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新生大鼠成骨细胞体外培养经验总结摘要] 目的：体外培养成骨细胞技术不仅仅在研究其生物学特征及功能方面有重要作用, 而且在研究代谢性骨疾病和重建骨组织方面异常重要。
高效便捷的体外培养方法，是开展体外实验研究的基础。
方法：采用0.25%胰蛋白酶和Ⅱ型胶原蛋白酶联合的二次酶消化法对新生SD大鼠成骨细胞进行原代提取、培养、传代。
通过观察成骨细胞的形态、碱性磷酸酶（ALP）染色和茜素红矿化结节染色法鉴定，确定其细胞活性及增殖情况。
结果：原代成骨细胞多呈混杂细胞，经过3次传代可获取较纯细胞。
成骨细胞呈三角形、梭形、多边形，胞体向外伸展，胞浆丰富，胞核呈卵圆形见，碱性磷酸酶和钙结节染色阳性。
结论：通过体外培养成骨细胞，可获取符合体外细胞生物学对细胞的要求。
为成骨细胞生物学特征及功能、代谢性骨疾病和重建骨组织方面等研究提供基础。
关键词：成骨细胞、细胞培养、碱性磷酸酶（ALP）染色、茜素红矿化结节染色法 Summary of the experience of osteoblasts culture in vitro in neonatal rats Wangzhen1, Yin Hong2▲, Qiang Weiqing2▲,Yao Nianwei2,Liu Yi Xin1,Xu Lei1, He Qiang 1(1.Nanjin g University of Chinese Medicine；2.Nanjing Hospital of TraditionalChinese Medicine Affiliated to Nanjing University of Chinese Medicine) [Abstract] Objective: In vitro culture of osteoblasts plays an important role not only in the studyof biological characteristics and functions, but also in the study of metabolic bone diseases and reconstruction of bone tissue. Efficient and convenient in vitro culture method is the basis of in vitro experimental research.Methods: Primary extraction, culture and subculture of osteoblasts from neonatal SD rats were carried out by secondary enzyme digestion with 0.25% trypsin and type II collagenase. By observing the morphology of osteoblasts, alkaline phosphatase (ALP) staining and alizarin red mineralized nodule staining, the cell activity and proliferation were determined.Results: Most of the primary osteoblasts were hybrid cells, and the more pure cells could be obtained after 3 passages. Osteoblasts were triangular, fusiform and polygonal in shape. The body of osteoblasts extended outwards. The cytoplasm of osteoblasts was abundant. The nucleus of osteoblasts was oval. Alkaline phosphatase and calcium nodule were positive.Conclusion: Osteoblasts cultured in vitro can meet the requirements