采用木瓜蛋白酶制备乌鸡蛋白肽的研究_龙彪

蛋白质、蛋白酶以及短肽类的分离提纯技术及应用
喇文军
【期刊名称】《食品工程》
【年(卷),期】2008(000)001
【摘要】介绍了蛋白质、蛋白酶以及短肽类研究的一些传统方法和新兴方法.主要对分离、提纯、鉴定及分析方法的使用条件、适用范围、操作步骤、各自特点和应用价值作了简要阐述,并对有关方法进行了比较与评价.
【总页数】5页(P15-18,29)
【作者】喇文军
【作者单位】深圳职业技术学院应用生物技术系,深圳,518055
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
【相关文献】
1.木瓜蛋白酶水解鸡骨泥制备短肽工艺优化 [J], 朱瀛;赵改名;柳艳霞;赵莉君;田玮
2.粉拟青霉类枯草杆菌蛋白酶基因的cDNA克隆及其序列和蛋白质分析 [J], 黄勃;汪章勋;樊美珍;李增智
3.中性蛋白酶水解鸡骨泥制备短肽工艺优化 [J], 朱瀛;赵改名;柳艳霞;赵莉君;田玮
4.蝉拟青霉类枯草杆菌蛋白酶基因的克隆及其序列和蛋白质分析 [J], 陈官菊; 柴一秋; 厉晓腊; 方鸣; 刘又高; 金轶伟
5.细胞内蛋白质降解:通过溶酶体和泛素—蛋白酶体系统探索人类疾病和药物靶向治疗的未来 [J], Aaron Ciechanover
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乌鸡肽的营养成分及其功能特性研究白芳;李映红;黄飞娟;吴正治【摘要】探讨乌鸡肽的营养成分及功能,为其深度开发打下基础.利用木瓜蛋白酶和风味蛋白酶水解乌骨鸡肌肉、活性炭脱色法制备乌鸡肽,高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法检测乌鸡肽的总氨基酸及游离氨基酸含量及相对分子质量分布区间、纳升级液相色谱串联质谱(Nano liquid chromatography tandem mass spectrometry,Nano LC-MS/MS)技术鉴定其组成成分.结果表明,游离氨基酸占总氨基酸的比例为1.74％,总氨基酸含量较高者为Leu、Ala、His、Pro、Met和Phe,游离氨基酸含量较高者为Glu、Pro、Asp、Arg、Gly和Ala;相对分子质量分布范围为0至6918 Da,其中1084 Da以下的比例达到88.91％;Nano LC-MS/MS鉴定出源于107种蛋白质的2287种肽段序列,其中种类最为丰富的蛋白为参与骨骼肌修复的蛋白及酶类.该研究较为全面的分析乌鸡肽的营养成分,并表征了其功能,为乌鸡肽的潜在应用价值研究打下基础.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2019(040)002【总页数】5页(P17-21)【关键词】乌鸡肽;氨基酸;相对分子质量;功能;应用【作者】白芳;李映红;黄飞娟;吴正治【作者单位】深圳大学附属第一医院,广东深圳518035;深圳市老年医学研究所,广东深圳518020;深圳大学附属第一医院,广东深圳518035;深圳大学附属第一医院,广东深圳518035;深圳市老年医学研究所,广东深圳518020;中山大学附属第一医院,广东广州510080;深圳大学附属第一医院,广东深圳518035;深圳市老年医学研究所,广东深圳518020【正文语种】中文乌骨鸡（Gallus gallus domesticus Brisson）是一种对气虚、血虚、脾虚、肾虚、心虚等各类虚症均有较好疗效的药用鸡种，体内蛋白质和氨基酸含量丰富，营养价值极高[1-2]。

