ALT,AST测定方法

血清中丙酮酸2,4-二硝基苯腙
505nm处有强吸光度
临床意义：
ALT在肝、肾、心和骨骼肌中含量丰富，其中ALT在肝细胞中的 浓度比血清高7 000倍，且主要位于肝细胞的可溶性部分。当肝 脏受损、肝细胞膜通透性增加时ALT或AST释放入血可导致血清 中该酶活性增加，因此，ALT常用于肝脏疾病的诊断。主要应用 于以下几种肝脏疾病的检测： 急性病毒性肝炎； 慢性活动性肝炎、脂肪肝、恢复期的急性病毒性肝炎患者； 肝硬化、肝癌；
实验八、血清丙氨酸氨基转移酶 （ALT）活性测定 ——赖氏法（比 色法）
目前测定ALT的方法主要有两大类：
分光光度法（速率法）
比色法（赖氏法）
实验目的
实验原理
实验步骤
结果分析
实验报告
实验目的：
熟悉ALT活性测定的方法
掌握ALT活性测定的临床意义
实验原理：
红棕色
丙酮酸2,4-二硝基苯腙的颜色深浅与丙酮酸的生成量成正比； 反应体系中丙酮酸的量与血清中ALT的活性成正比。
0.1
0.5
2,4-二硝基苯肼溶液 ALT 底物缓冲液
0.5 0.5
0.5 —
混匀，置37℃保温20min 0.4mol/LNaOH溶液 5.0 5.0
混匀，室温放置10min,于30min内比色(505nm)
结果分析：
1.以吸光度值为纵坐标，对应的ALT活性单位为横坐标，
作图，绘制标准曲线；
2.根据测得标本的吸光度值，从已经绘制好的标准曲 线中查得标本中ALT的卡门单位。
由其它原因引起的肝脏损害等。
实验步骤：
1.ALT标准曲线绘制
试剂(ml)/管号 0.1mol/L磷酸盐缓冲液 2.0mmol/L丙酮酸标准液 ALT底物缓冲液 2,4-二硝基苯肼溶液 0 0.10 0.00 0.50 0.50 1 0.10 0.05 0.45 0.50 2 0.10 0.10 0.40 0.50 3 0.10 0.15 0.35 0.50 4 0.10 0.20 0.30 0.50

一、实验目的1. 了解转氨酶在生物体内的作用及其在临床诊断中的重要性。

2. 学习并掌握转氨酶活力测定的原理和方法。

3. 通过实验操作，提高对实验仪器的操作技能。

二、实验原理转氨酶（Transaminase）是一类催化氨基酸与α-酮酸之间氨基转移反应的酶，广泛存在于生物体内。

在人体内，转氨酶主要存在于肝脏、心肌、骨骼肌等组织中，其中以谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）最为重要。

ALT和AST活性的测定在临床上具有重要的诊断价值，可作为肝功能异常、心肌梗死等疾病的辅助诊断指标。

本实验采用分光光度法测定ALT活力。

ALT催化L-丙氨酸与α-酮戊二酸之间的转氨反应，生成L-谷氨酸和丙酮酸。

丙酮酸与2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）反应，生成丙酮酸-2，4-二硝基苯腙（PNP）。

PNP在碱性条件下呈棕色，其最大吸收峰在520nm处，通过测定520nm处的吸光度，可以计算出ALT的活力。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 鸡肝- 0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.4）- 0.1mol/L丙氨酸- 0.1mol/Lα-酮戊二酸- 2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）- 30%氢氧化钠溶液- 碘化钾溶液- 硫代硫酸钠溶液- 酶活力测定试剂盒2. 实验仪器：- 酶标仪- 电子天平- 移液器- 离心机- 恒温水浴箱- 试管四、实验步骤1. 样品制备：将鸡肝剪碎，加入磷酸盐缓冲液（pH 7.4），匀浆，离心取上清液。

2. 标准曲线绘制：配制一系列不同浓度的丙酮酸标准溶液，加入2，4-DNPH和30%氢氧化钠溶液，在520nm处测定吸光度，绘制标准曲线。

3. 样品测定：将样品溶液、底物溶液、2，4-DNPH和30%氢氧化钠溶液加入试管，混匀，在520nm处测定吸光度。

4. 数据处理：根据标准曲线，计算样品中ALT的活力。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：在520nm处，吸光度与丙酮酸浓度呈线性关系。

ALT和AST测定方法ALT（Alanine Aminotransferase）和AST（Aspartate Aminotransferase）是两种常用的生物化学指标，用于评估肝脏功能和肝细胞损伤程度。

