食蟹猴人工授精及体外受精实验初步程序

人工授精操作规程一．准备工作1.双层乳胶手套2.预热好的37℃保温杯内装一次性专用集精袋二.清洗挤出公猪包皮积尿，然后用清水冲洗干净，再用高级纸巾擦干，避免纸屑沾在阴部后掉入采精杯。

清洗结束后，采精的手要戴上采精专用手套。

三．采精刺激公猪爬跨假台畜，然后将手握成空拳在公猪阴茎伸出同时，导入空拳拳内，用手紧握伸出的公猪阴茎螺旋状龟头，顺其向前冲力将阴茎的奜奓夢状弯曲拉直，让其抽送转动片刻，用手指由轻到紧带弹性有节奏握紧螺旋阴茎龟头不让转动，随阴茎充分勃起时顺伸向前(不要强牵)，手指有弹性、而有节奏调节压力．公猪即行射精。

另一手持带有过滤纱布和保温的采精瓶收集精子部分的精液。

公猪射精停止，可按上法再次施加压力，即可第二或第三次射精。

直到完全射完为止。

射精过程约为5-7分钟。

公猪射精一般分三部分，第一部份为清亮液体，多为尿道球腺分泌物，其中只含少量或不含精子，一般不采集。

第二部份为乳白色浓精，精子浓度高，应全部采集。

第三部份是含胶状物的较透明液体，精子浓度中偏低，采集时应滤去胶状物。

四．采精频率1.青年公猪（1岁左右）每周1-2次2. 成年公猪每周2-3次五．注意事项1.采精期间不准殴打公猪，防止出现性抑制2. 环境保持安静3. 采精完毕后彻底清洗采精栏4.精液必须经过滤纸再到集精袋六．精液颜色判断正常的精液应为乳白色，以下情况为不正常的精液：1. 淡黄色：内含尿液2.褐色或红色：内含血3. 绿色或黄绿色：化脓七．精液气味正常的精液气味为微腥味。

如有其它特殊臭味，可能是内含尿液或其他异物。

八．精子活力精子活力是指呈直线运动的精子百分率。

精子活力大于或等于0.7(+++)才可以使用，活力低于0.7不可以使用。

活力测定的标准为1.+++最活泼前进运动时呈涡状2.++活泼前进运动3.+微弱前进运动4._原地停止运动九．精液的稀释1. 精液稀释前准备（1）将稀释粉（专用）和蒸馏水搅拌均匀。

（2）恒温水浴锅开启并设至37.5℃。

人工授精操作规程一、采精的操作规程1、采精员一手带双层手套，另一手持37度保温杯用于收集精液。

2、饲养员将待采精的公猪赶至采精栏，用0.1%高锰酸钾溶液清洗其腹部及包皮、再用温水（夏天用自来水）清洗干净，避免药物残留对精子的伤害。

3、采精员挤出公猪包皮积尿，按摩公猪包皮部，刺激其爬跨假台畜。

4、公猪爬跨假台畜并逐渐伸出阴茎，脱去外层手套，将公猪阴茎导入空拳。

5、用手（大拇指方向与龟头方向相反）紧握伸出的公猪阴茎成螺旋状龟头，顺其向前冲力将阴茎的“S”状弯曲拉直，握紧阴茎龟头防止其旋转，公猪即可射精。

6、用滤纸过滤收集浓份精液于保温杯内的一次性食品袋内，最初射出的少量精液含精子很少，可以不必接取，有些公猪2—3个阶段将浓份精液射出，直到公猪射精完毕，射精过程历时5—7分钟。

7、采精员应注意安全，一旦公猪出现攻击行为，采精员应立刻逃至安全角。

8、经常保持采精栏的清洁干燥。

9、采精频率：成年公猪每周2次，青年公猪（1岁左右）每周1次，最好固定每头公猪的采精频率。

10、公猪采精调教：（1）后备公猪7月龄开始进行采精调教；（2）每次调教时间不超过15分钟；（3）采精调教可采用发情母猪诱导，观摩有经验公猪采精，以发情母猪分泌物刺激等方法；（4）调教公猪要有耐心，不准打骂公猪；（5）一旦采精获得成功，分别在第2、3天各采精1次，以利公猪巩固记忆；（6）注意公猪和调教人员的安全。

二、猪人工授精实验室管理规范人工授精站实验室是精液检查、处理、贮存的场所，为了生产出优质的、符合输精要求的精液，一定把好质量关，保证出站的每一瓶精液的活力不低于0.7，72小时之内保存活率不受影响，特对实验室日常运作做如下规定：1、实验室要求清洁、干净、卫生，每周彻底清洁一次。