of cell biology in vitro. It provides the basis for the study of osteoblast biological characteristics and functions, metabolic bone diseases and reconstruction of bone tissue. Key words: osteoblasts, cell culture, ALP staining, alizarin red mineralized nodule staining 成骨细胞是重塑单位的骨形成细胞，对于骨骼的生长和维持至关重要[1]。
大豆异黄酮对体外培养成骨细胞作用的实验研究摘要】目的研究大豆异黄酮对体外培养成骨细胞增值及分化等。
方法大豆异黄酮加入新生SD大鼠颅骨分离培养的成骨细胞中。
用噻唑蓝( MTT ) 比色法检测细胞增殖情况; 用对硝基酚磷酸盐法测定成骨细胞碱性磷酸酶(ALP) 活性、用放免法测定OB骨钙素( BGP) 含量, 以反映OB的分化状况。
结果用大豆异黄酮体外培养大鼠成骨细胞MTT吸光值明显增加, 成骨细胞ALP活性显著升高, 成骨细胞BGP分泌显著增加(p＜0.05)。
结论大豆异黄酮具有促进成骨细胞增殖分化的作用, 其作用程度低于雌激素。
大豆异黄酮的弱雌激素作用可能是其防治绝经后骨质疏松的重要机制。
【关键词】大豆异黄酮体外培养成骨细胞作用大豆异黄酮属异黄酮类植物雌激素, 主要存在于豆科植物中, 其主要成分为染料木素、大豆苷元和大豆黄素, 具有类雌激素和抗雌激素活性的双重作用, 且具有抗氧化、抗炎、防治心血管病，调节免疫及内分泌系统等多种生物学功能，是目前国内外研究的热点。
近年研究表明,在骨骼代谢、预防骨质疏松等方面大豆异黄酮也发挥着重要作用。
本实验通过MTT法检测细胞的增殖情况，通过检测ALP活性和BGP的含量进一步探讨大豆异黄酮对体外培养成骨细胞作用。
1 材料与方法1.1 动物和试剂出生24小时内的SD大鼠（四川大学实验动物中心）17-β 雌二醇（sigma），大豆异黄酮(天津市康宁生物化学工程有限公司, 总含量为50. 27%，大豆甙和大豆黄素12. 56%, 染料木甙和染料木素37. 71%)，唾哇蓝 (MTT)(华美生物工程公司)，DMSO(天津市登峰化学试剂厂)，碱性磷酸酶测定试剂盒(Randox有限公司)，骨钙素测定试剂盒(北京华英生物技术研究所)；DMEM 培养基、小牛血清（sigma）。
1.2 细胞培养将出生24小时内的SD大鼠放于70%异常消毒后颈椎脱臼处死，在超净工作台上从背部颈下环形剪开鼠皮肤，向头部翻转剥皮肤，取其颅盖骨，清除骨表面被膜、血管等结缔组织，用Hank’S液冲洗骨组织数次，在平皿中将骨片剪成1一3mm3大小的骨粒，再用Hank’s液冲洗2次，用0.25%胰蛋白酶预消化10～ 15分钟, 弃去胰蛋白酶溶液,用0.1% Ⅱ型胶原蛋白酶在37 ℃恒温振荡消化60 分钟, 消化液1000r/min 离心8 分钟, 收集细胞,用含10%小牛血清的DMEM培养液, 置37℃、5%CO2 培养箱内培养, 观察细胞生长情况, 待细胞融合后消化, 开始实验。
人骨关节炎软骨细胞的体外培养及细胞形态学分析唐新;郑果;黄强;李棋;付维力;李箭;陈刚;周宗科;裴福兴【摘要】目的：研究人骨关节炎关节软骨细胞的体外分离及培养方法，观察各代人关节软骨细胞的形态学特性，为临床基础研究提供参考依据。
方法取全膝置换术患者残存的无菌膝关节软骨，采用两步酶消化法（胰蛋白酶＋Ⅱ型胶原酶）分离培养人关节软骨细胞，并进行传代培养。
通过倒置相差显微镜下观察每代的细胞形态，甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色对细胞进行进一步鉴定后绘制生长曲线。
结果两步酶消化法消化出的软骨细胞呈接近圆形，培养2~3 d，细胞贴壁、变形，呈多角形或条状，2周左右细胞融合成层，4代后出现明显分化，软骨细胞增殖和生长缓慢。
形态学、免疫组织化学染色显示细胞培养4代以内可以保持表型的稳定。
结论体外培养骨关节炎软骨细胞4代以内生长良好，生物学特性明显，4代以后出现去分化现象，提示我们2或3代骨关节炎软骨细胞是用于实验研究的最佳选择。