本文将详细介绍ALT和AST的测定方法。

一、ALT的测定方法1.酶动力学法：该方法是最常用的ALT测定方法。

原理是将肝脏组织或血浆样品与丙酮酸转氨酶（LDH）反应，通过测定产生的谷草转氨酶（AST）的酶活力来反映样品中ALT的含量。

该方法准确可靠，具有较高的灵敏度和特异性。

2.免疫测定法：ALT测定的另一种常用方法是免疫测定法，包括免疫比浊法、免疫荧光法和免疫酶联免疫吸附测定法（ELISA）。

这些方法利用ALT特异性抗原和抗体的结合反应来测定ALT的浓度，具有高灵敏度和高特异性。

二、AST的测定方法1.酶动力学法：AST的测定方法类似于ALT的测定方法，也是通过与丙酮酸转氨酶（LDH）反应来测定AST的酶活力。

该方法较为简单快速，适用于大量样本的测定，但其灵敏度和特异性相对较低。

2.免疫测定法：AST的免疫测定法与ALT的免疫测定法类似，包括免疫比浊法、免疫荧光法和免疫酶联免疫吸附测定法（ELISA）。

这些方法通过AST特异性抗原和抗体的结合反应来测定AST的浓度，具有高灵敏度和高特异性。

三、ALT和AST测定的注意事项1.样本的采集：ALT和AST的测定常用的样本是血浆或血清。

在采集样本时，应避免血液污染或其他杂质的干扰，以保证测定结果的准确性。

2.技术操作：在进行ALT和AST的测定过程中，需要严格遵守相关实验操作规范，确保实验条件的一致性和稳定性。

包括标本处理、试剂配制、反应时间和温度的控制等。

3.器材和试剂的选择：选择合适的测定仪器和试剂是保证测定结果准确性和重复性的重要因素。

一般情况下，空白对照组和阳性对照组的选取是测定中的重点之一4.数据解读：在进行ALT和AST的测定后，需要对测定结果进行合理的解读和分析。

AST／ALT比值检测
1 检验目的
测定、计算样品中AST/ALT比值。

2 检测原理
计算型项目，公式为：AST/ALT
3 样本
血清、肝素或EDTA抗凝血浆，处理方法见生化标本采集程序。

稳定性：20～25℃稳定1天
4～8℃稳定7天
-20℃稳定1周
4 仪器
美国贝克曼-库尔特DXC800、AU5811全自动生化仪、迈瑞BS800M生化分析仪。

5 校准
5.1 仪器校准：每年由该仪器维修工程师参照厂方的技术规范对仪器进行一次校准。

5.2 项目校准：试剂盒在仪器上放置稳定期后；试剂批号更换后；由质控结果随时决定。

6 操作步骤
上机操作，操作程序、质量控制程序见相应生化仪操作
程序。

7 警告/危急值
未规定。

8 临床意义
AST/ALT之比对于急、慢性肝炎的诊断、鉴别诊断及判断转归有很重要的临床意义。

常
见情况如下：
8.1 急性肝炎时AST/ALT<1。

8.2 肝硬化时AST/ALT≥2。

8.3 肝癌时AST/ALT≥3。

ALT,AST测定⽅法3.8.2.1⼩⿏肝、肾、⼼组织ALT含量测定1实验原理⾕丙转氨酶作⽤于由丙氨酸及α-酮戊⼆酸组成的基质，在⼀定的反应条件下，产⽣⼀定量的丙酮酸。

在酶反应到规定时间时，加⼊2,4-⼆硝基苯肼，在当量浓度的酸性条件下，终⽌了酶反应。

2,4-⼆硝基苯肼分别与反应产⽣的丙酮酸及剩余的基质α-酮戊⼆酸形成各⾃对应的2,4-⼆硝基苯腙。

在碱性条件下，虽然⼆种苯腙分别显出红棕⾊，但由于丙酮酸⽣成的颜⾊较深，以同等克分⼦计算，在480-530nm波长范围内其浓度约为α-酮戊⼆酸⽣成的颜⾊的3倍，利⽤这⼀差别可以反映出丙酮酸的⽣成量。

本实验设⾕草转氨酶活⼒为：样品液与ALT 基质液在37℃下反应60min时每⽣成1µmol丙酮酸所需的酶量为1个活⼒单位（U）。

2试剂配制（1）0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）称取NaH2PO4.2H2O 2.96495g，Na2HPO4.12H2O 29.0142g，溶解于蒸馏⽔中，定容到1000mL。

（2）20µmol/L丙酮酸钠标准溶液称取22mg丙酮酸钠，溶解于0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）100mL中。

现配现⽤。

（3）ALT基质液称取α-酮戊⼆酸29.2mg，DL-丙氨酸1.78mg（L-丙氨酸0.85mg）溶解于30mL 0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）中，溶解后校正pH⾄7.4，再⽤pH7.4的磷酸缓冲液定容⾄100mL，置冰箱中保存备⽤（可保存⼀周）。

