药物分析第04章定量分析样品前处理及分析方法验证
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药物分析第04章定量分析样品前处理与分析方法验证
22
例1 三氯叔丁醇的测定
原理 三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中加热回流水解， 氯元素全部转变成氯化钠，然后用剩余滴定法，即于 水解液中加硝酸酸化，再加入定量过量的硝酸银滴定 液，使Cl-生成AgCl沉淀，过量的硝酸银，以Fe3+为指 示剂，用硫氰酸铵液回滴定。
23
例1 三氯叔丁醇
CCl3—C(CH3 ) 2— OH + NaOH (CH3 ) 2 CO+NaCl + HCOONa
Sb5 2KI H Sb3 I2 2K I2 2Na 2S2O3 2NaI Na 2S4O6
21
（二） 经水解后测定法
1.碱水解测定法
将含卤素的有机药物溶于适当溶剂（如乙 醇）中,加氢氧化钠溶液或硝酸银溶液后,加热回 流使其水解,将有机结合的卤素,经水解作用转变 为无机的卤素离子,然后选用间接银量法进行测 定。
为终点。
43
实例- 碘苯酯的含量测定
I
CH3
C (CH2)8 COOC2H5
样品 O2/Pt NaOH-H2O Br2-HAc 甲酸 空气 燃烧 吸收 KI 0.02mol/L Na2S2O3 淀粉作指示剂 终点：蓝色消失
44
溴-醋酸的作用：将碘化物全部转为碘酸盐。 甲酸的作用：除去过量的溴
Br2 HCOOH HBr CO2
CHO COO-
OCH -OOC
葡萄糖酸锑钠
14
含金属或卤素有机药物定量分析 前的处理方法有两大类：
➢1.不经有机破坏的分析方法(3种方法) 直接测定法;经水解后测定法;经还原后测定
法；
➢2.经有机破坏的分析方法(2种方法) 湿法破坏(硝酸-高氯酸法;硝酸-硫酸法;硫酸-
硫酸盐法等);干法破坏。
例1 三氯叔丁醇的测定
原理 三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中加热回流水解， 氯元素全部转变成氯化钠，然后用剩余滴定法，即于 水解液中加硝酸酸化，再加入定量过量的硝酸银滴定 液，使Cl-生成AgCl沉淀，过量的硝酸银，以Fe3+为指 示剂，用硫氰酸铵液回滴定。
23
例1 三氯叔丁醇
CCl3—C(CH3 ) 2— OH + NaOH (CH3 ) 2 CO+NaCl + HCOONa
Sb5 2KI H Sb3 I2 2K I2 2Na 2S2O3 2NaI Na 2S4O6
21
（二） 经水解后测定法
1.碱水解测定法
将含卤素的有机药物溶于适当溶剂（如乙 醇）中,加氢氧化钠溶液或硝酸银溶液后,加热回 流使其水解,将有机结合的卤素,经水解作用转变 为无机的卤素离子,然后选用间接银量法进行测 定。
为终点。
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实例- 碘苯酯的含量测定
I
CH3
C (CH2)8 COOC2H5
样品 O2/Pt NaOH-H2O Br2-HAc 甲酸 空气 燃烧 吸收 KI 0.02mol/L Na2S2O3 淀粉作指示剂 终点：蓝色消失
44
溴-醋酸的作用：将碘化物全部转为碘酸盐。 甲酸的作用：除去过量的溴
Br2 HCOOH HBr CO2
CHO COO-
OCH -OOC
葡萄糖酸锑钠
14
含金属或卤素有机药物定量分析 前的处理方法有两大类：
➢1.不经有机破坏的分析方法(3种方法) 直接测定法;经水解后测定法;经还原后测定
法；
➢2.经有机破坏的分析方法(2种方法) 湿法破坏(硝酸-高氯酸法;硝酸-硫酸法;硫酸-
硫酸盐法等);干法破坏。
药物定量分析和分析方法验证
4. 分析方法验证
专属性（特异性）和灵敏度尤为重要 标准曲线、精密度应包含全部样本浓度 需考察方法回收率、提取回收率 测定过程中进行质控
总论部分小结
质量标准的主要内容 药品检验的基本程序 杂质的来源和分类 杂质限量计算 一般杂质的检查方法 分析方法验证的内容
8. 耐用性 测定条件有小的变动时结果不受影 响的泌物、排泄物 2. 生物样本特点： 组成复杂、药物浓度低
3. 前处理方法：
