乙肝疫苗的制造工艺
1.目的基因的获取 2.工程菌的构建 3.目的基因的表达 4. 蛋白质的分离纯化
目的基因的获取
编码乙型肝炎表面抗原的基因的获取 一般目的基因的获取方法有: cDNA法, 化学合成法 ,反转录法
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工程菌的选择
CHO细胞的特点
①具有准确的转录后修饰功能 ,表达的糖基化药 物蛋白在分子结构、理 化特性和生物学功能方面最 接近于天然蛋白分子 ②具有产物胞外分泌功能 ,便于下游产物分离纯化; ③具有重组基因的高效 扩增和表达能力; ④具有贴壁生长特性 ,且有较高的 耐受剪切力和渗透压能力 ,可以进行悬 浮培养 ,表达 水平较高; ⑤CHO 细胞属于成纤维细胞 (fibrob2last) ,很少分泌自身的内源蛋白 ,利 于外源蛋白的后分离
乙肝疫苗的制备
乙肝疫苗的概念
乙肝疫苗是用于预防乙肝的特殊药物。疫苗 接种后,可刺激免疫系统产生保护性抗体, 这种抗体存在于人的体液之中,乙肝病毒一 旦出现,抗体会立即作用,将其清除,阻止 感染,并不会伤害肝脏,从而使人体具有了 预防乙肝的免疫力,从而达到预防乙肝感染 的目的。接种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染 的最有效方法。
3、阴离子交换柱层析 介质:DEAE Sepharose FF HBsAg活性蛋白经Sephadex G-25柱脱盐 换液,使缓冲盐系统的PH、离子强度和 IEC平衡液一致 按照平衡柱床、丄样吸附、氯化钠浓度梯 度分段洗脱、清柱再生程序层析
4、凝胶过滤柱层析 介质:Sepharose 4 FF 超滤浓缩到适当体积 按照平衡柱床、丄样、洗脱程序层析 5、除菌 收取到的HBsAg除菌过滤,即为纯品
基因工程乙肝疫苗是采用基因工 程技术生产的,即构建含有乙肝 表面抗原基因的重组质粒,然后 转染相应的宿主细胞,如酵母、 CHO细胞,生产乙肝表面抗原蛋 白。利用重组酵母生产的叫重组 酵母乙肝疫苗,利用CHO细胞生 产的叫重组CHO乙肝疫苗,剂量 为每支5微克。它们都可以用于 预防所有已知亚型的乙肝病毒感, 都可以放心选用。