蛋白沉淀法

沉淀蛋白法乙腈比例
沉淀蛋白法是一种常用的蛋白质提取方法，通常用于从生物样
品中提取蛋白质。

在使用乙腈进行蛋白质沉淀时，乙腈的比例是一
个重要的因素。

一般来说，乙腈的加入量应该使得最终溶液中乙腈
的浓度达到合适的范围，以促进蛋白质的沉淀和纯化。

在进行蛋白质沉淀时，乙腈的比例可以根据具体的实验要求和
样品特性来确定。

一般而言，乙腈的最终浓度通常在30%至90%之间。

具体的比例可以根据试验目的和样品类型进行优化。

一般来说，对
于不同的蛋白质，最适合的乙腈比例可能会有所不同。

此外，沉淀蛋白法中乙腈的加入还需要考虑到其他因素，比如
溶液的pH值、盐浓度等。

这些因素都会影响乙腈的最佳加入比例。

因此，在进行实验时，需要综合考虑这些因素，通过实验优化来确
定最佳的乙腈比例。

总的来说，沉淀蛋白法中乙腈的比例是一个需要根据具体情况
来确定的参数，需要综合考虑实验要求、样品特性以及其他影响因素，通过实验来优化确定最佳的乙腈比例。

希望这个回答能够帮助
到你。

蛋白沉淀方法蛋白沉淀是蛋白质分离与纯化的一种常用方法，通过加入化学物质使目标蛋白质与其它蛋白质或者杂质分离，并沉淀于溶液底部或者浮于溶液表面。

本文将从蛋白沉淀的原理、化学物质的选择、实验操作、蛋白沉淀后处理等方面进行介绍。

一、蛋白沉淀的原理蛋白质的沉淀是基于化学物质与蛋白质之间的物理或者化学相互作用，包括：1. 盐析沉淀在高浓度盐溶液中，蛋白质远离其同样带电的水分子，而形成大分子团聚，从而沉淀。

在酸性环境下，大多数蛋白质通过质子化而失去电荷，降低了疏水性，从而沉淀。

在碱性环境下，蛋白质通常解离出一个氨基酸残基的羧基，从而带有负电荷，易于被阳离子与之形成沉淀。

4. 有机溶剂沉淀如乙醇、丙酮、甲醇等，可与蛋白质形成复合物，使其聚合而沉淀。

以上几种原理可单独或结合使用，根据情况进行选择。

二、化学物质的选择常用的盐类有氯化铵、硫酸铵、硫酸钠等。

浓度通常在10-60%之间，具体浓度根据具体实验条件进行选择。

2. 酸类常用的酸包括二元酸、有机酸等。

浓度为0.1-1M之间，酸性度通常为pH 4-6。

3. 碱类常用的有机溶剂包括乙醇、丙酮、甲醇等。

浓度通常为50-90%之间，根据实验要求进行选择。

三、实验操作1. 样品制备待分离的蛋白质必须经过预处理，通常包括离心、裂解、过滤等步骤。

裂解方式可以使用生理盐水、水、甲醇等，使蛋白质从细胞中释放出来。

过滤可以使用滤纸、滤膜、分子筛等方式，去除杂质。

2. 化学物质的加入将选择好的化学物质加入样品中，此时需注意化学物质前后也要进行科学操作，如一些电解质类物质可能带有杂质，需要先进行过滤；有机溶剂可能会引起蛋白质的变性，需加入适量的缓冲液进行保护。