去蛋白： 有机溶剂、中性盐、强酸、重金属盐、酶 分离、纯化和浓集： 液液萃取(LLE)、液－固萃取(LSE) 化学衍生化
准确度 鉴别 杂 定量 质 测 限度 定 含量测定及 溶出度测定 精密度 重复性 中间精密度 专属性 检测限 定量限 线性 范围 耐用性
+ +
+
+ +
+ +
+ + + +
+ -
+ -
+ +
+ +
+ + + +
1. 准确度 测定结果和真实值的接近程度 一般以回收率表示 回收率＝(测定值-空白值)/加入量× 100％ 2. 精密度 多次测定结果的接近程度 还包括重复性、中间精密度、重现性等 用相对标准偏差(RSD)、标准偏差(S) 等表示
第四章 药物定量分析 和分析方法验证
一、样品前处理方法
前处理的目的： 将药物转变为适合分析的状态 前处理方法： 水解、氧化还原、有机破坏（干法、湿 法、氧瓶燃烧）等
二、分析方法的验证
证明方法适合检测要求 起草质量标准和更改工艺时需要验证 具体要求可参见“中国药典” 附录XIX
第04章定量分析样品前处理
滴定度的计算 放大反应
2mol碘苯酯→1molI2 1molI2→1molNaIO+1molNaI
1molNaIO→1/3molNaIO3+2/3molNaI
12 3
molNaI+Br2→
1
2 3
molNaIO3
即2mol碘苯酯→2molNaIO3
2mol NaIO3+10I→6molI2
即2mol碘苯酯→1molI2 →6molI2→12molI→12molNa2S2O3
溶剂（如乙醇）中，加入氢氧化钠溶 液（或一定量过量的硝酸银滴定液） 后，加热回流使其水解，将有机结合 的卤素转变为无机的卤素离子，然后 采用银量法（Volhard法）测定。
本法适用于含卤素有机药物结构中 卤素原子结合不牢固的药物（如卤原 子和脂肪碳原子相连者）。
例三氯叔丁醇的测定 ChP（2000） 原理 三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中 加热回流水解，氯元素全部转变成氯 化钠，然后用剩余滴定法，即于水解 液中加硝酸酸化，再加入定量过量的 硝 酸 银 滴 定 液 ， 使 Cl- 生 成 AgCl 沉 淀 ， 过量的硝酸银，以Fe3+为指示剂，用 硫氰酸铵液回滴定。
反应摩尔比为1∶6
TcM 0 .0 2 4.1 36 4 1 .3m 8/8 m g
n
6
98：140. 氧瓶燃烧法中的装置有 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 磨口软质玻璃锥形瓶 C. 铂丝 D. 铁丝 E. 铝丝
96：133（99x：138）．选择氧瓶燃烧 法所必备的实验物品 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 铂丝 C. 普通滤纸 D. 氢气 E. 无灰滤纸
1000ml
2000ml或特殊结 构的燃烧瓶
定量分析样品的前处理
样 品 O 2 / P t燃烧 吸 产 收 物 吸 于 收 适 液宜方法 燃烧
20
注意事项
①充氧气要充分 使样品燃烧完全,一般急速通氧气1~2分钟,燃烧
完全时没有黑色炭化物。 ②吸收完全 一般振摇30’,燃烧瓶看不到烟雾。
Cl－、F－白色烟雾 Br－棕色 I－紫色 ③防爆 样品燃烧时,温度很高,燃烧瓶内压力很大,有爆 炸的可能性,必须采取防护措施。
②百. 分吸收系数（ E11%cm ）：指在一定波长下,溶 液浓度为1%（W/V），厚度为1㎝的吸收度。
③ε与E关系
ε=
M
10
× E11%cm
强吸收度：ε=104~105
弱吸收度：ε<102
中强吸收：ε=102~104
35
3.仪器的校正和检定 波长的校正：汞灯中的几根较强的谱线或用仪器自身
所带的氘灯的特定谱线为参照进行校正 吸收度准确性的检定：重铬酸钾的硫酸溶液，规定波
烧瓶中进行燃烧,并将燃烧所产生的欲测物质（气态） 吸收于适当吸收液中,然后根据欲测物质的性质,采 用适当分析方法进行鉴别、检查或含量测定。
含 X 、 S 、 P 、 S 有 e 机 O 2 、 燃 无 药 烧 机 物 吸 收 吸 离 液 测 收 子
15
21
吸收液的选择 ①氟化物、氯化物
R X O 2 /P X t C 2 O H 2 O
氟或氯以离子状态存在,吸收后可直接测定.
