种子生活力测定的原理

实验 17 种子生活力的快速测定种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。

它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据，与播种时的用种量直接有关。

测定种子生活力常采用发芽实验，即在适宜条件下，让种子吸水萌发，在规定天数内统计发芽的种子占供试种子的百分数。

但是常规方法（直接发芽）测定种子生活力所需时间较长，特别是有时为了应急需要，没有足够的时间来测定发芽率，遇到休眠种子也无法知道。

而采用以下的化学方法，则能在较短时间内获得结果。

Ⅰ氯化三苯基四氮唑法（ TTC 法）一、原理凡有生命活力的种子胚部，在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，在呼吸代谢途径中由脱氢酶催化所脱下来的氢可以将无色的 TTC 还原为红色、不溶性三苯基甲（ TTF ），而且种子的生活力越强，代谢活动越旺盛，被染成红色的程度越深。

死亡的种子由于没有呼吸作用，因而不会将 TTC 还原为红色。

种胚生活力衰退或部分丧失生活力，则染色较浅或局部被染色。

因此，可以根据种胚染色的部位以及染色的深浅程度来判定种子的生活力。

二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料玉米、小麦等种子。

（二）试剂0.5% TTC 溶液：称取 0.5 gTTC 放在烧杯中，加入少许 95% 乙醇使其溶解，然后用蒸馏水稀释至 100 mL 。

溶液避光保存，若变红色，即不能再用。

（三）仪器设备恒温箱，培养皿，刀片，烧杯，镊子，天平。

三、实验步骤1. 浸种将待测种子在 30 ～ 35 ℃温水中浸种（大麦、小麦 6 小时，玉米 5 小时左右），以增强种胚的呼吸作用。

2. 显色取吸胀的种子 200 粒，用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半，将其中的一半置于 2 只培养皿中，每皿 100 个半粒，加入适量的 0.5% TTC 溶液，以覆盖种子为度。

然后置于 30 ℃恒温箱中 1 h 。

观察结果，凡胚被染为红色的是活种子。

将另一半在沸水中煮 5 min 杀死胚，作同样染色处理，作为对照观察。

三种常用检测种子生活力方法比较(1)随着种子在种植中所占的重要地位，各种检测种子生活力的方法也应运而生。

常用的检测种子生活力的方法有三种，分别是发芽率法、荧光法和电导率法。

本文将对这三种方法进行详细介绍，并进行比较。

一、发芽率法发芽率法是最常用的检测种子生活力的方法之一。

其主要原理是把一定数量的种子在一定的条件下进行发芽，然后通过计算发芽率来推断种子的生活力。

条件包括温度、湿度、光照和通风等，不同的作物和品种有不同的最适条件。

发芽率法检测种子主要有以下几个优点：一是操作简单；二是可大批量检测；三是检测结果真实可靠。

但是同时也存在着一些缺点，如检测时间长、结果受环境因素的影响等。

二、荧光法荧光法是一种新兴的检测种子生活力的方法。

荧光法主要利用了种子的细胞色素氧化酶体系在氧化还原体系下发生反应而使荧光物质荧光素产生荧光。

通过测定产生的荧光的强度来判断种子的生活力。

三、电导率法电导率法是一种利用种子中质量和导电能力的变化来测定种子生活力的方法。

其主要原理是将一定数量的种子放入导电液中，通过测定电导率的变化来判断种子的生活力。

导电液可以是盐水、糖水、电导液等。

三种方法比较从上述的介绍可以看出，每种方法都有其优点和缺点，没有一种方法是完美的。

所以在实际应用中，需要根据具体情况选择合适的方法。

一般来说，发芽率法适用于大批量检测，荧光法适用于单个种子检测，电导率法适用于不同品种间的比较。

除此之外，也可以选择不同的方法相互协作，如发芽率法和荧光法或者电导率法和发芽率法组合使用。

实验五、种子活力的快速测定一、实验目的熟悉种子活力快速测定的方法⏹TTC（氯化三苯基四氮唑）法⏹BTB（溴麝香草酚蓝）法⏹红墨水法⏹纸上荧光法二、实验原理⏹TTC（氯化三苯基四氮唑）法二、实验原理⏹红墨水法⏹活细胞的原生质膜具有选择透性，死亡的种胚细胞原生质膜无选择透性；⏹红墨水中的染色成分大红G不能通过选择透性膜，但能通过非选择透性膜。

三、实验材料、器材及试剂⏹材料：小麦种子⏹仪器及器皿：恒温箱，恒温水浴锅，镊子，刀片，培养皿，小烧杯⏹试剂：⏹0.5% TTC溶液（随配随用，若已变为红色则不能继续使用。

