线粒体呼吸链复合体Ⅲ活性检测试剂盒说明书 50T 24S可见分光光度法

纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂是一种旨在通过极谱法检测系统（polarographic system）测定新鲜活体线粒体在ADP存在（III态呼吸）与否（IV态呼吸）的情况下溶解氧（dissolved oxygen）的消耗差异，即呼吸控制率（RCR），以评价线粒体结构和功能完整性以及氧化磷酸化效率的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

可以被用于线粒体生理功能和药物作用机制等的研究。

产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。

技术背景线粒体是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心。

电子传递和ATP合成通过质子梯度偶联成一体。

线粒体结构完整，功能正常，底物充分，电子传递形成的质子梯度不断被消耗，电子得以顺畅传递，氧气快速消耗，其耗氧率大，为III态呼吸。

ADP耗竭，质子梯度不能消耗，阻碍电子传递，氧气消耗减少，为IV态呼吸。

呼吸控制率（respiratory control ratio或respiratory control index；RCR），又称呼吸调节比，是指III态（加入ADP）的呼吸速率与IV态（ADP耗竭）的呼吸速率之比。

正常线粒体的RCR为3至10：RCR降低意味着线粒体ATP 合成功能损伤，呼吸障碍；RCR增高意味着细胞活动旺盛，代谢加快。

产品内容介质液（Reagent A）毫升态底物液（Reagent B）微升态底物液（Reagent C）微升产品说明书 1份保存方式保存在－20℃冰箱里，有效保证6月用户自备CLARK氧电极仪：用于测定溶解氧浓度实验步骤实验开始前，制备好新鲜的线粒体置于冰槽里备用；同时将－20℃冰箱里的试剂融化，并预热氧电极仪到25℃。

然后进行下列操作。

1．加入xx毫升介质液（Reagent A）到反应玻璃槽2．使用微型磁力子搅拌，充分混匀3．密封反应槽4．开始记录氧浓度：起始饱和氧浓度值为0.240微摩尔分子氧/毫升（25℃）5．持续记录1分钟后，注射加入xx微升待测的线粒体（总量2毫克）（注意：氧浓度可能瞬时增加5％）6．持续记录1分钟后，注射加入xx微升态底物液（Reagent B）――开始IV态呼吸（注意：参见注意事项9）7．持续记录2分钟：出现氧浓度缓慢下降）（8．继续注射加入xx微升态底物液（Reagent C注意：氧浓度在10秒钟内开始下滑）――开始III态呼吸（注意：参见注意事项9）9．持续记录直至出现线性下行斜线出现拐点10．分别测算III态呼吸速率和IV态呼吸速率：氧浓度降低值÷实际时间（分钟）11．计算呼吸控制率：III态呼吸速率÷IV态呼吸速率注意事项1．本产品为20次操作2．操作时，须戴手套3．确保反应玻璃槽洁净，密闭，以免氧气流入4．线粒体样品须新鲜制备，建议不要冻存；制备的线粒体膜须完整，非常重要；建议使用GENMED线粒体分离试剂盒－GMS10006.15．注射加入反应槽时，避免气泡和空气注入6．避免乙醇污染；乙醇增加氧浓度；如果底物或抑制剂须使用乙醇溶解，则加注10微升7．保持反应槽温度恒定，温度降低，氧浓度升高8．反应液充分混匀，和环境氧保持平衡9．加注态底物液（Reagent B）和态底物液（Reagent C）前，须充分冻融和混匀10．严格按照规定加注试剂，切莫增加加注试剂容量11．本公司提供系列线粒体检测试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定检测敏感。

