剂未选用三氯甲烷等一级毒性溶剂，而选用“绿色”溶剂，从而避免了对操作者的毒害作用。
参考文献[1] 刘治军，吕俊玲，刘瑶，等.糖尿病的临床药物治疗进展[J].中国医院用药评价与分析，2003，3(4)：247.[2] 肖树雄，李杨杰.由降糖中成药和保健食品检验情况探索非法添加化学成分的系统快筛思路[J].药物分析杂志，2011，31(2)：418.[3] 谭和平，谭福元，邹燕，等.中成药中未知滥用化学药物的测试与鉴定方法[J].中国测试，2011，37(4)：37.[4] 陈玉武，张夙萍，高晓昱.薄层色谱法初筛少数中药制剂中添加降糖类化学药物[J].药物分析杂志，2010，30(7)：1298.[5] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：化学工业出版社，2005：附录31.400.0300.0200.0200.0100.0100.050.00.0100.0[AU]0.010.020.030.040.050.0[mm]80.070.060.01.20-0.40-0.200.000.200.400.600.80[mr]400.0300.0200.0200.0100.0100.050.00.0[AU]⚓图1 1～3号降糖中药及对照品溶液TLCS扫描结果600.0300.0200.0400.0100.00.0100.0[AU]0.010.020.030.040.050.0[mm]80.070.060.01.40-0.200.000.200.400.600.801.00[mr]600.0400.0300.0200.0100.00.0[AU]⚓图2 4～6号降糖中药保健品及对照品溶液TLCS扫描结果(1）创业教育主要专著1989年中国陶行知研究会副会长胡晓风出版《创业教育：教育整体改革的新构思》一书，提出创业教育是依据综合性技术原理，培养具有从事一定职业和创造相结合的教育。
HPLC-MS法测定降血糖类保健食品中二甲双胍含量的不确
定度评价
邓丰
【期刊名称】《基层医学论坛》
【年(卷),期】2018(022)028
【摘要】目的评价HPLC-MS测定降血糖类保健食品中非法添加的二甲双胍含量的不确定度.方法应用HPLC-MS法测定降糖类保健食品中二甲双胍含量,建立数据分析模型,分析不确定来源,计算各个不确定度的分量以及合成不确定度和扩展不确定度.结果降糖类保健食品中二甲双胍含量为(8.61±0.24)μg/g,不确定度主要来源于标准溶液和样品溶液制备过程中的玻璃量具校准和温度效应及标准曲线的拟合.结论采用本法测定保健食品中非法添加的二甲双胍含量准确、可靠,建立的不确定度评价方法规范、系统,可为同类检测提供指导和参考.
【总页数】4页(P3942-3945)
【作者】邓丰
【作者单位】福建省食品药品质量检验研究院,福建福州 350001
【正文语种】中文
【相关文献】
1.HPLC法测定保健食品中叶酸含量的不确定度评价研究 [J], 石岩;黄艳梅;熊婧;宁宵;薛恒跃;魏锋;马双成
2.ICP-OES法测定保健食品中铜元素含量的不确定度评价 [J], 王莹;华蕾;石金娥;
韩晶
3.高效液相色谱法测定保健食品中褪黑素含量不确定度的评估 [J], 李珍妮;曾文祥
4.高效液相色谱法测定保健食品中褪黑素含量不确定度的评估 [J], 李珍妮;曾文祥
5.对一测多评法测定蜂胶类保健食品中芹菜素等5种成分含量的评价研究 [J], 杨玲;刘成浩;韩萧茜;刘齐;冯曼琳;杜勇
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保健食品中非法添加降糖药物的测定方法 路亚静 太原市食品药品检验所基本情况保健食品现状。
近年来，“绿色食品”理念的提倡和发展，越来越多的人开始重视身体健康和饮食安全，一些以调节血压、血糖平衡为销售理念的“保健食品”随着人们健康意识的提高而越来越畅销，由于保健品市场火爆，市场竞争力大，一些商家为了提高服用效果和销售口碑，向保健食品中非法添加药物类成分，以此获得消费者的青睐。
