无菌检查用培养基适用性验证报告.doc

无菌检查用培养基灭菌后的保存时限验证方法1项目描述质量控制部无菌检查用培养基为硫乙醇酸盐流体培养基及胰酪大豆陈液体培养基，此两种培养基均为商品化的脱水培养基。

根据《中国药典》2023版规定，无菌检查用的硫乙醉酸盐流体培养基和胰酪大豆豚液体培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求，制备好的培养基若不即时使用，应置于无菌密闭容器中，在2~25℃、避光的环境下保存，并在经验证的保存期内使用。

因此，拟对胰酪大豆月东液体培养基及硫乙醛酸盐流体培养基在灭菌后的保存期进行验证，验证方法为：培养基灭菌后冷处保存（冰柜保存2~10°C）,确认在保存期内两种培养基的PH值、无菌性及灵敏度是否符合要求；每种培养基应进行三个配制批次验证；分别确认培养基在灭菌后保存0天、1天、2天、3天、4天、5天的PH值、无菌性检查及灵敏度检查是否符合要求；根据验证结果，确认硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆腺液体培养基在灭菌后的保存时限。

2.目的对无菌检查用培养基灭菌后的保存时限进行验证，确认无菌检查用培养基灭菌后在保存有效期内的PH值、无菌性检查及灵敏度检查是否符合要求。

3.范围本验证文件的范围仅适用于质量控制部无菌检查用培养基制备好后的保存时限的验证，验证项目包括：先决条件确认、实验设备及器材确认、培养基确认、灭菌效果确认、包装储藏确认、培养基PH值确认、培养基无菌性检查确认及培养基灵敏度检查确认。

4.职责4.1质量控制部职责：负责验证方案、报告的起草；负责按照批准的方案进行验证操作；负责对验证数据进行收集、整理、分析；负责记录在确认过程中所有发生的偏差及变更；负责针对偏差及变更，并提出解决方案，以采取纠正行动；负责验证过程中的相关检验工作；负责验证结果的总结、分析评价工作；负责人负责审核文件。

4.2质量保证部职责：负责监督整个验证活动，确保验证按计划进度进行；负责过验证项目的验证；负责对验证数据进行收集、整理、分析；负责变差、变更的调查和处理，偏差调查报告及变更情况上报审批；负责人负责审核文件。

培养基适用性检查▪计数实验的培养基适用性➢该部分内容均为新增➢规定了该内容的应用范围➢采用标准菌种计数，回收率以及形态比较的判定方法➢标准菌种为：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉；规定了稀释后的工作菌液的保存条件和保存期限➢引入了对照培养基的概念➢判定的依据：回收率大于70％，且形态一致▪控制菌检查的培养基适用性➢该部分内容均为新增➢规定了该部分内容的应用范围以及检查的项目➢采用标准菌种比较的判定方法➢根据培养基的用途不同，分为增菌培养基的促生长能力、固体培养基的促生长能力、培养基的抑制能力、固体培养基的指示能力、液体培养基的指示能力等5种检查方法➢在检查中引入了涂布接种的概念1.概述培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节。

计数测定用培养基的促生长能力是微生物限度检查结果判断的重要影响因素，控制菌检查用培养基也可能由于其促生长能力、指示能力、抑制能力的差异，从而对菌落颜色、形态等指标存在较大差异，影响结果判断的客观性。

培养基适用性检查是通过检验用培养基与对照培养基的比较，以阳性菌的生长状态或特征来评价拍段检验用培养基是否符合检验要求。

微生物限度检查用培养基主要分为细菌、霉菌及酵母菌计数测定用培养基和控制菌检查用培养基两部分。

2010《版中国药典》微生物限度检查法中收载了“适用性检查”对培养基质量进行控制。

2、培养基适用性检查实验的一般要求2.1培养基适用性检查适用范围2010版《中国药典》规定微生物限度检查中成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。

培养基使用性检查试验可用于确定实验室所用培养基(包括购置的不同批号的成品培养基、不同批号的脱水培养基干粉、按处方自行配制培养基不同批次的原材料等)、制备程序（包括水质控制、配制方法、灭菌程序等）、保存条件（温度、湿度、时间及盛装培养基的容器条件等）等是否满足微生物限度检查用要求。