22
②溴化物
R B r O 2 /P tB 2 rB rC2O H 2 O
量大 量少
③碘化物
R I O 2 /P tI2I I3 O C2 O H 2 O
20
注意事项
①充氧气要充分 使样品燃烧完全,一般急速通氧气1~2分钟,燃烧
完全时没有黑色炭化物。 ②吸收完全 一般振摇30’,燃烧瓶看不到烟雾。
Cl－、F－白色烟雾 Br－棕色 I－紫色 ③防爆 样品燃烧时,温度很高,燃烧瓶内压力很大,有爆 炸的可能性,必须采取防护措施。
②百. 分吸收系数（ E11%cm ）：指在一定波长下,溶 液浓度为1%（W/V），厚度为1㎝的吸收度。
③ε与E关系
ε=
M
10
× E11%cm
强吸收度：ε=104~105
弱吸收度：ε<102
中强吸收：ε=102~104
35
3.仪器的校正和检定 波长的校正：汞灯中的几根较强的谱线或用仪器自身
所带的氘灯的特定谱线为参照进行校正 吸收度准确性的检定：重铬酸钾的硫酸溶液，规定波
烧瓶中进行燃烧,并将燃烧所产生的欲测物质（气态） 吸收于适当吸收液中,然后根据欲测物质的性质,采 用适当分析方法进行鉴别、检查或含量测定。
含 X 、 S 、 P 、 S 有 e 机 O 2 、 燃 无 药 烧 机 物 吸 收 吸 离 液 测 收 子
15
21
吸收液的选择 ①氟化物、氯化物
R X O 2 /P X t C 2 O H 2 O
氟或氯以离子状态存在,吸收后可直接测定.
22
②溴化物
R B r O 2 /P tB 2 rB rC2O H 2 O
量大 量少
③碘化物
R I O 2 /P tI2I I3 O C2 O H 2 O
药物分析课件 第四章 药物定量分析与分析方法验证_OK
样品能在足够的氧气中燃烧分解完全样品能在足够的氧气中燃烧分解完全有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸防止爆炸的可能性防止爆炸的可能性26燃烧瓶要洁净不能残留有机溶剂不能用有机润滑剂涂抹瓶塞要有防爆措施氧气要充足确保燃烧完全产物不能有黑色炭化物燃烧产生的烟雾要被完全吸收充分振摇和放置都是为了保证吸收完全例
③要有防爆措施 ④氧气要充足，确保燃烧完全，产物不能有黑色
炭化物 ⑤燃烧产生的烟雾要被完全吸收
充分振摇和放置都是为了保证吸收完全 例：碘产生紫色烟雾；氯、氟产生白色烟雾，烟
雾颜色完全消失后，即表示吸收完全 ⑥测定含氟有机化合物时要用石英燃烧瓶
26
4、应用
含卤素、硫、磷、氟及硒等有机药物的鉴别、杂 质的检查及含量测定
100%
注射剂：标示量％＝
V0
V T 标示量
100%
V VO
T F 标示量
100%
VO : 量取注射剂的体积， ml
36
(2)间接滴定法 1）生成物滴定法
供试品＋试剂 A 化合物 B
化合物 B＋滴定液 C 化合物 D
计量滴定液消耗的量，计算供试品的含量 计算同直接滴定法
37
2）回滴定法（剩余滴定法） 原理：先在待测样品溶液中加定量、过量的滴定
10
（一）湿法破坏
（1） 硝酸-高氯酸法 适用于血、尿、组织等生物样品的破坏，有
机金属药物经破坏后，得到的无机金属离子一 般呈高价态。
本法不能用于含氮杂环药物的破坏
干法灼烧法 11
（2） 硝酸-硫酸法 适用于大多数有机物质的破坏，破坏得到的
无机金属离子均为高价态。 不能用于含碱土金属有机药物的破坏
27
氧瓶燃烧
③要有防爆措施 ④氧气要充足，确保燃烧完全，产物不能有黑色
炭化物 ⑤燃烧产生的烟雾要被完全吸收
充分振摇和放置都是为了保证吸收完全 例：碘产生紫色烟雾；氯、氟产生白色烟雾，烟
雾颜色完全消失后，即表示吸收完全 ⑥测定含氟有机化合物时要用石英燃烧瓶
26
4、应用
含卤素、硫、磷、氟及硒等有机药物的鉴别、杂 质的检查及含量测定
100%
注射剂：标示量％＝
V0
V T 标示量
100%
V VO
T F 标示量
100%
VO : 量取注射剂的体积， ml
36
(2)间接滴定法 1）生成物滴定法
供试品＋试剂 A 化合物 B
化合物 B＋滴定液 C 化合物 D
计量滴定液消耗的量，计算供试品的含量 计算同直接滴定法
37
2）回滴定法（剩余滴定法） 原理：先在待测样品溶液中加定量、过量的滴定
10
（一）湿法破坏
（1） 硝酸-高氯酸法 适用于血、尿、组织等生物样品的破坏，有
机金属药物经破坏后，得到的无机金属离子一 般呈高价态。
本法不能用于含氮杂环药物的破坏
干法灼烧法 11
（2） 硝酸-硫酸法 适用于大多数有机物质的破坏，破坏得到的
无机金属离子均为高价态。 不能用于含碱土金属有机药物的破坏
27
氧瓶燃烧
药物定量分析与分析方法验证定量分析样品的
