植物组织中碳水化合物含量的测定(Somogyi法)
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食品中一般成分分析—碳水化合物的测定
3.过剩的澄清剂应不干扰后续的分析操作，或易于除去。
.
提取液的澄清
常用澄清剂：
1.中性醋酸铅：这是最常用的一种澄清剂。铅离子能与很多离子结
合，生成难溶沉淀物，同时吸附除去部分杂质，它能除去蛋白质、果
胶、有机酸、单宁等杂质。它的作用可靠，不会沉淀样液中的还原糖。
在室温下也不会形成铅糖化合物，因此适用于测定还原糖的样液的澄
还原糖的测定方法很多，其中最
常用的有直接滴定法、高锰酸钾滴
定法、铁氰化钾法、碘量法、比色
法及酶法等。
我们以常用的直接滴定法为例来
介绍。
.
Part 01
原理
滴定原理
各步反应方程式如下：
滴定原理
各步反应方程式如下：
Part 02
试剂
滴定试剂
碱性酒石酸铜甲液：称取15.00g硫酸铜及0.05g次甲基蓝，
在提取液中，除含有单糖和低聚糖等可溶性糖类外，还不同程
度的含有一些影响测定的杂质，如色素、蛋白质、可溶性果胶、
可溶性淀粉、有机酸、氨基酸、单宁等。澄清剂的作用是除去一
些影响糖类测定的干扰物质。
.
提取液的澄清
糖类澄清剂的要求：
1.能较完全的除去干扰物质；
2.不吸附或沉淀被测糖分，也不改变被测糖分的理化性质；
试纸测试使其pH约为7。
操作方法
然后加入20mL 200g/L中性乙酸铅溶液，摇匀，静置10min，以沉淀蛋
白质、果胶等杂质。再加入20mL 100g/L的硫酸钠溶液，以除去过多的铅
离子。摇匀后用水转移到500mL容量瓶中，加水定容。过滤，弃去初滤液，
收集滤液备用。
另取100mL水和30mL6mol/LHCL于250mL锥形瓶中，按上述方法操作，
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提取液的澄清
常用澄清剂：
1.中性醋酸铅：这是最常用的一种澄清剂。铅离子能与很多离子结
合，生成难溶沉淀物，同时吸附除去部分杂质，它能除去蛋白质、果
胶、有机酸、单宁等杂质。它的作用可靠，不会沉淀样液中的还原糖。
在室温下也不会形成铅糖化合物，因此适用于测定还原糖的样液的澄
还原糖的测定方法很多，其中最
常用的有直接滴定法、高锰酸钾滴
定法、铁氰化钾法、碘量法、比色
法及酶法等。
我们以常用的直接滴定法为例来
介绍。
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Part 01
原理
滴定原理
各步反应方程式如下：
滴定原理
各步反应方程式如下：
Part 02
试剂
滴定试剂
碱性酒石酸铜甲液：称取15.00g硫酸铜及0.05g次甲基蓝，
在提取液中，除含有单糖和低聚糖等可溶性糖类外，还不同程
度的含有一些影响测定的杂质，如色素、蛋白质、可溶性果胶、
可溶性淀粉、有机酸、氨基酸、单宁等。澄清剂的作用是除去一
些影响糖类测定的干扰物质。
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提取液的澄清
糖类澄清剂的要求：
1.能较完全的除去干扰物质；
2.不吸附或沉淀被测糖分，也不改变被测糖分的理化性质；
试纸测试使其pH约为7。
操作方法
然后加入20mL 200g/L中性乙酸铅溶液，摇匀，静置10min，以沉淀蛋
白质、果胶等杂质。再加入20mL 100g/L的硫酸钠溶液，以除去过多的铅
离子。摇匀后用水转移到500mL容量瓶中，加水定容。过滤，弃去初滤液，
收集滤液备用。
另取100mL水和30mL6mol/LHCL于250mL锥形瓶中，按上述方法操作，
碳水化合物的测定 测定方法概述
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四、直接滴定法测定还原糖
1、原理 （GB/T5009.7-1985)
斐林试剂甲液（CuSO4· 5H2O+亚甲基蓝），斐林试剂乙液（酒 石酸钾钠+NaOH+亚铁氰化钾，混合→酒石酸钾钠合铜，酒 石酸钾钠合铜+葡萄糖→葡萄糖酸 + Cu2O↓(红棕)，亚铁氰 化钾使Cu2O↓（红棕）生成无色络合物K2Cu2Fe(CN)6。
第九章 碳水化合物的测定
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• • • • • • • • Nhomakorabea• • •
一、 测定方法概述
物理法（密度法、折光法、旋光法） 还原糖法（蓝爱农法、直接滴定法、 高锰酸钾法、斐林氏法、 单糖 铁氰化钾法、二硝基水杨酸比色法） 低聚糖 碘量法 (测定醛糖） 色谱法 气相色谱法 液相色谱法 酶法 葡萄糖氧化酶→葡萄糖 β—半乳糖脱氢酶→半乳糖、乳糖
• ②预测： 吸取甲、乙液各5.00mL，加水10mL， 2min内△至沸，准确沸腾30s，用样液滴定至蓝色 褪去，记录V样液预测 • ③测定： 吸取甲、乙液各5.00mL，加入预测样液 V少1mL样液，△，2min内沸腾，准确沸腾30s， 继续滴定至蓝色褪去，记下V2
• 3、计算
