菌落总数测定操作规程1

细菌总数检查标准操作规程1目的建立规范细菌总数检查标准操作规程，确保检查操作正确。

2范围适用于本公司的细菌总数检查操作。

3职责4术语及定义无5 内容5.1实验5.1.1仪器设备：电热恒温培养箱、电动移液器、生物安全柜、电子天平、PH计。

水浴锅、研钵、玻璃珠、三角瓶。

5.1.2试剂：生理盐水、卵磷脂吐温80-营养琼脂培养基、吐温80、液体石蜡、0.5%氯化三苯四氮唑。

5.1.3耗材：10 mL刻度移液管、90mm培养皿5.2实验前准备5.2.1检查样本是否保持原有的包装状态。

容器不应有破裂，在检验前不得打开，防止样品被污染。

5.2.2接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。

5.2.3若只有一个样品而同时需做多种分析，如微生物、毒理、化学等，则宜先取出部分样品做微生物检验，再将剩余样品做其他分析。

5.2.4在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散，所用器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在符合生物安全要求的实验室中进行。

5.2.2供试品处理5.2.2.1液体样品5.2.2.1.1.水溶性的液体样品，用灭菌吸管吸取10mL 样品加到90mL 灭菌生理盐水中，混匀后，制成1：10 检液。

5.2.2.1.2油性液体样品，取样品10g，先加5mL灭菌液体石蜡混匀，再加10mL灭菌的吐温80，在40℃—44℃水浴中振荡混合10min，加入灭菌的生理盐水75mL（在40℃—44℃水浴中预温），在40℃—44℃水浴中乳化，制成1：10 的悬液。

5.2.2.2膏、霜、乳剂半固体状样品5.2.2.2.1亲水性的样品：称取10g，加到装有玻璃珠及90mL 灭菌生理盐水的三角瓶中，充分振荡混匀，静置15min。

用其上清液作为1:10 的检液。

5.2.2.2.2疏水性样品：称取10g，置于灭菌的研钵中，加10mL 灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状，再加入10mL 灭菌吐温80，研磨待溶解后，加70mL 灭菌生理盐水，在40℃—44℃水浴中充分混合，制成1：10 检液。

A.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST ）肉汤A.1.1成分胰蛋白胨或胰酪胨20.0 g氯化钠5.0 g乳糖5.0 g磷酸氢二钾（K2HPO4）2.75 g磷酸二氢钾（KH2PO4）2.75 g月桂基硫酸钠0.1 g蒸馏水1 000 mL pH 6.8±0.2 制法将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。

分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL 。

121 ℃高压灭菌15 min 。

菌落总数检验操作规程一、目的建立菌落总数检验的标准操作程序，使操作过程规范化。

二、适用范围适用于菌落总数的检验操作。

三、职责1.检验人员严格按检验操作规程进行检验。

2.QC主管监督检查执行情况。

四、程序1.范围本方法适用于食品中菌落总数（Aerobic plate count）的测定2.术语和定义菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。

3. 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。

3.2冰箱：2 ℃～5 ℃。

3.3 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。

3.4天平：感量为0.1 g。

3.5均质器。

3.6振荡器。

3.7无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。

3.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。

3.9无菌培养皿：直径90 mm。

3.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。

3.11放大镜或和菌落计数器。

4.培养基和试剂4.1 平板计数琼脂培养基：见附录A 中A.1。

4.2 磷酸盐缓冲液：见附录A中A.24.3 无菌生理盐水：见附录A中A.3。

5.检验程序菌落总数的检验程序见图1。

图1 菌落总数的检验程序6.操作步骤6.1 样品的稀释6.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。

微生物检测操作规范1范围本标准规定了食品中菌落总数的测定方法本标准适用于遂平克明面业有限公司方便面生产线微生物控制及验证计划。

本标准适用于遂平克明面业有限公司方便面产品菌落总数、大肠菌群检测。

2 规范性引用标准GB 4789.1-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验总则》。

GB/T 4789.3-2003《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》。

GB 4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》。

4 设备和材料恒温培养箱：36℃±1℃。

恒温水浴箱：46℃±1℃。

天平：感量为0.1g。

无菌吸管：1ml（具有0.01ml刻度）、10ml（具有0.1ml刻度）。

无菌培养皿：直径90mm。

无菌锥形瓶：容量500ml；或225ml塑料稀释瓶（带内垫，可高温灭菌）。

灭菌试管：16mm×160mm；或10ml-20ml无菌管。

显微镜：10×-100×4 培养基和试剂平板计数琼脂培养基：GB 4789.2-2016 附录A.1。

无菌生理盐水：GB 4789.2-2016 附录A.3。

乳糖胆盐发酵管：按GB/T 4789.3-2003中4.9规定。

伊红美蓝琼脂平板：按GB/T 4789.3-2003中4.25规定。

乳糖发酵管：按GB/T 4789.3-2003中2.2规定。

EC肉汤：按GB/T 4789.28-2003中4.11规定。

格兰仕染色液：按GB/T 4789.3-2003中4.9规定。

5菌落总数检验程序实验前准备移液管、三角瓶、试管包扎、灭菌移液管：洗净烘干后在吸管粗头顶端约0.5cm处，塞上一小段棉花，后用4-5cm宽的报纸或牛皮纸将其以下图所示包扎好。

