简述发酵罐连续生产液体菌种工艺(1)

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液体菌种制作规程工艺流程：斜面菌种→初级摇瓶种→二级摇瓶种→发酵罐深层发酵种→接种一、摇瓶种的制作1斜面菌种准备：马铃薯200克（去皮切块煮沸过滤取滤液），蔗糖20克，麸皮30克（煮汁过滤取滤液）二氢钾2克，硫酸镁1克，琼脂20克，VB1 10毫克，水1000毫升。

25度培养7天备用。

2、初级摇瓶制作①配方土豆200克葡萄糖20克酵母膏2克蛋白胨3克磷酸二氢钾2克硫酸镁1克V B110毫克水1000毫升。

（配方2：玉米粉4%，蔗糖3%，麸皮2%，酵母膏0.5%，2氢钾0.25%，硫酸镁0.1%，VB1 0.01%，豆油0.05%）。

②制作：土豆去皮切成薄块，煮沸后保持20分钟，四层纱布过滤后取滤液，补足1000毫升水，称取其他成份，与土豆液充分搅匀然后装入三角瓶。

初级摇瓶采用500ml三角瓶，装入200ml,放入玻璃球5粒（0.5cm 直径）用二层纱布包裹制作棉塞，塞紧棉塞后再用二层纱布外层加报纸做罩，扎紧瓶胫，防止摇动时棉塞活动。

③灭菌：把三角瓶放入立式高压锅，加足水紧好盖，开启放气阀，接通电源，有蒸汽冒出时关闭放气阀，待压力表达到0.05MPa时,断掉电源,打开放气阀,放冷空气至压力表回0，再关闭放气阀，接通电源，当压力表显示0.11 MPa，温度达到121℃后开时计时，保持45min。

断电使其自然降至0.02 MPa时放气归0，趁热微开盖，使剩余蒸汽烘干棉塞，然后出锅降温至25℃即可接种。

④接种：首先，封闭接种室，用开启紫外线灯30分钟，再用臭氧灭菌器灭菌60分钟或用烟雾剂每立方5克熏蒸30分钟，进行接种环境灭菌。

把灭菌后的三角瓶放入超净台（或接种箱）,把斜面母种、工具、酒精灯、75%的酒精棉球瓶同时放入，母种用灭过菌的报纸遮盖，打开紫外线灯和无菌风开关，保持15min后，关闭紫外线灯进行接种。

操作人员应着干净的隔离衣，带好卫生帽、口罩，手洗净，用75%酒精擦拭手、母种试管、工具，点燃酒精灯，灼烧工具及试管口20秒，在严格无菌操作程序下，把斜面菌种切割成0.5厘米小块（不带培养基），移入三角瓶中，使其浮在液面，一般接入5-6块，塞好棉塞，接完后重新封好棉塞罩，放到25℃恒温环境净置培养72小时。

食用菌液体菌种生产方法（发酵罐法）传统菌种生产工艺，一般是由试管母种扩繁成二级种、三级种，生产周期长、污染率高、成本高、需大量人工、管理困难。

液体菌种生产具有纯度高、活力强、繁殖快的特点，接种到培养料内有流动性好、萌发点多，发菌迅速等特种点。

应用于生产与固体菌种相比有以下优点：1．菌种生产周期短。

固体种一般需25—40天，而液体种仅需3—7天。

2．接种后，萌发点多萌发点多、发菌快、出菇周期短。

接种24小时菌丝布满料面，3—15天长满菌袋，一般品种10天左右可出菇。

3．接种方便、成本低。

用液体菌种接种一般每袋成本是1—3分，每人每小时可接800袋以上，提高效益4—5倍。

4．适宜工厂化生产。

可直接用于栽培料进行出菇，大批量生产菌袋。

为食用菌集约化、标准化生产创造了条件。

因此，适宜我国国情的液体菌种设备的出现，必将在食用菌生产领域引发一场新的革命。

液体菌种具有固体（颗粒）菌种无可比拟的优势，但是液体菌种生产设备是近几年刚发展起来并逐渐成熟的，因此很多人对此很陌生。

在这里我们对此进行简单介绍一、液体菌种设备基本原理任何一种食用菌自身的生长必须满足其对温度、湿度、需氧量、养分等的需要，同时必须避免杂菌感染。

在深层发酵技术上称之为选择性发酵技术，如啤酒生产技术当属此例，而白酒生产则是生物菌群发酵技术。

液体菌种发酵设备（包括四大系统，温控系统由控制器、电热管等组成；供气系统由空气压缩机、输送管道、空气过滤器等组成；冷却系统由热交换器、进出水管道组成；搅拌系统由射流器、提升管等组成。