F • 还原糖 % = --------------------×100 • ( V2/V ) × m • F---- 10mL斐林试剂相当于葡萄糖质量， mg • V2----消耗样液的体积，ml • V----样液定溶的总体积，ml • M----样品的质量，mg
• 3、计算
• F • 还原糖 % = --------------------- ×100 • ( V1/V ) × m
• m--样品质量，mg；V1--滴定量mL；V--样液总mL； • F--还原糖因素，10mL费林试剂，相当的还原糖量 mg • F的求得有两种方法： • A、用标准还原糖液用上面同样方法标定10ml费林试 剂求得。 • B、查蓝—爱农法专用“还原糖因数表”附表 • 例 若V1=26 则F=49.9
碳水化合物的测定(ppt 87页)
2．适用范围及特点
• 本法适用于谷物及其制品、饲料、果蔬 等样品，对于蛋白质、淀粉含量高的样 品，易形成大量泡沫，粘度大，过滤困 难，使此法应用受到限制。
7·说明与讨论
• (1)中性洗涤纤维相当于植物细胞壁，它 包括了样品中全部的纤维素、半纤维素、 木质素、角质，因为这些成分是膳食纤 维中不溶于水的部分，故又称为“不溶 性膳食纤维”。
食品中碳水化合物存在的形式
• 动物性食品：葡萄糖、糖元、肌糖元、 肝糖元。
• 测定意义：对动物屠宰有意义，影响pH
• 植物性食品：多样化，淀粉、纤维素、 果胶等。
• 测定意义：营养、加工、质量指标等
食品中碳水化合物的作用
• ������ 提供人类能量的绝大部分 • ������ 提供适宜的质地、口感和甜味 （如麦芽糊精作增稠剂、稳定剂） • ������ 有利于肠道蠕动，促进消化 （如纤维素被称为膳食纤维，低聚糖可促
分子杂质。 1.2 提取液的纯化：加沉淀剂 • 对沉淀试剂的要求：a 较完全地除去干扰
物质；b 不影响糖分的测定 • 常用沉淀剂：中性醋酸铅、乙酸铅和亚
铁氰化钾溶液、硫酸铜和氢氧化钠溶液
第一节 可溶性糖类的测定
2 糖的转化： • 测还原糖，不必转化 • 测可溶性糖：还原糖法，先水解转化
缩合反应法，不必转化
高锰酸钾滴定法
• 适用范围及特点 • 国家标准分析方法之一。 • 不受色素的干扰，准确度和重现性好。 • 但，操作费时，需使用特制的高锰酸钾
法糖类检索表。
二、还原糖的测定
3 其它方法 • 3.1 萨氏(Somogyi,1933)法：微量法 • 3.2 碘量法(1918)：测醛糖 • 3.3 蓝-爱农(Lane-Eynon)法：国际上常用。 • 3.4 3,5-二硝基水杨酸比色法(1922)：快速 • 3.5 半胱氨酸-咔唑法：测定果糖。
实验1 植物组织中几种重要碳水化合物
实验1 植物组织中几种重要碳水化合物实验1 植物组织中几种重要碳水化合物的分组分离及其测定一、植物组织中几种重要碳水化合物的分组分离植物体内的碳水化合物按照化学性质，可分为单糖、寡糖和多糖三大类，每一类中又可分为若干种，其生理作用各不相同。
测定时按照测定目的不同可分类提取，分别测定。
常用的分离提取方法是根据各种碳水化合物在乙醇和水中的溶解度不同，以及水解的难易加以区别。
这种方法在一般的营养状况研究中经常采用。
当需要对每一种糖进行分离鉴定时，则必须利用更加精密的分离方法，如纸层析分离法或直接在纸谱上显色，利用光密度计鉴定。
现代的高效液相色谱分析更是进行碳水化合物分离鉴定的有效手段。
本实验只介绍常规的分离方法。
原理碳水化合物中的单糖及寡糖易溶于水及乙醇，而糊精、果聚糖等多糖可溶于水但不溶于乙醇；淀粉不溶于冷水，但经加热糊化后亦可部分溶于水中，半纤维素不溶于热水，但可用稀酸水解，纤维素则只可用浓硫酸方可水解，故可用不同方法提取植物样品以测定不同类型的碳水化合物。
可溶性糖（单糖、寡糖）一般用82%乙醇提取，其残渣经40℃～50℃热水提取，可测定其中的糊精、果聚糖（葡糖）等水溶性多糖。
剩余部分有淀粉、半纤维及纤维素，其中淀粉可用淀粉酶水解，也可用过氯酸提取，残渣用2%的盐酸加热水解，以测定半纤维素，而纤维素则用80%的浓硫酸溶解，分别测定各级提取液及水解液，即可求出各种类型碳水化合物的含量。
方法（一）样品的预处理测定碳水化合物的含量可用新鲜样品或烘干样品。
其原则是，从取样至样品完全杀死以前，尽量减少植物体内碳水化合物的含量及种类的变化。
当用于样品分析时，应迅速将样品放在105℃烘箱中20分钟左右，将细胞杀死，然后在80℃下烘干。
幼嫩材料含单糖多的，烘干温度过高糖易焦化，最好在60℃下，用真空干燥箱烘干。
样品烘干后，用粉碎机粉碎，全部通过60目筛，即可作为分析样品。
如用鲜样品直接分析，应取剪碎的新鲜材料二份，准确称重，一份放入105℃烘箱中，烘至恒重，测其含水量，以求得供试材料的干重，另一份立即投入几乎沸腾的95%乙醇中，以停止酶的活动，乙醇的用量应使加入植物材料后，其浓度不低于80%，如此固定的材料也可长期保存。
碳水化合物的测定
成的多糖；
异多糖（杂聚糖）：由多种不同的单糖构成 的多糖。
多糖没有均匀一致的聚合度。 多糖间、同一多糖的不同位点间具有多种次级
键键合作用；
多糖又能与水、离子和其它小分子相互作用；
所以使多糖的结构具有很强的不确定性，
并可形成多种构象。
Cellulose(纤维素）
Polymer of b-D-Glucose (1, 4) linkage.