这种做法既不符合法律规定，又对消费者身体造成损害，对保健食品中非法成分的测定成为阻止违规保健食品流向市场的关键。
保健食品中非法添加降糖药物情况。
根据目前的保健食品测定研究，常见的非法添加的降糖药物主要有磺酰脲类、胰岛素增敏剂、促胰岛素分泌剂和双胍类药物，以格列本脲、二甲双胍等居多，由于价格低廉且见效迅速，服用添加此类药物的保健食品后，服用者血糖情况在短期内得到有效控制，但长期服用，极易导致药物依赖，在服用者不知情的情况下不当容易出现中毒现象。
如今市场流通的保健食品种类繁多，为了防止降糖药物成分被检测出又不断更新添加种类和配方，为非法添加的检测工作增加了难度。
检测方法检测方法的选择。
在此研究前，作者查阅了大量的检测技术的文献，与中成药物相比，保健食品非法添加的检测较为容易，保健食品制作工艺细致，产品基质较为稳定，其杂质的含量较小，对检测结果的干扰也小，这更利于检测方法的选择，不同检测方法造成的数据偏差也相对较小。
文献中最为常用的方法是色谱法，多以薄层色谱（ＴＬＣ）和高效液相色谱（ＨＰＬＣ）为主。
ＨＰＬＣ以液体为流动相，在高压的作用下，液体快速流经色谱柱，受到的阻力比固态流动相小得多，检测速度得到提升，具有高效、准确的特点，且可以重复使用，样本不容易破坏，又克服了薄层色谱的假阳性问题，既可以定性分析，又可以定量测定，在实际检测时十分常用。
近年来，高效液相色谱与质谱联用，衍生出ＨＰＬＣ－ＭＳ法，该方法具有ＨＰＬＣ的高分离能力，又具有质谱的灵敏性，采用离子检测器代替了二极管阵列检测器，克服了分离不彻底的问题，使得色谱法测定的结果更加准确，但该方法对检测者的操作要求较高，且检测仪器价格不菲，并没有十分普及。
高效液相色谱法同时鉴定保健胶囊食品中非法添加的9种降糖药成分糖尿病属于常见、多发病，且随着人们生活水平的提高，其发病率在我国呈逐年上升趋势，已经威胁到大众健康。
有些不法商家违反“食品不得加人药物”的规定，利用患者不愿服药而又急于治疗的心理，在保健食品中违规添加降糖类西药以虚假广告误导消费者，从中牟取暴利。
在不知情的情况下患者若长期使用，会引起肝肾功能严重损害、低血糖反应、血细胞减少等不良反应。
降糖类的保健品多为多成分中成药，在测定时对分析方法的选择性提出了更高的要求。
用高效液相色谱法同时测定磺酞脉类、双肌类中的9种降血糖西药成分，可实现组分的完全分离，快速准确。
1仪器与试剂1.1仪器美国Waters高效液相色谱仪，包括2487紫外检测器、DAD2996型二极管阵列检测器、全自动进样器、柱温箱、超声波清洗器。
1.2试药及试剂对照品:盐酸苯乙双肌(批号100922一201001、纯度99.7%)、格列本脉(批号100135-200404)、格列齐特(批号100269一201004)、格列毗凑(批号100281-200602)、格列喳酮(批号100280一201002)、格列美脉(批号100674一201102)、马来酸罗格列酮(批号100952一2007叫、瑞格歹叮奈(批号100753一201102)、盐酸毗格列酮(批号100634-200401)，均由中国食品药品检定研究院提供。
甲醇为色谱纯;磷酸二氢馁、十二烷基硫酸钠、三乙胺为分析纯;水为纯化。
样品:市售降糖保健胶囊类食品，共9个厂家21批。
(厂家A，批号20120412,20120420,20111101,20110901、111102、20111118、201200507;厂家B，批号120206001,120101030,120312010,120206001,12010103020;厂家C，批号20120701,20120101,120301;厂家D，批号DL02128;厂家E，批号20120507;厂家F，批号201200101;厂家G，批号20120201;厂家H20120403;厂家I，批号20111221).2实验部分2.1色谱条件色谱柱:大连依利特C18(4.6mmx250mm,5N,m);流动相:0.02mol·L的磷酸二氢钱(含十二烷基硫酸钠0.03%，用三乙胺调节pH至3.510.O5甲醇;梯度洗脱程序见表1;流速:1.OmLmin一1;检测波长:235nm;柱温;35℃;进样量:20pL.2.2系统适用性试验取混合对照溶液进样，记录色谱图。
