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mRNA差别显示技术

mRNA差别显示技术

数据处理与分析方法的改进
要点一
总结词
要点二
详细描述
数据处理与分析方法的改进可以提高mRNA差别显示技术 的可重复性和可解释性。
采用先进的数据处理和分析方法，如归一化处理、差异表 达分析、生物信息学分析等，可以更准确地识别差异表达 的基因。归一化处理可以消除实验误差和批次效应，差异 表达分析可以筛选出显著变化的基因，生物信息学分析可 以对这些基因进行功能注释和通路分析。此外，建立标准 化和规范化的数据处理流程可以提高技术的可重复性和可 比性。
详细描述
差显PCR使用特定的引物对cDNA进行扩增，这些引物能够识别出在不同条件下表达的基因的差异。通过调整 PCR条件，如温度、循环次数和引物浓度，可以优化差显PCR的效果。扩增后的产物通过凝胶电泳进行分离，以 便后续的分析和测序。
序列测定与数据分析
总结词
对PCR产物进行测序，并利用数据分析找 出差异表达的基因。
疾病研究
mRNA差别显示技术在疾病研究方面具有重要价值，可以用于研究疾病发生、发展过 程中基因表达的变化，为疾病的诊断、治疗和预后评估提供依据。
药物研发
通过mRNA差别显示技术，可以发现与药物作用相关的基因，为新药研发提供候选靶 点，加速药物研发进程。
技术发展前景与展望
01
技术改进
随着测序技术的不断发展，mRNA差别显示技术有望得到进一步改进，
VS
详细描述
通过适当的测序技术，如Sanger测序或下 一代测序（NGS），对PCR产物进行序列 测定。获得序列数据后，利用生物信息学 工具和算法进行数据分析，以识别出在不 同条件下表达的差异基因。这一步骤对于 深入了解基因表达模式和生物过程至关重 要。
03
mRNA差别显示技术的优化与 改进

(汇总)mRNA差别显示技术.ppt

(汇总)mRNA差别显示技术.ppt

精选整理
16
9、双向电泳技术
双向电泳（two-dimensional electrophoresis）是等 电聚焦电泳和SDS-PAGE（十二烷基磺酸钠—聚丙烯 酰胺凝胶电泳）的组合，即先进行等电聚焦电泳（按 照pI分离），然后再进行SDS-PAGE（按照分子大 小），经染色得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图。 第一向进行等电聚焦，蛋白质沿pH梯度分离，至各自 的等电点；随后，再沿垂直的方向进行分子量的分离.
精选整理
7
mRNA差别显示技术
DNA指 纹
Jeffreys等用肌红蛋白基因的一个内含子 的串联重复序列作探针，从人的基因文 库中筛选出8个含有串联重复序列的重组 克隆。序列分析表明，这8个小卫星重复 单位的长度和序列不完全相同，但都有 相同的核心序列，他们先后用两个小卫 星探针进行Souther杂交，在低严谨条件 下杂交图谱的带型千差万刷，如人的指 纹一样．Jeffreys称之为DNA 指纹或遗传 指纹。
精选整理
15
8、噬菌体抗体库技术
以噬菌体(主要是丝状噬菌体、λ噬菌体和T4噬菌体)为 载体,将抗体基因插入噬菌体编码的外壳蛋白基因PⅢ或 PⅥ中,在噬菌体表面以抗体－外壳蛋白融合蛋白的形成 表达。经辅助病毒感染后,借助蛋白PⅢ的信号肽穿膜作 用,进入宿主外周基质,在正确折叠后被包装于噬菌体尾 部,随后携带表达载体的宿主菌就会释放出带有抗体片 段的噬菌体颗粒。此抗体可以特异性识别抗原,又能够 感染宿主菌进行再扩增,将B细胞全套可变区基因克隆 出来,组装成噬菌体抗体的群体,则成为噬菌体抗体库技 术。
精选整理
8
DNA指纹图
图为41个红花檵木品种嫩叶DNA，红花檵 木为我国特产的一种优良园林绿化观赏植物
精选整理

