(二)免疫酶技术(immunoenzyme technic)
免疫酶技术又称酶免疫测定法(enzyme immunoassay),其原理是利用酶与抗原或抗体结合后, 既不改变抗原或抗体的免疫学反应特异性,也不影响酶本 身的活性,在特异抗原抗体反应后,在相应而合适的酶底 物作用下,产生可见的不溶性有色产物。常用的为辣根过 氧化物酶 (horseradish peroxidase,HRP),其次有碱性磷 酸酶等。免疫酶技术可用于组织切片、细胞培养标本等组 织细胞抗原的定性定位。也可用于可溶性抗原或抗体的测 定,称酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)。ELISA方法是将可溶性 抗体或抗原吸附到聚苯乙烯等固相载体上,再进行免疫酶 反应,用分光光度计比色以定性或定量,是目前应用最广 泛的生物学技术之一。
一、抗原、抗体反应的一般规律
(1)特异性 抗原决定簇和抗体分子V区间的各种分子引力 是它们间特异性的物质基础。这种高度特异性是各种血清学 反应及其应用的理论依据。 (2)可逆性 抗原抗体间的结合仅是一种物理结合,故在 一定条件下是可逆的。 (3)定比性 抗原物质表面的抗原决定簇数目一般较多, 故属多价的,而抗体一般仅以Ig单体形式存在,故是双价的。 所以,只有当两者比例合适时,才会出现可见反应。 (4)阶段性 抗原与抗体的反应一般有两个明显的阶段, 第一阶段的特点是时间短(一般仅数秒),不可见,第二阶 段的时间长(从数分钟至数小时或数天),可见。第二阶段 的出现受多种因子影响,如抗原抗体的比例、pH、温度、 电解质和补体等。两个阶段间并无严格的界限。 (5)条件依赖性 最佳条件一般为pH=6~8,温度为 37~45℃,适当振荡,以及用生理盐水作电解质等。