即上述影响培养基质量的各关键控制点应通过培养基使用性检查试验确定，如果任一控制点发生变化应重新进行培养基适用性检查。

无菌检查用培养基的适用性检查标准操作规程目的：建立无菌检查用培养基适用性检查标准操作规程。

范围：适用于无菌检查使用培养基的适用性检查。

依据：中国药典》2015年版《药品生产质量管理规范》2010年修订《中国药品检验标准操作规程》2010年版责任：QC化验员对实施本规程负责。

内容:1、概要：无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌检查及灵敏度检查要求。

本检查可在供试品的检查前或与供试品的检查同时进行。

2、材料及设备2.1 生化培养箱2.2 生物安全柜2.3 中国浊度标准管（由中国药品生物制品检定所提供）2.4 灭菌试管、灭菌注射器2.5 0.9%无菌氯化钠溶液2.6 0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液：取聚山梨酯80 0.05ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠至100ml，混匀，灭菌即可。

3、无菌检查培养基的适用性检查3.1无菌性检查取新鲜配制灭菌的培养基各5瓶，硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃，胰酪大豆胨液体培养基置20～25℃，培养14天，应无菌生长。

3.2灵敏度检查3.2.1菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

金黄色葡萄球菌[Staphylococcus aureus CMCC(B) 26003]铜绿假单胞菌[Pseudomonas aeruginosa CMCC(B) 10104]枯草芽孢杆菌[Bacillus subtilis CMCC(B) 63501]生孢梭菌[Clostridium sporogenes CMCC(B) 64941]白色念珠菌[Candida albicans CMCC(F) 98001]黑曲霉[Aspergillus niger CMCC(F) 98003]3.2.2菌液制备3.2.2.1 金黄色葡萄球菌菌悬液制备3.2.2.1.1 取金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18～24小时，取新鲜传代菌种一支待用。

无菌检查方法验证报告目录1. 目的 (3)2. 适用范围 (3)3. 接受标准 (3)4. 抽样计划 (3)5. 设备、试剂和菌种信息 (3)6. 试验步骤 (4)7. 供试品检查 (6)8. 结论 (6)9. 再验证周期 (6)10. 附件清单 (6)1.目的支据中国药典2020版无菌检查法的要求，对产品的无菌检查法进行验证，以确定一种无菌检查的方法能有效的消除该产品对微生物的抑制作用，从而证实该方法的有效性和实用性。

2.适用范围适用于本司产品的无菌检查。

3.接受标准与阳性对照比较，含供试液各容器中的试验菌（金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌和黑曲霉）均生长良好，则可照此检查方法和检查条件进行供试品的无菌检查。

如含供试品的任一容器内的试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，需进一步改进检验条件再进行方法验证试验。

4.抽样计划随机抽取灭菌后的样品24份。

具体信息见表一：表一样品信息确认人/日期：复核人/日期：5.设备、试剂和菌种信息5.1设备信息详见表二表二设备信息确认人/日期：复核人/日期：5.2试剂信息详见表三：表三试剂信息确认人/日期：复核人/日期：5.3菌种信息详见表四：表四菌种信息确认人/日期：复核人/日期：5.3.1菌液的制备用接种环取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的第三代培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的菌悬液；用接种环取生孢梭菌的第三代培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的菌悬液；用接种环取白色念珠菌的第四代培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的菌悬液；用接种环取黑曲霉的第三代培养物，向培养物中加入10mL0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，转移孢子悬液至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成浓度≤100cfu/mL的孢子悬液。