将混合物小心地混合均匀后，离心使混合物分层，此时目标蛋白沉在沉淀层，上清液中还有一些蛋白，需要将其过滤或沉淀以去除杂质。

4. 纯化将沉淀分解，得到的产物通过离心、层析等步骤进行纯化，最终得到目标蛋白。

沉淀后需要进行洗涤，以去除杂质，保证目标蛋白的纯度和酶效。

四种蛋白纯化方法1. 溶液沉淀法溶液沉淀法是一种常用的蛋白纯化方法，适用于从复杂的混合物中分离目标蛋白。

该方法基于蛋白质在不同条件下的溶解度差异，通过添加盐类或有机溶剂来诱导蛋白质的沉淀。

步骤：1.样品制备：将待纯化的样品经过初步处理，如细胞破碎、组织切割等，得到含有目标蛋白的混合物。

2.溶解度测试：在不同条件下（如pH、温度、盐浓度等）测试目标蛋白质的溶解度，并确定最适合其沉淀的条件。

3.沉淀：根据前一步骤确定的最佳条件，向样品中添加盐类或有机溶剂，使目标蛋白质发生沉淀。

可以通过离心将沉淀物与上清液分离。

4.溶解：将沉淀物重新溶解在适当的缓冲液中，得到纯化后的目标蛋白。

优点：•简单易行，不需要复杂的设备和操作。

•适用于从复杂混合物中纯化目标蛋白。

缺点：•可能会导致非特异性沉淀，使得纯化后的蛋白含有杂质。

•沉淀方法对蛋白质的溶解度要求较高，不适用于所有蛋白。

2. 凝胶过滤法凝胶过滤法是一种基于分子大小的蛋白纯化方法，适用于分离不同分子量范围的蛋白。

该方法利用孔径可调的凝胶柱或膜来分离目标蛋白和其他小分子。

步骤：1.样品制备：将待纯化的样品经过初步处理，如细胞破碎、组织切割等，得到含有目标蛋白的混合物。

2.凝胶柱选择：根据目标蛋白的分子量范围选择合适孔径的凝胶柱或膜。

3.样品加载：将样品加载到凝胶柱上，并使用缓冲液进行洗涤，以去除小分子。

4.蛋白洗脱：通过改变缓冲液的组成或pH值，使目标蛋白从凝胶柱上洗脱下来。

5.收集纯化蛋白：将洗脱得到的蛋白收集起来，即可得到纯化后的目标蛋白。

优点：•可以根据分子量范围选择合适的凝胶柱，实现高效分离。

•纯化后的蛋白质纯度较高。

缺点：•操作相对复杂，需要一定的专业知识和技术。

•只适用于分子量差异较大的目标蛋白。

3. 亲和层析法亲和层析法是一种基于生物分子间特异性相互作用的蛋白纯化方法，适用于富含目标蛋白的混合物。

该方法利用目标蛋白与特定配体之间的亲和力进行分离和纯化。

沉淀蛋白法乙腈比例全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：沉淀蛋白法是一种常用的蛋白质提取方法，通过将样品中的蛋白质与有机溶剂乙腈相结合，使蛋白质在溶液中沉淀下来，从而实现蛋白质的分离、富集和纯化。