%Objective To study the methods for isolation,culture and identification of articular chondrocytes as well as the biological characteristics from osteoarthritis patients in vitro. Methods Cartilage was harvested under sterile conditions from osteoarthritis knee joints in total knee arthroplasty. Human articular chondrocytes were isolated by using two-step enzymatic di-gestion,and the cells were cultured and subcultured respectively in vitro. Cell morphology were observed under phase-contrast microscope,toluidine blue staining,type Ⅱ collagen immunohistochemistry staining and growth curve was drawn. Results The morphology of osteoarthritis chondrocytes was similar to fibroblasts,and the growth rate was slowly. It could get a confluent layer after culture for about two weeksand appeared distinct differentiation in passage four. Toluidine blue staining and type Ⅱ colla-gen immunohistochemistry staining showed that the chondrocytes cultured in vitro maintained the specific chondrocytes pheno-type in the first 4 passages. Conclusion Within 4 passages,the osteoarthritis chondrocytes grew well with obviously biological characteristics and turned to dedifferentiation after 4 passages.【期刊名称】《实用骨科杂志》【年(卷),期】2015(000)007【总页数】5页(P614-617,618)【关键词】骨关节炎;人软骨细胞;细胞学【作者】唐新;郑果;黄强;李棋;付维力;李箭;陈刚;周宗科;裴福兴【作者单位】四川大学华西医院骨科，四川成都610041;四川大学华西医院骨科，四川成都 610041;四川大学华西医院骨科，四川成都 610041;四川大学华西医院骨科，四川成都 610041;四川大学华西医院骨科，四川成都 610041;四川大学华西医院骨科，四川成都 610041;四川大学华西医院骨科，四川成都 610041;四川大学华西医院骨科，四川成都 610041;四川大学华西医院骨科，四川成都610041【正文语种】中文【中图分类】R684.3骨关节炎(osteoarthritis，OA)是一种随年龄增长而发生率明显增加的退行性关节疾病，其发病是一个多因素参与的复杂过程[1]，至今其病因和发病机理仍不是十分清楚。
不同来源大鼠成骨细胞增殖和成骨活性比较的实验研究的开题报告一、研究背景与意义成骨细胞是维持骨骼稳态的重要细胞种类，其增殖和成骨活性是骨生长、修复和代谢的重要指标之一。
然而，成骨细胞来源的多样性以及群体间的差异性往往影响其实验研究结果的可靠性和准确性。
因此，开展不同来源大鼠成骨细胞增殖和成骨活性比较的实验研究，将有助于更加全面和客观地评估成骨细胞的功能和特性，进而为相关疾病的治疗提供理论依据和实践指导。
二、研究内容和方法1. 研究内容：选择不同来源的大鼠成骨细胞，比较它们的增殖能力和成骨活性差异，并探讨其相关机制。