可加⼊氯仿数滴防腐。

（4）0.02% 2，4—⼆硝基苯肼溶液称取20mg2，4—⼆硝基苯肼先溶解于10 mL纯盐酸中，电炉加热助溶，待2，4—⼆硝基苯肼全部溶解后，⽤蒸馏⽔稀释⾄100mL，过滤后盛于棕⾊中，置冰箱中保存备⽤。

（5）1mol/L NaOH溶液：称取4g NaOH溶解于蒸馏⽔后，定容到100mL。

（6）0.4 mol/L NaOH溶液称取16 g NaOH溶解于蒸馏⽔后，定容到1000mL。

双项目同测法测定ALT和AST
钟方财;蒋维国;李顺康
【期刊名称】《川北医学院学报》
【年(卷),期】2003(018)004
【摘要】目的探讨双项目同测法与单项目测定法测定ALT和AST结果的差异.方法分别使用双项目同测法和单项目测定法测定定值血清和30例样本ALT和AST 含量,并将定值质控血清分别做日内、日间精密度测定.结果两方法测定结果相关性良好,γ=0.999,检测结果差异无显著性(P＞0.05),ALT和AST日内变异分别为
2.63%、2.47%,日间变异分别为
3.84%、3.77%.结论双项目同测法可以节约仪器通道,提高工作效率,节约资源,有一定推广应用价值.
【总页数】3页(P94-96)
【作者】钟方财;蒋维国;李顺康
【作者单位】内江市第一人民医院检验科,四川,内江,641000;内江市第一人民医院检验科,四川,内江,641000;内江市第一人民医院检验科,四川,内江,641000
【正文语种】中文
【中图分类】R446.1
【相关文献】
1.电子水准仪单程双测的一种方法——单程双测在大连庄河Ⅲ场海上风电场项目三等水准中的应用 [J], 张开
2.一测双评法测定咳特灵胶囊中牡荆苷与异牡荆苷的含量 [J], 员荣;孙丽丽;杨立伟
3.双项同测法测定血清丙氨酸转氨酶和天门冬氨酸转氨酶 [J], 蒋洪敏
4.溶血对速率法测定ALT／GPT和AST／GOT的影响 [J], 周美芬;赵岩
5.双波长微孔板赖氏法测ALT含量 [J], 刘玉振;陶玉生;温涛;王君
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AST和ALT机制一、AST和ALT机制概述AST（谷草转氨酶）和ALT（谷丙转氨酶）是两种常见的肝酶，它们在人体内发挥着重要的生理功能。

AST主要存在于心肌、骨骼肌、肝脏等组织中，而ALT主要存在于肝脏中。

当肝脏受损或疾病发生时，AST和ALT的活性会发生变化，因此检测AST和ALT的活性可以作为肝脏疾病的诊断和监测指标之一。

二、AST和ALT的生理功能AST和ALT在人体内具有重要的生理功能。

AST参与糖代谢和能量代谢，是维持人体正常生理功能所必需的酶之一。

同时，AST也参与了某些药物的代谢和排泄，对于药物的疗效和毒性具有重要影响。

ALT则参与蛋白质代谢和糖代谢，对于维持人体正常生理功能同样具有重要作用。

三、AST和ALT在临床上的应用AST和ALT检测在临床上广泛应用于肝脏疾病的诊断和监测。

当肝脏受损或疾病发生时，肝细胞内的AST和ALT会释放入血，导致血清中AST和ALT的活性升高。

因此，检测血清中AST和ALT的活性可以作为肝脏疾病的辅助诊断指标之一。

此外，AST和ALT检测还可以用于监测肝脏疾病的病情变化和疗效评估。

四、AST和ALT检测的方法和正常值范围AST和ALT的检测方法有多种，包括酶法、比色法、荧光法等。

其中，酶法是最常用的一种方法，具有灵敏度高、特异性好的优点。

正常值范围因检测方法和个体差异而有所不同，一般而言，AST的正常值范围为0-40U/L，ALT的正常值范围为0-40U/L。

五、AST和ALT升高的常见原因及意义1.肝细胞损伤：肝脏疾病是引起AST和ALT升高的最常见原因之一。

各种肝病如肝炎、肝硬化、肝癌等均可导致肝细胞损伤，使肝细胞内的AST和ALT 释放入血，导致血清中AST和ALT的活性升高。

AST和ALT的升高程度与肝细胞损伤程度呈正相关，因此检测AST和ALT的活性可以反映肝细胞损伤的程度。

2.心肌损伤：心肌中的AST含量较高，当心肌损伤时，AST的活性会升高。

ALTAST测定方法ALT（Alanine Aminotransferase）和AST（Aspartate Aminotransferase）是评估肝功能的常用酶学指标。