无色
＋ HCl N+(CH3)2
为消除氧化亚铜沉淀对滴定终点观察的干扰，在碱 性酒石酸铜乙液中加入了少量亚铁氰化钾（1、为消除沉 淀时滴定终点的干扰，2、澄清剂），使之与氧化亚铜生 成可溶性的络合物，而不再析出红色沉淀，消除沉淀对 滴定终点的干扰。 Cu2O+K4Fe(CN)6+H2O K2Cu2Fe(CN)6 +2KOH
Melbiose
Sucrose Moiet y
Stachyose(水苏糖）
• 6-0-α-D-Galactopyranosyl-6-0-α-D-Galactopyranosyl -2-0α-D-Glucopyranosyl-β-D-Fructofuranoside • “Flatulence Factor”
一、定义和分类 碳水化合物统称为糖类，是由碳、氢、氧三种 元素组成的一类多羟基醛（酮）以及能水解产生这 类物质的某些其衍生物及其缩合物的总称。 ① 碳水化合物存在于各种食品的原料中（特别是植 物性原料中）。 ② 作为食品工业的主要原料和辅助材料。
③ 在各种食品中存在形式和含量不一。 糖分为单糖、低聚糖、多糖。 有效碳水化合物——人体能消化利用的单糖、双糖、 多糖中的淀粉。
O O
Cu+2H2O
碳水化合物的测定
第八章碳水化合物的测定●碳水化合物在植物界分布很广，种类很多，谷类食物和水果、蔬菜的主要组分就是carb，（合理膳食组成中，碳水化合物应占其总热能的50—70%。
但不大于70%，其中食糖的热能不能超过15%）●一、表示方法：食品中carb含量通常以总碳水化合物或无氮抽出物来表示：●无氮抽出物：是指不包括粗纤维在内的总碳水化合物，主要是指淀粉、糖原和糊等。
●总碳水化合物（%）=100-（水分%+粗蛋白质%+粗灰分%+粗脂肪%）●无氮抽出物（%）=总carb-粗纤维%=100-（水分+粗蛋白质+粗灰分+粗脂肪+粗纤维% ●总碳水化合物：有效碳水化合物：单糖、低聚糖、糊精、淀粉、糖原●无效碳水化合物：（膳食纤维）指人们的消化系统或消化系统中的酶不能消化分解、吸收的物质。
主要指果胶、半纤维素、纤维素、木质素。
但能促进肠道蠕动，改善消化系统机能，对维持人体健康有重要作用，人们膳食中不可缺少,防治肠道疾病。
●常见单糖：D——葡萄糖和D——果糖是指用水解法不能加以分解的Carb.●低聚糖：蔗糖、乳糖、麦芽糖和棉子糖●多糖：淀粉、纤维、果胶●二、糖类的提取与澄清：●糖类：可溶性的游离态单糖和低聚糖总称糖类，葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖等●1、常见提取剂；(提取糖类时，一般须先将样品磨碎浸渍成溶液，再用石油醚提取除去其中的脂类和叶绿素。
)● a.水作提取剂：温度40--50 ℃，可提可溶性淀粉及糊精。
为了防止糖类被酶水解，加入HgCL2。
● b.乙醇水溶液：糖类在乙醇溶液中具有一定的溶解度，可避免糖类被酶水解。
●2、澄清剂：●①澄清剂作用：是沉淀一些干扰物质，防止干扰物质影响糖类的测定。
干扰物质存在将影响分析结果，常见干扰物质有pro.Aa多糖及色素等。
糖及糖制品，水果制品通常用水作提取剂。
●②澄清剂的要求（1）能较完全除去干扰物质（2）不会吸附或沉淀被测糖类（3）不会改变糖类的（比旋光度等）理化性质（4）过剩的澄清剂应不干扰后面的分析操作或易于除掉。
碳水化合物的测定方法
三、碳水化合物的测定1.还原糖含量测定（1）高锰酸钾滴定法○1.原理样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐（碱性酒石酸铜）还原为氧化亚铜，加硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量，再查表得还原糖量。
○2.适用范围GB5009.7-85，本法适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的测定。
○3.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
4.1 6mol/L盐酸：量取50ml盐酸加水稀释至100 ml。
4.2 甲基红指示剂：称取10mg甲基红，用100ml乙醇溶解。
4.3 5 mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠加水溶解并稀释至100ml。
4.4 碱性酒石酸铜甲液：称取34.639g硫酸铜（CuSO4·5H2O），加适量水溶解，加0.5ml硫酸再加水稀释至500ml，用精制石棉过滤。
4.5 碱性酒石酸铜乙液：称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠，加适量水溶解，并稀释至500ml，用精制石棉过滤，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
4.6 精制石棉：取石棉先用3mol/L盐酸浸泡2～3天，用水洗净，再加2.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡2～3天，倾去溶液，再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时，用水洗净。
再以3mol/L盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。
然后加水振摇，使成微细的浆状软县委，用水浸泡并贮存于玻璃瓶中，即可用做填充古氏坩埚用。
4.7 0.1000mol/L高锰酸钾标准溶液。
4.8 1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠，加水溶解并稀释至100ml。
4.9 硫酸铁溶液：称取50g硫酸铁，加入200ml水溶解后，慢慢加入100ml 硫酸，冷却后加水稀释至1L。
4.10 3mol/L盐酸：量取30ml盐酸，加水稀释至120ml。