酶解法生产蛋白1 蛋白原料动物性蛋白与植物蛋白相比，原料中脂肪含量较高，不仅影响水解反应的进行，而且所得水解液颜色混浊，影响最终分离效果。

因此，在酶解前用丙酮、乙醚对原料进行脱脂处理，对水解反应的进行有促进作用。

余礼碧等（2000）研究表明，脂肪磷脂去除的越干净，蛋白质反应中心暴露得越充分，利于酶解反应的进行，并且水解终点明显，固液易于分离。

2 预处理为了提高酶解效率，一般对原料蛋白作变性预处理，主要方法包括：①热处理。

在沸水浴中煮10～60min 后，直接酶解加工或离心收集沉淀。

Margearet（1997）认为酶解前的热处理只能提高反应的水解度，而对产物的生理活性没有影响。

②强酸处理。

用适当浓度强酸处理蛋白原料，离心收集沉淀，并用水悬浮洗涤沉淀数次，去掉余酸。

李春美等（2005）研究表明，鱼鳞未经酸处理时水解效果很差，经粉碎并用酸处理后，酶解效率大大提高。

蛋白质经变性处理后会充分暴露其水解作用的位点，易于酶的水解作用，进而提高水解度。

但谭斌等（2005）的试验结果表明，蛋白质在不同变性程度时对水解度影响很大，变性程度过高反而不利于水解。

因此需要根据水解时间长短在保证水解液不变质的条件下适当预处理。

3 酶解3.1 蛋白酶的选择根据蛋白酶的来源，常选用的蛋白酶分为：动物性蛋白酶（胰蛋白酶，胃蛋白酶等）、植物蛋白酶（木瓜蛋白酶，菠萝蛋白酶等）和微生物蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶，黑曲酶等）；根据蛋白酶作用的最适pH 值来分，可分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。

由于蛋白质水解液中一些苦肽氨基端的暴露而使得水解液带有苦味，因此，一些风味酶也常常被用于产品风味的调节加工中。

一般根据蛋白原料的组成、酶的特性，以及实验目的选择合适的蛋白酶。

由于不同蛋白酶的特异性不同，而蛋白原料的蛋白较复杂，使用单一的酶难以提高最终的水解度，对蛋白质进行有效的酶解（朱志伟等，2004）。

试验中多以水解度，小肽得率以及产品风味为指标对蛋白酶进行比较筛选或选用复合酶进行水解。

固定化木瓜蛋白酶制备大豆肽的研究
固定化木瓜蛋白酶制备大豆肽的研究
摘要:
大豆肽是一种具有丰富营养和多种生物活性的蛋白质水解产物。

本研究旨在利用固定化木瓜蛋白酶制备大豆肽，并评估其水解效果和生物活性。

引言:
大豆是世界上最重要的农作物之一，其蛋白质含量丰富。

然而，大豆蛋白质中存在一些抗营养因子，如胰蛋白酶抑制剂和血凝素等，这些物质会影响蛋白质的消化和吸收。

通过蛋白酶水解，大豆蛋白质可以转化为更小的肽段，提高其消化性和生物利用率。

方法:
在本研究中，我们选择了木瓜蛋白酶作为大豆蛋白质的水解酶。

首先，我们将木瓜蛋白酶固定在载体上，以增加其稳定性和重复使用性。

然后，我们使用固定化木瓜蛋白酶对大豆蛋白质进行水解反应。

通过对反应条件进行优化，包括酶底物比例、反应时间和pH值等，我们得到了最佳的水解效果。

结果:
经固定化木瓜蛋白酶水解后，大豆蛋白质转化为一系列不同长度的肽段。

通过质谱分析，我们确定了水解产物的序列。

进一步，我们评估了水解产物的生物活性，如抗氧化活性、抗菌活性和抗糖尿病活性等。

结论:
本研究表明，固定化木瓜蛋白酶可以有效地水解大豆蛋白质，产生具有多种生物活性的大豆肽。

这种固定化酶的应用具有潜在的工业应用前景，可用于大豆蛋白质的高效转化和功能性食品的开发。

展望:
尽管本研究取得了一定的成果，但仍有一些问题需要进一步解决。

例如，如何进一步提高水解效果和生物活性，以及如何优化固定化木瓜蛋白酶的制备方法等。

此外，还需要评估大豆肽的稳定性和毒性等方面的安全性问题。

这些问题将是我们未来研究的重点。

专利名称：用木瓜蛋白酶酶解全蛋分离蛋白粉制品的制备方法和用途
专利类型：发明专利
发明人：邹远东
申请号：CN01124102.0
申请日：20010813
公开号：CN1359630A
公开日：
20020724
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属生物高科技的酶法制得小分子活性多肽技术。