它们通常通过血液样本进行检测。

在本文中，我们将介绍ALT和AST的测定方法、应用以及血液样本的预处理。

首先，ALT和AST的测定方法主要是基于酶促反应原理。

当ALT和AST存在于细胞内时，它们通常以较低的浓度存在。

在细胞损伤或炎症发生时，细胞膜破裂，导致ALT和AST释放到血液中，使其浓度升高。

因此，通过测定血液中ALT和AST的浓度，可以评估肝脏的炎症程度和损伤程度。

目前，常用的ALT和AST测定方法主要有两种：荧光法和颜色反应法。

荧光法是利用荧光探针，例如NADH（尼克酸腺嘌呤二核苷酸还原型）或NADPH（尼克酸腺嘌呤二磷酸盐还原型），与ALT和AST进行反应，生成发射荧光信号。

该方法的优势是灵敏度高、特异性好，可以测定低浓度的ALT和AST。

颜色反应法是利用一些物质与ALT和AST进行反应后，形成可见光吸收的化合物。

这些化合物的光密度和ALT和AST的浓度成正比，可以通过比色法或分光光度法来测定。

在血液样本测定ALT和AST之前，还需要进行一些预处理步骤。

首先，采集血液样本时要注意避免氧化和污染。

其次，血液样本需要离心分离血清或血浆。

一般来说，血清是指凝结后，离心除去凝块，得到的液体部分；而血浆是指在血液凝结前，通过添加抗凝剂，离心除去细胞和凝块，得到的液体部分。

这是因为ALT和AST主要存在于细胞内，测定它们的浓度需要去除细胞成分的干扰。

因此，选择适当的分离方法非常重要。

最后，ALT和AST的应用非常广泛。

它们不仅用于评估肝脏疾病，还用于监测药物治疗的副作用，例如肝毒性。

此外，一些非肝脏疾病，如心肌梗死、肌肉炎等，也会导致ALT和AST的升高。

因此，ALT和AST的测定可以提供有关这些疾病的重要信息。

总结起来，ALT和AST的测定方法主要是基于酶促反应原理。

ALTAST测定方法ALT和AST是两种常用的肝功能指标，用于评估肝脏疾病和损伤程度。

本文将介绍ALT和AST的测定方法。

一、ALT（丙氨酸氨基转移酶）的测定方法：ALT是一种肝细胞特异性酶，主要存在于肝细胞的胞浆中。

当肝细胞受损或破坏时，ALT会释放入血液中，因此血液中ALT水平的升高通常与肝脏疾病相关。

ALT的测定方法一般采用酶动力学法或颜色反应法。

1.酶动力学法：这种方法是通过衡量ALT催化丙酮酸和谷氨酸互相转化的速率来测定ALT的活性。

这种方法的原理是ALT催化丙酮酸和谷氨酸生成谷草转氨酶和谷氧化酶，同时反应中NADH的消耗会导致光学密度的变化。

通过测量这种变化可以确定ALT的活性水平。

2.颜色反应法：颜色反应法是用于测定ALT浓度的常用方法，它基于谷氨酸和丙酮酸在特定条件下与ALT催化生成谷草转氨酶和谷氧化酶的反应。

这种方法通常使用的试剂盒包含了特定的底物和酶，当ALT存在时，底物与其催化生成产物，产物的浓度可以通过光度计测量。

二、AST（天冬氨酸氨基转移酶）的测定方法：AST也是一种肝脏酶，但它不仅存在于肝细胞中，还存在于心肌、肌肉、肾脏和红细胞等组织中。

因此AST的升高并不一定代表肝脏疾病，也可能与其他组织的损伤有关。

AST的测定方法与ALT类似，也有酶动力学法和颜色反应法两种常见方法。

1.酶动力学法：该方法是通过测量AST催化天冬氨酸和α-酮戊二酸互相转化的速率来测定AST的活性。

反应中，NADH或NADPH的消耗导致光学密度的变化，可以用于测量AST的活性水平。

2.颜色反应法：AST的颜色反应法原理与ALT的相似，使用特定的底物和酶，当AST存在时，底物与其催化生成产物，产物的浓度可以通过光度计测量。

这些方法虽然有一定的差异，但一般都基于底物与酶的反应原理，通过测量底物与产物的光学密度变化或者测量酶活性来确定血液中ALT和AST的水平。

综上所述，ALT和AST的测定方法主要有酶动力学法和颜色反应法两种。

谷丙转氨酶测定方法一、赖式比色法赖氏法并没有自己的酶活为单位定义。

作者以当时卡门氏的速率法为准，测得多份不同ALT活力血清的ALT卡门氏单位。

然后在赖氏比色法条件下，测得各份血清反应显色的吸光收值。

