第十四章 甾体激素类药物的分析

第四节含量测定 容量法、⽐⾊法、紫外分光光度法、荧光法、⽓相⾊谱法、⾼效液相⾊谱法等，本章重点讨论四氮唑⽐⾊法、异烟肼⽐⾊法、Kober反应⽐⾊法、紫外分光光度法、⾼效液相⾊谱法等。

⼀、四氮唑⽐⾊法 （⼀）四氮唑的种类两种：2，3，5-三苯基氯化四氮唑（缩写为TTC），其还原产物为不溶于考，试⼤收集整理⽔的深红⾊三苯甲簪，λmax在480~490nm，也称红四氮唑（缩写为RT）。

蓝四氮唑（缩写BT），其还原产物为暗蓝⾊的双甲簪，λmax在525nm左右。

TTC和BT的结构式如下： （⼆）反应原理 ⽪质激素C17-α-醇酮基具有还原性，在强碱性溶液中能将四氮唑盐定量地还原为有⾊甲簪。

可能路线为α-醇酮基，失去2个电⼦氧化为20-酮基-21醛基，在碱催化下，分⼦内部重排；有部分形成20-羟基-21-醛基，C20-C21键断裂形成甾基甲酸衍⽣物和甲醛，以前者为主。

四氮唑盐得到2个电⼦，开环形成甲簪显⾊。

（三）测定⽅法 USP（23）采⽤蓝四氮唑；中国药典（1995版）和BP（1993）采⽤红四氮唑。

中国药典收载地醋酸泼尼松龙软膏的含量测定⽅法如下： 1.对照品溶液制备：精密称取醋酸泼尼松龙对照品20mg，置100ml量瓶中，加⽆⽔⼄醇振摇使溶解，并稀释⾄刻度，摇匀，即得。

2.供试品溶液的制备：精密称取本品4g（约相当于醋酸泼尼松龙20mg），置烧杯中，加⽆⽔⼄醇约30ml，置⽔浴上加热，充分搅拌，使醋酸泼尼松龙溶解，在置冰浴中放冷后，滤过，滤液滤⼊100ml量瓶中，同法提取3次，滤液并⼊量瓶中，加⽆⽔⼄醇稀释⾄刻度，摇匀，即得。

3.测定法：精密量取对照品溶液及供试品溶液各1ml，分别置⼲燥具塞试管中，各精密加⽆⽔⼄醇9ml与氯化三苯四氮唑试液2ml，摇匀，再精密加氢氧化四甲基铵试液1ml，摇匀，在25℃暗处放置40~45min，照分光光度法，在485nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得。

甾体激素类药物的分析、维生素类药物的分析一、最佳选择题1. 可与具有C17-α-醇酮基的甾体激素药物作用显色的试剂是A.四氮唑盐B.重氮盐C.亚硝基铁氰化钠D.三氯化锑E.异烟肼答案：A[解答] 本题考查重点是肾上腺皮质激素中的C17-α-醇酮基具有还原性，在强碱性溶液中能将四氮唑盐定量地还原有色甲腊。

采用不同的四氮唑盐和在不同的反应条件下，产生不同的颜色，多为红色或蓝色。

《中国药典》采用氯化三苯四氮唑(TTC)。

肾上腺皮质激素(含有C17-α-醇酮基)能将四氮唑盐定量地还原成红色三苯甲腊，三苯甲腊在485nm的波长处有最大吸收，可用于定性定量分析。

2. 可用四氮唑比色法测定含量的药物A.硫酸阿托品B.丙酸睾酮C.黄体酮D.雌二醇E.醋酸地塞米松注射液答案：E[解答] 本题考查重点是对醋酸地塞米松结构特点的掌握。

甾体激素类药物中只有肾上腺皮质激素的结构中含有C17-α-醇酮基，具有还原性，在强碱性溶液中能将四氮唑盐定量地还原有色甲腊，可用比色法测定含量。

以上药物中只有醋酸地塞米松属于肾上腺皮质激素类药物，《中国药典》中醋酸地塞米松注射液采用该法测定含量。

3. 醋酸地塞米松中硒的检查方法A.氧瓶燃烧有机破坏后的茜素氟蓝比色法测定B.氧瓶燃烧有机破坏后的四氮唑比色法测定C.氧瓶燃烧有机破坏，加盐酸羟胺还原，与2，3-二氨基萘缩合，紫外法测定D.氧瓶燃烧有机破坏，加过氧化氢氧化，与2，3-二氨基萘缩合，紫外法测定E.用湿法有机破坏，加过氧化氢氧化，与2，3-二氨基萘缩合，紫外法测定答案：C[解答] 本题考查重点是对醋酸地塞米松中特殊杂质硒检查方法的掌握。

检查方法是根据含硒的有机药物经过氧瓶燃烧破坏，使有机硒游离并转变为Se6+，在吸收液中加盐酸羟胺，使Se6+还原为Se6+。

然后在pH2.0±0.2的条件下，与2，3-二氨基萘反应，生成4，5-苯并苯硒二唑，用环己烷提取后，于378nm波长处测定吸光度，按对照品比较法测定硒含量。