NJ0389-TTC染液

3TTC法(1)TTC试验原理TTC是取作为指示剂用的2、3、5-Triphenyte-trazoliumchloride(氯化三苯基四氮唑)的头一个字母的缩写，其原理是如果乳中有抗生素存在，则在向试样中加入菌种(嗜热链球菌)培养时细菌不增殖。

此时，由于作为指示剂加入其中的TTC不还原，所以，仍呈无色状态。

相反，如果没有抗生素存在，则加入的试验菌即行增殖，TTC还原变成红色，试样也随之染成红色。

也就是说试样呈奶的原色时为阳性，染成红色时阴性。

(2)设备和材料水浴箱、温箱、1ml与10ml灭菌试管各2支、灭菌巧15x15mm试管3支，100℃温度计、蜡笔、试管架。

(3)培养基和试剂菌种嗜热乳链球菌、经113℃温度灭菌20min的脱脂乳。

TTC试剂；称取2，3，5一氯化三苯基四氮唑1g，溶于25ml灭菌蒸馏水中，装人褐色瓶在7℃以下冰箱暗处保存。

临用时用灭菌蒸馏水稀释至5倍。

(4)菌液制备将菌种移种脱脂乳，经36士1℃的温度培养15h后，以灭菌脱脂乳1:1的比例稀释待用。

(5)操作顺序注:每份检样作2份，另外再作阴性和阳性对照各1份，阳性对照常用无抗生素的乳8ml，加抗生素及菌液和TTC，阴性对照常用无抗生素乳8ml加菌液和TTC。

微生物检测法的缺点是时间相对较长，状态判断通过肉眼辨别易产生误差，灵敏度低，操作相对复杂。

其优点是费用低，一般实验室都能操作。

2.1氯化三苯四氮唑法(TTC试验)本法是往检样中先加人菌液和TTC指示剂(2，3，5一氯化三苯四氮哇)，如检样中有抗生素存在，则会抑制细菌繁殖，TTC指示剂不被还原，不显色;如检样中无抗生素残留，则细菌大量繁殖，指示剂被还原而呈红色。

具体操作为:2.2.1菌液制备。

将嗜热乳酸链球菌接种人灭菌脱脂乳，置36℃士1℃培养箱中保温15h，再用灭菌脱脂乳以1:1比例稀释备用。

2.1.2操作步骤。

取乳样9ml放人试管中→置80℃水浴中保温5min→冷却至37℃以下→加人菌液lml→置36℃士1℃水浴中保温2h→加入4%TTC指示剂0.3ml→置36℃土1℃水浴中保温30min→观察牛乳颜色变化。

花粉活力染色液(TTC 法)简介：花粉活力的大小直接影响授粉、受精过程，与植物的产量密切相关，通过花粉活力的测定，可了解花粉的可育行，并掌握不育花粉的形态、生理特征。

TTC 是标准氧化电位为80mV 的氧化还原色素，溶于水中形成无色溶液，还原后生成红色不溶于水的三本甲腙，该物质比较稳定，不易被氧化，所以TTC 被广泛用于酶实验的氢受体。

TTC 还原量能表示脱氢酶活性，进而判断植物根系或花粉活力。

组成：自备材料：1、 载玻片2、 盖玻片3、 恒温箱4、 显微镜操作步骤(仅供参考)：1、配制TTC 染色液：取1支TTC 完全溶解于TTC stain buffer ，即为TTC 染色液。

4℃避光保存，1个月有效。

2、取成熟将要开放的新鲜花朵，小心去除花瓣和雌蕊。

染色结果：活力强红色 活力弱淡红色 无活力或不育 无色计算：观察统计100粒花粉，计算有活力花粉的百分数。

其公式为：花粉活力百分数(%)=有活力花粉数/100×100%编号 名称 DP0101 DP0101 Storage 试剂(A): TTC 1支 1支 RT 试剂(B): TTC stain buffer 10ml 50ml RT 避光注意事项：1、染完色后，应立即显微镜下观察，放久会褪色。

2、TTC染色液开盖后尽快使用，否则效率会下降，如果变成红色应弃用。

3、染色时需要将花粉完全浸没于染色液中。

4、染色温度一般以25-35℃为宜。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。

相关：编号名称CS0001 ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)DC0032 Masson三色染色液DC0041 天狼星红染色液DG0005 糖原PAS染色液DM0002 姬姆萨染色液(1:9)PS0013 RIPA裂解液(强)PW0053 Western抗体洗脱液(碱性)TO1013 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)。

FD Rapid GolgiStain TM KitFD快速高尔基染色试剂盒神经元和胶质细胞形态学研究的完整Golgi-Cox染色体系使用手册中文版PK401/PK401A一级代理 北京博蕾德生物科技有限公司联系电话：186******** QQ 1985563437I.介绍Golgi-Cox浸染法是研究神经元和胶质细胞正常和非正常形态最有效的方法之一。