将每份血清的卡门氏单位和对应比色法吸光值在坐标纸上作图。

经过大量实验，对所有实验点以最佳曲线拟合，形成了比色法在某指定比色计上的标准曲线。

坐标横轴为卡门氏单位，纵轴为吸光值，比色法结果和卡门氏速率法结果一致。

继后作者以底物溶液及丙酮酸标准溶液，按照酶反应实际情况配制成不同浓度的丙酮酸标准溶液系列与2．4二硝基苯肼显色，并与速率法的结果比较。

经多年反复实验，最后作者正式报告可通用于各种比色计的结果为ALT28卡门单位的鼍清在比色法条件下产生相当于0．1μmol丙酮酸，ALT57卡门单位的血清产生相当于0．2μmol丙酮酸，ALT97卡门单位? 的血清产生相当于0．3μmol丙酮酸。

这样就使赖氏法标准曲，线上丙酮酸量和对应卡门单位确定下来。

1970年将曲线延伸至150卡门单位。

赖氏法报告的结果与速率法结果一致。

没有条件采用速率法的实验室可以采用此法。

（一）赖氏比色法测定血清ALT1、试剂（1）Imol／L磷酸氢二钠：称取磷酸氢二钠(含两个结晶水)17.6g溶解于水中，并加水至1000ml，冰箱内保存。

（2）0.1mol／L磷酸二氢钾溶液：称取磷酸二氢钾13.6g溶解于水中，加水至1000ml，冰箱内保存。

（3） 0.1mol／l磷酸缓冲液(pH7.4)：将420ml 0.1ml／L磷酸氢二钠溶液和80ml 0.1mol／L磷酸二氢钾溶液混匀，置冰箱内保存。

（4）底物缓冲液(DL—丙氨酸200mmol／L，α-酮戊二酸2m—mol／L)：精确称取1.79g DL-丙氨酸和29．2mgα-酮戊二酸，先溶于约50ml 0.1mol／L磷酸缓冲液中，用lmol／L氢氧化钠(约0.5m1)调到pH7.4，再加磷酸缓冲液至100ml，置冰箱保存，可稳定两周。

甲功五项检查甲功五项检查是一种常见的体检项目，用于评估人体肝功能的健康状况。

下面将详细介绍甲功五项检查的标准格式文本。

一、甲功五项检查的定义甲功五项检查是通过测定血液中的相关指标来评估人体肝功能的一种常规检查方法。

该检查包括血清谷丙转氨酶（ALT）、血清谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）和总蛋白（TP）五个指标的测定。

二、检查项目及正常参考范围1. 血清谷丙转氨酶（ALT）：正常参考范围为10-40 U/L。

ALT是一种存在于肝细胞中的酶，其升高可能与肝细胞损伤有关。

2. 血清谷草转氨酶（AST）：正常参考范围为10-34 U/L。

AST也是一种存在于肝细胞中的酶，其升高可能与肝细胞损伤有关。

3. 总胆红素（TBIL）：正常参考范围为3.4-17.1 umol/L。

TBIL是血液中的胆红素总量，其升高可能与肝脏功能异常有关。

4. 直接胆红素（DBIL）：正常参考范围为0-6.8 umol/L。

DBIL是血液中的直接胆红素量，其升高可能与胆道梗阻或者肝细胞损伤有关。

5. 总蛋白（TP）：正常参考范围为60-80 g/L。

TP是血液中的总蛋白含量，其升高或者降低可能与肝脏功能异常有关。

三、检查方法及注意事项甲功五项检查普通采用静脉采血的方式进行，具体步骤如下：1. 患者需空腹进行检查，通常要求至少8小时的禁食。

2. 医务人员会在患者的手臂上绑扎一根橡皮带，以增加静脉充盈度。

3. 选择合适的静脉，用消毒棉球擦拭后进行穿刺。

4. 采集适量的血液样本，普通为5-10毫升。

5. 采血后，医务人员会将采集的血液样本送往实验室进行检测。

在进行甲功五项检查时，需要注意以下事项：1. 患者应提前告知医生自己是否有过敏史或者对采血有特殊反应。

2. 患者在检查前应避免剧烈运动或者情绪激动，以免影响检查结果。

3. 患者在采血前应充分歇息，保持良好的心态。

四、结果分析及临床意义甲功五项检查的结果可用于评估肝功能的健康状况。

血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活力测定5页一、实验目的1. 掌握测定血清ALT活力的方法和原理。