运用木瓜蛋白酶,将全蛋分离蛋白粉酶解成人体极易吸收的小分子活性多肽(氨基酸链)和20种氨基酸(其中8种人体必需而又不能合成的氨基酸)卵磷脂,多种维生素和多种微量元素的混合物。

属崭新的高级营养品。

可用于功能食品,普通食品、营养增强剂,药品、饲料营养增强剂、植物营养生长剂。

制备方法简易,成本较低,是一种适于工业化生产的方法。

申请人：邹远东
地址：430071 湖北省武汉市武昌中南路25号3号楼3楼
国籍：CN
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泰和乌骨鸡活性肽的分离及其体外抗氧化作用刘建华，田颖刚，王 勇，朱 胜，王春艳，张 盼，谢明勇*(南昌大学 食品科学与技术国家重点实验室，江西 南昌 330047)摘 要：利用制备型HPLC 对泰和乌骨鸡活性肽进行分离，流动相为0.01mol/L 的磷酸盐溶液，采用强酸型离子交换树脂和强碱型离子交换树脂两步脱盐法对泰和乌骨鸡活性肽各分离组分进行脱盐处理。

以肌肽和抗坏血酸为对照，通过清除羟自由基作用、抑制脂质过氧化作用以及对Fe 2+和Cu 2+螯合能力4个体系测定泰和乌骨鸡活性肽及其分离组分的体外抗氧化能力。

结果表明：泰和乌骨鸡活性肽分离所得13个组分均具有一定的抗氧化能力，且与质量浓度呈量效关系，绝大部分分离活性肽组分比活性总肽有更强的羟自由基清除能力、脂质过氧化抑制能力以及Fe 2+螯合能力。

关键词：泰和乌骨鸡活性肽；抗氧化；清除自由基；抑制脂质过氧化；金属螯合能力Isolation and in vitro Antioxidant Activity of Active Peptides from Taihe Black-bone Silky Fowl(Gallus gallus domesticus Brisson ) MuscleLIU Jian-hua ，TIAN Ying-gang ，WANG Yong ，ZHU Sheng ，WANG Chun-yan ，ZHANG Pan ，XIE Ming-yong*(State Key Laboratory of Food Science and Technology, Nanchang University, Nanchang 330047, China)Abstract ：The Taihe black-bone silky fowl muscle hydrolysate prepared by papain hydrolysis were separated to obtain active peptides by preparative HPLC with 0.01 mol/L phosphate buffer as the mobile phase, and the separated fractions were then pooled and desalted stepwise by 001×16 strong acid cation exchange resin and 201×7 strong basic anion exchange resin column chromatography. The hydrolysate and its separated fractions were tested for their in vitro antioxidant effects by hydroxyl free radical scavenging array, lipid peroxidation inhibition assay and measuring the ability to chelate Fe 2+ and Cu 2+ and compared with carnosine and ascorbic acid. Totally 13 fractions were separated from the Taihe black-bone silky fowl muscle hydrolysate,and all of them had obvious antioxidant effect in a concentration-dependent way. Most of the fractions presented stronger abilities to scavenge hydroxyl free radicals, inhibit lipid peroxidation and chelate Fe 2+ than the hydrolysate.Key words ：active peptides derived from Taihe black-bone silky fowl muscle ；antioxidation ；free radical scavenging ability ；peroxidation inhibition ；metal chelating ability中图分类号：R282.74 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2010)19-0079-05收稿日期：2010-06-19基金项目：国家自然科学基金项目(20862012)作者简介：刘建华(1982—)，男，博士研究生，研究方向为天然产物及功能食品开发。