附件1食品中二甲双胍等非食品用化学物质的测定BJS 2019011范围本标准规定了食品（含特殊食品）中二甲双胍、苯乙双胍、丁二胍、伏格列波糖、阿卡波糖、维达列汀、罗格列酮、西他列汀、吡格列酮、氯磺丙脲、达格列净、格列吡嗪、甲苯磺丁脲、醋磺己脲、妥拉磺脲、瑞格列奈、卡格列净、格列齐特、格列波脲、格列本脲、那格列奈、格列美脲、曲格列酮、格列喹酮、莫格他唑、GW501516、环格列酮等27种非食品用化学物质的高效液相色谱-串联质谱测定方法。
本标准适用于茶叶、奶粉、饼干、酒、饮料等食品（包括上述类似基质的片剂、胶囊剂等形式的特殊食品）中二甲双胍等27种非食品用化学物质的测定。
2原理试样粉碎后经甲醇超声提取，过滤后，上清液供高效液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。
3试剂和材料除另有规定，本方法所用试剂均为分析纯或以上规格，水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂3.1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。
3.1.2 甲酸（HCOOH）：色谱纯。
3.1.3 甲酸铵（HCOONH4）：色谱纯。
3.1.4 甲醇（CH3OH）：分析纯。
3.2溶液配制3.2.1 0.1%甲酸水溶液：量取甲酸（3.1.2）1 mL，用水稀释至1000 mL，用滤膜（4.2）过滤后备用。
3.2.2 5 mmol/L甲酸铵水溶液：称取甲酸铵（3.1.3）0.315 g，用水稀释至1000 mL，用滤膜（4.2）过滤后备用。
3.2.3 5 mmol/L甲酸铵乙腈溶液：称取甲酸铵（3.1.3）0.315 g，加水50 mL溶解后，用乙腈稀释至1000 mL，用滤膜（4.2）过滤后备用。
3.3标准品苯乙双胍、丁二胍、二甲双胍、伏格列波糖、阿卡波糖、维达列汀、罗格列酮、西他列汀、吡格列酮、氯磺丙脲、达格列净、格列吡嗪、甲苯磺丁脲、醋磺己脲、妥拉磺脲、瑞格列奈、卡格列净、格列齐特、格列波脲、格列本脲、那格列奈、格列美脲、曲格列酮、格列喹酮、莫格他唑、GW501516、环格列酮标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量详见附录A中的表A.1，各标准品纯度均≥95%。
3.4标准溶液的配制3.4.1 标准储备液（5 mg/mL）：准确称取伏格列波糖、阿卡波糖、达格列净、卡格列净、曲格列酮、环格列酮各标准品（3.3）50.0 mg（精确至0.0001 g），分别置于10 mL容量瓶中，用甲醇（3.1.4）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为5 mg/mL标准储备液A，-20℃保存，有效期3个月。
3.4.2标准储备液（100 μg/mL）：准确称取苯乙双胍、丁二胍、二甲双胍、维达列汀、罗格列酮、西他列汀、吡格列酮、氯磺丙脲、格列吡嗪、甲苯磺丁脲、醋磺己脲、妥拉磺脲、瑞格列奈、格列齐特、格列波脲、格列本脲、那格列奈、格列美脲、格列喹酮、莫格他唑、GW501516各标准品（3.3）10.0 mg（精确至0.0001 g），分别置于100 mL容量瓶中，用甲醇（3.1.4）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为100 μg/mL标准储备液B，-20 ℃保存，有效期3个月。