2. 熟悉ALT在肝脏功能监测中的重要性。

二、实验原理ALT是一种酶，分布在人体的细胞内，主要存在于肝脏、心肌、骨骼肌和肾脏等组织中。

正常情况下，ALT主要在肝脏中发挥作用。

当肝脏受到损伤时，ALT会释放到血液中，导致血液中ALT活力的升高。

因此，测定血清ALT活力是一种常用的肝功能检测方法。

本实验使用比色法测定血清ALT活力。

利用谷草-丙氨酸转移酶测定(AST)所产生的谷草酸，和血清ALT催化产生的丙酮酸反应，生成2,4-二硝基苯胺，其吸光度与丙酮酸的浓度成正比。

由此计算出血清ALT活力。

三、实验步骤1. 将标准品和待测血清样品准备好，室温恢复至20-25°C。

2. 取比色管，在无菌条件下加入以下试剂：2.5ml缓冲液pH7.5、0.25ml 10mmol/L 肌酸盐缓冲液、0.2ml5.5mmol/LNADH、0.2ml2mol/L丙酮酸、0.1ml3%的PEG，混匀。

3. 加入待测血清样品1ml，立即混匀。

4. 马上读测吸光度(Zero)。

5. 在37℃恒温箱中孵育10分钟。

6. 然后再读一次吸光度。

7. 加入ALT试剂，混匀，孵育60秒钟。

8. 反应结束后7分钟内，读取吸光度值，记录。

9. 将标准品同样操作，测定吸光度，计算样品中ALT活力的单位(L_0.9)四、实验注意事项1. 实验中的所有仪器、试剂、杯器等都要事先清洗干净，确保无污染。

2. 实验操作应在干燥、无尘、无异味的净化房间内进行。

3. 操作过程中要注意保持常温。

4. 实验中的吸光度必须在规定时间内完成测定，避免影响结果。

5. 测定前，必须保证血清样品无血浆外渗。

6. 测定期间谨慎操作，防止试剂泼溅，注意安全。

五、实验结果分析ALT活性测定值与肝损伤的程度有一定的相关性。

当ALT活性超过健康人参考范围时，说明肝脏功能出现异常，可能出现肝炎、脂肪肝等肝病状况。

天门冬氨酸氨基转移酶(AST)测定操作规程（SOP文件）1实验原理和检验目的本试剂用于人血清或血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)的体外定量测定。

AST门冬氨酸+ α-酮戊二酸谷氨酸+ 草酰乙酸MDH草酰乙酸+ NADH + H+ 苹果酸+ NAD+在波长340nm处测定NADH降低速率，计算出AST活力。

2标本采集和处理2.1标本种类和采集方法标本：新鲜无溶血血清。

受检者（体检对象或病人）的准备：对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯。

静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布。

2.2标本处理方法标本要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。

样品采集后要离心标本，吸出血清。

标本应立即测定。

处理样品时要将其当成生物污染品。

3试剂3.1试剂组成3.2试剂准备试剂为液体双试剂，开瓶即可使用，用后及时置于2～8℃避光保存。

3.3试剂稳定性试剂在2-8℃避光保存可稳定12个月，试剂开盖后稳定7天。

R1和R2以2：1混匀，即为单一工作试剂。

单一工作试剂稳定1周。

4校准4.1校准品每日进行试剂空白校准操作。

使用朗道（RONDOX）进行全点校准操作。

4.2校准品准备朗道（RONDOX）校准物复溶30分钟，充分溶解混匀后即可使用。

4.3校准品稳定性朗道（RONDOX）冻干校准物2～8℃密闭保存稳定至有效期，复溶后校准物15℃～25℃稳定8小时，2℃～8℃稳定2天，-15℃～-25℃稳定2周。

4.4试剂校准周期校准周期为2天。

当试剂批号更换时应重新校准。

5质控5.1质控品采用朗道（RONDOX）（正常范围质控）和朗道（RONDOX）（病理范围质控）两个水平的血清进行室内质控。

5.2可接受性判断质控物的检测值应在给定质控范围，或可以通过参加卫生部室间质评对实验室的运作情况进行系统评估。

5.3质控操作每日进行样本检测之前首先应进行质控操作，以考察系统的在控情况。

如果检测结果符合质控要求则进行样本操作；如果不符合质控要求，则应重复质控操作，以排除可能发生的偶然误差；如果仍不符合质控要求，则应考虑质控品的重新准备、试剂的重新校准或更新、仪器的维护等。