乙腈是一种常用的有机溶剂，具有较好的溶解性和挥发性，适合用于蛋白质提取与分离。

在进行沉淀蛋白法时，乙腈的比例是影响提取效果的重要因素之一。

下面将详细介绍沉淀蛋白法中乙腈的比例对提取效果的影响。

乙腈的比例对沉淀蛋白法的提取效果具有重要影响。

一般来说，较低浓度的乙腈可使蛋白质保持在水相中，而高浓度的乙腈则可促使蛋白质从水相中沉淀出来。

在选择乙腈的比例时，需要根据所需提取的蛋白质的特性和样品的性质来确定。

通常情况下，乙腈的浓度在20%~60%之间是比较常见的选择范围。

乙腈的比例还会影响到提取蛋白质的纯度和产率。

在一定范围内，适当的乙腈浓度可以促使目标蛋白以较高的纯度从水相中沉淀出来，并且不容易出现杂质的干扰。

但是如果乙腈的比例选择不当，可能会导致蛋白质不完全沉淀或者纯度降低，进而影响到后续实验的结果。

在进行沉淀蛋白法时，需要根据具体情况适当调整乙腈的比例，以实现最佳的提取效果。

乙腈的比例还会对实验的操作性产生影响。

高浓度的乙腈可以提高实验操作的复杂度，可能需要更长的离心时间或者更高的离心速度才能将蛋白质充分沉淀下来。

而低浓度的乙腈则可能导致蛋白质的提取效率较低，需要增加提取的重复次数才能达到理想的结果。

在选择乙腈的比例时，还需要考虑到实验操作的便捷性和效率性，以确保实验的顺利进行。

沉淀蛋白法中乙腈的比例是一个重要的影响因素，需要在实验前进行充分的考虑和优化。

合理选择乙腈的比例可以提高蛋白质的提取效果，提高蛋白质的纯度和产率，同时也能够简化实验操作，提高实验的效率和准确性。

希望通过本文的介绍，读者对沉淀蛋白法中乙腈比例的选择有了更深入的了解，能够在实际操作中取得更好的实验结果。

【字数不足2000，望谅解】。

第二篇示例：沉淀蛋白法是一种常用于蛋白质纯化和分离的方法，它通过与乙腈的比例来实现目的。

蛋白质沉淀的概念：蛋白质分子凝聚从溶液中析出的现象称为蛋白质沉淀(precipitation)，变性蛋白质一般易于沉淀，但也可不变性而使蛋白质沉淀，在一定条件下，变性的蛋白质也可不发生沉淀。

定性分析：蛋白质所形成的亲水胶体颗粒具有两种稳定因素，即颗粒表面的水化层和电荷。

若无外加条件，不致互相凝集。

然而除掉这两个稳定因素(如调节溶液pH至等电点和加入脱水剂)蛋白质便容易凝集析出。

如将蛋白质溶液pH调节到等电点，蛋白质分子呈等电状态，虽然分子间同性电荷相互排斥作用消失了。

但是还有水化膜起保护作用，一般不致于发生凝聚作用，如果这时再加入某种脱水剂，除去蛋白质分子的水化膜，则蛋白质分子就会互相凝聚而析出沉淀；反之，若先使蛋白质脱水，然后再调节pH到等电点，也同样可使蛋白质沉淀析出。

沉淀方法：1.盐析法——多用于各种蛋白质和酶的分离纯化；在蛋白质溶液中加入大量的中性盐以破坏蛋白质的胶体稳定性而使其析出，这种方法称为盐析。

常用的中性盐有硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等。

各种蛋白质盐析时所需的盐浓度及pH不同，故可用于对混和蛋白质组分的分离。

例如用半饱和的硫酸铵来沉淀出血清中的球蛋白，饱和硫酸铵可以使血清中的白蛋白、球蛋白都沉淀出来，盐析沉淀的蛋白质，经透析除盐，仍保证蛋白质的活性。

调节蛋白质溶液的pH至等电点后，再用盐析法则蛋白质沉淀的效果更好。

盐析法分为两类，第一类叫Ks分段盐析法，在一定PH和温度下通过改变离子强度实现，用于早期的粗提液；第二种叫b分段盐析法，在一定离子强度下通过改变PH和温度来实现，用于后期进一步分离纯化和结晶。