准确度 精密度 专属性 检测限 定量限 线性 范围 耐用性
准确度 accuracy
1 概念 2 含量测定方法的准确度 3 杂质定量测定的准确度
准确度
准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考 值接近的程度，一般用回收率（%）表示。
测定回收率（recovery）可采用“回收试验法”或 “加样回收试验法”。
分离、纯化与浓集
1 液-液提取法 2 液-固提取法 3 被测组分的浓集
化学衍生化
1 GC中的化学衍生化 2 HPLC中的化学衍生化
CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH
回流
△ (CH3)2-CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2O
NaCl + AgNO3
AgNO3 + NH4SCN
Fe3+ + SCNˉ
AgCl↓ + NaNO3 (Ksp=1.56×10–10 )
AgSCN ↓ + NH4NO3
(Ksp=1.0×10-12 )
第二节 定量分析方法的特点
一 容量分析法 二 光谱分析法 三 色谱分析法
容量分析法
1 适用范围 2 注意 3 计算 （1）滴定度 （2）百分含量
光谱分析法
（一）紫外分光光度法 1 特点 2 仪器的校正和检定 3 对溶剂的要求 4 测定方法
（二）荧光分析法 1 特点 2 含量测定
色谱分析法
HPLC 1 对仪器的一般要求 2 系统适用性试验 3 测定方法
检测限
指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量。 是一种限度检验效能指标，反映方法与仪器的 灵敏度和噪音的大小，也表示样品经处理后空白 （本底）值的高低。 常用%、ppm、ppb表示。
药物分析 第4章 药物定量分析与分析方法验证
三氯叔丁醇的含量测定
CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH
+ HCOONa +2H2O
△
(CH3)2CO +3NaCl
NaCl + AgNO3
AgCl
+ NaNO3
AgSCN +
AgNO3 + NH4SCN
NH4NO3
2. 用酸水解后测定法
某些含金属的有机药物，用 适当的酸性水溶液溶解并转化为 可溶性盐，适合于分析。
含量% = （V 空白 – V 剩余) ×T ×F /W×100%
例如：司可巴比妥钠的含量测定 间接碘量法 做空白试验 90页
CH2 CH CH2 C C3H7 CH CH3
O H C N C ONa C N O
司可巴比妥钠
求滴定度？ 写出含量计算式？
二、光谱分析法
（一）紫外-可见分光光度法（200nm～760nm) 灵敏度高，可达10-4g/ml ～ 10-7g/ml 1. 特点 准确度高，SRD（%）为2% ～5% 仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用 范围广。
湿法破坏 干法破坏
(一)湿法破坏
HNO3-H2SO4法 H2SO4-硫酸盐法
H2SO4-HClO4法
H2SO4-KMnO4 分解剂 和 氧化剂 破坏共价键
应用实例：凯氏定氮法
用于蛋白质、氨基酸、含有氨基的药物、
含有酰胺结构的药物的含量测定
常量法和半微量法
操作过程：
1、消化：
药物置凯氏烧瓶中，加入硫酸、硫酸钾，
（2）间接滴定法
①生成物滴定法
例如 葡萄糖酸锑钠的含量测定
H+
Sb5+ + 2KI
药物分析(湖南大学) 第04章 药物定量分析与分析方法验证
辅助分解剂：硝酸、高氯酸、过氧化氢。
湿法破坏可分为：硫酸 -硝酸法、硫酸-高氯酸法、 硫酸-硫酸盐法、硝酸-高锰酸钾法。
以硫酸-硫酸盐法为基础的含氮有机药物定量 分析方法―凯氏定氮法原理
将含氮有机药物与硫酸和硫酸盐在凯氏烧瓶中共热， 药物分子中有机结构被氧化分解成二氧化碳和水， 有机结合的氮则转变为无机氨，并于过量的硫酸结 合为硫酸氢铵及硫酸铵；
e. 含磷药物（如甘油磷酸钠注射液）的定量测定： 精密称取样品 1ml ，置于瓷坩锅中，加氧化锌 1g ， 加热碳化后在 600℃炽灼 1h ，放冷，加水与盐酸 个 5ml ，加热煮沸使溶解后，用钼蓝比色法测定。
f. 砷盐的检查： 有机结合的砷经与无水 Na2CO3 或 Ca(OH)2 、 Mg(NO3)2 共热（ <700℃）转化为无机砷 酸盐后，依法检查。本法主要用于高分子化合物 （如：右旋糖酐铁）或植物提取物（如：大豆油） 中砷盐的检查，亦应用与少数有机药物（如吡罗 昔康、布美他尼等）.