《mRNA及SSH》PPT课件

《mRNA及SSH》PPT课件
达,决定了整个生命过程. 比较同一类细胞在不同生长发育阶段的基因表达的差
异,是克隆特异表达基因的方法.
二、DDRT技术的原理
〔一〕锚定PCR
锚定PCR〔anchored PCR〕是PCR技 术的一种改进,一般的PCR实验中需要 知道目的基因两端的序列,而锚定PCR 技术不需要.
所谓的"锚定"就是指一端已经定死了, 另一端通过人工合成引物来定,这就为 许多我们对不清楚其5’端区域或是3’ 端区域的RNA的分析找到了一条良好
四、mRNA差别显示技术的应用
2、基因的鉴定与克隆 水稻的赤霉素调节基因
赤霉素处理的水稻：诱导 不诱导
mRNA的表达量相差10倍
四、mRNA差别显示技术的应用
3、研究激素对植物发育的影响 娄沂春水稻叶绿体ATP合成酶受赤霉素诱导
的差别表达基因,证明了赤霉素诱导水稻产 生生理发应过程涉及了叶绿体基因表达
第七章 目的基因的分离技术
第一节 mRNA差异显示技术 〔 mRNA differential display reverse
transcripion PCR,DDRT—PCR〕
第二节
抑制消减杂交技术 <Suppression subtractive Hybridization>
第一节 mRNA差异显示技术及其应用
A C G U
G U C
5’- ···AGAAA···AA - 3 5’- ···CGAAA···AA - 3 5’- ···GGAAA···AA - 3 5’- ···UGAAA···AA - 3 5’- ···AUAAA···AA - 3’ 5’- ···CUAAA···AA - 3’ 5’- ···GUAAA···AA - 3 5’- ···UUAAA···AA - 3’ 5’- ···ACAAA···AA - 3’ 5’- ···CCAAA···AA - 3’ 5’- ···GCAAA···AA - 3 5’- ···UCAAA···AA - 3’

实验七 植物mRNA原位杂交技术-PPT精选文档

实验七 植物mRNA原位杂交技术-PPT精选文档
3、纳瓦兴（Navaschjn‘s）固定液：植物制片技术中广泛 应用。配方：75 ml 1%铬酸，5 ml冰醋酸和20 ml福尔 马林混合。根据实验材料的种类，目前有很多的改良液， 效果更好。
材料脱水
材料洗涤后，如果材料含有水分，水与石蜡不能 相溶，通常用酒精脱水。材料由水入酒精中，由 低浓度酒精渐至高浓度酒精。通常由30%、50%、 70%、80%到90%酒精，每次须经半小时左右， 具体的时间由材料大小而定。
实
原位杂交（in situ hybridization）是一种在细胞水 平上研究基因表达调控的最直接有效的分子生物 学技术。
RNA原位杂交是用同位素标记或非同位素标记的 双链DNA或单链反义RNA探针对组织切片或装片 的不同细胞中基因产物mRNA或rRNA进行原位定 位。分布于细胞中的mRNA与反义RNA探针互补而 杂交产生双链的RNA。标记在反义链上的同位素 经放射自显影、非同位素经酶促免疫显色或免疫 荧光反应，均可显示mRNA在植物组织细胞中的分 布位置。用标记的有义RNA作探针，由于与细胞 内的mRNA不互补而不能杂交，可以作为对照。
地高辛标记的体外转录 （12月3日）
1、按照下表将各成分加入EP管中，混匀后在37 ℃保温2小时；
2、加入2 μl无RNase的DNaseI，37℃保温15分钟； 3、加入2 μl 0.2 mol/L EDTA终止反应； 4、加入2.5 μl 4 mol/L LiCl 和75 μl冰冷的100%乙醇，沉淀过夜； 5、12000 rpm，4 ℃离心15分钟。用70%冷乙醇清洗后在室温下进行干燥。 6、根据沉淀物的多少（一般为6-10 μg），重悬于30-50 μl DEPC-H2O中，
九、封片观察（12月6日）
1、将载玻片转入缓冲液III（10 mmol/L Tris-HCl，1 mmol/L EDTA，pH 8）中，浸5分钟，终止反应。