2. 研究方法：（1）动物来源：从1-2周龄的SD大鼠、Wistar大鼠、Sprague-Dawley大鼠中分离成骨细胞。
（2）细胞培养：将分离得到的成骨细胞培养在MEM培养基中，加入10%的胎牛血清，以37℃、5%CO2条件下培养。
每天更换一次新的培养基，直至细胞到达80%-90%的密度。
（3）细胞增殖实验：采用MTT法、细胞计数法等方法，比较不同来源大鼠成骨细胞的增殖能力，并优选出最具代表性的成骨细胞种类进行后续研究。
（4）成骨活性实验：采用碱性磷酸酶染色法、Alizarin Red染色法、基因表达等方法，比较不同来源大鼠成骨细胞的成骨活性差异，并探讨其相关机制。
三、研究预期成果本研究旨在通过比较不同来源大鼠成骨细胞的增殖能力和成骨活性差异，得到更加全面和客观的评价成骨细胞的功能和特性。
预期成果包括：（1）明确不同来源大鼠成骨细胞的增殖能力和成骨活性特征。
（2）了解成骨细胞来源与其功能表现的相关性，为进一步深入阐述成骨细胞的表型特性和功能机制提供基础数据。
（3）为相关疾病的治疗提供理论依据和实践指导。
浅谈体外培养成骨细胞张杰（陕西理工学院生物科学与工程学院生物科学081班陕西汉中 723000）【摘要】成骨细胞是骨形成和骨代谢的核心部分，随着体外细胞培养技术的发展，人们已经从许多动物的颅骨、骨髓基质、骨膜及骨外组织中成功培养出了具有典型成骨细胞特性的细胞，成骨细胞体外培养是研究骨代谢和成骨机制的重要手段。
现就成骨细胞的来源、分化调控因子、复合移植及中医药方面和影响因素的研究进展作一综述。
【关键词】成骨细胞；细胞培养技术；移植；中药；影响因素；成骨细胞是骨形成细胞，对骨组织的生长发育、骨代谢平衡、骨量平衡和损伤修复起关键作用。
随着细胞培养技术的发展，人们已经从许多动物的颅骨、骨髓基质、骨膜及骨外组织中成功培养出了具有典型成骨细胞特性的细胞，研究表明培养出的成骨细胞具有良好的生物学特性，在不同环境下可以形成骨组织，现就成骨细胞的研究进展作一综述。
1 成骨细胞的来源国内外文献报道新生动物的颅骨或胚胎颅骨为成骨细胞的常用来源。
有不少学者尝试用新生大鼠的颅骨分离成骨细胞，结果表明所培养的成骨细胞具有典型的成骨细胞的形态特征、生物学活性及发生钙化的功能。
有学者研究兔盖骨的成骨细胞增殖．代谢及钙化的能力发现，来自兔盖骨的成骨细胞具有较高的增殖能力，但碱性磷酸酶的生成较低，而且兔盖骨来源的成骨细胞在体外培养中可以形成有序的钙化结节和羟基磷灰石(HA)结晶。
骨膜是骨骼膜性成骨的细胞来源，若将体外培养的骨膜细胞移植入体内，在理论上能形成骨组织，修复骨缺损，很多学者对此展开了研究并取得成功。
Turhani等【1】将骨膜细胞接种到HA支架上进行培养，观测到HA上细胞具有良好的活性，表达骨特定因子，如骨钙素和骨桥蛋白，三维HA 对骨膜间充质细胞的生长行为起着积极作用。
从研究中可知，骨膜源性细胞(PDC)具有很强的增殖能力和分化成骨潜能间充质干细胞(MSCs)是一种多潜能成体干细胞，主要存在于骨髓，还存在于胚胎时期间充质来源的骨外组织，如脂肪干细胞、血管内皮细胞、胚胎干细胞等。
成骨细胞与破骨细胞的体外培养
徐芝华;吴培福;曾兴梅;任改仙;韩博
【期刊名称】《中国兽医杂志》
【年(卷),期】2008(44)12
【摘要】成骨细胞起源于间充质的骨祖细胞，可进行传代培养。
破骨细胞来自于CD34＋的骨髓造血干细胞，为终末细胞，不能进行传代培养。
骨吸收代谢过程包括破骨细胞贴附在旧骨区域，分泌酸性物质溶解矿物质，分泌蛋白酶消化骨基质，形成骨吸收陷窝；其后，成骨细胞移行至被吸收部位，分泌骨基质，骨基质矿化而形成新骨。
破骨与成骨过程的平衡是维持正常骨代谢的关键，
【总页数】3页(P30-32)
【作者】徐芝华;吴培福;曾兴梅;任改仙;韩博
【作者单位】中国农业大学动物医学院,北京,海淀,100193;中国农业大学动物医学院,北京,海淀,100193;中国农业大学动物医学院,北京,海淀,100193;中国农业大学动物医学院,北京,海淀,100193;中国农业大学动物医学院,北京,海淀,100193
【正文语种】中文
【中图分类】Q253
【相关文献】
1.接骨方含药血清孵育体外培养骨痂中破骨细胞、成骨细胞和软骨细胞生长的影响[J], 尹拥军;王炳南;林勇
2.清络通痹颗粒含药血清对体外培养的成骨细胞和破骨细胞的影响 [J], 陈长华;方
泰惠;周玲玲;周学平;贾敏
3.白芍总苷对体外培养的成骨细胞和破骨细胞的影响 [J], 贾敏;张寒