影响盐析的因素包括：蛋白质浓度、离子强度和类型、PH值、温度等。

针对温度这一条，需要强调：在低离子强度或纯水中，蛋白质溶解度在一定范围内随温度增加而增加。

但在高浓度下，蛋白质、酶和多肽类物质的溶解度随温度上升而下降。

在一般情况下，蛋白质对盐析温度无特殊要求，可在室温下进行，只有某些对温度比较敏感的酶要求在0-4℃进行。

体内药物分析中常用的蛋白沉淀方法
蛋白沉淀方法是临床药物分析中用于检测和鉴定活性蛋白质的一种快速有效的工具。

它不仅提供了定量的信息，而且还具有良好的特异性和灵敏度。

目前，蛋白沉淀方法被用于医学、分子生物学和药物研究中，以及用于筛选对疾病有特异性反应的药物。

主要有几种常用的蛋白沉淀方法：离子交换、硫酸沉淀、血清旋缠球蛋白和硫酸戊二醛沉淀。

离子交换沉淀是一种常见的技术，它具有活性范围宽、体积可调、效率高、特异性强和耐受性好等优点，但操作要求较严格，耗时较长。

硫酸沉淀也是一种沉淀技术，它的优点是简单、可操作性好、反应时间短，但是可溶性蛋白无法检测，而且多种溶质或盐会影响蛋白沉淀。

血清旋缠球蛋白沉淀法是一种特殊的沉淀技术，它利用血清旋缠球蛋白与活性蛋白结合来将蛋白质从溶液中沉淀出来，这种方法操作简单且特异性良好。

硫酸戊二醛沉淀是一种最新的蛋白沉淀技术，由于多低地醛类尤其是硫酸戊二醛具有非常强的折叠能力，因此可以有效把活性蛋白固定在最低的溶液中。

蛋白沉淀方法在医学药物分析中有重要的作用，它可以有效地提取活性蛋白质，以准确定量和质量鉴定，这对医学治疗和研究提供了有益的决策参考。

因此，学习与应用蛋白沉淀技术是有必要的。

蛋白质沉淀(Protein Precipitation)浓缩方法原理及详细解析在生化制备中，沉淀主要用于浓缩目的，或用于除去留在液相或沉淀在固相中的非必要成分。

在生化制备中常用的有以下几种沉淀方法和沉淀剂：1．盐析法多用于各种蛋白质和酶的分离纯化。

2．有机溶剂沉淀法多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化，有时也用于蛋白质沉淀。

3．等电点沉淀法用于氨基酸、蛋白质及其它两性物质的沉淀。

但此法单独应用较少，多与其它方法结合使用。

4．非离子多聚体沉淀法用于分离生物大分子。

5．生成盐复合物沉淀用于多种化合物，特别是小分子物质的沉淀。

6．热变性及酸碱变性沉淀法用于选择性的除去某些不耐热及在一定PH值下易变性的杂蛋白。

第一节盐析法一般来说，所有固体溶质都可以在溶液中加入中性盐而沉淀析出，这一过程叫盐析。

在生化制备中,许多物质都可以用盐析法进行沉淀分离，如蛋白质、多肽、多糖、核酸等，其中以蛋白质沉淀最为常见，特别是在粗提阶段。

盐析法分为两类，第一类叫Ks分段盐析法，在一定PH和温度下通过改变离子强度实现，用于早期的粗提液；第二种叫Kb分段盐析法，在一定离子强度下通过改变PH和温度来实现，用于后期进一步分离纯化和结晶。

一．影响盐析的若干因素1．蛋白质浓度高浓度蛋白溶液可以节约盐的用量，但许多蛋白质的b 和Ks常数十分接近，若蛋白浓度过高，会发生严重的共沉淀作用；在低浓度蛋白质溶液中盐析，所用的盐量较多，而共沉淀作用比较少，因此需要在两者之间进行适当选择。

用于分步分离提纯时，宁可选择稀一些的蛋白质溶液，多加一点中性盐，使共沉淀作用减至最低限度。

一般认为2.5%-3.0%的蛋白质浓度比较适中。

2．离子强度和类型一般说来，离子强度越大，蛋白质的溶解度越低。

在进行分离的时候，一般从低离子强度到高离子强度顺次进行。

每一组分被盐析出来后，经过过滤或冷冻离心收集，再在溶液中逐渐提高中性盐的饱和度，使另一种蛋白质组分盐析出来。

蛋白质的沉淀的方法
1. 酸性沉淀法：在酸性条件下，将蛋白质和特定的金属离子（如铜离子）配合形成不溶性的复合物沉淀。

2. 盐析法：利用不同浓度的盐解离水合壳，使蛋白质沉淀。

3. 醇沉淀法：在高浓度的乙醇或异丙醇中加入蛋白质，使其沉淀。

4. 离子交换层析法：利用离子交换树脂对蛋白质进行分离纯化，蛋白质在不同离子浓度下与树脂发生离子交换，使蛋白质从树脂上洗脱。

5. 大小分离法：根据蛋白质分子的大小、形态、电荷等特性，利用凝胶过滤、离心等方法进行分离。

6. 两亲性层析法：利用特殊的分子筛材料（如聚合物、聚丙烯酰胺凝胶）对蛋白质进行分离，以蛋白质分子的亲水性和疏水性的不同性质进行分离。

100％（ｗ／ｖ）三氯乙酸得配制方法：500g三氯乙酸用227ml水来溶解,所得溶液即１00％三氯乙酸溶液.避光,4度保存.(pｒeｐａｒaｔiｏn of 100%TCA: 454ml H2O/kg TCA、Ｍaｉntain ｉn ｄarkｂoｔtｌeaｔ4ｏＣ、Ｂeｃａrｅfｕｌ，use gloｖes！！！)、培养基上清直接电泳跑出来得条带经常很难瞧，可以ＴCA沉淀浓缩后跑电泳，一般表达量大于1ｍg/ml可以瞧到明显条带，这就是我用得TCA沉淀方法，效果很好：1、菌液1０0０0g，离心５分钟，收集表达上清。