2、非实验室工作人员在正常情况下不准进入实验室，采精员也不准进入实验室，如有需要，则要更换衣、鞋，洗手。

3、实验室工作人员进入实验室要更换衣、鞋，洗手。

4、各种电器设备应按其要求选择适应插座，除冰箱、精液保存箱、恒温培养箱等外，一般电器要求人走断电，干燥箱无人时设定温度不应高于100度。

人工受精流程是怎样
人工受精是一种辅助生殖技术，主要用于治疗不孕不育症，也
被广泛应用于家畜繁殖。

人工受精流程包括以下几个主要步骤：
首先，女性需要接受促排卵治疗。

促排卵治疗通常包括使用促
排卵药物，以促进卵巢排卵。

这些药物可以帮助卵巢产生多个卵泡，增加受精的机会。

然后，医生会监测卵泡的生长情况。

这通常通过超声波检查和
血液检测来进行。

一旦卵泡达到合适的大小，医生会使用人工受精
技术来获取卵子。

接下来，男性需要提供精子样本。

这通常是通过手动射精或精
液捐赠来完成的。

精子样本会被送到实验室进行处理，以获取高质
量的精子。

然后，实验室技术人员会将精子与卵子结合。

这可以通过直接
将精子注入卵子中，也可以通过体外受精（IVF）来完成。

在体外受
精中，精子和卵子在培养皿中结合，然后移植到女性子宫内。

最后，女性需要进行妊娠测试。

这通常在受精后两周进行，以确定是否成功妊娠。

总的来说，人工受精流程包括促排卵治疗、卵泡监测、卵子获取、精子提供、受精过程和妊娠测试。

这一流程需要医生、实验室技术人员和患者之间的密切合作，以确保成功受精和妊娠。

人工受精技术的不断发展和进步，为许多不孕不育夫妇带来了生育的希望。

然而，人工受精也面临着许多伦理和法律问题，需要严格的监管和规范。

希望通过不断的科研和实践，人工受精技术能够更好地服务于社会，为更多的家庭带来福音。

【高中生物】高中生物知识点：体外受精和早期胚胎培养体外受精与胚胎的早期培养：1、体外受精的原理：人工模拟体内环境（包括营养、温度、pH等），使初级卵母细胞成熟和精子获能，最终完成受精和胚胎保存。

2、体外受精主要操作步骤（1）卵母细胞的采集和培养：方法一：对小型动物一般用促性腺激素处理，使其排出更多的卵子，然后，从输卵管中冲取卵子，直接与获能的精子在体外受精。

方法二：对大型动物是借助超声波探测仪、腹腔镜等直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞，在体外经人工培养成熟后，才能与获能的精子受精（或从刚屠宰母畜的卵巢中采集卵母细胞）（2）精子的采集和获能：在体外受精前，要对精子进行获能处理。

采集方法：假阴道法、手握法和电刺激法等。

获能方法：培养法和化学法。

（3）受精：获能的精子和培养成熟的卵细胞在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程。

3、胚胎的早期培养：（1）培养目的：精子与卵子在体外受精后，应将受精卵移入发育培养液中继续培养，以检查受精状况和受精卵的发育能力。

（2）培养液成分：除一些无机盐和有机盐外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及血清等物质。

（3）当胚胎发育到适宜的阶段时，可将其取出向受体移植或冷冻保存。

不同动物胚胎移植的时间不同。

（牛、羊一般要培育到桑椹胚或囊胚阶段才能进行移植，小鼠、家兔等实验动物可在更早的阶段移植，人的体外受精胚胎可在4个细胞阶段移植）。

知识拓展：1、早期胚胎是指可用于移植的胚胎，在原肠胚之前的囊胚、桑椹胚甚至更早的阶段。

2、受精后形成的受精卵需经早期发育培养，才能完成植入或着床。

3、胚胎早期培养液成分与动物细胞培养液成分基本相同，除无机盐、营养成分和调节物质外，还需要血清、抗生素等，两者都是液体培养基，但植物组织培养为固体培养基，其中加入琼脂，所需植物激素主要是生长素和细胞分裂素两大类。