4.蛇床子、菟丝子及其复方对体外培养成骨细胞和破骨细胞的影响及血清药理学研究 [J], 刘悦;季晖;蔡曼玲
5.补骨脂单体成分对体外培养成骨细胞和破骨细胞分化的影响 [J], 柴丽娟;樊娜;王虹;张晗;王少峡;苗琳;毛浩萍;周昆
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植块法成骨细胞体外培养方法的改良【摘要】目的：对成骨细胞体外培养改良植块法的可行性进行观察。
方法：应用改进的植块接种培养技术进行成骨细胞的分离培养，通过细胞形态学、碱性磷酸酶（alp）细胞化学染色、骨钙素（bgp）免疫细胞化学染色、钙化结节的形成四方面对成骨细胞进行鉴定。
结果：(1)原代及传代细胞均贴壁生长，呈三角形、多角形、梭形等不规则形态，条件培养基中形成钙化结节，碱性磷酸酶细胞化学染色及骨钙素免疫细胞化学染色呈阳性。
结论：改进的植块接种培养法可获得成骨细胞，缩短成骨细胞的培养周期。
【关键词】成骨细胞 ;体外培养 ;方法 ;改良【中图分类号】r329 【文献标识码】a【文章编号】1044-5511（2011）11-0453-02近20年来随着细胞生物学及生物材料学技术的发展而出现了一门新的边缘学科——骨组织工程学。
骨组织工程学研究的方向主要在：种子细胞及载体材料两方面。
种子细胞主要来源是骨外膜成骨细胞［1］、松质骨组织中的成骨细胞［2］、软骨细胞［3］及骨髓基质细胞［4］。
传统的成骨细胞体外培养方法需多次传代，具有耗时、易污染的缺点，我们对体外培养方法进行了改良，现总结如下：一、材料与方法1实验动物：健康新西兰大白兔（赣南医学院实验动物中心提供，体重1.5-2kg）2、主要试剂及仪器：胎牛血清（华美生物工程公司）dmem（gibco）胰蛋白酶（gibco）edta（gibco）青霉素g钠盐（华美生物工程公司）链霉素（华美生物工程公司）骨钙素抗体（解放军总医院放免研究所）sabc试剂盒（博士德公司）倒置显微镜（olympus）低温冰箱（indesit）二氧化碳细胞培养箱（forma scientific）3、兔成骨细胞的植块接种原代培养及传代：组织块的来源是新西兰大白兔的肋骨，无菌操作下采取骨组织块，在无菌室内进行植块前的处理：去除肋骨四周的软组织（包括骨膜及软骨）及将肋骨剪成1mm×1mm×1mm大小的骨组织块，用中性d-hanks液反复冲洗组织块，直至液体清亮为止。
不同来源成骨细胞体外培养比较-人体解剖学论文-基础医学论文-医学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——骨的形成和重塑需要多种细胞的协作，其中成骨细胞发挥了至关重要的作用。
成骨细胞不仅调节骨的矿化，还间接调节破骨细胞的骨吸收功能，它的数量和功能变化直接影响骨的生物学特性。
目前用于研究成骨细胞生物学特性的细胞模型多种多样，包括不同种属来源的原代细胞和永生化或是恶性肿瘤细胞系。
但这类细胞的生物学特性和人成骨细胞间存在一定的差异。
在选择某个成骨细胞模型实验之前，需要对其生物学特性进行合理评估，以增加实验结论的可靠性。
例如，选用骨肉瘤细胞系取材方便，不受伦理问题的约束，且有着更好的再现性；而人原代细胞具有的优势显而易见，其生物学特性与在体的成骨细胞更为接近，所以在临床前及临床实验中应用更广。
因此，本篇综述将讨论不同种类的成骨细胞，包括各种种属来源的原代成骨细胞和细胞系，为体外实验选择合适的成骨细胞模型提供参考。
1 原代成骨细胞1. 1 人原代成骨细胞与其他种属的原代细胞或者细胞系相比，人原代成骨细胞更为贴近临床真实状态。
但人原代成骨细胞在分离出来之后将会保持其已经分化的表现型，即这类细胞将会在不同的细胞群之间表现出异质性，而异质性是由取材部位和样本年龄等因素不同引起[1].分离人原代成骨细胞的主要方法是：酶解法和组织培养法，但这些方法步骤较为繁琐，耗时较长，不容易获取目的细胞[2].一些研究报道，酶解法会对随后的体外实验有影响，具体表现为，以酶解法得到的细胞，比组织培养的细胞增殖快，但ALP活性要低一些[3].不仅如此，与成骨细胞表型变化相关的基因表达和蛋白合成也受到供者年龄的影响。
目前为止，已经证明多种因素对人原代成骨细胞的生物学特性有影响，其中供者的性别、年龄、取材位置和取材方法的影响尤为突出。
至于哪些影响因素应该作为细胞模型的纳入标准现在还没有统一的认识。