二、液体菌种生产的关键技术1、溶氧量液体菌种生产中最关键的是培养液中氧的溶解量，因为在菌丝生长过程中，必须不断的吸收溶解其中的氧气来维持自身的新陈代谢，氧气在液体（水）中的溶解量与压力、温度有关，同时与培养液的接触面积、渗透压有很大的关系。

因此我们设计发酵设备时有效地解决了这些问题，如安装射流器使气泡细碎度增加等。

2、空气过滤技术的关键就是保证进入的空气无菌度高，因此必须选择孔径小、材料先进的过滤膜。

液体菌肥生产工艺
液体菌肥的生产工艺一般包括以下几个步骤：
1. 菌种培养：选择适合的菌种，进行菌种的培养和繁殖。

常用的菌种有免疫活性菌、氮固定菌、腐生菌等。

2. 发酵培养：将培养好的菌种接种到发酵罐中，添加适当的培养基，控制好温度、酸碱度、通气量等条件，进行真菌发酵培养。

3. 调控发酵过程：根据菌肥生产的需求，可以进行一些调控，如添加适宜的碳源和氮源，调整酸碱度和营养元素等。

4. 发酵液分离：经过一段时间的发酵，菌体和培养液混合在一起。

需要将发酵液分离出来，常用的方法有离心法、滤液法等。

5. 液体菌肥的后处理：将分离出来的发酵液进行适当的处理，如调节一些指标，控制菌体浓度等。

可以根据不同的需求进行进一步的处理，例如添加营养元素、调整PH值等。

6. 包装和贮存：将经过处理的液体菌肥进行包装和贮存。

一般采用塑料瓶等无菌容器进行包装，然后进行密封和贮存。

以上是液体菌肥的一般生产工艺，具体工艺流程可能会因生产厂家和产品类型的不同而有所差异。

液体深层培养方法生产发酵产品主要工艺过程液体深层培养是一种常用的发酵工艺，用于大规模生产各种发酵产品，如酒精、乳酸、酱油等。

它通过在液体培养基中添加适量的发酵菌种，控制温度、氧气供应和pH值等条件，使菌种在液体中快速繁殖和产生目标产物。

液体深层培养的主要工艺过程包括菌种接种、发酵培养、收获和提取等环节。

首先是菌种接种。

选择适宜的菌种，并在无菌条件下将菌种接种到预先配制好的液体培养基中。

菌种接种后，必须严格控制接种量，以确保发酵过程中的菌种数量适宜。

接下来是发酵培养。

在菌种接种后，将培养基装入发酵罐中，并控制好温度、氧气供应和pH值等条件。

温度的控制是非常重要的，不同的菌种对温度有不同的要求。

氧气供应也是必不可少的，因为很多发酵过程需要氧气来进行代谢和生长。

此外，pH值的控制也非常重要，过高或过低的pH值都会对发酵过程产生不利影响。

发酵过程中，菌种会快速繁殖，并在培养基中产生目标产物。

为了保证发酵效果，还需要控制好发酵罐内的搅拌速度和培养基的通气量等参数。

此外，还需要定期对发酵罐进行采样分析，以监测发酵过程中的菌种数量和产物浓度等指标。

当发酵过程达到一定的时间后，就可以进行收获和提取。

收获时，将发酵液从发酵罐中取出，并进行初步的固液分离。

然后，通过离心、过滤、浓缩等步骤，将目标产物从发酵液中提取出来。

最后，对提取得到的产物进行纯化和检测，以确保产品的质量和纯度。

总结起来，液体深层培养方法是一种常用的发酵工艺，它通过在液体培养基中添加适量的菌种，控制好温度、氧气供应和pH值等条件，使菌种在液体中快速繁殖和产生目标产物。

主要的工艺过程包括菌种接种、发酵培养、收获和提取等环节。

通过严格控制这些环节，可以获得高质量的发酵产品。

液体菌种的制作及使用方法液体菌种的制作及使用方法随着食用菌生产的发展,食用菌制种方法在传统固体制作的基础上在不断的改进和提高,其中液体菌种的制作便是其中之一。

液体发酵技术是现代生物技术之一，起源于美国。

它是指在生化反应器中，模仿自然界将食药用菌在生育过程中所必需的糖类、有机和无机含有氮素的化合物、无机盐等一些微量元素以及其它营养物质溶解在水中作为培养基，灭菌后接入菌种，通入无菌空气并加以搅拌，提供食用菌菌体呼吸代谢所需要的氧气，并控制适宜的外界条件，进行菌丝大量培养繁殖的过程。