2、取500－１000ul上清于EP管中，加入1/9体积得10０％TCＡ，颠倒10次混匀。

3、样品置于冰浴中大于0、5小时，过夜效果更好.４、15000g，离心10－2０分钟,可见有棕黑色沉淀,倒掉上清，将EP管倒扣在吸水纸上轻轻控几下，除去残余在管口得液体。

5、将EP管倒置于吸水纸长,37度烘箱１０—20分钟，待管底无明显液体残留，如果管壁还残留有液体，可以吸水纸吸掉。

可以改成室温或用电吹风，关键就是除去管底与管壁残余液体.6、15000ｇ，离心10－20分钟,用20ｕl枪头尽量吸去管底残余得液体,此步骤要快，不然沉淀容易散开，降低蛋白回收率，一般最多几ul或者没有，注意不要吸到沉淀.7、ＥP管倒置于吸水纸长,37度烘箱5分钟，确认管壁与管底没有液体残留。

8、加入2０－５0ul Lｏadｉｎg ｂｕｆｆer，9５度加热１0nｉm，一般沉淀会自动溶解,如果不溶,用手指轻弹管壁或用２0ul枪头轻轻吸打,注意整个操作尽量不要碰到管壁，因为管壁可能沾有残余ＴCA。

如果蓝色得Loadinｇbuｆｆer 不变成黄色，说明残余TCＡ吸弃了干净，如果变黄,一般不影响电泳。

此方法连丙酮洗这一步都省了,而且不影响电泳效果。

或者第５步与第6步改为丙酮洗：5、加入200ul冰冷得丙酮，用手指轻弹EP管,洗去管底与管壁残余得TCA.6、１50００g,离心10－20分钟，倒掉上清,将EP管倒扣在吸水纸上轻轻控几下,除去残余在管口得液体.ＴＣA—DＯCFｏｒ pｒｅｃiｐiｔation of ｖeｒy ｌoｗ proteiｎ cｏncenｔraｔioｎ1) Ｔo oｎe volｕme of pｒotｅinｓolution,add 1／10０vｏl、of ２％DOC (Na deoxychｏｌａte, ｄeｔerｇeｎt）、２）Vorｔex anｄlet sｉt fｏr 30min ａt 4ｏC、ﻫ3)Adｄ１/10 oｆTrichloｒｏaceｔi ｃacid(ＴCA）100％vortex anｄｌet siｔON at 4oC (prepaｒation oｆ100% TC Ａ：454ｍｌＨ2O/kｇTCA、Mａinｔａin ｉｎdark bottlｅaｔ4oC、Be carｅful，ｕse ｇlｏves!！!）、４）Sｐin 1５ｍiｎ4oC ｉn microｆｕｇｅat maxｉmum speed（1５０00ｇ）、Ｃarefu ｌlｙdｉschａrge ｓupernaｔant aｎd retain the pellet: drｙtｕbe by ｉｎverｓｉon ｏｎtissuｅpapｅｒ（pellet may bｅｄifficult to see）、[ＯPTION: Wasｈｐelｌeｔtwi ｃe with ｏne vｏlumｅof cold ａｃｅtone（aｃｅｔone keep aｔ–20oC）、Ｖor ｔex and repeｌｌｅt saｍplｅs 5ｍin aｔｆull sｐeed ｂeｔｗeｅｎwａｓhes］、５）Dry ｓaｍｐles uｎder vaccuｍ（ｓｐｅｅd vａｃ) orｄryａｉr、Fｏr ＰAGＥ—SDS, resuspｅｎd sａmｐlｅs in ａminimal voｌuｍｅof saｍpleｂｕffｅｒ、(Tｈe pｒesence of some TＣＡcan giｖｅa yeｌｌow ｃｏｌour ａs aｃonｓeｑｕe ｎcｅof tｈe aciｄificａtioｎof the sample buｆｆer; titｒatｅwｉth 1N NaOH ｏr 1M TrｉｓＨCｌpH8、５ｔｏｏbｔain the normal blue sａmplｅｂuｆfｅr colｏur、)Nｏrmａl TCＡﻫTo eliminateＴCA soluble iｎtｅｒferｅnces and ｐrｏteｉn coｎceｎtr ａtion1) Ｔo a sampｌe oｆpｒotein soluｔｉｏｎaｄd Ｔrichlorｏacetic aｃｉd（TCA) 100% to get13％finａl cｏncentｒation、Ｍix and keep 5min–20oCａnd tｈｅn 15min ４oC；or lｏngeｒtime at4ｏC wｉthｏuｔthe –2０oC sｔｅｐfoｒlower ｐrotｅin cｏnceｎｔration、Ｓuggestiｏn: lｅave ON iｆｔhe prｏteiｎcoｎcｅntrａtｉon iｓvｅrｙlow、ﻫ（pｒeｐaration of1０0％ＴＣA：454ml H2O／kｇＴＣA、Mainｔａin in dａｒｋbotｔlｅat 4ｏC、Ｂe carefｕl，use glｏves!!!)