以上操作均在微生物检验室阳性菌室的生物安全柜中进行。

培养基适用性检查记录A一、引言培养基的适用性检查是指通过相关试验和分析，对培养基的成分、性质和质量进行评估，以确认其适用性和可靠性。

本报告记录了对培养基A 的适用性检查结果。

二、试验目的本次检查的目的是评估培养基A在不同温度、pH值和气氛条件下的生长性能，以确定其适用范围和最佳条件。

三、试验设备和材料1.培养基A：按照制备方法配制得到的培养基。

2.培养皿：用于培养细菌的培养皿。

3.细菌菌种：选择一种常见的细菌菌种作为试验菌种。

4.灭菌器：用于培养基和培养器具的灭菌处理。

5.恒温培养箱：用于控制培养温度。

6.pH计：用于测量培养基的pH值。

四、试验方法1.培养基质量检查：对培养基进行外观检查，观察是否存在悬浮物、沉淀物或变色等异常情况。

2.培养基成分测试：对培养基进行化学分析，检测关键成分的含量是否符合规定标准。

3.温度适应性试验：将培养基A分装至多个培养皿中，接种细菌菌种后，在不同温度条件下培养一段时间，观察细菌的生长情况。

4.pH适应性试验：将培养基A分装至多个培养皿中，调整pH值到不同水平，接种细菌菌种后，在恒温培养箱中培养一段时间，观察细菌的生长情况。

5.气氛适应性试验：将培养基A分装至多个培养皿中，分别置于不同的气氛条件下，接种细菌菌种后，在恒温培养箱中培养一段时间，观察细菌的生长情况。

五、试验结果与分析1.培养基质量检查结果显示，培养基A外观正常，无悬浮物、沉淀物或变色等异常情况。

2.培养基成分测试结果显示，培养基A关键成分的含量符合规定标准，满足培养需求。

3.温度适应性试验结果显示，培养基A在不同温度条件下均能支持细菌的生长，生长速度和菌落数量与温度呈正相关关系。

4.pH适应性试验结果显示，培养基A在pH值在6~8范围内能够支持细菌的生长，菌落数量在不同pH值条件下有所差异，但均能生长。

5.气氛适应性试验结果显示，培养基A在不同气氛条件下均能支持细菌的生长，但生长速度和菌落数量会受到气氛条件的影响。

培养基适用性检查报告1. 试验目的：对培养基性能的质量控制，以保证微生物检验的质量。

2. 适用范围：适用于细菌、霉菌及酵母菌计数用培养基和控制菌检查用的培养基的适用性检查。

需检查的培养基包括成品培养基、由脱水培养基和按处方配制的培养基。

3. 试验内容：3.1 .计数培养基的适用性检查3.1.1. 菌种：大肠埃希菌[CMCC( B)44102]金黄色葡萄球菌[CMCC( B)26003]枯草芽抱菌[CMCC( B)63501]白色念珠菌[CMCC (F) 98001]黑曲霉[CMCC ( F) 98003]接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或琼脂斜面培养基中，33C培养24小时，接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂斜面培养基中，26C培养48小时。

上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50〜100cfu的菌悬液。

接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，26C培养7天，加入4ml含0.05% ( ml/ml )聚山梨酯80的0.9%的无菌氯化钠溶液，将抱子洗脱。

然后，用管口带有薄的无菌棉花吸出抱子悬液至无菌试管内，用含0.05% (ml/ml )聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50〜100cfu的菌悬液。

菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在 2~8C ，可在24小时内使用。

黑曲霉孢子悬液可保存在2~8C ，在验证过的贮存期内使用。

3.1.3.适应性检查3.1.3.1.细菌计数用培养基适应性检查取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各1ml (50〜100cfu ),分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备 2个平皿，混匀，凝固，置33C 培养48小时，计数。

用被检培养基和对照培养基(若无对照培养基可用其他厂家生产的培养 基)按上述方法进行试验，并记录。

试验结果报告见表 1。

(精选)无菌检查法培养基的适用性检查无菌检查法是一种用于检测生物培养基中是否存在细菌、真菌等微生物的方法。

对于无菌检查法培养基的适用性检查，其主要目的是通过一系列实验探究不同基质中培养基的适用性，并验证其能否满足质量控制要求。

关于无菌检查法培养基适用性检查，其需要考虑以下几个方面：1. 检测的菌种无菌检查法的适用性检查主要是针对检测的菌种进行的。

在检查培养基适用性时，应选取常见的菌种，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等，以测试其在不同基质中生长情况。