细胞线粒体分离试剂盒经验细胞线粒体是细胞内的一个重要器官，负责细胞内能量的生产和调控。

由于其结构特殊且与细胞核分离，为了研究线粒体的功能和机制，科学家们开发了一种称为细胞线粒体分离试剂盒的工具。

本文将介绍细胞线粒体分离试剂盒的使用经验，为科研工作者提供参考。

细胞线粒体分离试剂盒的选择非常重要。

市面上有多种品牌的试剂盒可供选择，但不同试剂盒的分离效果和操作方法可能有所不同。

因此，在选择试剂盒时，需要根据具体实验需求和文献研究，选择适合的试剂盒。

准备工作要做好。

在使用细胞线粒体分离试剂盒前，需要准备好所需的实验材料和设备。

常用的实验材料包括培养细胞、培养基、缓冲液等，而设备则包括离心机、显微镜、离心管等。

确保实验材料和设备的质量和干净程度对于细胞线粒体的分离至关重要。

然后，按照试剂盒说明书进行操作。

不同的试剂盒可能有不同的操作步骤，因此在使用前，务必仔细阅读试剂盒的说明书，并按照说明书的要求进行操作。

一般来说，分离线粒体的步骤包括细胞收集、细胞破碎、离心分离等。

在操作过程中，要注意操作的细节，严格控制温度和时间，以获得较好的分离效果。

要注意细胞线粒体的保存和处理。

细胞线粒体是一种易于受到氧化损伤的器官，因此在分离后，应尽快进行后续实验或储存。

常用的线粒体保存方法包括冷冻保存和低温保存。

在保存过程中，需要保持样品的完整性和纯度，避免细胞线粒体的损伤和污染。

对实验结果进行分析和解读。

细胞线粒体分离试剂盒的最终目的是获得纯净的线粒体样品，以进行后续的功能研究。

因此，在分离后，需要对线粒体样品进行质量检测和功能分析，如线粒体呼吸链活性、ATP产量等。

通过对实验结果的分析和解读，可以进一步揭示细胞线粒体的功能和机制。

细胞线粒体分离试剂盒是一种用于研究细胞线粒体的重要工具。

在使用试剂盒时，科研工作者需要选择适合的试剂盒，做好实验准备工作，按照说明书进行操作，并注意样品的保存和处理。

最后，对实验结果进行分析和解读，可以进一步深入了解细胞线粒体的功能和机制。

线粒体呼吸链复合体Ⅴ活性检测试剂盒说明书50T/24S 可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号:BC1440规格:50T/24S 产品内容：提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×2支，-20℃保存；临用前每支加入1.11mL 双蒸水，充分溶解备用，分装后-20℃保存，避免反复冻融；试剂三：液体12mL×1瓶，4℃保存；试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入6mL 双蒸水，充分混匀；试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入20mL 双蒸水，充分混匀；试剂六：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入20mL 双蒸水，充分混匀；试剂七：液体20mL×1瓶，室温保存。

标准品：液体1mL×1支，4℃保存。

10μmol/mL 磷标准液。

临用前用蒸馏水稀释40倍即0.25μmol/mL 磷标准液。

定磷试剂的配制：按H 2O：试剂五：试剂六：试剂七=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷试剂应为浅黄色。

若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染（请根据需要，用多少配多少）。

注意：配试剂最好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器，或者一次性塑料器皿，以避免磷污染。

产品说明：线粒体复合体Ⅴ又称F 1F 0-ATP 合酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，由F1和F0两个亚单位组成。

该酶利用呼吸链产生的质子电化学梯度催化ATP 合成，也可逆过程水解ATP。

此外，复合体Ⅴ还存在于叶绿体、异养菌和光合细菌中。

复合体Ⅴ是线粒体氧化磷酸化和叶绿体光合磷酸化合成ATP 的关键酶。

复合体Ⅴ水解ATP产生ADP和Pi，通过测定Pi增加速率来测定复合体Ⅴ活性。

试验中所需的仪器和试剂：台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

土壤脲酶（S-UE）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC0120规格：50T/24S产品内容：试剂一：甲苯10mL×1瓶，4℃保存；（自备）试剂二：粉剂×1瓶，临用前加入20mL蒸馏水，充分溶解待用，4℃保存；试剂三：液体65mL×1瓶，4℃保存；试剂四A液：液体2mL×1瓶，4℃保存；试剂四B液：液体8mL×1瓶，4℃保存；临用前将A液倒入B 液中混合，待用；未用完的液体4℃保存一周。

试剂五：液体10mL×1瓶，4℃保存；标准品：液体1mL×1支，1mg/mL氮标准液产品说明：S-UE能够水解尿素，产生氨和碳酸。

土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关。

土壤脲酶活性反应了土壤的氮素状况。

本法以尿素为基质，利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N，生成的蓝色靛酚和氨的浓度成正比。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。

操作步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至630nm，蒸馏水调零2、培养试剂名称测定管对照管第1页，共2页风干土样（g）0.250.25试剂一（μL）125125振荡混匀，使土样全部湿润，室温放置15min试剂二（μL）625蒸馏水（μL）625试剂三（μL）12501250混匀，放入37℃水浴培养24h后，10000g常温离心10min，取上清液。