吸 收 液 的 选 择
采用银量法测定含氯药物时，燃烧产物亦为 单一的氯化氢，但氯化氢在水中溶解度较低， 需用H2O-NaOH溶液作为吸收液。
采用银量法测定含溴药物时，分解产生的溴 化氢可被氧气氧化成单质溴，故其燃烧产物 为单质溴和溴化氢的混合物，可在 H2O-NaOH 吸收液中加入还原剂 SO2 饱和溶液，将单质溴 还原为溴负离子。
b) 仪器装置：燃烧瓶为 500ml、1000ml或 2000ml 的磨口、硬质锥形瓶，瓶塞应严密，底部熔 封铂丝一根（直径：1mm），铂丝下端做成网 状或螺旋状，长度约为瓶身长度的 2/3。通常 取样量为10～ 20mg，使用 500ml燃烧瓶；加大 样 品 取 样 量 （ 200mg ） 时 可 选 用 1000ml 或 2000ml的燃烧瓶
4药物定量分析与分析方法验证解析精品PPT课件
反应摩尔比为1∶6
T cM 0.02 416.34 1.388mg / ml
n
6
98：140. 氧瓶燃烧法中的装置有 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 磨口软质玻璃锥形瓶 C. 铂丝 D. 铁丝 E. 铝丝
96：133（99x：138）．选择氧瓶燃烧 法所必备的实验物品 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 铂丝 C. 普通滤纸 D. 氢气 E. 无灰滤纸
Fe (SCN) 2+ （淡棕红色）
测定方法 取本品约0.1g，精密称定，加 乙醇5ml溶解后，加20%氢氧化钠溶液5ml， 加热回流15min，放冷至室温，加水20ml 与硝酸5ml，精密加硝酸银滴定液 (0.1mol/L) 30ml，再加邻苯二甲酸二丁酯 5ml，密塞，强力振摇后，加硫酸铁铵指 示液2ml，用硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)滴 定，并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于 6.216mg的C4H7Cl3O·1/2H2O。
OH SO3Na
磺溴酞钠
实验诊断用药 （肝功能）
（二）含卤素有机药物的分析
C X 适当的处理 X
直接回流后测定法 碱性或酸性还原后测定法 氧瓶燃烧分解后测定法
1. 直接回流后测定法 本法是将含卤素有机药物溶于适当
溶剂（如乙醇）中，加入氢氧化钠溶 液（或一定量过量的硝酸银滴定液） 后，加热回流使其水解，将有机结合 的卤素转变为无机的卤素离子，然后 采用银量法（Volhard法）测定。
本法特点是简便、快速、破坏 完全，尤其适用于微量样品的分析
（ 2） 仪器与材料
①仪器装置 燃烧瓶为500、1000或
2000ml无色、磨口、厚壁、 硬质玻璃锥型瓶；瓶塞空 心，底部熔封铂丝一根， 下端呈螺旋状或网状
T cM 0.02 416.34 1.388mg / ml
n
6
98：140. 氧瓶燃烧法中的装置有 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 磨口软质玻璃锥形瓶 C. 铂丝 D. 铁丝 E. 铝丝
96：133（99x：138）．选择氧瓶燃烧 法所必备的实验物品 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 铂丝 C. 普通滤纸 D. 氢气 E. 无灰滤纸
Fe (SCN) 2+ （淡棕红色）
测定方法 取本品约0.1g，精密称定，加 乙醇5ml溶解后，加20%氢氧化钠溶液5ml， 加热回流15min，放冷至室温，加水20ml 与硝酸5ml，精密加硝酸银滴定液 (0.1mol/L) 30ml，再加邻苯二甲酸二丁酯 5ml，密塞，强力振摇后，加硫酸铁铵指 示液2ml，用硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)滴 定，并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于 6.216mg的C4H7Cl3O·1/2H2O。
OH SO3Na
磺溴酞钠
实验诊断用药 （肝功能）
（二）含卤素有机药物的分析
C X 适当的处理 X
直接回流后测定法 碱性或酸性还原后测定法 氧瓶燃烧分解后测定法
1. 直接回流后测定法 本法是将含卤素有机药物溶于适当
溶剂（如乙醇）中，加入氢氧化钠溶 液（或一定量过量的硝酸银滴定液） 后，加热回流使其水解，将有机结合 的卤素转变为无机的卤素离子，然后 采用银量法（Volhard法）测定。
本法特点是简便、快速、破坏 完全，尤其适用于微量样品的分析
（ 2） 仪器与材料