3.4.3混合标准中间液A：分别准确吸取伏格列波糖和阿卡波糖的标准储备液（3.4.1）及苯乙双胍、丁二胍、二甲双胍的标准储备液(3.4.2)各1 mL，置于同一100mL容量瓶中，用甲醇（3.1.4）稀释至刻度，摇匀，制成混合标准中间液（A），其中伏格列波糖和阿卡波糖浓度为50 μg/mL，苯乙双胍、丁二胍、二甲双胍浓度为1 μg/mL。
3.4.4混合标准中间液B：分别准确吸取达格列净、卡格列净、曲格列酮、环格列酮的标准储备液(3.4.1)各1 mL及维达列汀、罗格列酮、西他列汀、吡格列酮、氯磺丙脲、格列吡嗪、甲苯磺丁脲、醋磺己脲、妥拉磺脲、瑞格列奈、格列齐特、格列波脲、格列本脲、那格列奈、格列美脲、格列喹酮、莫格他唑、GW501516的标准储备液(3.4.2)各1 mL，置于同一100 mL容量瓶中，用甲醇（3.1.4）稀释至刻度，摇匀，制成混合标准中间液B，其中达格列净、卡格列净、曲格列酮、环格列酮浓度为50 μg/mL，维达列汀等18个化合物浓度为1 μg/mL。
3.4.5 混合标准工作溶液A：分别准确吸取混合标准中间液A(3.4.3)各0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、1.0 mL、2.0 mL，置于20 mL容量瓶中，用甲醇（3.1.4）稀释至刻度，摇匀，作为系列标准工作溶液S1~S5，伏格列波糖和阿卡波糖的浓度均依次为0.25 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、2.5 μg/mL、5.0 μg/mL；苯乙双胍、丁二胍、二甲双胍的浓度均依次为5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL。
3.4.6混合标准工作溶液B：分别准确吸取混合标准中间液B(3.4.4)各0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、1.0 mL、2.0 mL，置于20 mL容量瓶中，用甲醇（3.1.4）稀释至刻度，摇匀，作为系列标准工作溶液S(1)~S(5)，达格列净、卡格列净、曲格列酮、环格列酮4个化合物的浓度均依次为0.25 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、2.5 μg/mL、5.0 μg/mL；维达列汀等18个化合物浓度均依次为5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL。
4仪器和设备4.1高效液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾（ESI）离子源。
4.2分析天平：感量0.0001g。
4.3超声波水浴。
5分析步骤5.1试样的制备5.1.1茶叶、奶粉、饼干、片剂、胶囊取适量研细，称取粉末1 g（精确至0.0001 g）置于50 mL量瓶中，加入甲醇（3.1.4）45 mL，振摇，超声提取10 min，放冷，加甲醇（3.1.4）定容至刻度，摇匀，用滤膜（0.22 µm，有机相型）过滤，取续滤液，可根据实际浓度适当稀释至线性范围内，供液相色谱-质谱联用仪分析。
5.1.2 饮料、口服液准确吸取1 mL，置50 mL量瓶中，加入甲醇（3.1.4）45 mL，振摇，超声提取10 min，放冷，加甲醇（3.1.4）定容至刻度，摇匀，用滤膜（0.22 µm，有机相型）过滤，取续滤液，可根据实际浓度适当稀释至线性范围内，供液相色谱-质谱联用仪分析。
5.1.3酒准确吸取1 mL，置蒸发皿中，水浴蒸至无醇味，用适量甲醇（3.1.4）溶解并转移至50 mL 量瓶中，振摇，超声提取10 min，放冷，加甲醇（3.1.4）定容至刻度，摇匀，用滤膜（0.22 µm，有机相型）过滤，取续滤液，可根据实际浓度适当稀释至线性范围内，供液相色谱-质谱联用仪分析。