工业化大规模的发酵培养即为发酵生产，亦称深层培养或沉没培养。

液体菌种由于具有生产规模化、控制自动化、生长无菌化、发菌高速化的生产应用优势,为食用菌产业化的发展提供了良好的种源条件,是食用菌产业化发展的必然方向,已被业内人士所看好。

液体菌种是用液体培养基培养而成的菌种。

近年来，国内外正积极研究液体菌种的培养与利用。

与固体菌种相比，它具有菌种生产周期短、菌龄整齐一致、接种方便、接于固体菌料发酵快、适宜于工厂化生产等优点，因而受到了广大栽培者的欢迎。

目前我国已能进行深层发酵的食用菌有：香菇、平菇、凤尾菇、美味侧耳、鲍鱼菇、金针菇、黑木耳、猴头、草菇、蜜环菌、茯苓、滑菇和冬虫夏草等。

一、液体菌种的培养方法常见的有采用摇床来生产的摇瓶培养法和采用发酵罐来生产的深层培养法。

若少量生产，可以用摇瓶培养法。

深层培养需要一整套工业发酵设备，如锅炉、空气压缩机、空气净化系统、发酵罐等，故投资大，只适用于工厂化的大规模生产。

而摇瓶培养投资少，设备技术简单，适合一般菌种厂生产使用。

本节主要介绍摇瓶培养的技术方法。

1、食用菌液体发酵的培养基根据培养基中组成的不同，可分为天然培养基和合成培养基。

天然培养基的组成均为天然有机物。

合成培养基则是采用—些已知化学成分的营养物质作培养基。

在生产上，还根据工艺将培养基分为孢子培养基、种子培养基及发酵培养基。

但无论如何划分，每一种培养基的组成中都离不开碳、氮、无机盐、微量元素、维生素和生长素等。

秀珍菇液体菌种制备技术一、工艺流程母种→原种（液体摇瓶）→生产种（罐体发酵）→料棒接种二、母种的制备1、母种培养基配方马铃薯（去皮）20％，葡萄糖2％，琼脂2％，水1000毫升，pH值5.5～6。

2、母种的制备及注意事项按配方准确称取原料，加热煮沸最后定容，分装试管，装入量约为试管长度的1／4～1／5，塞好棉塞。

使用高压灭菌锅灭菌，在温度121℃、压力0.11Mpa下灭菌半小时，注意一定要放净高压灭菌锅内的冷空气。

灭菌后，待培养基温度下降至60℃时，将成把的试管摆成斜面。

注意，不要让培养基粘湿棉塞。

要严格按照无菌操作规程进行接种，然后置于恒温箱中25℃左右恒温培养10～15天。

三、原种的制备1、原种培养基配方马铃薯（去皮）２０％、麦麸３％、葡萄糖２％、蛋白胨３‰、磷酸二氢钾２‰、硫酸镁１‰。

2、原种的制备及注意事项马铃薯去皮切片后与麦麸一起煮沸20分钟，过滤定容，加入其它原料，全部溶解后装入三角瓶。

三角瓶在使用前除清洗之外，还要进行空灭，灭菌方法与常规灭菌试管培养基相同。

每个瓶中放入5～10粒玻璃球（直径0.5cm），用棉塞塞紧瓶口，再用牛皮纸包裹后扎紧。

使用高压灭菌锅灭菌，在温度121℃、压力0.11Mpa下灭菌45分钟。

冷却后进行无菌接种，然后置于25℃恒温培养箱中静置培养72小时。

摇床培养时，温度25℃，转速140转/分钟，培养时间72～96小时。

四、生产种的制备1、生产种培养基配方马铃薯（去皮）２０％、麦麸２％、蛋白胨３‰、葡萄糖２％、磷酸二氢钾１‰、硫酸镁0.5‰、石膏0.5‰、琼脂２～３ｇ、酵母膏0.5‰、消泡剂１‰。