《mRNA及SSH》课件

《mRNA及SSH》课件
介绍mRNA的合成过程和加工修饰方式
生物技术应用
探索mRNA在基因工程和疫苗研发中的应用前景
三、SSH
定义和原理
详细解释SSH的定义、工作原理和核心思想
与基因差异表达分析的关系
说明SSH技术在基因表达差异分析中的重要性
优缺点
探讨SSH方法的优势和局限性
应用前景和展望
展望SSH在功能基因组学和生物医学研究中的 未来应用
四、mRNA与SSH的比较
异同点
对比mRN比较
比较mRNA和SSH方法的优势 和局限性
应用比较
分析mRNA和SSH在研究领域 中的应用区别
五、结论
1 总结
总结mRNA和SSH的重要性和研究成果
2 未来发展方向
探讨mRNA和SSH领域未来的研究方向和趋势
六、参考文献
《mRNA及SSH》PPT课件
PPT大纲：mRNA及SSH
一、简介
概述
mRNA和SSH的定义和基本概念
作用与应用领域
探讨mRNA和SSH在遗传学、生物工程学和医学领域的应用
二、mRNA
定义和特点
详解mRNA的定义、结构特点和功能
功能和作用
阐述mRNA在基因表达调控和蛋白质合成中的 重要作用
合成和加工
1 相关论文和文献的引用和推荐
列出mRNA和SSH领域相关研究文献

《mRNA到蛋白质》幻灯片

《mRNA到蛋白质》幻灯片

2、信号识别颗粒：
在胞液中有一种信号识别颗粒〔SRP〕，含有 300 个 核 苷 酸 的 7S 小 分 子 RNA〔 小 胞 浆 scRNA〕及6种蛋白质的核糖核蛋白，在信号 肽出现后，能识别并结合信号肽及核糖体，使 翻译暂停，并与膜上的SRP受体蛋白〔停靠蛋 白〕结合，引导肽链跨膜转运。
伴侣蛋白
与mRNA结合
B．真核40S小亚基先与mRNA结合，再与MettRNAMet结合
C．tRNA与核糖体的大亚基结合,再与小亚基结合
D．真核40S小亚基先与Met-tRNAMet结合,再与
mRNA结合
B
2、反密码子IGC可以识别的密码子是
〔
〕。
A．GCG D．ICG
B．GCA
C．ACG
3、有关蛋白质合成，以下哪条描述是错误的〔
六、蛋白质的空间构造
• 蛋白质的生物学活性和理化性质主要决定于 空间构造〔构象〕是指蛋白质的二级、三级 和四级构造。
1、蛋白质的二级构造
〔1〕α－螺旋：含α－螺旋丰富的蛋白质构造严密 而稳定少变，故蛋白质的功能区常不在α－螺旋 区而在其邻近。
The alpha-helix
Some proteins, such as cytochrome b are composed almost entirely of alphahelices.
4、摆动性
在密码子与反密码子的配对中，前两对严格遵 守碱基配对原则，第三对碱基有一定的自由度，可 以“摆动”，这种现象称为密码子的摆动性。
摆动配对
U
mRN5A' A U U A U C A U A 3'
UAI UAI UAI
tRNA
5'
5'