1. 2 其他种属的原代成骨细胞由于人原代成骨细胞获取困难且存在细胞表型的异质性，科学家们开始尝试从其他动物体上分离培养原代成骨细胞用于体外研究。
与人原代成骨细胞相比，动物原代成骨细胞获取简便。
动物样本可以更好的控制纳入标准，控制样本的年龄、性别、体重和取材位置等。
但使用其他种属的原代成骨细胞有着明显的弊端，种属之间的差异可能会使得出的结论与使用人原代成骨细胞得出的结论不同[4].1994 年，美国食品药品监督管理局批准使用大鼠的原代成骨细胞作为临床前和临床药物疗效评估模型，用以治疗和预防绝经后骨质疏松[5].考虑到大鼠骨骼样本容易获取且基因组序列已知，大鼠的原代成骨细胞被广泛用于研究激素对细胞表型的影响及评估高分子聚合物或生物材料骨性导和细胞毒性[6].1983 年，Ecarot-Chartier 等[7]通过新生小鼠颅骨组织块培养的方式首次分离出小鼠原代成骨细胞。
影响鼠原代成骨细胞表现型的主要是样本年龄和取材位置[8].其他种属的原代成骨细胞来自牛、羊和兔。
与啮齿类动物相比，这些种属来源的细胞使用较少。
2 细胞系与原代细胞相比，细胞系的优势有：无限传代、容易获取和表型的相对稳定性等。
但是，有学者报道经过多次的传代之后，有些细胞系出现明显的表型异质性。
而且不管是非转化或是转化的细胞系，都被固定在分化的某一阶段，没法反应正常成骨细胞全面的表型特征。
不仅如此，恶性细胞系的增殖是非生理模式，其他细胞所具有的接触抑制等相关生物学特性被改变[9].即便如此，细胞系在成骨细胞模型中还是得到了广泛的使用。
即便如此，细胞系在成骨细胞模型中还是得到了广泛的使用。
最为常用的细胞系有：人源的MG-63、大鼠源的ROS 17/2 和小鼠源的MC3T3- E1.2. 1 MG-63 细胞系1977 年Billiau 等[10]在14 岁男性左侧股骨末端的近皮质骨肉瘤中分离出这株细胞。
MG-63 增殖迅速，不存在接触抑制，这一点被利用来生产干扰素[11].MG-63 细胞系不具有成熟的成骨细胞表型，关于MG-63 分化和矿化特性的研究尚存在争议。
Kumarasuriyar 等[12]报道，MG-63 可作为良好的分化和矿化模型。
在培养15d 之前，MG-63 分泌的ALP活性增加，随后逐步降低为正常水平，但Ⅰ型胶原的表达量在培养的第二周才增加。
在培养的第15 天和第29 天分别检测出骨钙素（Osteocalcin,OCN）和骨粘连蛋白（Osteonectin,ON）的表达，但是Runt 相关转录因子2 和骨桥素（Osteopontin,OPN）直到培养的第28 天才表达。
Pierschbacher[13]和Saldana[14]分别在1988 年和2011 年报道MG-63 细胞系的ALP活性很低，且不能够完成矿化。
MG-63 对维生素D3和PTH 的反应和人原代成骨细胞相似。
MG-63 相关蛋白的分泌具有维生素D3刺激的时间和计量依赖性[15].有学者证明，MG-63 分泌的细胞外基质成分与人原代成骨细胞不同，MG-63 分泌白凝胶酶和金属蛋白酶组织抑制因子，但是没有Ⅰ型胶原1和 2 链的羧基端前肽[13].由于以上特点，MG-63细胞系是用来研究激素对成骨细胞调节作用的良好模型。
而MG-63 细胞系分泌的细胞外基质与原代细胞存在的差异限制了其在成骨细胞表型分化和基质矿化方面的研究。
2. 2 ROS 17 /2 细胞系此细胞系来源于ACI 大鼠自发的肿瘤，经过多次皮下接种后形成的稳定细胞系。
Majeska 等[16]致力于此细胞系的建立与研究，发现在PTH 或维生素D3作用下ROS 17/2 表现出较强的腺苷酸环化酶和ALP 活性。
ROS 17 /2. 8 为ROS 17 /2 的亚克隆，它在合适培养条件下可结构性的表达Ⅰ型胶原（Type-I collagen,COL-Ⅰ）mRNA,并完成矿化[17].Noda等[18]发现，在转化生长因子（Transforming growthfactor,TGF）作用下，ROS 17 /2. 8 合成ALP、COL-Ⅰ、ON 和OPN 增加，但OCN 合成减少。
2. 3 MC3T3-E1 细胞系它是应用非常广泛的小鼠源性前成骨细胞模型。