）⏹5%红墨水四、实验步骤⏹1、材料准备：将待测小麦种子用30-35℃温水浸种6~8h。

⏹2、切种子：随机取种子30粒以上,用刀片沿种子胚中心线切成两半。

⏹3、染色处理：取一半的种子放在培养皿中，加入染色溶液（刚好浸没种子），30-35℃恒温箱中保温0.5-1h。

⏹4、对照处理：另一半于沸水中煮死，染色同3。

⏹5、结果观察：倒出染色溶液，TTC处理种子用清水将种子冲洗1-2次，红墨水处理种子则用水冲洗至冲洗液无色为止。

观察种胚着色状况。

⏹6、结果验证：随机取种子30粒以上，25℃保温保湿培养，48h检测发芽率。

五、结果与讨论⏹1、计算两种测定法得到的种子发芽率。

统计分析两种测定方法的结果是否有差异。

⏹讨论两种方法有什么不同？你认为哪一种方法测定的结果较好，为什么？⏹2、统计分析种子活力快速测定结果与实际种子萌发结果的差异性。

⏹讨论可能原因。

比较分析种子活力快速测定与种子直接发芽率测定的优缺点。

注意事项⏹TTC处理染色结束后要立即进行鉴定。

凡种胚全部或大部分被染成红色的即为具有生活力的种子，种胚不被染色的为死种子。

如果种胚中非关键性部位（如子叶的一部分）被染色，而胚根或胚芽的尖端不能染色都属于不能正常发芽的种子。

⏹红墨水处理后要冲洗充分后观察。

凡种胚不着色或着色很浅的为活种子，凡种胚与胚乳着色程度相同的为死种子。

实验六种子生活力的快速测定一、实验目的1.加深对种子作用的理解；2.掌握种子生活力的测定方法。

二、实验原理在播种、交换和调运种子之前，都要及时了解种子的发芽率，以确定是否作为播种材料或引种种源。

因此，快速而又准确地测定种子生活力，对于及时调种和播种后确保全苗、壮苗具有极其重要的意义。

种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。

有生活力的种子进行呼吸作用，呼吸代谢途径催化产生的氢（H）有生活力的种子进行呼吸作用，呼吸代谢途径催化产种子生活力越强，代谢活动越旺盛，被染成红色的程度越深；死亡种子没有呼吸作用，不会将TTC还原成红色；种胚生活力衰退或部分丧失生活力，染成较浅或局部被染色；三、实验材料及用品材料：绿豆种子实验器皿：恒温箱、小烧杯、镊子、刀片实验试剂：0.5%TTC溶液（避光保存）四、实验步骤1. 浸种：将待测种子在 30 ～ 35 ℃温水中浸种，以增强种胚的呼吸作用。

2. 显色：a、种子处理：随即选取吸胀的种子 40 粒，小心剥去种皮，勿伤及种胚。

b、实验组处理：将处理好的20粒种子置于小烧杯中，加入0.5%TTC溶液，以刚好浸没种子为宜，恒温（32℃）中保1h。

c、对照组处理：另取20粒种子，于沸水浴中煮5min后，加入0.5%TTC溶液，以刚好浸没种子为宜，恒温（32℃）中保温1h。

3. 统计：染色结束，马上鉴定；倒出TTC溶液，用清水将种子冲洗1-2次，观察种胚乳染色情况。

有生活力种子：种胚全部或大部分被染成红色；无生活力种子：不被染色。

生活力的种子数计算种子生活力的比率= ————————X 100%实验组测定种子数五、实验现象与结果保温1h后种子染色情况：被染色的数目未被染色的数目未煮沸的种子14 6煮沸的种子 0 20表一种子染色情况记录表图1 未煮沸的种子染色情况图2 煮沸的种子染色情况生活力的种子数未煮沸的种子生活力的比率= ————————X 100% = 14/20 X 100% = 70%实验组测定种子数生活力的种子数煮沸的种子生活力的比率= ———————X 100% =0/20 X 100% = 0实验组测定种子数六、分析和讨论1.在实验中，去种皮时要小心防止伤及种胚，因为胚是种子中的活细胞，若损失可能使实验无法进行反应，造成实验的误差。

实验3 种子生活力的测定目的要求用化学试剂测定种子生活力，可以在短时间内评定种子质量。

特别是对于有些树种种子的休眠期长，难于进行发芽测定，采用此法测定种子的生活力就具有明显的优越性。

通过实验要求了解测定种子生活力的基本原理，并学会其操作程序。

一、 氯化三苯基四氮唑（TTC ）法【原理】凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。

当TTC 溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH 或NADPH ）还原时，可产生红色的三苯基甲 （TTF ），胚便染成红色。

当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。

TTC 还原反应如下：TTC（无色） TTF（红色）【仪器与用具】培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH 试纸。

【试剂】TTC 溶液的配制：取1g TTC 溶于１L 蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC 溶液。

药液p Ｈ应在6.5～7.5，以pH 试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。

【方法】1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h ，使种子充分吸胀。

2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。

3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC 溶液，以浸没种子为度。

4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min.5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。

表32-1 染色法测定种子生活力记载表+Cl+CN N NN +2HCN N NNHHCl【注意事项】1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。