核糖体展示技术PPT课件

核糖体展示技术PPT课件

①亲和筛选 分为固相筛选和液相筛选，主要有ELISA和
磁珠法。Hanes等认为,ELISA方法中，抗原包被 在塑料表面上，而塑料表面的疏水作用有可能会 影响吸附蛋白的空间构象，从而导致筛选出的抗 体分子不能识别抗原的天然表位;磁珠法是在抗 原上连接捕获标签，如生物素，然后在形成抗 原-抗体复合物后,采用磁珠-链霉亲和素捕获该标 签,进行亲和筛选。
核糖体展示技术
基因控制生物性状
指导 合成
体现者
蛋白质
基因指导蛋白质合成的过程，叫基因的表达。
问题：基因是怎样指导蛋白质的合成呢？
mRNA在细胞核中合成
DNA
A A T C AA T AG 细胞核 U U A G U U A U C
mRNA
核孔 细胞质
U U A GUU AUC
mRNA
？ 甲硫氨酸
3 核糖体展示技术的优势、问题、展 望
a 优势: 核糖体展示技术完全在体外进行,与噬菌
体或酵母菌展示技术相比具有建库简单、库容量 大、分子多样性强、筛选方法简便、无需选择压力, 还可通过引入突变和重组技术来提高的问题:如何进一步地提高该系统的稳定性；
写在最后
成功的基础在于好的学习习惯
The foundation of success lies in good habits
26
结束语
当你尽了自己的最大努力时，失败也是伟大的 ，所以不要放弃，坚持就是正确的。
When You Do Your Best, Failure Is Great, So Don'T Give Up, Stick To The End
演讲人：XXXXXX 时 间：XX年XX月XX日
4）体外分子定A shuffering)等方法引 入突变和重组技术,增加分子多样性,从而提高获 得高亲和力、良好稳定性或增加酶活性靶标分子 的机率.Plückthumx小组利用核糖体展示技术筛 选到1.1 nmol高亲和力的ScFv,之后通过引入 DNA重排技术,又将其亲和力提高了30倍。

mRNA的结构副本PPT课件

mRNA的结构副本PPT课件
第5页/共10页
原核生物中的mRNA前导区第 Nhomakorabea页/共10页
mRNA的高级结构
RNA分子中，部分区域也能形成双螺旋结构，不能形成双 螺旋结构的部分，则形成突环。这种结构可以形象地称为 “发夹型”结构或者茎环结构。另外，在RNA的双螺旋结 构中，碱基配对的情况不像DNA那么严格。G除了可以和C 配对外也可以和U配对，G-U配对形成的氢键较弱。不同类 型的RNA,其二级结构有明显的差异。
第4页/共10页
真核生物中的mRNA
PolyA：通常位于mRNA上的 150-200个腺苷酸残基。转录 后在RNA末端腺苷酸转移酶 催化下,以ATP为底物,添加到 mRNA的3’端的。
作用:在真核生物中，多聚 腺苷酸化是一种机制，令 mRNA分子于它们的3'端中 断。多聚腺苷酸尾（或聚A 尾）保护mRNA，免受核酸 外切酶攻击，并且对转录 终结、将mRNA从细胞核输 出及进行翻译都十分重要。
目录
• 真核生物中的mRNA • 原核生物中的mRNA • mRNA的高级结构 • 原核真核生物mRNA对比
第1页/共10页
真核生物中的mRNA 1.mRNA的产生
第2页/共10页
真核生物中的mRNA
第3页/共10页
真核生物中的mRNA
这一5’端帽子是成熟mRNA，运出核孔 所必需的结构，为翻译起始酶eIF4e， 识别mRNA的5’端，提供非常重要信号， 它还能防止RNA5’，端被RNA酶降解， 增加mRNA稳定性，以便与核糖体进行 结合。
• ④原核与真核生物mRNA的结构特点也不同。
第8页/共10页
谢谢观看
第9页/共10页
感谢您的观看！
第10页/共10页
第7页/共10页

实验七 植物mRNA原位杂交技术共28页PPT

实验七 植物mRNA原位杂交技术共28页PPT

21、要知道对妒。——培根 22、业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。——韩愈
23、一切节省，归根到底都归结为时间的节省。——马克思 24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会全部推倒。——莎士比亚
25、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基
谢谢！
实验七 植物mRNA原位杂交技术
11、用道德的示范来造就一个人，显然比用法律来约束他更有价值。—— 希腊
12、法律是无私的，对谁都一视同仁。在每件事上，她都不徇私情。—— 托马斯
13、公正的法律限制不了好的自由，因为好人不会去做法律不允许的事 情。——弗劳德
14、法律是为了保护无辜而制定的。——爱略特 15、像房子一样，法律和法律都是相互依存的。——伯克