三角瓶包扎图例将包扎后的器具放入灭菌锅，121℃ 15min灭菌。

a.样品处理面饼样品经粉碎机粉碎后，称取25g粉碎样加入装有225ml无菌生理盐水的稀释瓶内，充分振摇，做成1:10的均匀稀释液。

菌落总数测试片安全操作及保养规程前言菌落总数测试片是在食品、饮料、制药等行业中广泛应用的一种实验室用品，用于检测样品中的微生物数量。

正确的操作和保养，不仅能够保证测试数据的准确性，还能延长设备的使用寿命。

本文档旨在为使用菌落总数测试片的实验室人员提供安全操作及保养规程，以便正确且有效地使用该设备。

安全操作规程1.检测前准备工作在进行菌落总数测试前，需要进行一些准备工作。

•首先，检查试剂盒是否完整、完好。

•其次，需要对实验室进行清洁，确保试样不会受到外来污染。

•最后，检查检测设备是否工作正常。

2.操作步骤具体的菌落总数测试操作步骤如下：1.将手持菌落计瓶插入加热设备中，加热到80℃左右（不要超过90℃）。

2.准备好待测样品，并使用消毒液将样品平台擦拭消毒。

待样品平台干燥后，打开试剂盒，取出测试片。

3.拿起测试片，用过滤棉球沾取少量样品，涂在测试片的圆形区域上，记得不要涂满，要注意对称，以避免对测试结果的影响。

4.将测试片放入一个透明的塑料袋里，将原袋弯角45°折叠，收紧口部，放置在加热设备中，加热时间为30min ± 1min。

5.取出加热设备中的透明袋，打开袋口，拿起测试片，将其反转在富营养液培养皿中，培养时间为48小时± 4小时。

6.在培养后的菌落数量区域，数清菌落数量，并将结果记录在实验记录簿上。

3. 注意事项在使用菌落总数测试片过程中，还需要注意以下事项：1.尽量避免使用过期的试剂盒和菌落计瓶。

2.操作过程中需要佩戴手套和口罩。

3.遵循操作规程，严禁进行任何私自操作或修改设备设置。

4.由专人负责使用和保养设备，不得擅自借用或转移使用。

5.每次操作后，要及时清洗设备以保证设备的清洁度和准确性。

保养规程菌落总数测试片是一种高精度、高灵敏度的实验室设备，因此需要进行专业的保养和维修。

1.日常保养日常保养是延长菌落总数测试片使用寿命和保证测试结果准确性不可缺少的一部分。

食品中菌落总数的测定方法操作规程一、适用范围本标准规定了食品中菌落总数（Aerobic plate count）的测定方法。

本标准适用于食品中菌落总数的测定，实验采样方案按照GB4789.1-2016。

二、编写依据GB4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数的测定》三、术语和定义菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。

四、内容1.设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：1 .1恒温培养箱：36℃±1℃，30℃±1℃1.2 冰箱：2℃～5℃1.3 恒温水浴箱：46℃±1℃1.4 天平：感量为0.1g1.5 均质器1.6 振荡器1.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头1.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL1.9 无菌培养皿：直径90 mm1.10 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸1.11 放大镜或/和菌落计数器2.培养基和试剂:2.1 平板计数琼脂培养基：同GB 4789.15项下制法。

2.2 磷酸盐缓冲液：同GB 4789.15项下制法。

2.3 无菌生理盐水：同GB 4789.15项下制法。

2.4 30%碳酸钠溶液。

2.5 1mol/L HCl。

3.样品的稀释3.1固体和半固体样品：称取25 g样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10的样品匀液。