感谢您的阅读，祝您生活愉快。

3.2体外受精和早期胚胎培养一、教学目标1.简述哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤。

2.简述哺乳动物胚胎的早期培养方法。

3.认同体外受精在家畜快速繁殖中的重要意义。

二、教学难点与重点1.教学重点（1）体外受精在家畜快速繁殖中的重要意义。

（2）哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤。

2.教学难点（1）卵母细胞的采集和培养。

（2）精子的采集和获能。

三、教学过程教学过程一定要根据学生的具体情况、教材的内容、教学的条件综合考虑进行。

本节教材是在哺乳动物体内受精和胚胎发育的理论基础上，着重简述哺乳动物体外受精和胚胎早期培养的技术方法。

本节内容简单，学生通过阅读基本能明白。

另外，由于所讲内容技术性较强，与学生的生活相距较远，不易引起学习兴趣，所以可采用探究式的学习方法，以“试管牛”为例，创设出一种新的学习情景，在的带领下，让学生以胚胎工程学家的身份出现，亲历其境地去思考和探究“体外受精和早期胚胎培养”的过程，领悟其探究的方法，以达到激发兴趣、培养能力、获取知识的目的。

对具体的教学方法如下。

课前搜集有关“试管牛”技术及其发展的资料，并制作“利用屠宰厂牛卵巢收集卵母细胞，并工厂化生产试管胚胎”的计算机辅助教学软件（或投影片）。

同时，布置学生搜集有关“试管牛”的资料。

在课堂活动中，首先提出问题：“你听说过试管牛、试管羊吗？你知道什么是试管动物技术吗？”从而引出试管动物技术的概念及体外受精在家畜快速繁殖中的重要意义，提出本节主题。

接着，请学生回忆第一节课的内容，并思考讨论以下各题：（1）哺乳动物体内胚胎的形成需要经过哪些过程？（精子和卵子的发生—受精—胚胎的发育）（2）哺乳动物体外胚胎的发育需要完成哪些环节？（获得精子和卵子—体外受精—体外胚胎培养）。

在学生讨论出结果的基础上，告诉学生，胚胎工程专家就是根据这几个环节来研究哺乳动物体外受精和胚胎早期培养方法的。

今天请大家来扮演胚胎工程专家，共同模拟研究“试管牛”工厂化生产的技术流程。

技术研究总结—二（参考格式）子课题名称：食蟹猴生理生化学的研究一、研究工作总结摘要首次比较全面地研究了用阴茎电刺激采精法对食蟹猴进行电刺激采精、精液特征、用计算机辅助精液分析系统对精液进行分析，搞清了电刺激参数电压，频率，波宽和电刺激时间；精子的活力和密度；扫描电镜下精子形态；平均死活精子率，平均精子畸形率，平均精子顶体异常率。

首次比较全面地研究了精液稀释液在常温、低温和生理温度三种状态下保存精子的存活时间，存活指数和最佳配方。

首次比较全面地研究了雌性猴阴道涂片动态细胞图像变化，月经周期宫颈粘液氯化钠浓度的变化，正常雌性猴和因肥胖不孕雌性猴月经周期雌二醇和孕酮的分泌特点。

研究了食蟹猴人工授精和同期发情的和超数排卵和收集卵子的方法。

二、研究工作总结1. 研究内容及研究方法。

1）、人工采精方法: 以电刺激法采精，探讨最佳成功采精方法。

2）、精子性状指标测定包括：精子活力, 精子畸形率，精子浓度等性状以及精子的形态结构特点。

本实验采用计算机辅助精液分析系统对食蟹猴精液进行分析。

3）、精液的处理与保存：测定精液稀释液在常温（15～25℃）、低温（0～5℃）和生理温度（37℃）三种保存方法的精子活力、时间和最佳配方。

4)、食蟹猴排卵期的测定方法。

食蟹猴阴道涂片的动态观察；宫颈粘液NaCl浓度法测定食蟹猴排卵期的研究；用基础体温和基础体重法测定食蟹猴排卵期的研究。

5)、雌性食蟹猴月经周期雌二醇和孕酮分泌水平的研究。

6）、超数排卵方法: 采用以下超数排卵方法对供体进行试验：●孕激素+孕马血清（PMSG）或卵泡促激素（FSH）的超排方法；● PMSG或FSH+前列腺素（PGS）的超排方法；7）、受体动物选择和同期发情处理: 受体动物应是健康、营养良好、生殖机能正常的雌猴；安排120只猴子进行氯前列烯醇肌肉注射法的试验，同时进行了氯前列烯醇的阴道栓法的试验。