、2) Spin 1５min 4oC iｎmicｒofuge at mａｘiｍｕｍspeed (150０0g)、Carｅfully dｉｓcharge sｕpｅrnaｔaｎt and retａin ｔhe pellet: dry tubｅｂy inｖｅｒsion on tiｓsue papｅr （pellｅt may be difficｕlt tｏsｅe）、ﻫ3)Fｏr PAＧＥ—ＳＤS,ｒesuspenｄsampleｓiｎa minimal volumeｏf sａmple buｆfer、（Thｅpreｓence of some TCA can give aｙeｌlow cｏloｕｒasａcoｎｓｅquencｅｏf thｅacｉdificatiｏn oｆｔhe sampｌe bｕfｆｅr ; tiｔrａｔe with 1N NaOH or １M TrisＨCｌpH8、5 to obtａｉｎthe nｏrmal ｂlue samｐｌｅbuffｅｒcｏlouｒ、) ﻫAcetone PｒecipitationﻫTo eliminate acetone soｌｕble ｉntｅｒfｅrenceｓand ｐroteiｎcoｎcentratｉoｎ1) Ａｄd ｔo1vｏｌｕme ｏf ｐroteｉn ｓolｕtion 4 ｖoｌumeｓof ｃolｄａcetｏne、Mix aｎｄkeeｐaｔleast 20min –20oＣ、（Suｇgｅstion：leave OＮiｆthe pro ｔein conceｎtratioｎｉs very lｏｗ）、ﻫ2) Ｓpｉｎ15ｍiｎ４oC ｉｎmicrｏfugｅat maximuｍsｐeed （15000g)、Carｅｆulｌy ｄischarge suｐernaｔant and retaｉn tｈe pellet：ｄｒy ｔube byｉｎｖersｉoｎon ｔissuｅpａper （pellｅｔmayｂe dｉfficult to ｓee）、ﻫ3) Ｄｒy ｓａmpｌｅｓｕnｄer vａcｃｕｍ(speeｄ-vaｃ）ｏr ｄｒy ａir tｏeliｍｉnatｅａnｙaｃetｏｎe ｒesidue (smｅll ｔuｂeｓ)、Fｏr PAGＥ—SＤS, resuｓpend saｍples ｉn a ｍｉnimal vｏluｍe of samｐｌe ｂuｆfer、EthanoｌPrecｉｐitaｔiｏnＵseｆｕl methoｄto conｃenｔraｔｅproｔｅiｎｓanｄremoval of Ｇｕａｎiｄine Hydrocｈloｒide bｅfｏre ＰＡGE-SDS１)Aｄd ｔo 1 vｏlume oｆpｒoteiｎsolution 9 ｖoｌｕmes ｏf ｃold Ethanol1０0％、Mix andｋeｅp at leaｓt 10miｎ、at –２0ｏＣ、（Suggesｔiｏn: leave ＯN)、2）Sｐin 1５ｍin 4ｏC in micrｏcｅntrifｕge aｔmaximuｍｓpeeｄ(1５０0０g)、Carefully dｉscharｇe supｅｒｎataｎｔanｄｒetain the pellet: dｒy ｔuｂe by inｖersion oｎtissue paｐｅr(pelｌet ｍａｙbe diｆficult to sｅe）、３）Wash pelｌet with 90％cｏld eｔｈanol（keeｐａt–2０oC)、Ｖortex ａndrepelｌet samｐｌes ５mｉｎａt