3.2液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。

1、目的：游泳池水微生物检验方法细菌总数测定。

2、适用范围：本标准适用于游泳池水细菌总数的测定。

3、责任：使操作者熟悉本规程，并在具体样品检验中严格遵照操作，确保检测结果准确性。

4、内容4.1定义细菌总数：指水样在一定条件下培养后（如培养基成分和PH值、培养温度和时间以及需氧性质等），1ml检样中所含菌落的总数。

本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。

细菌总数可作为判定游泳池水被污染程度的标志，也可以为游泳池水消毒效果的判定和评价提供依据。

4.2仪器三角瓶。

量筒。

PH计或精密PH试纸。

高压消毒锅。

试管。

灭菌平皿：直径9cm。

灭菌刻度吸管：1mL、2ml、10mL。

酒精灯。

恒温培养箱。

放大镜。

4.3培养基和试剂4.3.1营养琼脂培养基4.3.1.1成分：蛋白胨 10g牛肉浸膏 3g氯化钠 5g琼脂 15～20g蒸馏水 1000ml4.3.1.2制法：将上述各成分混合，加热溶解，校正pH至7.4，过滤分装，121℃20分钟高压灭菌，用自然沉降法测定时，倾注约15ml，于灭菌平皿内，制成营养琼脂平板。

用撞击法测定时，则参照采样器采样使用说明制备营养琼脂平板。

4.3.2 10%（m/m）硫代硫酸钠溶液，121℃高压灭菌20min。

4.5 操作步骤4.5.1 采样瓶的要求和预处理：用于微生物分析的采样瓶要无酸、无碱、无毒的玻璃容器。

采样瓶在灭菌前加入足量的10%（m/m）硫代硫酸钠（Na2S2O3）溶液.一般情况下125ml的采样瓶加0.1ml，加完后121℃高压灭菌20min。

4.5.2 用灭菌吸管吸取均匀水样1ml，注入到灭菌平皿内，另取1ml注入另一灭菌平皿内作平行接种。

取1ml加到9ml无菌生理盐水中作1：:10稀释，混匀后取2ml分别加到两个无菌平皿内，每皿1ml。

4.5.3 将溶化并冷却至45℃的营养琼脂培养基倾注平皿内，每皿约15ml，另取一个不加样品的平皿作空白对照。

菌落总数检验操作规程一、实验室准备工作1.准备培养基：根据实验需求选择适当的培养基，如营养琼脂培养基、大肠埃希氏菌选择性培养基等。

注意培养基的成分和质量。

2.准备培养基平板：测量合适的培养基量并加入培养皿中，使用无菌技术将培养基均匀倒入培养皿，标明编号和日期。

二、样品处理1.准备样品：如食品样品，需要将样品称重并加入适当的生理盐水中，用搅拌器或均质仪进行均匀悬浮。

2.稀释样品：根据实验需要，对样品进行系列稀释。

取适量的悬浮样品，依次加入尺量瓶中的生理盐水，振摇均匀。

三、接种培养1.无菌操作：在无菌工作台内进行操作，穿戴好无菌手套，将培养皿放入工作台上，注意防止污染。

2.接种样品：使用无菌移液器，取适量的稀释样品均匀滴入培养皿上。

3.均匀涂布：使用无菌匀涂棒，将样品在培养皿上均匀涂抹，注意避免混入外来微生物。

四、培养条件1.始菌箱：将接种后的培养皿置于始菌箱中，设定适当的温度和湿度（如37℃，24小时）。

2.孵化箱：将始菌箱中的培养皿转移到恒温培养箱中适当孵育时间，保持适宜温度及湿度。

五、菌落计数1.观察菌落：取出培养好的菌落总数平板，放在均匀光源下观察菌落的形态、颜色、大小等特征，标记异常菌落。

2.计数菌落：使用计数器或显微镜对菌落进行计数，记录结果，并用公式计算菌落总数。

每个菌落总数平板至少计数两遍，计算平均值。

六、数据分析与结果判定1.数据分析：对不同样品的检测结果进行归类整理，统计菌落总数的分布情况。

2.结果判定：根据相应的标准或规定，比较样品的检测结果与标准要求，判定样品是否合格。

七、清洗和消毒1.清洗：将培养皿彻底清洗干净，清除残留的培养基和菌落。

2.消毒：将使用过的器材进行高温高压消毒或化学消毒，确保无菌环境。

以上就是菌落总数检验操作规程的简要示例，实验过程中需严格遵守无菌操作规范，并根据具体实验要求进行相应的调整。

在实验过程中，及时记录实验数据，注意安全操作。

实验完成后，对结果进行统计分析和归档保存。

菌落总数检测方法菌落总数检测是一种常见的微生物检测方法，它可以用于食品、饮用水、医药制品等领域的微生物质量控制。

菌落总数检测方法的准确性和可靠性对产品的质量和安全至关重要。

因此，了解菌落总数检测方法的原理和操作流程对于相关行业的从业人员至关重要。

菌落总数检测方法的原理是通过将待检样品进行适当稀释后，均匀涂布在含有适当培养基的琼脂平板上，然后在一定的温度下培养一定的时间，最后根据菌落的数量来计算样品中微生物的数量。