（2）直接滴定法○1.原理样品经除去蛋白质后，在加热条件下，直接滴定已标定过的费林氏液，费林氏液被还原析出氧化亚铜后，过量的还原糖立即将次甲基蓝还原，使蓝色褪色。
第11章碳水化合物的测定研究报告
⑥样品溶液预测的目的；一是本法对样品溶液 中还原糖浓度有一定要求(0.1%左右)，测定时 样品溶液的消耗体积应与标定葡萄糖标准溶液 时消耗的体积相近，通过预测可了解样品溶液 浓度是否合适，浓度过大或过小应加以调整， 使预测时消耗样液量在 10 ml 左右；
二是通过预测可知道样液大概消耗量，以便在正 式测定时，预先加入比实际用量少 1 ml 左右的 样液，只留下 1 ml 左右样液在续滴定时加入， 以保证在 1 分钟内完成续滴定工作，提高测定 的准确度。
这种沉淀与亚铁氰化钾络合成可溶的无色络合 物；二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲 基蓝还原，溶液由兰色变为无色，即为滴定终点；
根据样液消耗量可计算出还原糖含量。
Cu2+ + 还原糖
Cu+
2. 计算还原糖的量有两种方法： （1）用已知浓度的葡萄糖标准溶液标定的方 法。 （2）利用通过实验编制出的还原糖检索表来计
⑵ 含脂肪的食品，须经脱脂后再用水提取。
⑶ 含有大量淀粉、糊精及蛋白质的食品，用 乙醇溶液提取。
⑷ 含酒精和二氧化碳的液体样品，应先除酒 精、CO2。
⑸ 提取过程如用水提取，还要加入HgCl2, 防低聚糖被酶水解。
二、 提取液的澄清
1. 常用澄清剂要符合二点要求（P128）。 2. 常用澄清剂的种类
2Cu+ + I2 = 2Cu2+ +2 I-
I2 + 2 Na2S2O3 = Na2S4O6 + 2 NaI
四、其他方法简介 1. 碘量法
(1) 原理
样品经处理后，取一定量样液于碘量瓶中， 加入一定量过量的碘液和过量的氢氧化钠溶液， 样液中的醛糖在碱性条件下被碘氧化为醛糖酸钠， 由于反应液中碘和氢氧化钠都是过量的，两者作 用生成次碘酸钠残留在反应液中，当加入盐酸使 反应液呈酸性时，析出碘，用硫代硫酸钠标准溶 液滴定析出的碘，则可计算出氧化醛糖消耗的碘
二是通过预测可知道样液大概消耗量，以便在正 式测定时，预先加入比实际用量少 1 ml 左右的 样液，只留下 1 ml 左右样液在续滴定时加入， 以保证在 1 分钟内完成续滴定工作，提高测定 的准确度。
这种沉淀与亚铁氰化钾络合成可溶的无色络合 物；二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲 基蓝还原，溶液由兰色变为无色，即为滴定终点；
根据样液消耗量可计算出还原糖含量。
Cu2+ + 还原糖
Cu+
2. 计算还原糖的量有两种方法： （1）用已知浓度的葡萄糖标准溶液标定的方 法。 （2）利用通过实验编制出的还原糖检索表来计
⑵ 含脂肪的食品，须经脱脂后再用水提取。
⑶ 含有大量淀粉、糊精及蛋白质的食品，用 乙醇溶液提取。
⑷ 含酒精和二氧化碳的液体样品，应先除酒 精、CO2。
⑸ 提取过程如用水提取，还要加入HgCl2, 防低聚糖被酶水解。
二、 提取液的澄清
1. 常用澄清剂要符合二点要求（P128）。 2. 常用澄清剂的种类
2Cu+ + I2 = 2Cu2+ +2 I-
I2 + 2 Na2S2O3 = Na2S4O6 + 2 NaI
四、其他方法简介 1. 碘量法
(1) 原理
样品经处理后，取一定量样液于碘量瓶中， 加入一定量过量的碘液和过量的氢氧化钠溶液， 样液中的醛糖在碱性条件下被碘氧化为醛糖酸钠， 由于反应液中碘和氢氧化钠都是过量的，两者作 用生成次碘酸钠残留在反应液中，当加入盐酸使 反应液呈酸性时，析出碘，用硫代硫酸钠标准溶 液滴定析出的碘，则可计算出氧化醛糖消耗的碘
碳水化合物含量的检测
Cu2+ + 还原糖
Cu2O
Cu2O+K4Fe(CN)6+H2O═K2Cu2Fe(CN)6+2KOH
（2）适用范围及特点
本法又称快速法，它是在蓝一爱侬法基础上 发展起来的，其特点是试剂用量少，操作和计算 都比较简便、快速，滴定终点明显。 适用于各类食品中还原糖的测定。但测定酱 油、深色果汁等样品时，因色素干扰，滴定终点 常常模糊不清，影响准确性。
ⅱ.
样品溶液测定
吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液各 5.00 mL，置 于250 mL 锥形瓶中,加水10mL, 加玻璃珠2粒， 从滴定管中加入比预测时样品溶液消耗总体积少 1 mL的样品溶液，加热使其在2分钟内沸腾，准 确沸腾30秒钟，趁沸以每2秒1滴的速度继续滴加 样液，直至蓝色刚好褪去为终点。 记录消耗样品溶液的总体积。同法平行操作3份， 取平均值。
（6）说明与讨论
① 此法测得的是总还原糖含量。 ② 在样品处理时，不能用铜盐作为澄清剂，以免样液中 引入Cu2+，得到错误的结果。 ③ 碱性酒石酸铜甲液和乙液应分别贮存，用时才混合。 ④ 滴定必须在沸腾条件下进行，其原因一是可以加快还 原糖与Cu2+的反应速度；二是次甲基蓝变色反应是可逆 的，还原型次甲基蓝遇空气中氧时又会被氧化为氧化 型。此外，氧化亚铜也极不稳定，易被空气中氧所氧 化。保持反应液沸腾可防止空气进入，避免次甲基蓝 和氧化亚铜被氧化而增加耗糖量。
I2 + 2 Na2S2O3 = Na2S4O6 + 2 NaI
(2)适用范围及特点
该法又称Somogyi法，是一种微量法，检出量为 0.015-3mg。灵敏度高，重现性好，结果准确可靠。 因样液用量少，可用于生物材料或经过层析处理后 的微量样品的测定。终点清晰，有色样液不受限制。
碳水1化合物计数法ppt课件
物5g，蛋白质1～3g，热量 种类
名称
1份可食量 蛋白质 （g） （g）
25Kcal）
莴苣叶、油麦菜、鸡毛菜、青椒、 100 南瓜、红辣椒
1
深色蔬菜 浅色蔬菜
芥兰菜、空心菜、韭菜、茼蒿菜、 100
2
芦笋、马兰头、菜节、塔菜、萝
卜缨、胡萝卜、番茄、紫色甘蓝、
芥菜
芹菜叶、菠菜、苜蓿、西兰花、 100
3
冬苋菜
柿子（90）
80
桂圆（鲜）、荔枝（120）
90