5.2 仪器参考条件5.2.1 色谱条件5.2.1.1 系统1（测定苯乙双胍、丁二胍、二甲双胍、伏格列波糖、阿卡波糖）a) 色谱柱：酰胺基键合杂化颗粒色谱柱(2.1×100 mm，3.5 µm)，或性能相当者；b）流动相：A为含5 mmol/L的甲酸铵溶液（3.2.2），B为5 mmol/L甲酸铵乙腈溶液（3.2.3），梯度洗脱程序见表2；c）流速：300 μL/min；d) 柱温：70℃；e) 进样量：1 μL。
5.2.1.2 系统2（测定维达列汀、罗格列酮、西他列汀、吡格列酮、氯磺丙脲、达格列净、格列吡嗪、甲苯磺丁脲、醋磺己脲、妥拉磺脲、瑞格列奈、卡格列净、格列齐特、格列波脲、格列本脲、那格列奈、格列美脲、曲格列酮、格列喹酮、莫格他唑、GW501516、环格列酮）a) 色谱柱：亲水三键键合相实心核颗粒色谱柱(2.1×100 mm，2.7 µm)，或性能相当者；b）流动相：A为含0.1%甲酸水溶液（3.2.1），B为乙腈（3.1.1），梯度洗脱程序见表3；c）流速：300μL/min；d) 柱温：30℃；e) 进样量：1μL。
5.2.2 质谱条件a) 离子源：电喷雾离子源（ESI源）。
b) 检测方式：多反应监测（MRM）。
c) 扫描模式：正离子模式或负离子模式。
d）干燥气、雾化气、鞘气、碰撞气等均为高纯氮气或其他合适气体，使用前应调节相应参数使质谱灵敏度达到检测要求，毛细管电压、干燥气温度、鞘气温度、鞘气流量、喷嘴电压、碰撞能量、碎裂电压等参数应优化至最佳灵敏度，监测离子对和定量离子对等信息详见附录A。
5.3 定性测定按照高效液相色谱-串联质谱条件测定试样和标准工作溶液，记录试样和标准溶液中各化合物的色谱保留时间，以相对于最强离子丰度的百分比作为定性离子对的相对丰度，记录浓度相当的试样与标准工作溶液中相应成分的相对离子丰度。
当试样中检出与27种化合物中某标准品色谱峰保留时间一致的色谱峰（变化范围在±2.5%之内），并且相对离子丰度允许偏差不超过表4规定的范围，可以确定试样中检出相应化合物。
5.4定量测定5.4.1标准曲线的制作将混合标准工作溶液A （3.4.5）分别按仪器参考条件（5.2.1.1和5.2.2）进行测定，将混合标准工作溶液B （3.4.6）分别按仪器参考条件（5.2.1.2和5.2.2）进行测定，得到相应的标准溶液的色谱峰面积。
以混合标准工作溶液的浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
5.4.2试样溶液的测定将试样溶液（5.1）按仪器参考条件（5.2）进行测定，得到相应的样品溶液的色谱峰面积。
根据标准曲线得到待测液中组分的浓度，平行测定次数不少于两次。
6空白试验除不加试样外，均按试样同法操作。
7结果计算将液相色谱-质谱测得浓度代入下式计算含量：K m Vc X ⨯⨯⨯=1000 (1)式中：X — 试样中各待测物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg ）；c — 从标准曲线中读出的供试品溶液中各待测物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL ）；V — 样液最终定容体积，单位为毫升（mL ）； m —试样溶液所代表的质量，单位为克（g ）； K — 稀释倍数。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。
8检测方法的灵敏度、精密度、专属性8.1 灵敏度固体和液体取样量为1 g 或1 mL ，定容体积为50 mL 时，伏格列波糖、阿卡波糖、达格列净、卡格列净、曲格列酮、环格列酮的定量限为12.5 mg/kg 或12.5 mg/L ；苯乙双胍、丁二胍、二甲双胍、维达列汀、罗格列酮、西他列汀、吡格列酮、氯磺丙脲、达格列净、格列吡嗪、甲苯磺丁脲、醋磺己脲、妥拉磺脲、瑞格列奈、卡格列净、格列齐特、格列波脲、格列本脲、那格列奈、格列美脲、曲格列酮、格列喹酮、莫格他唑、GW501516、环格列酮的定量限为0.25 mg/kg 或0.25 mg/L 。