fuｌl speed、ﻫ４）Dry sａｍplｅs under vaccum (ｓpeedｖac) or drｙａir toｅliｍinａte ａny ethanoｌｒｅｓiduｅ(smell ｔｕｂes）、Ｆor PAGE－SDS, reｓuspenｄsａmples iｎ a miｎimal volｕme of sample buffer、ﻫTCＡ-DＯＣ／AcetoｎeﻫUseful mｅthoｄto concｅｎtrate ｐrｏteiｎs and ｒｅmoｖｅacetｏne aｎd TCA ｓolｕble inｔｅrfereｎces1、To oｎe vｏlume ｏｆｐｒotｅｉｎsoluｔion adｄ2％Ｎａdeoｘycｈolate （DO Ｃ) to 0、02% final（for１0０μl sａmple, aｄd 1 μｌ2% DＯＣ)、2、Mix ａnd keｅｐat ｒoｏm tｅmperａture for ａｔleast 15 min、3、100% triｃhｌｏroacetic ａcｉｄ(ＴCA) tｏget 10% fiｎａl concｅｎtratｉoｎ（pre ｐaration ｏｆ10０%TＣA:45４ml Ｈ2Ｏ/kｇTＣＡ、Mａiｎtaｉｎiｎdaｒk bottl ｅａt 4oC、Be carｅful, usｅgloves！!!）、ﻫ４、Mｉx anｄkeｅp at room teｍpｅｒature foｒat least 1hour、ﻫ5、Spiｎａt 4ｏC fｏｒ１0 min, ｒｅmoｖｅsｕpernａtａn ｔａnｄrｅtａin tｈe pｅllet、Ｄry tube by inverｓｉon on tissuｅpａpｅr、ﻫ6、Aｄd200 μl of ice cold ａcetｏne toＴCA pellet、ﻫ7、Mix aｎd keeｐoｎiｃe ｆorａt leas ｔ１5 min、8、Spin at ４oC ｆor10 mｉn in miｃrocenｔｒifuge at ｍａｘｉmｕm spｅｅd、9、Reｍove ｓｕpｅrnａｔａｎt as befoｒe(5）, dry airｐellｅt tｏelimiｎａte anyａcｅｔoｎe ｒesidue （smell tuｂeｓ）、For PＡGE—SDS，rｅsusｐenｄsaｍples ｉｎａｍinimａl volｕme of sａｍpleｂuffeｒ、ﻫ10、(Ｔｈｅpresenｃe oｆsｏｍｅＴCA can givｅａyellow coloｕr aｓ a consequence oｆthe acｉdificaｔiｏｎof ｔhe saｍple bｕffeｒ; ｔｉtｒaｔe wｉｔh 1N ＮaOH or 1M ＴrisＨCl pH８、５to ｏbt ａin tｈe ｎorｍａl blue ｓampｌe bｕffeｒcｏlouｒ、)Aciｄiｆiｅd Aceｔone／ＭethａｎｏｌﻫUｓefｕlｍetｈod to rｅｍove acetoｎe and methanolｓoluｂle inｔｅrｆerencｅs like SDS befoｒe IＥF1）Prepare aｃidiｆied acetｏｎe: １２0mｌacetone + １0μl HCl （1ｍＭfｉnaｌco ｎcｅnｔration）、2) Pｒepare precipitation reagent: Mix ｅquａｌvolumeｓof acidifｉed ａcetoｎe aｎdmｅthanoｌand keｅp ａｔ—20ｏC、３）Tｏone volume of proteｉn solution add 4vｏlｕmes of ｃolｄpreciｐitation reag ｅｎt、Miｘand kｅep ＯＮat—2０oC、4）Ｓｐin １5min 4ｏC in microfuｇe aｔｍaxiｍuｍsｐｅｅd （１5000g）、Cａrefull ｙdischaｒge ｓupeｒｎatant and reｔain thｅｐeｌlet：dry tuｂe by inversioｎon tis ｓｕe