石榴（170）
100
香梨（125）、黄桃（115）、国光 110
苹果（145）、黄香蕉苹果（125）
柑（170）、桃（150）
130
橙（190）
140
菠萝（230）、芦柑（200）、鸭 150
梨 （ 180 ） 、 红 富 士 苹 果 （ 170 ） 、
饱和脂肪酸
牛油
5
猪油、蛋黄酱、椰子油 5
色拉酱 奶油奶酪
10
1汤
匙
12
鲜奶油
15
坚果种类类（热食量物名4称 5kc可a食l量（脂克）肪5克备）注
含脂肪5克（含不饱 腰果
7
和脂肪酸）
杏仁
10
5粒 17粒
开心果
7
8粒
小核桃仁
10
1汤匙Biblioteka 核桃仁（胡桃）83粒
花生仁
10
12粒
花生酱
8
榛子（炒）
10
4粒
松子（炒）
家禽类
食物名称
家禽类 可 食 量 （ 克 ）备注
土鸡（50）、乌骨鸡（60）、
30
母鸡（45）、鸡爪（50）、烤鸡（40） 30
碳水化合物的分析检验
乙醇作提取液还可避免糖被酶水解。
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1.3 可溶性糖类的提取和澄清
(1) 提取液的制备
提取液的制备方法要根据样的性状而定，但应 遵循以下原则：
①取样量和稀释倍数的确定，要考虑所采用的 分析方法的检测范围。一般提取经净化和可能的 转化后，每毫升含糖量应在0.5－3.5mg之间， 提取10克含糖2%的样品可在100毫升容量瓶中 进行；而对于含糖较高的食品，可取5－10克样 品于250毫升容量瓶中进行提取。
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澄清剂的使用
❖ 澄清剂的种类很多，性能也各不相同，应根据提取液的性质
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②含脂肪的食品，如乳酪， 巧克力，蛋黄酱 及蛋白杏仁糖等，通常需经脱脂后再以水进行 提取。一般以石油醚处理一次或几次，必要时 可以加热。每次处理后，倾去石油醚层（如分 层不好，可以进行离心分离），然后用水提取 。
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③ 含大量淀粉和糊精的食品，如粮谷制品，某些 蔬菜，调味品，用水提取会使部分淀粉，糊精溶出， 影响测定，同时过滤也困难，为此，宜采用乙醇溶 液提取。乙醇溶液的浓度应高到足以使淀粉和糊精 沉淀，通常用70－75%的乙醇溶液。若样品含水量 较高，混合后的最终浓度应控制在上述范围内。提 取时可加热回流，然后冷却并离心，倾出上清液， 如此提取2－3次，合并提取液，蒸发除去乙醇。用 乙醇溶液作提取剂时，提取液不用除蛋白质，因为 蛋白质不会溶解出来。
碳水化合物的测定
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一、概述 二、糖类的提取与澄清 三、食品中还原糖的测定 四、蔗糖和总糖的测定 五、淀粉的测定 六、纤维素的测定 七、糖化力的检验
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【引入新课】
❖ 碳水化合物是生物界三大物质之一，是自然界分布广泛、数量 最多的有机化合物，是食品的主要组成分之一 。 ❖ 19世纪，化学家测定碳水化合物的组成，发现碳水化合物中含 有一定比率的碳、氢、氧元素，并且符合Cm（H2O）n的结构，因此 认为是碳和水化合而成，故取名为碳水化合物。 ❖ 进一步研究发现，有些符合这个结构式的化合物不是碳水化合 物，如甲醛（CH2O）,乙酸（C2H4O2），乳酸（C3H6O3），而有些碳 水化合物却不符合这一结构式如脱氧核糖（C5H10O4），鼠李糖 （C6H12O5）， 有些碳水化合物还含有氮、硫、磷等成分。
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1.3 可溶性糖类的提取和澄清
(1) 提取液的制备
提取液的制备方法要根据样的性状而定，但应 遵循以下原则：
①取样量和稀释倍数的确定，要考虑所采用的 分析方法的检测范围。一般提取经净化和可能的 转化后，每毫升含糖量应在0.5－3.5mg之间， 提取10克含糖2%的样品可在100毫升容量瓶中 进行；而对于含糖较高的食品，可取5－10克样 品于250毫升容量瓶中进行提取。
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澄清剂的使用
❖ 澄清剂的种类很多，性能也各不相同，应根据提取液的性质
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②含脂肪的食品，如乳酪， 巧克力，蛋黄酱 及蛋白杏仁糖等，通常需经脱脂后再以水进行 提取。一般以石油醚处理一次或几次，必要时 可以加热。每次处理后，倾去石油醚层（如分 层不好，可以进行离心分离），然后用水提取 。
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③ 含大量淀粉和糊精的食品，如粮谷制品，某些 蔬菜，调味品，用水提取会使部分淀粉，糊精溶出， 影响测定，同时过滤也困难，为此，宜采用乙醇溶 液提取。乙醇溶液的浓度应高到足以使淀粉和糊精 沉淀，通常用70－75%的乙醇溶液。若样品含水量 较高，混合后的最终浓度应控制在上述范围内。提 取时可加热回流，然后冷却并离心，倾出上清液， 如此提取2－3次，合并提取液，蒸发除去乙醇。用 乙醇溶液作提取剂时，提取液不用除蛋白质，因为 蛋白质不会溶解出来。
碳水化合物的测定
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一、概述 二、糖类的提取与澄清 三、食品中还原糖的测定 四、蔗糖和总糖的测定 五、淀粉的测定 六、纤维素的测定 七、糖化力的检验
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【引入新课】