使用Golgi技术，在药物处理过的动物脑中和因神经疾病死亡的病人脑中发现了神经树突和树突微小的形态改变。

然而Golgi染色法的不可靠性且费时已成为这种方法广泛应用的障碍。

FD Rapid GolgiStain TM Kit(FD快速高尔基染色法)是根据Ramón-Moliner，Glaser和Van der Loos所阐述的方法原理设计的。

该试剂盒不仅极大地改进并简化了Golgi-Cox 技术，而且被证实在显示神经元和胶质细胞，尤其是树突棘的形态细节极为灵敏可靠。

北京博蕾德生物代理的FD Rapid GolgiStain TM Kit已被广泛用于并用于数种动物脑组织染色。

II.试剂盒组分室温保存III.需要但未包括在试剂盒里的物品1.双蒸水或Milli-Q水2.塑料/玻璃管或瓶3.组织学耗材：明胶包被的显微镜载玻片（Cat.#PO101）盖玻片染色罐乙醇二甲苯树胶封片剂Permount®光学显微镜IV.安全操作注意事项1.FD Rapid GolgiStain TM Kit仅用于体外研究，不能用于诊断或其它应用。

2.试剂盒所包含有试剂是有毒的，吸入或接触皮肤是有害的，如果吞咽可能是致命的。

不要用嘴吸。

避免吸入和接触皮肤和眼睛。

如果接触，立即用大量的水冲洗并求助医生。

3.在化学通风橱下完成实验。

操作这些试剂时须穿戴合适的防护服，手套和眼睛和面部防护罩，完成实验之后把手彻底冲洗干净。

V.组织制备使用此试剂盒前必须仔细阅读以下说明！！●所用容器（最好为塑料材质）必须用蒸馏水冲洗干净。

近红外i区荧光染料
近红外I区荧光染料是一类在生物医学领域应用广泛的荧光探针，它们具有在近红外光谱范围内发射荧光的特性。

近红外荧光染料主要分为两个区域：近红外I区（NIR-I）和近红外II区（NIR-II）。

NIR-I区的波长范围是650-900 nm，而NIR-II区的波长范围是1000-1700 nm。

这些染料因其较长的波长，能够在生物体内降低自身荧光的干扰，从而提高检测的灵敏度和限度。

以下是一些常见的近红外I区荧光染料的特点：
800CW染料：这是一种高水溶性的荧光染料，其最大激发和发射波长分别为780 nm和800 nm。

它适用于蛋白质和抗体标记，以及核酸应用，具有高标记密度、低非特异性结合和高信噪比的特点。

IR系列：这一系列的染料被用于活体成像，因为它们具有较大的光穿透深度和较低的背景值，能够准确反映体内的信息。

Cy系列：又称为菁染料，包括Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7和Cy7.5等，这些染料在生物大分子标记和肿瘤研究等领域有广泛的应用。

ICG系列、EC系列、CH1055系列：这些系列也提供了多种选择，以适应不同的实验需求和应用场景。

近红外I区荧光染料由于其独特的光学特性，在生物医学研究和临床诊断中发挥着重要作用。

它们能够提供较低的背景信号和较高的组织穿透能力，使得活体成像和实时监测成为可能。

在选择适合的荧光染料时，需要考虑实验的具体需求，如标记对象、所需的波长范围、灵敏度要求等因素。

TTC染色原理及步骤TTC染色（tri-phenyl tetrazolium chloride staining）是一种常用的细胞活性染色方法，主要用于检测细胞的呼吸功能和代谢活性。