paper (ｐellｅt mａｙｂe ｄifｆicultｔo seｅ）、ﻫ５)Ｄry sampｌｅｓｕnder vaｃcuｍ(ｓｐeed-vac）orｄry air tｏelｉmiｎａte aｎy ａcｅtｏne ｏr mｅthａnｏl resｉｄue （smell tｕbes）、TCA—Ｅtｈanol PｒｅcipitationUｓeｆul methｏｄto coｎcentraｔe prｏｔeinｓand rｅmovaｌof Guａｎidiｎe Hydｒｏchｌoriｄe bｅfoｒｅＰAGＥ—ＳDＳ１）Ｄilｕte１０—25μl sａｍpleｓtｏ100μl with Ｈ2OAdd１0０μl oｆ２0％tｒicｈloｒoacｅtｉｃaｃｉd(TCA) ａnd mｉx（preparation of 100％TCA：45４mｌH2Ｏ/ｋg TCA、Maintaｉn iｎdark bｏｔtｌeat４ｏC、Ｂe caｒeful, use gｌoves!！!）、ﻫ2）Ｌeavｅｉn ice for ２０ｍiｎ、Spｉn at ４oC for 15 min in ｍｉcrocentrifuge aｔｍaxｉｍuｍspｅeｄ、ﻫ3）Caｒｅfully ｄischａrge s ｕpｅｒnatanｔand retaiｎthe pellet：dry tuｂｅby inveｒsion on tissue（pellet ｍ4）Wash ｐellｅｔwith 100μlｉce—cold etｈanol，ａy be difｆｉcｕlt toｓee)、ﻫｄry and reｓusｐend in sａmｐｌe buffer、5）Ｉn caｓeｔhere are traces of GuHＣl prｅｓent,samｐles should bｅloadedｉmmeｄｉａteｌy afｔer boilｉng ｆor ７min at 95°C ﻫ6）(Tｈe pｒeｓｅnce of some TCA ｃａn ｇiｖe a yellow ｃolour as a ｃｏnｓequｅnce ｏf the acｉdifｉｃａｔion of ｔhｅsamｐle buffer ；ｔｉtrate ｗｉtｈ１N ＮaOH oｒ1M TriｓHCl ｐH8、5 to obtain ｔｈe normal bluｅsample ｂｕffｅr ｃolour、）ﻫPAGE preｐTM Pｒｏteｉn Cleａn-up and EnricｈmｅnｔＫit — PＩＥRCEＴｈe PAGEｐreｐ？Kiｔenａbles rｅmoval oｆｍany chemicals tｈa ｔiｎterｆｅre ｗｉth ＳDＳ－PAＧEａｎａlyｓｉｓ：gｕａniｄｉne，ammｏniｕm sulfaｔe, other mon sａlｔs, acidｓanｄbases，detergenｔs，dyeｓ, ＤNＡ,RNA，aｎd liｐids、ＰIＥＲＣE：#26800- ＰＡGＥprｅｐTMＰroteiｎCｌean—up and EｎｒicｈmｅntＫit（ｐｄｆ）ＣhloｒｏｆorｍMethanol PrｅcｉｐitationﻫUseful mｅthｏｄfoｒReｍovaｌof s ａlｔand deterｇenｔs1)To saｍple of ｓtartiｎｇvolumｅ100ul2) Add 400 ul methanol3）Ｖoｒtex wellﻫ4）Ａdd 100 ｕl cｈlorｏform5) Vortexﻫ6）Add30０uｌH2O7）Vortexﻫ8）Spin 1 miｎuｔe 14,0０00ｇ9）Remｏve top aqueouｓlayｅr (protｅin is betweeｎlaｙers）10) Ａdd 4０0ul meｔhanoｌﻫ１1）Voｒtex１2）Spin 2 minｕtes14,000 g１3）Ｒeｍovｅas mucｈMeOH ａｓpｏsｓｉbｌe ｗitｈｏut dｉｓturb14)Speeｄ—Vaｃtｏｄrynessｉng pelleｔﻫ15）Ｂring uｐｉｎ2X samｐle buｆfeｒfｏrＰAGE。