❖ 碳水化合物是生物界三大物质之一，是自然界分布广泛、数量 最多的有机化合物，是食品的主要组成分之一 。 ❖ 19世纪，化学家测定碳水化合物的组成，发现碳水化合物中含 有一定比率的碳、氢、氧元素，并且符合Cm（H2O）n的结构，因此 认为是碳和水化合而成，故取名为碳水化合物。 ❖ 进一步研究发现，有些符合这个结构式的化合物不是碳水化合 物，如甲醛（CH2O）,乙酸（C2H4O2），乳酸（C3H6O3），而有些碳 水化合物却不符合这一结构式如脱氧核糖（C5H10O4），鼠李糖 （C6H12O5）， 有些碳水化合物还含有氮、硫、磷等成分。
植物叶片干样碳水化合物测定_概述说明
植物叶片干样碳水化合物测定概述说明1. 引言1.1 概述植物叶片干样碳水化合物测定是一种常用的研究方法，用于评估植物的生长状况、光合作用效率和营养状态等。
干样碳水化合物主要包括淀粉、蔗糖和纤维素等，它们在植物的能量代谢和生理功能中起着重要作用。
因此，准确测定植物叶片干样碳水化合物的含量对于了解植物生长发育以及其对环境变化的响应机制具有重要意义。
1.2 文章结构本文将依次介绍三种常用的植物叶片干样碳水化合物测定方法：方法一、方法二和方法三。
这些方法基于不同的原理和操作步骤，适用于不同类型的植物材料。
通过比较和分析这些方法的优缺点，读者可以根据自己研究需要选择最适合的测定方法。
1.3 目的本文旨在系统地介绍植物叶片干样碳水化合物测定的各种方法，并对这些方法进行评估和比较。
我们希望通过这篇文章，能帮助读者了解植物叶片干样碳水化合物测定的基本原理和步骤，提供可靠和准确的实验指导，以促进该领域的研究工作和进一步的探索。
以上是本文“1. 引言”部分的内容，介绍了植物叶片干样碳水化合物测定的概述、文章结构和目的。
下面将在正文部分详细介绍三种常用的测定方法。
2. 正文：2.1 植物叶片干样碳水化合物测定方法一植物叶片干样碳水化合物的测定是一个重要的实验步骤，可以用于评估植物的生长和营养状况。
因此，本文介绍了一种常用的测定方法。
首先，收集所需的植物叶片样品。
可以选择健康的、代表性的叶片作为样品，并确保将其彻底清洁和干燥。
将收集到的叶片样品研磨成粉末状，可以使用通用的离心机或其他适当的设备完成这个步骤。
然后，在一个标准试管中取约0.1克左右的叶粉，并加入适量的提取液。
常用的提取液包括乙醇、丙酮或二甲基亚砜等。
加入提取液后，使用振荡器或其他适当设备使悬浮液均匀混合。
接下来，将含有混合悬浮液的试管置于离心机中，并进行高速离心。
离心过程会使混合物分层，产生上清液和沉淀。
取出上清液并放入干燥皿中，然后使用旋风干燥器或其他适当的设备将其蒸发干燥。
碳水化合物的检测与含量
碳水化合物的检测与含量碳水化合物是人体必需的主要营养物质之一，它们在人体内能够提供大量的能量。
然而，过多的碳水化合物摄入可能会导致肥胖和糖尿病等健康问题。
因此，了解食物中的碳水化合物含量对于维持健康的饮食非常重要。
要了解食物中的碳水化合物含量，我们可以通过检测食物中的糖分、淀粉和纤维含量来实现。
首先，糖分是食物中最简单的碳水化合物形式之一，可以迅速提供能量，但过多的糖分摄入可能会导致血糖反应不佳。
通过测量食物中的糖分含量，我们可以了解食物是否含有过多的糖分。
其次，淀粉是一种复杂的碳水化合物形式，它在体内会逐步分解为葡萄糖，供给身体所需的能量。
检测食物中的淀粉含量有助于我们了解食物对血糖的影响程度。
例如，白米饭和全麦面包的淀粉含量差异很大，全麦面包的含量更低，更适合糖尿病患者和想要控制血糖的人群。
此外，纤维是一种特殊的碳水化合物，它在人体内无法被消化吸收。
纤维可以帮助清除肠道垃圾，促进肠道蠕动，维持肠道健康。
通过检测食物中的纤维含量，我们可以了解食物对于肠道健康的贡献。
许多水果、蔬菜和全谷类食物富含纤维，是良好的纤维来源。
为了检测碳水化合物的含量，我们可以使用多种方法。
其中一种常用的方法是采用化学分析技术，如高效液相色谱法或气相色谱法。
这些方法可以准确测量食物中的糖分和淀粉含量。
此外，近年来随着生物技术的发展，一些更先进的方法也逐渐应用于食物中碳水化合物的检测，例如基于DNA技术的PCR方法。
另外，我们也可以借助食品营养成分数据库来了解食物中碳水化合物的含量。
这些数据库中收录了大量食物的碳水化合物含量数据，我们可以通过查询来了解特定食物的含量。
这对于日常饮食的规划非常有帮助。
总之，在现代社会，人们越来越关注碳水化合物的摄入量。
科学准确地检测食物中的碳水化合物含量有助于我们制定健康的饮食计划，并避免因过多或不足摄入碳水化合物而导致的健康问题。
了解食物中的糖分、淀粉和纤维含量，不仅有助于控制血糖、维持健康体重，还有益于肠道健康。
somogyi-nelson比色法测定范围
Somogyi-Nelson比色法是一种常用的生化分析方法，用于测定碳水化合物的浓度范围。
该方法基于还原砷酸钠和硫酸铜在强酸性条件下的氧化还原反应，通过光度计测定在试样中生成的砷蓝色复合物的吸光度，从而确定碳水化合物的浓度。
在使用Somogyi-Nelson比色法测定范围时，需要注意以下几点：1.试剂准备在进行Somogyi-Nelson比色法测定时，首先需要准备好一系列试剂。
这些试剂包括还原砷酸钠溶液、硫酸铜溶液、试样处理溶液和砷酸钠处理溶液等。
其中，还原砷酸钠溶液和硫酸铜溶液是构成反应体系的重要试剂，其质量和浓度直接影响着测定结果的准确性和可靠性。
2.反应条件Somogyi-Nelson比色法的反应条件对测定结果也至关重要。
在进行测定时，需要控制好溶液的酸度、温度和反应时间等因素，以确保反应能够有效进行并获得准确的测定结果。
还需要注意避免其他可能造成干扰的因素的存在，以保证测定结果的精确性。
3.光度测定在反应完成后，通过光度计测定生成的砷蓝色复合物的吸光度。
在进行光度测定时，需要选择合适的波长和校正光度计，以确保测定结果的准确性。
还需要控制好试样的浓度范围，避免超过光度计的线性范围，从而影响测定结果的准确性。
4.结果计算与分析根据光度测定得到的吸光度数值，结合所测定的标准曲线，计算出碳水化合物的浓度范围。