结果 有 ３种形 式 ：数 据 测定 值 、符 号 标记 和反 应 曲 线 图 数 据测 定 值 和符 号标 记 是 检 验报 告 单 的主 要 内容 ．而反 应 曲线 图可 以 直观 地 反 映测 试 的全 过 程 ｌ３１．是操 作 者 判 断测 定 结果 准 确 度 的依 据 之
０
３．１ 方法 学 缺 陷 ＴＣ６０６０全 自动生 化 分 析仪 采 用 酶 偶联 速 率法 测定 ＡＬＴ和 ＡＳＴ．其原 理 是 在酶 促 反 应过 程 中 ．ＮＡＤＨ 的氧化 速率 与标 本 中酶活 性呈 正 比 ．可 在 ３４０ｎｍ 检测 吸 光度 下 降速 率 ．根 据线 性 反 应期 吸光 度 下 降 速率 ，计 算 出 ＡＬＴ、ＡＳＴ活 性 浓 度 。从上 表 １号 和 ２号 标本 测定 结果 看 ．由于标 本 中 ＡＬＴ和 ＡＳＴ活性 浓 度 太 高 超 过 了试 剂 的 检 测 线 性范 围才 使测 定结 果失 真 由于 ＡＬＴ和 ＡＳＴ活 性 浓 度 太高 在 到 达测 定 区域 前 底 物 已被 耗 尽 ．在 到达 测定 区域 时酶 促 反应 曲线 已成 为 一 条 水平 直 线 ，说 明吸 光度 基 本 上没 有 变化 ．从 而 使 测 定结 果 太 低 经过 用 生理 盐 水按 合 适 比例 稀 释 后 重新 测 定 ，并 观 察 反 应 曲线 是 否 正 常 ，如 反应 曲 线 良好 ． 则 将测 定结 果乘 以稀 释倍 数 ．即为 真实 结果 ３．２ 稀 释 倍数 有 报 道 只要 稀 释 ５倍 后 即可 ［４１ 二 份 标 本 都 作 了 稀 释 ５倍 和 ｌＯ倍 测 定 ．１号 标 本 ＡＩＪＴ、ＡＳＴ．以及 ２号标 本 ＡＳＴ５倍 稀 释后 真 实 结果 与 １０倍 稀 释后 真 实值 很 相 近 ．且 二次 检 测 所 得反

生化测定中13例ALT和AST数据不符原因分析及措施ALT即丙氨酸氨基转移酶，主要存在于肝脏、心脏和骨骼肌中。

肝细胞或某些组织损伤或坏死，都会使血液中的ALT升高。

AST是天门冬氨基转移酶，也是反映肝脏功能的其中一项指标。

需要注意的是，转氨酶升高的原因有很多，当患者出现有ALT和AST升高的情况后，要先查明病因，再进行针对性的治疗。

资料与方法一般资料：标本来源于我院门诊和住院患者的标本。

仪器：深圳迈瑞BS-400型全自动生化分析仪，试剂为深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司提供的相配套的酶偶联双试剂。

结果4例样本ALT、AST稀释前后测试情况：见表1。

分类情况：标本分类情况，见2。

讨论测定ALT和AST均为速率法。

速率法是在一定速率下，反应开始时的瞬时速率为初始速率。

由反应物浓度的变化确定反应速率和速率方程式的方法为初始速率法。

将反应物按不同组成配制成一系列混合物。

先只改变一种反应物A的浓度，保持其他反应物浓度不改变。

在某一温度下反应开始，获得CA-t图,确定△t→0时的瞬时速率。

若能获得至少两个不同CA条件下的瞬时速率，即可确定反应物A的反应级数。

同样的方法，可以确定其他反应物的反应级数。

不过由于ALT和AST过高，在到达测定区域前底物已被耗尽，在到达测定区域时酶反应曲线已成为一条平坦的直线，从而使测定结果很低甚至为负值。

在测定过程中，应在程序设置时解决好。

很多仪器在编程中有一试剂质量控制步序，即试剂空白不能不低于1.0，也不能＞2.5。

在加样本后到反应读数结束时不能＜0.6(跟仪器设置)也不能＞2.5。

并且注意反应时间不能太长。

对于经常检查的病员要充分利用计算机的储存和查询功能，对比前后的测试结果，对某些急诊检验项目，如血钾、血糖、血钙等，遇到特别异常结果要与临床医师及时取得联系，以便对病员的紧急处置。