并同时对发情的食蟹猴进行人工授精实验。

8）、胚胎移植技术研究：采胚方法: 拟采用非手术内窥镜腹部穿刺采胚。

培育试管动物的流程一、获取卵子和精子。

这可是第一步呢，就像是找原材料一样。

对于卵子来说，得从雌性动物的卵巢里取出来。

这可不是个简单事儿哦。

一般呢，会用一些特殊的方法来刺激雌性动物的卵巢，让它多排出些卵子。

这个过程就像是在哄卵巢“多干活儿”一样，可有趣啦。

那精子呢，就从雄性动物那里获取呗。

雄性动物会很“慷慨”地提供精子的啦。

不过呢，这精子也得经过一些处理，把那些不太好的、活力不够的精子给筛选掉，就像挑水果一样，只留下最棒的那些精子。

二、体外受精。

有了卵子和精子，就可以进行体外受精啦。

把卵子和精子放在一个特殊的环境里，这个环境就像是一个小小的“约会场所”，让卵子和精子在这儿相遇、结合。

这个过程就像是一场浪漫的邂逅呢。

不过有时候呀，它们也不是那么顺利就能结合的，就像两个人刚开始相处可能会有点小别扭一样。

科学家们就得想办法去促进它们的结合，比如调整这个“约会场所”的环境条件之类的。

三、胚胎培养。

当卵子和精子成功结合成受精卵之后，就开始胚胎培养啦。

这个受精卵就像一颗小小的种子，要在合适的环境里慢慢长大。

这个环境需要提供它所需要的营养物质、温度、氧气等等。

就像我们照顾小婴儿一样，要给它提供最好的条件。

在这个过程中，胚胎会不断地分裂、发育，从一个小小的细胞团慢慢变成有好多细胞的胚胎呢。

四、胚胎移植。

胚胎培养到一定阶段后，就可以把它移植到雌性动物的子宫里啦。

这就像是把小种子种到地里一样。

不过在移植之前，也要对雌性动物的身体进行一些准备，确保它的子宫环境适合胚胎的生长。

这个时候呀，雌性动物就像一个温暖的小房子，要迎接这个小小的新生命啦。

一旦胚胎成功移植到子宫里，它就会在里面继续发育，就像在妈妈的肚子里一样，慢慢长成一个可爱的小动物呢。

体外受精和早期胚胎培养1.体外受精的过程哺乳动物的体外受精主要包括卵母细胞的采集、精子的获取和受精等几个主要步骤。

（1）卵母细胞的采集和培养第一种方法：对于实验动物如小鼠、兔和家畜猪、羊等进行卵母细胞采集时，可先用促性腺激素处理，使其超数排卵，然后在适当的时间从输卵管冲取卵子，并使其直接与获能的精子在体外受精。

第二种方法：从刚屠宰的雌性动物体内摘取卵巢，再从卵巢中采集卵母细胞。

第三种方法：活体采卵。

需要借助超声探测仪、内窥镜或腹腔镜等工具，直接从活的动物卵巢中吸取卵母细胞。

后两种方法适用于大家畜或大动物。

采集的卵母细胞需在体外培养成熟后才能与获能的精子受精。

（2）精子的采集和获能①收集精子的方法：假阴道法、手握法和电刺激法②精子体外获能的方法a.培养法对象：啮齿动物、家兔和猪等动物的精子方法：将取自附睾的精子，放入人工配制的获能液中，培养一段时间后，精子就可获能。

b.化学诱导法对象：牛、羊等家畜的精子方法：将精子放在一定浓度的肝素或钙离子载体A23187溶液中，用化学方法诱导精子获能。

(3)受精获能的精子和培养成熟的卵子，一般情况下都可以在获能液或专用受精溶液中完成受精过程。

精子和卵子一般要放在培养液小滴内共同培养一段时间才能完成受精。

【例1】采集的卵母细胞，在体外经人工培养成熟后，才能与获能的精子受精，以下原因不正确的是（）A. 卵子从输卵管中冲出也要经历类似精子获能的过程B. 动物排出的卵子成熟程度不同C. 体外人工培养至减数第二次分裂中期时，才算成熟D. 冲出的卵子还要培养一段时间由小变大解析：冲出的卵子还不成熟，只有培养至减数第二次分裂中期时，才具有与精子受精的能力。

在此之前也要经过类似精子获能的处理。

答案：D【例2】关于牛体外受精胚胎的工厂化生产的叙述正确的是( )A．精子和卵子受精形成受精卵后即可移入母牛子宫B．采集的卵母细胞应立即与精子共同放入培养液才能形成受精卵C．成熟卵子与收集来的精子相遇形成的受精卵, 需培养到一定阶段才可移植。