在进行结果计算与分析时，需要进行数据处理和统计，并对测定结果进行评价和分析，以确保最终得到的测定结果准确可靠。
Somogyi-Nelson比色法是一种常用的生化分析方法，用于测定碳水化合物的浓度范围。
在进行测定时，需要严格控制试剂的准备和反应条件，以及准确进行光度测定和结果计算与分析，从而获得准确可靠的测定结果。
希望本文对Somogyi-Nelson比色法测定范围的相关内容能够帮助到您。
Somogyi-Nelson比色法是一种常用的生化分析方法，主要用于测定碳水化合物的浓度范围。
这种方法基于还原砷酸钠和硫酸铜在强酸性条件下的氧化还原反应，通过光度计测定在试样中生成的砷蓝色复合物的吸光度，从而确定碳水化合物的浓度。
植物有机碳的测定方法
植物有机碳的测定方法我折腾了好久植物有机碳的测定方法，总算找到点门道。
说实话，最开始我真的是一头雾水，就瞎摸索呗。
我一开始想的可简单了，就像称称植物重量，烧一烧，然后看看剩下啥，就觉得能算出有机碳。
结果大错特错啊。
烧的过程根本不是我想的那么回事，植物组成那么复杂，就这么简单粗暴地烧，得到的数据乱七八糟的。
后来我就认真看书查资料。
看到一种方法，是用重铬酸钾氧化法。
这个方法里呢，有好多细节。
我先把植物样本烘干，就像是把衣服脱水一样，要干得透透的。
这一步很重要，要是有点水分在里面，整个测定就没准头了。
然后把样本磨碎得很细很细，就好比把沙子磨成面粉那样的细粉。
接下来按照比例加上重铬酸钾溶液和浓硫酸。
加的时候可得小心点儿，这浓硫酸可不是闹着玩的，就像个小火药桶，一不注意就可能溅出来伤人。
这个反应过程中呢，需要在一定的温度条件下进行。
我一开始没控制好温度，结果测出来的数据偏差很大。
我当时都懵了，以为这个方法又不行。
后来才知道温度影响很大，所以我就专门搞了个能精确控制温度的小设备。
反应完了之后，再通过测定剩余的重铬酸钾的量，从而推算出有机碳的量。
这个计算过程也挺复杂的，就像走迷宫一样，我经常在里面绕晕。
有时候公式用错了，算出来简直是笑话。
我就只能再重新来一遍，仔细核对每个数值。
还有一种方法我也试过，叫元素分析仪法。
这个方法感觉就高级一点，仪器嘛，直接就能把很多元素都分析出来。
但是这个仪器可得好好保养维护，我有一次没清理干净上次的样本残留，结果出来的数据也是不准确的。
这些经历告诉我啊，搞这个植物有机碳的测定，每一个小步骤都不能马虎，不管是样品的前期处理还是后面的数据计算或者仪器操作，任何一个环节出问题就会功亏一篑。
这差不多就是我在测定植物有机碳的过程中的一些经验了，希望能有点用。
还有就是啊，在测定的过程中，样本的选取也很关键。
我试过选取不同部位的植物，像叶子和根茎的有机碳含量就有很大差别。
如果想研究整个植物的有机碳情况，就要把不同部位按照合适的比例混合起来。
植物组织中碳水化合物含量的测定(Somogyi法)
测定植物碳水化合物的含量，通常用80梍85%的酒精抽提，在此浓度的酒精溶液中，还原糖和蔗糖溶解而淀粉沉淀。
过滤后在溶液中测定可溶性糖（包括还原糖和蔗糖），在残渣中测定淀粉。
还原糖可根据其还原能力大小直接测定其含量。
蔗糖和淀粉经水解后生成还原糖，测得其含量，然后换算成蔗糖和淀粉。
纤维素用称重法，测得经酸、碱和有机溶剂处理过的样品。
Ⅰ．还原糖含量的测定原理重要反应如下；1．还原糖（如葡萄糖）在碱性溶液中能将Cu2+还原为Cu+，产生Cu2O 沉淀。
2．加酸使KI与KIO3作用，放出I2来。
5KI+KIO2+3H2SO4→3I2+3K2SO4+3H2O3．放出的I2立即与Cu2O作用。
Cu2O+H2SO4→Cu2SO4+H2OCu2SO4+I2+K2SO4→2CuSO4+2KI4．多余的I2用Na2S2O3滴定。
2Na2S2O3+I2→2NI+N2S4O6将结果与空白滴定相比较，即知消耗I2量，可间接推算出测定液中还原糖含量。
仪器药品分析天平台天平烘箱水浴锅电动粉碎机容量瓶移液管烧杯三角烧瓶漏斗酒精5%硫酸锌1%酚酞溶液：1g酚酞溶解在100ml95%酒精溶液中。
饱和氢氧化钡溶液：将蒸馏水煮沸，除去水中二氧化碳，冷却后加入固体Ba(OH)2盖好，过液，次日过滤。
铜碘试剂：溶液A：取硫酸铜6.5g溶于100ml水中。
溶液B：取酒石酸钾钠12g，无水碳酸钠20g，碳酸氢钠25g溶于500ml 水中。
溶液C：取碘酸钾0.8g，碘化钾10g，草酸钾18g溶于200梍300ml 水中。
用时将溶液B倒入溶液A中，再倒入溶液C中，混合后稀释至1000ml，混匀。
2.5mol/L H2SO4：浓硫酸143ml加入水中，稀释成1000ml。
淀粉指示剂：1g淀粉溶解在100ml水中，加热使之溶解即可。
0.005mol/L硫代硫酸钠标准溶液：参照实验39。
操作步骤1．抽提将采回的植物样品，分开部位，迅速放在60℃烘箱中烘干至恒重。
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测定植物碳水化合物的含量，通常用80梍85%的酒精抽提，在此浓度的酒精溶液中，还原糖和蔗糖溶解而淀粉沉淀。
过滤后在溶液中测定可溶性糖（包括还原糖和蔗糖），在残渣中测定淀粉。
还原糖可根据其还原能力大小直接测定其含量。
蔗糖和淀粉经水解后生成还原糖，测得其含量，然后换算成蔗糖和淀粉。
纤维素用称重法，测得经酸、碱和有机溶剂处理过的样品。
Ⅰ．还原糖含量的测定
原理
重要反应如下；
1．还原糖（如葡萄糖）在碱性溶液中能将Cu2+还原为Cu+，产生Cu2O 沉淀。
2．加酸使KI与KIO3作用，放出I2来。
5KI+KIO2+3H2SO4→3I2+3K2SO4+3H2O
3．放出的I2立即与Cu2O作用。
Cu2O+H2SO4→Cu2SO4+H2O
Cu2SO4+I2+K2SO4→2CuSO4+2KI
4．多余的I2用Na2S2O3滴定。
2Na2S2O3+I2→2NI+N2S4O6
将结果与空白滴定相比较，即知消耗I2量，可间接推算出测定液中还原糖含量。
仪器药品
分析天平台天平
烘箱水浴锅
电动粉碎机容量瓶