・中药制剂・生物酶提取乌骨鸡的工艺研究与药效验证王玉蓉1　吴　清1　孙建宁1　李　银2(1北京中医药大学中药学院　北京100102)　王玉蓉,女,55岁,教授,硕士生导师(2北京同仁堂股份有限公司　北京100029)摘要:目的　以乌骨鸡为原料,优选生物酶酶解乌骨鸡的工艺条件。

方法　以光密度法测定酶解液氨基酸为指标,对酶解温度、时间、pH和酶底比进行比较,用正交试验设计法筛选酶解最佳工艺条件。

以乌鸡白凤丸补气养血、调经止带主要药效为指标,对酶解提取工艺进行验证。

结果　确定酶解方案为先用pH8.3的人工肠液湿润,90℃加热,降温后转入50℃恒温水浴,加入12000U中性蛋白酶酶解4h。

结论　以乌骨鸡酶解工艺入药的乌鸡白凤丸不仅保持了原制剂工艺的作用,酶解工艺对测试的各项指标均有明显的改善作用,显示出良好的效果。

关键词:乌骨鸡;生物酶;酶解工艺;乌鸡白凤丸中图分类号:R283Enzy ma ti c hydrolysis processi n g of bl ack2bone ch i cken and va li da ti on of pharmacodynam i c acti onW ANG Y u2rong1,W U Q i n g1,SUN J i a n2n i n g1,L IY i n2(1Be iji n g un i versity of Ch i n ese M ed i c i n e,Be iji n g100102)(2Be iji n g Tongren t ang Co.L td,Be iji n g100029)Abstract:O bjecti ve　To op ti m ize the conditi ons of hydr olysis p r ocessing of black2bone chicken by using pep sin,tri p sin,papain,neutrase and fiberase.M ethod　The conditi ons of te mperature,durati on,pH and the rati o of enzy me t o substrate were compared by using the abs orbance of a m ino acids in enzy molysis liquid as indicat or.O rthogonal test was used t o op ti m ize the conditi ons of hydr olysis.The efficacy of the hydr olysis p r oduct on rep lenishing qi and nourishing bl ood and regulating manstruati on and st op ing leukorrhagia was validated by comparing with that of W ujibaifeng Pills.Result　Hydr olysis conditi ons were pH8.3,neutrase12000U,te mperature50℃and durati on4h.Conclusi on　The phar macol ogical efficacy ofW ujibaifeng Pills p r oduced by ne w p r ocessing is sa me as that of the old one.Key words:black2bone chicken;enzy me;enzy matic hydr olysis p r ocessing;W ujibaifeng Pills乌鸡白凤丸的功效为补气养血、调经止带,临床主治气血两虚,身体瘦弱,腰膝酸软,月经不调,崩漏带下,是至今应用甚广的传统中成药之一。

专利名称：一种乌鸡低聚肽的制备及其活性肽段分离、鉴定方法
专利类型：发明专利
发明人：蔡木易,谷瑞增,易维学,马勇,董哲,潘兴昌,林峰,马永庆,徐亚光,鲁军,金振涛,陈亮,刘文颖
申请号：CN201110131377.7
申请日：20110520
公开号：CN102787154A
公开日：
20121121
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种乌鸡低聚肽的制备及其活性肽段的分离、鉴定方法，属于生物医药技术领域。

具体步骤为：将白条乌鸡绞碎、加水、加热、去脂等前处理，然后加入Protamex酶解，再经过离心、超滤、浓缩和喷雾干燥等工序，制得乌鸡低聚肽。

经检测，乌鸡低聚肽的分子量小于1000Da的组分占85％以上。

乌鸡低聚肽具有较高的DPPH自由基清除活性，其IC值为4.52mg/mL。

而且乌鸡低聚肽具有较强的ACE抑制活性，其IC值为2.86mg/mL。

采用RP-HPLC法和Q-TOF2法分离鉴定出部分活性肽段，其中2个抗氧化活性肽段，即LWR和NM；5个降血压活性肽段，即LER、GAGP、KPGV、LH和NM。

申请人：中国食品发酵工业研究院
地址：100027 北京市朝阳区霄云路32号
国籍：CN
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