2、生产种的制备（1）清洗罐体发酵罐在每次使用后都必须进行彻底的清洗，去除罐内残存的菌球、菌块料液等杂物，保证罐内洁净。

（2）配制原料按照生产种培养基配方准确称取各种原料。

马铃薯去皮切片后与麦麸一起煮沸20分钟，过滤定容，再加入其它原料及消泡剂。

（3）灭菌将盛有培养基质的发酵罐推进灭菌仓，通入蒸汽进行灭菌，控制温度在121℃左右、压力为0.11Mpa，灭菌1个小时。

食用菌液体发酵罐制种技术食用菌制种主要有液体和固体两种制种方式。

液体制种是目前国际上通用的、先进的方法。

液体菌种具有生产周期短、用工成本低、菌丝活力强、接种后萌发吃料快、菌种在培养基中的流动性和分散性好、菌龄一致、出菇整齐、可缩短栽培时间等优点。

在对液体制种与固体制种经济效益分析比较中指出，液体菌种发育时间可以减少24d，接栽培袋菌丝满菌时间缩短约10d，污染率可以降低1.5%，成本利润率可提高42%。

液体菌种作为食用菌基料工厂化生产发展过程中的重要环节，具有重要意义。

而现在食用菌产业受资金和技术的限制，其规模化、工厂化生产仍然以固体菌种为主，液体菌种的应用只有少数较大规模工厂化生产的企业及少数栽培品种工厂化栽培中获得应用，液体菌种的优势完全没有发挥出来。

液体菌种在制作过程中对设备、技术的要求较高，液体菌种发酵罐的操作技术流程复杂，增加了使用者的生产难度。

我们将对食用菌液体菌种发酵罐的生产工艺、操作流程进行技术总结，为食用菌项目的液体菌种提供参考。

1、研发液体菌种发酵罐的构造液体菌种在发酵培养过程中需要充足的氧气，属好氧性发酵。

满足于好氧性发酵的生化反应器主要有两大类即机械搅拌通风发酵罐和气流搅拌发酵罐。

前者利用通风装置和搅拌装置将氧溶入发酵液中，因机械搅拌剪切力而对菌丝产生破坏作用，因此不适于栽培型菌种的应用。

而后者则利用外部供气装置将气体通入发酵罐内形成环流将氧溶入发酵液中，其特点是基质溶液分布均匀、具有较高的溶解氧速率和溶解氧效率、结构简单、易于加工和操作。

而气流搅拌发酵罐的构造主要由电控系统、气体输送系统、发酵培养系统三部分组成。

1.1电控系统。

由控制箱体、微型电脑、集成传感器、报警器、数码显示屏、控制开关等组成，可调控灭菌温度、时间、压力及培养温度等。

1.2气体输送系统。

由无油隔膜泵、气水分离器、空气过滤器、滤芯、止回阀、压力表、硅胶管等组成，可为发酵罐提供纯净、无菌的气源。

1.3发酵培养系统。

液体菌种生产的工艺流程液体菌种与固体菌种在生产工艺流程有着很大的差别，液体菌种对无菌操作要求更严，对技术人员的要求更高。

而且菌龄短、菌龄整齐一致，并且菌种生产量大，可以大规模生产菌种或栽培袋。

液体菌种的生产工艺流程专用试管母种→发酵罐专用母种→发酵罐液体菌种1.专用试管母种生产：液体菌种对试管的纯度要求很高。

生产前,先要将试管种进行纯化,不然很难生产出液体种。

纯化的方法有二种：固体生产法和菌种提纯法。

二者可任选其一。

2.专用母种生产：工艺流程培养基的配制→装瓶→灭菌→接试管种→专用母种专用母种分固体和液体两种。

从生产技术上看，液体专用母种要难一些，是用电磁搅拌器（当然也可以用摇瓶机）进行生产。

整个过程要3-5天时间，生产的液体种稍经加工就可以直接使用。

固体种生产时间要长些，约20天，保存的时间也长，运输方便。

二者的接种效果都是一样的。

3.发酵罐生产：工艺流程空气压缩→过滤↓配料→装罐→灭菌→冷却→接种→培养→液体种↑试管斜面种→三角瓶液体专用母种生产时要先进行培养料的配制。

配料时先将土豆去皮切片，与麸皮混合后用不锈钢锅煮后取汁，再将辅料KH2PO4、MgSO4等溶入，混匀后装入罐中加热，至125℃并维持40分钟左右进行灭菌，灭菌结束后用冷水冷却至培养温度，而后将并瓶后的三角瓶专用母种接上进行培养，培养时根据不同的菌种，设定适宜的温度。

培养期间应注意观察，并做好记录。

包括温度、压力、气流量、排出气体的气味等。

如遇到停电，排气阀自动关闭或人工关闭来保持罐中处于正压状态。

来电后重新启动，并打开排气阀继续培养。

培养过程中，可随时无菌操作采样分析，几天后待菌球密度合适（从视镜观察）即可接种。