移液管烧杯
三角烧瓶漏斗
酒精5%硫酸锌
1%酚酞溶液：1g酚酞溶解在100ml95%酒精溶液中。
饱和氢氧化钡溶液：将蒸馏水煮沸，除去水中二氧化碳，冷却后加入固体Ba(OH)2盖好，过液，次日过滤。
铜碘试剂：
溶液A：取硫酸铜6.5g溶于100ml水中。
溶液B：取酒石酸钾钠12g，无水碳酸钠20g，碳酸氢钠25g溶于500ml 水中。
溶液C：取碘酸钾0.8g，碘化钾10g，草酸钾18g溶于200梍300ml 水中。
用时将溶液B倒入溶液A中，再倒入溶液C中，混合后稀释至1000ml，混匀。
2.5mol/L H2SO4：浓硫酸143ml加入水中，稀释成1000ml。
淀粉指示剂：1g淀粉溶解在100ml水中，加热使之溶解即可。
0.005mol/L硫代硫酸钠标准溶液：参照实验39。
操作步骤
1．抽提
将采回的植物样品，分开部位，迅速放在60℃烘箱中烘干至恒重。
剪碎后，放入电动粉碎机中粉碎。
用电动分析天平分别称取样品1g，放入250ml三角烧瓶中，加入80%酒精50ml，放在70℃水浴锅中抽提3小时，将上清液过滤（瓶内残渣不要过滤出来），再往残渣内倒入80%酒精20ml，继续抽提3小时，过滤。
如此提取3─5次，合并所有滤液，定容至500ml。
最后将残渣烘干，留作分析淀粉用。
2．澄清．
(1)吸取酒精提取液25ml，在水浴锅上蒸干。
若溶液有酸性，可先用固体碳酸钠中和，以免酸对蔗糖的分解。
(2)蒸干后加入少量水，边搅边加入Ba(OH)22─10ml（用量根据不同样品而定，如叶含色素多需用7─8ml，含色素少的可用6─7ml）。
(3)沉淀完全后，加入1滴酚酞指示剂，边搅边滴入ZnSO4溶液，以沉淀钡盐，滴至红色褪去，再滴Ba(OH)2溶液，恢复淡红色为终点。
(4)过滤并用蒸馏水洗涤沉淀，将滤液放入50ml容量瓶中释至刻度，使可测定还原糖和蔗糖含量。
3．测定
(1)吸取糖液5ml（含糖在0.3─2.0mg），若糖液太浓可少吸些样品，用水补足5ml，放入大试管或小烧杯中。
(2)加入铜碘试剂5ml，用量必须十分准确。
(3)盖以表面皿，置沸水中保持100℃15分钟。
(4)取出放入30℃水浴中，杯内温度与水浴温度相一致时为止。
加入2.5mol/L H2SO41ml盖好，放置2分钟，使沉淀物完全溶解，用水将盖上的碘冲洗下来。
(5)用0.005mol/L Na2S2O3滴定，边滴定边搅拌，滴至淡黄色时，加淀粉指示剂1ml，再滴至淡蓝色时为终点。
(6)另取蒸馏水及铜碘试剂各5ml，做空白滴定，二者之差，即可由附表11中查得5ml糖液中的含糖量。
假若用20g样品，稀释成500ml，吸取25ml，澄清后定容至50ml，最后吸取5ml滴定时，查得含糖量需乘因数1。
Ⅱ．蔗糖含量的测定
原理
由于植物体中有还原糖和非还原糖（主要是蔗糖，因此要测定蔗糖时，需先经盐酸水解后，测定其还原糖含量。
从总可溶性糖含量减去还原糖含量即为蔗糖含量。
药品
5mol/L NaOH
比重1.103的HCl：取浓盐酸528ml，加水稀释成1000ml。
操作步骤
吸取清洁后的可溶性糖液10ml，放入25ml容量瓶中，加入比重
1.103HCl2ml，煮沸5分钟，使之转化成还原糖后用5mol/L NaOH溶液中和，用酚酞为指示剂加至淡红色为止。
中和后用水稀释至刻度，吸取5ml 测定其总可溶性糖含量。
蔗糖量=（总可溶性糖含量椈乖 呛 浚 羅0.95式中系数0.95是由于蔗糖水解时吸收了1分子水。
所以由附表11查得含糖量乘以2.5即得总可溶性糖含量。
若用烘干样品2g，则因素为25。
Ⅲ．淀粉含量的测定
原理
淀粉用酸水解转化成葡萄糖后，测定其葡萄糖含量。
根据葡萄糖含量换算成淀粉含量。
(C6H10O5)n+nH2O→n(C6H12O6)
药品
2%HCl溶液5mol/L NaOH溶液
操作步骤
取酒精抽提后的残渣0.5g，放入三角烧瓶中，加2%HCl25ml，盖上，在沸水浴锅中沸腾3.5小时，用5mol/L NaOH中和，再依照测定还原糖的方法加入清洁剂，过滤，稀释至250ml。
吸取5ml测量定其还原糖含量。
葡萄糖含量×0.9=粗淀粉含量
式中系数0.9是由于淀粉(C6H10O5)n水解时吸收了n个分子水。
Ⅳ．粗纤维含量的测定
原理
测定粗纤维是用硫酸、碱、乙醇和乙醚相继处理样品。
硫酸水解某些不溶解的碳水化合物（如淀粉和部分半纤维素）成为单糖。
碱能使蛋白质转变成可溶态并除去脂肪及溶解不能被酸溶解的半纤维素和某些木素。
酒精和乙醚能抽出树脂、单宁和色素及剩余的脂肪与部分蛋白质。
药品
70─85% 乙醚
1.25%硫酸溶液：取比重1.84的浓硫酸13ml加水稀释至1L。
1.25%氢氧化钠：15g氢氧化钠溶解在1L蒸馏水中，然后用标定其准确浓度，计算再应加蒸馏水量，使其浓度准确为1.25%。
操作步骤
1．将磨碎的样品1─3g，装入已知重量的称量瓶中，在分析天平上准确称重，无损失地倒入三角烧瓶里。
如为新鲜样品，须取同样的样品测定水分。
此外，再于已知重量的称量瓶中烘干滤纸。
注意温度不要过高，一般在80─90℃，防止滤纸烘焦影响重量。
2．在烧瓶外壁上，相当200ml溶量处，用玻璃铅笔或纸条作一记号，然后将200ml1.25%的硫酸倒入瓶中，加热至沸腾时再继续30分钟，加热时防止激烈沸腾，应经常搅拌。
每5分钟要向瓶内倒入沸水，使其内容物达到记号，以保持酸的浓度不变。
3．煮沸之后，用带有已知重量的滤纸漏斗过滤，并用热蒸馏水冲洗烧杯及漏斗3─4次，直至滤液用石蕊试纸试验呈中性反应为止。
4．用1.25%氢氧化钠溶液将滤纸上的沉淀物完全洗入瓶内，将其加热至沸腾再继续30分钟（操作同上）。
5．煮沸后冷却，用原来所用已知重量的滤纸过滤，用蒸馏水冲洗2─3次，再用酒精冲洗2─3次直至滤液无色为止。
若植物样品（如叶子）含色素多时，除用酒精外，还要用乙醚冲洗至无色为止。
6．将滤纸和沉淀放入以前称过这张滤纸的称量瓶中，在100─105℃的烘箱中烘至恒重（用分析天平称重）。
已知滤纸重量为W p，滤纸及纤维重量为W t，则粗纤维重量W c=W t－W p，再换算成百分含量。