2. 基质的选择适用性检查需要考虑基质的选择。

一般情况下，培养基要适应于常见的基质中，如水、空气、土壤等。

同时，针对基质特性有所不同的检测培养基，还需要进行不同基质特性的适用性测试，如pH值、含盐量等。

3. 实验室条件在进行无菌检查法培养基适用性检查时，还需要考虑实验室条件。

一般情况下，必须要有一定的实验室基础设施和操作规范，如洁净室、灭菌设备等。

4. 实验材料适用性检查还需要考虑实验材料的选择。

一般情况下，适用性检查需要使用经过严格检测和认证的实验材料，如蒸馏水、洗涤剂、试管等。

需要注意的是，在进行无菌检查法培养基适用性检查时，需要进行详细的实验记录，并对实验结果进行分析和总结，以便更好地指导检测实际生产和应用过程中的无菌检测工作，确保其可靠和稳定。

总之，无菌检查法培养基适用性检查，是一项非常重要的质量控制工作。

只有通过严格的实验探究和检测，才能保证培养基在实际应用过程中具有较好的适应性和稳定性，积极促进无菌检测工作的提高和优化，更好地维护人类的健康与安全。

.培养基适用性验证方案起草人：方案审核人：方案批准人：XXXXX药业股份有限公司目录1. 验证目的 (2)2. 参照标准 (2)3. 验证项目 (2)4. 验证小组人员及职责 (3)5. 验证可接受的标准 (3)6. 验证步骤 (3)7. 菌液制备 (6)8. 适用性检查 (6)9. 控制菌检查 (7)10. 操作方法 (8)11.结论 (11)1. 验证目的：需氧菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基及控制菌培养基应进行培养基的适用性检查。

本次验证的目的是确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适合需氧菌、霉菌及酵母菌总数及测定和控制菌适用性检查。

2. 参照标准：2015版中国药典微生物限度检查法。

3. 验证项目：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查和控制菌适用性检查。

4.验证小组人员及职责：4.14.2验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。

4.2.2认真观察并做好验证原始记录。

4.2.3对实施验证的结果负责。

4.3验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。

4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。

4.3.1.3负责验证方案的批准工作。

4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。

4.3.1.5负责验证报告的批准工作。

4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。

4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。

4.3.2.3负责验证方案的实施。

4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。

4.3.2.5参与验证结果的评价工作。

4.3.3质量部职责4.3.3.1负责验证方案的审核工作。

4.3.3.2负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。

4.3.3.3负责验证中各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过程中的各项检验工作负责。

4.3.3.4负责验证资料和报告的审核工作。

4.3.3.5负责验证文件回收、归档管理工作。

培养基适用性检查沙氏葡萄糖琼脂培养基适用性检査接种不大于lOOcfu白色念珠菌菌液及黑曲霉泡子悬液至沙氏衙萄糖琼脂培养基，至20~259培养不超过5天，每一试验菌株平行制备2个半1111。

同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5~2范困内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。

检验时间: 对照培养基批号: 被检配制批培养基批号:检验人/日期: 复核人/日期:胰酪大豆腺琼脂培养基适用性检査接种不大于lOOcfu的金黄色葡简球菌、铜绿假单胞菌.枯草芽砲杆菌各51至胰酪大豆腺琼脂培养基平板上.30、35'C培养不超过3天：接种不大于lOOcfu 的白色念珠菌菌液及黑曲霉砲子悬液各lml至胰酪大豆腺琼脂培养基平板上.30~35C培养不超过5天，每一试验菌株平行制备2 个平1111：同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0. 5、2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致检验时间: 对照培养基批号: 被检配制批培养基批号:R2A琼脂培养基适用性检査取不大于lOOcfu的铜绿假胞杆菌液及枯草芽抱杆菌液各lml,分别注入无菌平UI1中，立即倾入R2A琼脂样品培养基，每一试验菌株平行制备2个平皿，混匀，凝固，S35-C培养120小时，计数。

同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5-2范困内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。

检验时间: 对照培养基批号: 被检配制批培养基批号:胰酪大豆淼液体培养基适用性检査接种不大于lOOcfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假取胞菌、枯草芽他杆菌、大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌至胰酪大豆腺裁体培养基中，至3OT5C培养18・24小时，每一试验菌株平行制备2管：同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。