mRNA tRNA结构与功能ppt课件

mRNA tRNA结构与功能ppt课件
mRNA、tRNA的结构与功能生物化学教学节段10来自精选课件ppt1
一、mRNA的一级结构
1. 原核生物mRNA的一级结构 (1)多顺反子结构，一条链上有多个编码区
（2）编码序列被插入序列所间隔 （3）整个编码序列区连续编码
精选课件ppt
2
2. 真核生物mRNA的一级结构
5‘帽子结构 5‘非翻译区
编码区 3‘非翻译区 3‘poly（A）尾巴
精选课件ppt
3
真核生物mRNA各部分结 构特点与功能
编码区：加工成熟的mRNA分子已减去内含子，将外显 子连接，可按照三个碱基决定一个氨基酸（密码子）
的原则，指导多肽链的合成。
5‘非翻译区：对翻译过程起到调节作用，包括起始控 制位点和抑制因子结合位点
3‘非翻译区：包括抑制因子的结合位点等
鸟苷酸
GP
GP
通过ppi连接
PP
NP
mRNA5‘端任意核苷酸
NP
通过ppi连接
m7G5’P PP
5’NP
精选课件ppt
M在字母左侧表 示碱基被甲基化
M在字母右侧表 示核糖被甲基化
6
3‘poly（A）结构
与mRNA从细胞核到细胞质的运输有关
与mRNA半衰期有关，新生mRNA的poly （A）较长
精选课件ppt
11
精选课件ppt
4
5‘帽子结构：能够抗5’核酸外 切酶对mRNA的降解作用，维持
mRNA分子的稳定
帽子结构形成方式：甲基化鸟苷酸经ppi与 mRNA5‘末端核苷酸相连
O型：末端核苷酸核糖未甲基化
帽子结构的分类 I型：末端一个核苷酸的核糖甲基化
II型：末端两个个精选核课苷件p酸pt 的核糖甲基化
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人们已利用这种新的技术鉴定了许多功能性 多肽，包括 RNA 结合肽、TNF-α 结合因 子等，建立了以 mRNA 体外展示技术筛选 与抗肿瘤药物的重要靶酶———胸苷酸合 成酶mRNA高度亲和多肽的方讨
Structure of mRNA-linker
体积25ul,其中含10xPCR缓冲液2.5 u凝胶载体上，然后加入 400ul
洗涤5~6遍后，加入洗脱液(无酵母 tRNA) 及
mRNA展示技 术
应用：
CAT(Cambridge Antibody Technology) 应用体外展示技术制备单克隆抗体用于疾 病的治疗：
D2E7 ABT-874 CAT-192and GC1008
CAT-5001 (formerly SS1P)
目前应用的组合多肽/蛋白质库技术包括 噬菌体展示技术(phage display) 酵母双杂交 与核糖体展示技术(ribosome display，RD) mRNA体外展示技术( mRNA display)
基本原理：借助一种蛋白质合成 抑制剂嘌呤霉素(puromycin)来 形成mRNA- 蛋白质融合体，从 而实现基因表型 (RNA)与蛋白质 表型(多肽) 的结合. 嘌呤霉素是 一种模拟子的3’端，当 mRNA 翻译完成时，嘌呤霉素进入核糖 体的 A 位点接纳新生肽，抑制蛋 白质翻译，在多肽与嘌呤霉素的 O- 甲基酪氨酸之间形成稳定的 酰胺键，生成肽酰嘌呤霉素复物， 而使mRNA3 ’端和蛋白质的羧基 端通过嘌呤霉素分子共价地联系 在一起。
DNA展示技术
mRNA体外展示又称mRNA- 蛋白质融合体 展示(mRNA-protein fusion display)，是 近年来发展的一种高效多肽选择技术。 它可以由大容量的多肽库中(1013 ~1015 个分子)获得具有特定生物学功能的多肽分子. 与噬菌体和核糖体展示技术相比，mRNA 体 外展示技术具有多肽库容量大、筛选方法简 便等优点，特别适用于获得小分子功能性多 肽