①仪器装置 燃烧瓶为500、1000或
2000ml无色、磨口、厚壁、 硬质玻璃锥型瓶；瓶塞空 心，底部熔封铂丝一根， 下端呈螺旋状或网状
第四章 药物定量分析与分析方法验证(药物分析)学习参考资料
分析
案例的实施和实验操作
案例选择：选择具有代表性的药物品种和相应的分析方法 实验设计：根据药物品种和分析方法，设计合理的实验方案 实验操作：按照实验设计进行实验，注意实验操作的规范性和准确性 数据分析：对实验数据进行处理和分析，评估方法的可行性和可靠性
案例的总结和经验教训
案例分析：介绍具体的药物定量分析与分 析方法验证案例，包括实验设计、操作过 程、结果分析和结论。
生产控制：药物定量分 析可确保生产过程中的 药物成分一致，提高产 品质量和生产效率。
药品质量控制：通过药 物定量分析，可对药品 进行质量控制，确保药 品的安全性和有效性。
临床应用：药物定量 分析有助于医生根据 患者的病情制定合理 的用药方案，提高治 疗效果。
药物分析方法验证的定义和目的
定义：药物分析方法验证 是通过一系列实验，证明 所建立的分析方法是否符 合药品质量控制的要求和 标准的过程。
解释
实验设计的目的和原则
目的：确保药物分析方法的准确性和可靠性 原则：对照原则、重复原则、随机原则、均衡原则
实验操作的流程和注意事项
实验前准备：确保实验室环境、 仪器和试剂符合要求，制定详 细的实验计划和操作步骤。
样品处理：根据实验需要，对 药物样品进行适当的处理，如 溶解、稀释、离心等。
仪器操作：按照仪器说明书进 行操作，确保仪器处于正常状 态，并记录仪器使用情况。
注意事项：确保 实验操作规范， 避免误差，保证 实验结果的准确 性和可靠性
实验数据分析和处理的方法
实验数据的收 集和整理：确 保数据的准确
性和完整性
数据分析方法 的选择：根据 实验目的和数 据类型选择合
适的方法
数据处理流程： 对数据进行预 处理、统计分 析和可视化处
案例的实施和实验操作
案例选择：选择具有代表性的药物品种和相应的分析方法 实验设计：根据药物品种和分析方法，设计合理的实验方案 实验操作：按照实验设计进行实验，注意实验操作的规范性和准确性 数据分析：对实验数据进行处理和分析，评估方法的可行性和可靠性
案例的总结和经验教训
案例分析：介绍具体的药物定量分析与分 析方法验证案例，包括实验设计、操作过 程、结果分析和结论。
生产控制：药物定量分 析可确保生产过程中的 药物成分一致，提高产 品质量和生产效率。
药品质量控制：通过药 物定量分析，可对药品 进行质量控制，确保药 品的安全性和有效性。
临床应用：药物定量 分析有助于医生根据 患者的病情制定合理 的用药方案，提高治 疗效果。
药物分析方法验证的定义和目的
定义：药物分析方法验证 是通过一系列实验，证明 所建立的分析方法是否符 合药品质量控制的要求和 标准的过程。
解释
实验设计的目的和原则
目的：确保药物分析方法的准确性和可靠性 原则：对照原则、重复原则、随机原则、均衡原则
实验操作的流程和注意事项
实验前准备：确保实验室环境、 仪器和试剂符合要求，制定详 细的实验计划和操作步骤。
样品处理：根据实验需要，对 药物样品进行适当的处理，如 溶解、稀释、离心等。
仪器操作：按照仪器说明书进 行操作，确保仪器处于正常状 态，并记录仪器使用情况。
注意事项：确保 实验操作规范， 避免误差，保证 实验结果的准确 性和可靠性
实验数据分析和处理的方法
实验数据的收 集和整理：确 保数据的准确
性和完整性
数据分析方法 的选择：根据 实验目的和数 据类型选择合
适的方法
数据处理流程： 对数据进行预 处理、统计分 析和可视化处
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第四章
药物定量分析与分析方法验证
本章主要内容：
第一节定量分析样品的前处理方法
一、概述
二、不经有机破坏的分析方法
三、经有机破坏的分析方法
第二节定量分析方法的特点
第三节药品分析方法验证
本章主要学习目的：
1.熟悉不经有机破坏的分析方法；
2.熟悉经有机破坏的分析方法；
3.掌握氧瓶燃烧法；
4.掌握测定方法的效能指标。
第一节定量分析样品的前处理方法目的:使待测药物或待测元素转化为适宜的测定方式, 从而利于分析测定。
优点:增加测定的专属性和灵敏度。
样品种类：
1. 含卤素元素（F、Cl、Br、I）
2. 含金属元素（Ca、Fe、Hg、Zn、Sn 、Bi)
3. 含N、P、S 等元素
第一节定量分析样品的前处理方法一、概述
（一）含卤素有机药物
系指药物分子结构中所含卤素直接与芳环或脂肪链相连者，而不包括某些有机药物的卤酸盐或氢卤酸盐。
结构特点：C—X
卤原子的活泼性
1、卤原子与碳原子直接相连，卤原子的活泼性和它直接相连的烃基的结构有很大关系.