检验工作者应能对一些常见的异常检验结果能够做出合理解释，这就要求具备一定的临床基础知识。

血液标本测定完毕，应至少保留7天，以备临床医师对检查结果有疑惑的复查核对之用，这对寻找检验结果出错原因很有好处。

alt ast指标ALT和AST指标是人体体内的两种生化成分，它们被称为肝酶，通常被用于检测人体肝功能的健康状况。

ALT和AST指标被广泛用于诊断和监控疾病，包括肝脏炎症、肝炎、动脉粥样硬化、心肌梗死等，本文将围绕这两种指标进行详细阐述。

【Part 1】理解ALT和AST指标ALT和AST均为肝酶，ALT通常被称作丙氨酸氨基转移酶，而AST 则被称作天门冬氨酸转移酶。

这两种酶对人体健康有着重要的作用，它们能够帮助肝脏处理和代谢蛋白质、脂肪和碳水化合物等，同时也能帮助肝脏消化和代谢一些药物。

【Part 2】原因及其影响肝脏健康不良会导致ALT和AST水平升高，这通常表明肝脏细胞受到了破坏。

肝细胞的损伤能够引起ALT和AST水平升高的原因很多，例如肝炎、肝硬化、过度饮酒、药物过量、心脏病等。

当ALT和AST水平升高时，通常会给医生一个信号，告诉医生勘测病因是否与肝脏有关。

肝脏损伤可以被非常轻松地发现，由于肝脏是一种重要的生化工厂，这也就意味着它是病毒和毒素的一个目标。

【Part 3】如何进行检测？检测血清ALT和AST的方法非常简单，它们是病发胆囊疾病或肝脏疾病的有效手段。

通过检测血液中的ALT和AST水平，就能够发现肝脏是否受到了损伤或疾病的侵袭。

在进行检查之前，需要先停止服用任何药物，否则这些药物也会影响检查结果。

处理步骤如下：1.医生会要求病人到医院或美妙诊所给外周静脉或手指等部位进行采血;2.在病人手臂上用乙醇清洁正确位置以避免细菌感染，这样做的目的是增加采血的准确性;3.医生在采血前会讲解流程，态度亲和，以便病人能够放松心情;4.采血完成后，将血样送到实验室进行检查;5.实验室通常会在24小时内提供结果，医生会根据病人的具体情况，判断是否肝脏疾病，从而诊断及治疗。

【Part 4】如何降低ALT和AST值？一旦检测出ALT和AST值已经升高，医生会通过诱导治疗和减少药物剂量来治疗病症。

此外，饮食也非常重要，病人应该避免摄入过多的脂肪和糖类食物，同时多吃富含维生素、蛋白质的食物如鱼类、鸡肉等,这样有利于身体恢复健康并降低ALT和AST值。

氨基转移是氨基酸代谢中基本生化反应之一，在机体内存在着多达60种氨基转移酶，丙氨酸基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)是其中最重要的两种。

它们都需要磷酸吡哆醛(维生素B4)为辅基，不含磷酸吡哆醛的酶蛋白称为脱辅基酶蛋白，没有催化活性。

血清除含有有活性的全酶外，还有部分不含磷酸吡哆醛的酶蛋白，如在测定前，先加入足量磷酸吡哆醛，所测血清转氨酶活性常有明显升高。

AST有两种受不同基因控制的同工酶分别存在于细胞质(c-AST)和线粒体(m-AST)中，而一般认为ALT不存在同工酶，我国学者证实在人组织和血清中也存在类似AST的两种同工酶，即细胞质ALT(c-ALT)和线粒体ALT(m-ALT)。

【组织分布】AST广泛存在于多种器官中，按含量多少顺序为心脏、肝、骨骼肌和肾，还有少量存在于胰腺、脾、肺及红细胞中，肝中AST大部分(70%)存在于肝细胞线粒体中。

ALT也广泛存在于多种器官中，含量最多的不是心脏，而是肝，顺序为肝、肾、心、骨骼肌等，与AST相比，在各器官中含量都比AST少，肝中ALT绝大多数存在于细胞质中，只有少量在线粒体中。

【生理变异】此二酶生理变异较小，性别、年龄、进食、适度运动对酶活性无明显影响，每天虽有生理性波动，但无统计学意义。

表7-6 ALT和AST在疾病时的变化疾病ALTASTAST/ALT病毒性肝炎随不同病期和严重程度而异，常明显升高，可达10-100倍正常上限同ALT，但程度没有ALT明显，恢复到正常早于ALT<1.0重症肝炎不超过20倍正常上限，出现肝疸分离增高程度常超过ALT>1.0肝硬化变化不定，常轻度增高同ALT，但增高程度常超过ALT>1.0右心衰竭合并肝溢血正常或轻度升高，个别可高达10倍正常上限增高程度常超过ALT>1.0梗阻性黄疸变化不足，常不超过5倍正常上限同ALT不定，常<1.0Gilbert综合征无变化无变化溶血性黄疸无变化无变化AMI正常或轻度升高明显升高，与CK和LD相比，无何优点>1.0心肌炎正常或轻度升高急性期可轻度升高>1.0肌肉损伤正常或轻度升高可高达2-5倍正常上限>1.0肌萎缩明显上升，可达8倍正常上限同ALT>1.0【标本的采集、处理和贮存】红细胞中AST和ALT分别为血清含量的15倍与7倍，所以明显溶血标本不宜测此二酶。