这种方法的优点是简单易行，不需要复杂的设备和技术，适用于大批量样品的检测。

菌落总数检测方法的操作流程主要包括样品的制备、琼脂平板的制备、涂布和培养、计数和结果分析等步骤。

首先，对待检样品进行适当的稀释，以确保在琼脂平板上形成可数的菌落。

然后，制备含有适当培养基的琼脂平板，并进行涂布和培养。

在培养结束后，对菌落进行计数，并根据计数结果进行样品的微生物数量统计和分析。

在进行菌落总数检测时，需要注意一些关键的操作技巧和注意事项。

首先，样品的制备和处理要严格按照相关标准和规定进行，以避免外界环境的污染。

其次，在琼脂平板的制备、涂布和培养过程中，需要严格控制温度、湿度和时间等因素，以确保菌落的正常生长和形成。

最后，在菌落计数和结果分析时，需要仔细进行，确保结果的准确性和可靠性。

除了传统的琼脂平板法外，菌落总数检测方法还有其他一些新的技术和方法。

比如，膜过滤法、光学密度法、生物发光法等，这些方法在一定的情况下可以替代传统的琼脂平板法，具有更快速、更灵敏的特点。

但无论采用何种方法，都需要严格按照相关标准和规定进行操作，以确保检测结果的准确性和可靠性。

总之，菌落总数检测方法是一种常见且重要的微生物检测方法，它对于食品、饮用水、医药制品等领域的微生物质量控制起着至关重要的作用。

了解菌落总数检测方法的原理和操作流程，掌握关键的操作技巧和注意事项，对于相关行业的从业人员具有重要的意义。

希望本文所述内容能够对菌落总数检测方法有所了解，为相关行业的微生物质量控制工作提供一些帮助。

《水处理微生物》教案教学重点教学难点无菌操作的实施各环节操作要求参考资料环境微生物陈剑虹、胡肖容主编科学出版社环境微生物周凤霞、白京生主编化学工业出版社一、训练目标1．能准确地采样和稀释样品，会制备平板。

2．能正确报告样品中的活菌数。

二、材料用具1.材料与试剂待测样品，牛肉膏，蛋白胨，氯化钠，琼脂，75%酒精棉球，试纸等。

2.仪器与用具天平，培养箱，干燥箱，超净工作台，水浴锅，称样瓶，吸管，培养皿，玻璃珠，试管，三角瓶，试管架，酒精灯，记号笔等。

三、训练操作规程1、稀释平板菌落计数法操作流程及技术要点操作流程操作技术要点训练准备提前分组，建议2人一组，每组准备以下物品：1．培养基：150mL牛肉膏蛋白胨培养基1瓶2．无菌水：9mL无菌水5～7支（吸取9mL蒸馏水装入试管中，所需数量根据样品中含菌量而定），然后塞上塞子培养基、无菌水采取高压蒸汽灭菌，于121℃灭菌20min3．1mL吸管8支，10mL吸管1支，培养皿9套。

用报纸包扎好，在干燥箱中于160℃灭菌2h取样超净工作台里操作，也可室内操作（需70%酒精净空，酒精灯无菌区操作）1．提前30min打开超净工作台风机和紫外线开关（注意：操作前关闭紫外灯）2．在超净工作台上，按无菌操作法准确量取待测样品1mL，注入到第1装有9mL无菌水试管中（注意：吸管吸液端不要接触到液面），振荡制成10-1菌悬液系列稀释再取1支吸管伸进10-1菌悬液吹吸数次，吸取1mL菌液注入到第2支装有9mL无菌水的试管中，混匀即成10-2菌液依此法按10倍序列稀释至适宜稀释度（图6-3）（注意：每换一个稀释度取1支新吸管）标记取12套培养皿，在皿底注明稀释度，每个稀释度重复3皿（含无菌水3加样取连续的3个稀释度菌液，用一支无菌吸管吸取1mL菌液加入对应的培养菌落计数一般选择每个平板上长有30～300个菌落的稀释度，算出同一稀释度3重复的菌落平均数，再根据公式求出样品的含菌量平板菌液注入量稀释释倍数平均同一稀释ml)(cf u/样品含菌数⨯=菌落度菌数报告1.若只有一个稀释度的平均菌落数在30～300，则该平均菌落数乘以稀释倍数即为该样品中的细菌总数2.若有两个稀释度的平均菌落数均在30～300，则视二者之比如何来决定。