2. 分子中所含卤原子的个数
分子中所含卤原子的个数越多，活泼性越强，特别是同一碳上含多个卤原子或一个苯环上含多个卤原子时，活泼性增强更加明显。
3. 卤素的种类
I、Br、Cl、F
（二）含金属有机药物
含金属的有机药物：金属原子不与碳原子直接相连，通常为有机酸及酚的金属盐或配位化合物。
如酒石酸锑钾、葡萄糖酸锑钠、富马酸亚铁
有机金属药物：金属原子直接与碳原子以共价键相连，结合比较牢固。
如卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利
含金属或卤素有机药物定量分析前的处理方法有两大类：
➢1.不经有机破坏的分析方法(3种方法)
直接测定法;经水解后测定法;经还原后测定法；
➢2.经有机破坏的分析方法(2种方法)
湿法破坏(硝酸-高氯酸法;硝酸-硫酸法;硫酸-硫酸盐法等);干法破坏。
二、不经有机破坏的分析方法
本法主要适用于含金属有机药物或结合不牢固的含卤素等药物的分析。
（一）直接测定法
适用于金属原子不直接与碳原子相连的含金属有机药物或某些C—M键结合不牢固的有机金属药物,在水溶液中可电离。
（2）适用于C-M (金属原子直接与碳原子相连）键结合不牢固的有机金属药物,在水溶液中可以电离。
例如：
富马酸亚铁溶于热硫酸，同时分解释放出亚铁离子，可选用铈量法进行测定。
例1 富马酸亚铁的含量测定
取本品约0.3g，精密称定，加稀硫酸15ml，加热溶解后，放冷，加新沸过的冷水50ml与邻二氮菲指示液2 滴，立即用硫酸铈滴定液
(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验
校正。
每1ml硫酸铈滴定液(0.1mol/L)相当于16.99mg 。
C4H2FeO4
原理
Fe 2+ + Ce 4+ Ce 3+ + Fe
2+N N 3Fe 2+ + e
N N 3Fe 3+红色浅蓝色
O O C
CH O HC
C O ˉˉ+Fe 2+
（二）经水解后测定法
1.碱水解测定法
将含卤素的有机药物溶于适当溶剂（如乙醇）中,加氢氧化钠溶液或硝酸银溶液后,加热回流使其水解,将有机结合的卤素,经水解作用转变为无机的卤素离子,然后选用间接银量法进行测定。
例1 三氯叔丁醇的测定
原理三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中加热回流水解，氯元素全部转变成氯化钠，然后用剩余滴定法，即于水解液中加硝酸酸化，再加入定量过量的硝酸银滴定液，使Cl-生成AgCl沉淀，过量的硝酸银，以Fe3+为指
示剂，用硫氰酸铵液回滴定。
2、酸水解后测定法
硬脂酸镁与定量硫酸共沸、水解生成硬脂酸和硫酸镁,剩余的酸以氢氧化钠滴定。
Mg(C17H35COO)2 +H2SO4 MgSO4 + 2 C17HCOOH
H2SO4 + NaOH Na2SO4 + H2O
（三）经还原后测定法
卤素结合于芳环上,由于分子碘的结合较牢固,需在碱性溶液中加还原剂（如锌粉）,加热回流,使碳-碘键断裂,形成无机碘化物后测定。
例1 泛影酸的测定ChP (2005)取本品约0.4g，精密称定，加氢氧化钠溶液30ml与锌粉1.0g，加热回流30min，放冷，冷凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗涤3次，每次15ml，洗液与滤液合并，加冰醋酸5ml与曙红钠指示液5滴，用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定。
每1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)
相当于20.46mg的C
11H
9
I
3
N
2
O
4。
三、经有机破坏的分析方法
适用于金属原子与碳原子结合牢固的有机金属药物。
（一）湿法破坏
本法主要使用硫酸作为分解剂，常加入氧化剂作为辅助分解剂。