经3d 的培养，MC3T3-E1 即能够在体外增殖且分泌COL-Ⅰ，与此同时，ALP 的活性从培养的第3天开始增加直到第21 天完成矿化为止，矿物质于第14 天开始沉积[19].抗坏血酸和甘油磷酸钠是MC3T3-E1 完成矿化的前提条件，在缺乏此类导剂时，MC3T3-E1 产生的ALP 活性很低，没法完成正常的矿化[20].MC3T3-E1 的分化受到多种因素的调节，包括培养基、血清、细胞因子和生长因子[21].在加入全营养的胎牛血清时，细胞在分化早期具备较强的增殖能力，且在增殖后期细胞ALP 活性、mRNA和蛋白的合成均增加[22].虽然MC3T3-E1 是一种细胞系，但是在多次传代后其增殖能力下降，传60代之后细胞出现不连续的细胞周期，发生复制性衰老[23].基于以上特性，MC3T3-E1 是研究骨骼形成和重塑的良好细胞模型。
2. 4 SaOs-2 细胞系1987 年Rodan 等[24]从11 岁的白人女性分离出SaOs-2 细胞系并对其进行研究。
此种细胞系具有成熟的成骨细胞表型，碱性磷酸酶（Alkalinephosphatase,ALP）活性较其他骨肉瘤细胞系高得多。
在培养的早期其ALP 活性与人原代成骨细胞相似，但是在相同条件培养14d 之后，其活性要高出人原代细胞120 倍[14].由于SaOs-2 细胞系合成分泌ALP 的特点，在培养时加入地塞米松和磷酸盐的量要适当减少。
SaOs-2 细胞系分泌的COL-Ⅰ和人原代细胞相似，但是其赖氨酰基羟基化水平较高[25].此细胞系分泌正常量的细胞因子和生长因子，同时表达甲状旁腺激素（Parathyroid hormone,PTH）和维生素D3的受体[26].2. 5 hOB 细胞系即the adult human osteoblast-like cell line,hOB的建立是将SV40 病毒的大小T 抗原转染到68 岁的一个正常女性的成骨细胞中。
hOB 分化良好，能够对类固醇激素起反应，非常接近成熟的成骨细胞表型。
此细胞系能够转录出COL-Ⅰ、OPN、TGF 和白细胞介素-1（IL-1），且在维生素D3作用后OCN和ALP 的转录和翻译均增加。
hOB 上表达功能性的雌激素和雄激素受体，但无PTH 的受体[27].2. 6 hFOB 细胞系即the human fetal osteoblast cell line,科学家将SV40 病毒大T 抗原的温度敏感突变体tsA58 转染到自发流产胎儿组织分离得到的成骨细胞中，从而建立了hFOB.hFOB1. 19 是这个细胞系中分泌ALP活性最高的克隆，其ALP 和OCN 的分泌对维生素D3存在剂量依赖性。
分化的hFOB 表达高水平的OPN、ON 和COL-Ⅰ。
甲状旁腺激素可以使得hFOB的cAMP 水平增加。
另外，在细胞汇合时hFOB 可形成钙化结节[28].2. 7 CAL72 细胞系Rochet 等[29]于1999 年建立了一株新的人骨肉瘤细胞系，与之前已建立的所有骨肉瘤细胞系相比，其生物学特性及表型更加接近正常的成骨细胞。
CAL72 为研究成骨细胞在造血细胞生长分化中的作用提供了良好的模型。
与其他骨肉瘤细胞相比，其呈现出单一细胞因子表达谱的特点，这与之前研究较为充分的MG-63 和SaOs-2 相比更加接近正常的成骨细胞，并且CAL72 与前两个细胞系不同，不会抑制造血克隆的生成。
2. 8 UMR 106 细胞系这株骨肉瘤细胞系于1976 年由Martin 等[30]建立。
UMR 106 起源于由P32 导的恶性骨源性肉瘤。
此细胞系能够分泌ALP、COL-Ⅰ、前列腺素和胶原酶。
不仅如此，UMR 106 还表达有表皮生长因子、PTH 和维生素D3的受体，所以其可在这些因子的作用下完成矿化。
UMR 106 有 2 株亚克隆，UMR106-01 和UMR 106-06,就目前研究所知，这2 株亚克隆的唯一区别在于UMR 106-06 表达有降钙素受体[31,32].2. 9 UMR 201 细胞系此细胞系是来自新生大鼠颅骨的非转化细胞系。
UMR 201 由Ng 等[33]于1988 年建立，它是非永生化的细胞系，其只能传代12 次，具有前成骨细胞的表型特征。
在加入促分化试剂之前，UMR 201 检测不出ALP 的表达，但在加入维甲酸之后，ALP 合成量提高，并具有很高的活性。
TNF、地塞米松和维生素D3能够调节UMR 201 对维甲酸的反应性[34].由于以上原因，UMR 201 可组细胞向成骨细胞方向分化的研究模型，也可用以研究体内激素和各种生长因子对成骨细胞分化的调节及其相关机制。