2、将培养结束的上清液稀释10倍（取0.1mL上清液，加入0.9mL蒸馏水）若吸光值仍大于1.5继续稀释。

3、标准品的准备：吸取适量的标准溶液，稀释至10、8、6、4、2、1、0.5、0μg/ml。

4、测氨量测定管对照管标准管稀释后的上清液或标准液（μL）400400400试剂四（μL）808080试剂五（μL）606060充分混匀，室温放置20min蒸馏水（μL）460460460混匀，630nm处蒸馏水调零，测A值，ΔA=A测定管-A对照管。

线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途线粒体呼吸链复合物I（NADH－辅酶Q还原酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶Q同功类似物和特异性抑制剂，通过反应系统测定样品中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后峰值的降低，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

其适合于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）－辅酶Q还原酶的特异性活性检测。

其用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。

产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。

技术背景线粒体呼吸链复合物I，通常称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶Q还原酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide coenzyme Q reductase；NADH-CoQ reductase），又称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase；NADH dehydrogenase），是线粒体电子传递链中最大的结构成分：含有30至40多个多肽结构。

其特征性的酶活性是鱼藤酮敏感的NADH－辅酶Q还原酶（NADH:Q Reductase）。

复合物I催化线粒体内电子由供体NADH传递到内膜上辅酶Q受体（泛醌；ubiquinone）的能量转移反应，为整个呼吸链反应系统的第一步。

基于辅酶Q底物，在鱼藤酮存在与否的情况下，通过NADH－辅酶Q还原酶的催化，转化成还原型泛醌（CoQH2），同时还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），在分光光度仪下产生吸收峰值的变化（340nm 波长），由此定量测定NADH －辅酶Q还原酶的特异活性。

微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC0515规格：100T/96S溶液的配制：1、 试剂二：临用前取一支加入1 mL 丙酮，充分溶解，2-8℃可保存1个月（1瓶粉剂即可做100T ，为延长试剂盒使用时间，故此产品多给一支）；2、 试剂三：临用前加入0.1mL 丙酮，丙酮易挥发，使用完毕后注意封口，-20℃可保存2个月；3、 试剂三工作液：临用前根据用量将试剂三：丙酮=5μL ：0.5mL （约50T ）混合备用，现用现配；4、 试剂四：临用前取一支加入1.6mL 蒸馏水（约100T ），充分溶解，-20℃可保存1个月，避免反复冻融（1瓶粉剂即可做100T ，为延长试剂盒使用时间，故此产品多给一支）；5、 工作液的配制：根据用量将丙酮：试剂二：试剂三工作液=250μL ：250μL ：500μL （约50T ）混合备用，现配现用。

产品说明：复合体Ⅰ（EC 1.6.5.3）又称NADH-CoQ 还原酶或NADH 脱氢酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，是线粒体内膜中最大的蛋白复合物。

该酶催化一对电子从NADH 传递给CoQ ，同时可使O 2还原生成O 2-，是呼吸电子传递链上产生O 2-的主要部位。

测定该酶活性，不仅可以反映呼吸电子传递链（ETC ）状态，而且可以反映活性氧（ROS ）生成状态。

复合体Ⅰ能够催化NADH 脱氢生成NAD +，在340nm 下测定NADH 的氧化速率计算出该酶活性的大小。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量石英比色皿/ 96孔UV 板、研钵/匀浆器、细胞超声破碎仪、丙酮、冰和蒸馏水。

NAD + + CoQH 2 NADH （340nm ） + H + + CoQ Mitochondrial Complex I操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1.称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1.0 mL提取液一，用匀浆器或研钵于冰上快速匀浆（约30次）。

五种线粒体呼吸链复合体研究工具今天咱们就来聊一聊关于线粒体呼吸链复合体的五种研究工具，先“上菜”：CheKine™线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性检测试剂盒（比色法）KTB1850CheKine™线粒体呼吸链复合体Ⅱ活性检测试剂盒（比色法）KTB1860CheKine™线粒体呼吸链复合体Ⅲ活性检测试剂盒（比色法）KTB1870CheKine™线粒体呼吸链复合体Ⅳ活性检测试剂盒（比色法）KTB1880CheKine™线粒体呼吸链复合体Ⅴ活性检测试剂盒（比色法）KTB1890线粒体呼吸链上所有进行电子传递的辅基包括：NADH、FAD、FMN、铁硫中心、泛醌、铜中心以及细胞色素α、α3、bH、bL、c、c1。