根据分解剂组合形式的不同，湿法破坏法分为若干种，如硫酸－硝酸法、硫酸-高氯酸法、硫酸－硫酸盐法、硝酸－高锰酸钾法等。
1 湿法破坏法
①硝酸-高氯酸法
破坏力强，不适于含氮杂环.(高价态)②硝酸-硫酸法
适于大多数有机物质破坏(高价态)
不适于含碱土金属的药物(M+硫酸反应)③硫酸-硫酸盐法(如凯式定氮法)
常用于含砷、锑有机药物(低价态)
（二）干法破坏
适用于湿法不易破坏完全的有机物以及某些不能用硫酸进行破坏的有机药物。
不适用于含易挥发性金属（如汞、砷等）有机药物的破坏。
这里分为：
a.高温灼烧法
b. 氧瓶燃烧法
1.高温灼烧法
将有机物灼烧灰化，使有机结构分解而待测元素转化为无机元素或可溶性无机盐，以供分析。
常加无水碳酸钠或轻质氧化镁等辅助灰化。
湿法破坏不完全的药物
——适用于含氮杂环+含碱土金属药物。
不适于汞、砷的测定。
2、氧瓶燃烧法p84
原理：
将有机药物放入充满氧气的密闭烧瓶中进
行燃烧,使有机结构部分彻底分解为二氧化碳和水，而待测元素根据电负性的不同转化为不同价态的
氧化物，被收于适当吸收液中,然后根据欲测物质的性质,采用适当分析方法进行鉴别、检查或含量测定。
NaCl HCl
O
Cl
C
NaOH 2
−
−
−→−
↑−
−→
−
+
-
溶液
点燃
适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析。
本法特点是简便、快速、破坏完全，尤其适用于微量样品的分析。
（1）仪器装置
燃烧瓶为500、1000或2000ml无色、
磨口、厚壁、硬质玻璃锥型瓶；瓶塞
空心，底部熔封铂丝一根，下端呈螺
旋状或网状,长度约为瓶身的2/3。
燃烧瓶容积大小的选择。
通常取样量为10－20mg，使用500ml 燃烧瓶;加大样品取样量（200mg）时可选用1000或2000ml的燃烧瓶。
图2 氧瓶燃烧装置与样品包装操作图
（2）吸收液的选择
A. 作用：
吸收液的作用是将样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒等，定量地吸收并转变为一定的便于测定的价态。
（3）样品制备
A. 固体样品无灰滤纸
B. 液体样品纸袋
C. 软膏类样品：将适量样品置不含被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹。
（4）操作方法
在燃烧瓶内加入规定的吸收液，并将瓶口用水湿润；小心急速通氧气约1分钟，立即用表面皿覆盖
瓶口，备用；点燃包有供试品的滤纸包或纸袋尾部，迅速放入燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶口，俟燃烧完毕（应无黑色碎片），充分振摇，使生成的烟雾完全吸入吸收液中，放置15min，用水少量冲洗
瓶塞及铂丝，合并洗液及吸收液，同法另做空白试验。
然后按各药品项下规定的方法进行鉴别、检查或含量
（5）注意事项
①充氧气要充分
使样品燃烧完全,一般急速通氧气1~2分钟,燃烧完全时没有黑色炭化物。
②防爆
样品燃烧时,温度很高,燃烧瓶内压力很大,有爆炸的可能性,必须采取防护措施。
防护措施:戴防护眼睛；瓶外包湿毛巾
③吸收完全
一般振摇30’,燃烧瓶看不到烟雾。
Cl－、F－⇒白色烟雾
Br－⇒棕色
I－⇒紫色
例碘苯酯的含量测定ChP（2005）
原理碘苯酯系有机碘化物，用氧瓶燃烧分解，转变为碘化物，继而氧化为游离的碘，并被定量地吸收于吸收液中，和氢氧化钠反应，生成碘化物与碘酸盐，加入溴-醋酸溶液，使全部转变为碘酸盐，过量的溴以甲酸及通空气去除。
加入碘化钾，使与碘酸盐反应析出游离碘，用硫代硫酸钠液滴定，碘与淀粉结合所显的蓝色消失即
为终点。
0.02mol/L Na2S2O3
第二节定量分析方法的特点一、定义
容量分析法（也称滴定法）：是将已知浓度的滴定液（标准物质溶液）由滴定管滴加到被测药物反应完全（通过适当方法指示），然后根据滴定液的浓度和被消耗的体积，按化学计量关系计算出被测药物的含量。