相应的酶类和辅基并非单独发挥作用，而是相互结合在一起，形成功能相对独立的呼吸链蛋白复合物，即呼吸链复合物Ⅰ（NADH 脱氢酶），呼吸链复合物Ⅱ（琥珀酸脱氢酶），呼吸链复合物Ⅲ（细胞色素 c 还原酶）和呼吸链复合物Ⅳ（细胞色素c 氧化酶），呼吸链复合物Ⅳ，呼吸链复合物V。

一、呼吸链复合体Ⅰ线粒体中大多数的ATP都是复合体Ⅰ。

呼吸链复合体Ⅰ是最复杂的复合物单体，由45个蛋白亚基、8个铁硫中心和1个FMN 分子组成，并且可以结合NADH、NADPH 和辅酶Q。

呼吸链复合体Ⅰ由跨膜臂和伸入线粒体基质的亲水臂两部分组成，亲水臂和跨膜臂连接呈L 形。

亲水臂完成NADH 的氧化并将电子传递至两臂连接的区域；跨膜臂完成辅酶Q 的还原和质子的转运。

两臂之间功能的协调由一系列蛋白亚基的相互作用和构象变化来完成。

二、呼吸链复合体Ⅱ复合体Ⅱ由琥珀酸脱氢酶和一种铁硫蛋白组成，将从琥珀酸得到的电子传递给辅酶Q。

细胞色素类都以血红素为辅基，红色或褐色。

将电子从辅酶Q传递到氧。

呼吸链复合体Ⅱ从FADH 中获得电子，并将电子传递给氧化态泛醌Q 生成还原态泛醌QH2，整个过程没有发生质子的跨膜转运。

呼吸链复合体Ⅱ的蛋白结构相对简单，由4个蛋白亚基组成。

DPPH 自由基清除能力检测试剂盒说明书可见分光光度法货号：BC4750 规格：50T/24S产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称 规格 保存条件 提取液 液体50 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂一 液体60 mL×1瓶（自备）常温保存 试剂二 粉剂×1瓶 2-8℃保存 试剂三粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1、 试剂一：无水乙醇自备；2、 试剂二：粉剂置于瓶内EP 管中。

临用前加入6.08 mL 试剂一振荡溶解，用不完的试剂可于-20℃保存1个月，建议分装保存，避免反复冻融；临用前根据试验所需量按照试剂二：试剂一（V:V ）= 4：21的比例配制成工作液，现配现用，用不完的工作液可于2-8℃保存一周；3、 试剂三：10 mg 维生素C 。

临用前加入1 mL 提取液，充分振荡溶解，配成10 mg/mL 维生素C 溶液，2-8℃保存两周；用于阳性对照。

产品说明：DPPH 自由基一种很稳定的氮中心的自由基，是样本抗氧化能力的重要指标之一，广泛应用于抗氧化类食品、保健品及药品的研究中。

DPPH 自由基有单电子，其醇溶液呈紫色，在515 nm 处有强吸收。

当有抗氧化剂存在时，DPPH 自由基被清除，其溶液颜色变浅，515 nm 的吸光度下降，在一定范围内其吸光度的变化与自由基被清除的程度成正比。

本试剂盒中，通过吸光度下降的程度来反映样本清除DPPH 自由基的能力。

DPPH · DPPH ·H注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅、台式离心机、无水乙醇、研钵/粉碎机、烘干箱、30~50目筛和蒸馏水。

操作步骤：一、样本的制备（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）（1）植物样本的制备：将新鲜样本置于60℃烘箱烘干至恒重，研钵研碎（或粉碎机粉碎），过30~50目筛。

第 1 页，共 2 页α-半乳糖苷酶（α-GAL ）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法货号：AC10467规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系本公司工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体50 mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂×1瓶-20℃保存试剂二液体15 mL×1瓶4℃保存试剂三液体80 mL×1瓶4℃保存标准品液体1 mL×1支4℃保存溶液的配制：1、试剂一：临用前每瓶加入5 mL 双蒸水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存；2、标准品：5 μmol /mL 的对硝基苯酚溶液。

产品说明：α-GAL (EC 3.2.1.22)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能专一地催化α-半乳糖苷键的水解，主要参与棉子糖、水苏糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。

α-GAL 对于植物种子的萌发至关重要，种子萌发初期，其催化产生的D-半乳糖通过糖酵解途径迅速转化和消耗，为种子的萌发提供最初的能量来源，后期则主要参与细胞壁储藏多糖水解。

α-GAL 分解对-硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm 有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算α-GAL 活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌或培养细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每1000万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3s ，间隔10s ，重复30次），15000g ，4℃，离心20分钟，取上清，置冰上待测。