它的染色原理是根据细胞内还原酶的活性来实现的。

下面将详细介绍TTC染色的原理和步骤。

TTC是一种被还原的化合物，它的分子结构中存在六个位置可以接受电子的氧原子，当TTC被还原后，它会发生颜色变化，并呈现出红色。

在细胞中存在一些呼吸酶，如葡萄糖氧化酶和琥珀酸氧化酶等，这些酶能够将TTC还原为红色的产物。

因此，通过观察TTC染色后样品的颜色变化，可以推断出样品中酶的活性和细胞的代谢活性。

1.预处理：-准备细胞样品：从培养器中收获细胞，将细胞用PBS缓冲液洗涤2-3次，使细胞悬浮于PBS缓冲液中。

-细胞计数：使用细胞计数板或显微镜下的细胞计数室，计算出细胞的浓度和总数。

-稀释细胞：根据实际需要，将细胞用PBS缓冲液稀释至适当的浓度。

2.染色：-准备TTC染色液：将TTC染色盐溶解在PBS缓冲液中，使最终浓度为1%。

- 加入样品：取适量的细胞悬液，加入到TTC染色液中，使细胞最终浓度为10^6个/ml。

-染色反应：将细胞和TTC染色液混合均匀后，放置在37°C恒温培养箱中进行染色反应。

染色时间一般为1-4小时，具体时间根据实验需求和细胞类型决定。

3.结果观察：-细胞沉淀：染色反应结束后，将细胞悬液离心，去除上清液，留下细胞沉淀。

-影像观察：取适量的细胞沉淀，将其均匀地涂在显微镜载玻片上，使用显微镜观察细胞的染色情况。

染色的细胞会呈现出红色或橘黄色，非染色的细胞则为无色或淡色。

-图像分析：使用图像处理软件或计算机程序，对染色的细胞进行分析，计算出染色面积或颜色密度等参数，以评估细胞的代谢活性。

值得注意的是，TTC染色的结果受多种因素的影响，如细胞密度、染色时间、染色溶液的浓度等。

因此，在进行TTC染色实验时，需要根据具体实验要求进行优化和调整，以获得准确且可靠的结果。

TTC染色流程范文步骤1：固定组织首先，需要将待染色的组织进行固定，常用的固定剂是10%的中性缓冲福尔马林（neutral buffered formalin）。

将组织样本浸入福尔马林中，并在室温下固定6至24小时，以确保组织固定并避免组织腐败。

步骤2：切片在固定完的组织样本中，选取感兴趣的区域进行切片。

使用旋转式切片机将组织切成约5-10微米的厚度，在玻璃切片上收集组织切片，并使用水或生理盐水进行洗涤，将切片沉积在玻片上。

步骤3：染色将制备好的切片放在干燥的恒温箱中，通常在37°C条件下孵育1-2小时。

这样做是为了使组织样本中的酶能够还原显色剂。

TTC染色中使用的显色剂是2,3,5-三苯基四氮唑盐（TTC）。

TTC溶液的制备步骤：(1) 取30mg TTC物质，溶解在10mL的生理盐水或磷酸缓冲溶液中。

充分摇匀，确保TTC充分溶解。

(2)在根据实验需要，可以适当调整溶液的浓度。

将制备好的TTC溶液轻轻滴在切片上，确保每个切片均匀分布染料。

处理后，将切片放入37°C的恒温箱中孵育30分钟至2小时，让切片充分吸收TTC。

步骤4：显微观察将TTC染色的切片放在显微镜下观察。

TTC染色后，细胞中的存在氧化酶会将TTC还原成红色的产物，而那些缺乏氧化酶的细胞则没有这种还原能力，因此呈现出无色或淡色。

通过观察染色结果，可以区分不同细胞类型和细胞活性。

步骤5：结果解读通过TTC染色能够看到红色或深红色的部分，代表有氧化酶活性的细胞。

而无色或淡色的区域代表缺乏氧化酶活性的细胞。

这有助于我们了解组织中不同细胞类型的分布和代谢状态。

需要注意的是，由于TTC染色是一种在细胞和组织水平上进行观察的方法，有时结果会受到组织的厚度、染色时间和染料的浓度等因素的影响。

因此，在进行实验之前，应该进行一定的优化和标准化，以确保结果的准确性和可重复性。

总结起来，TTC染色是一种常用的组织学染色技术，通过检测组织中氧化酶的活性，可以显示组织中不同细胞类型的分布和代谢状态。

一种活性污泥ttc脱氢酶活性测定方法本发明属于微生物活性测定技术领域，具体涉及一种废水生物处理过程中活性污泥脱氢酶活性的测定方法。

背景技术：脱氢酶属于氧化还原酶类，它参与从有机物到分子氧化的电子得失的整个过程。

脱氢酶活性经常作为评价污泥活性的指标，很大程度上反映了活性污泥中微生物对有机物的代谢能力。

ttc-脱氢酶活性测定法，其原理是利用脱氢酶将氯化三苯基四氮唑(ttc)还原成三苯基甲臜(tf)后在485nm处有特征吸收，从而测定脱氢酶活性。

早期，国内外常在90℃高温条件下萃取生成的tf，但是萃取剂在高温下极易蒸发，破塞而溢，导致测定结果不稳定。

而后众多研究者提出了常温萃取测定法的分析程序，萃取温度通常37℃，效果良好。

在标准曲线制作中，早期使用还原剂连二亚硫酸钠，但生成的tf稳定性极差，其颜色在40分钟后几乎全部消失，连二亚硫酸钠逐渐被硫化钠取代。

酶反应终止剂主要有浓h2so4、甲醛、乙醇和丙酮等试剂，浓h2so4会与污泥培养液和残留细胞反应，出现“茶色现象”，甲醛的酶反应终止效果优于乙醇和丙酮，一般情况下，甲醛的用量为反应液体积的1/10。

在甲醇、乙醇及丙醇等萃取剂中，丙酮的萃取效果最好，有利于萃取颜色的稳定，而且80％的丙酮比纯丙酮萃取效果更好。

活性污泥呈颗粒状，对tf具有很强的吸附能力，加入萃取液并在摇床中振荡提取，仍然有部分tf无法溶解。

酶反应结束，离心分离后去除上清液的过程中，活性污泥易悬浮，造成tf的损失，从而导致结果不准确，无法完全去除上清液。

技术实现要素：本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种方便、可靠、准确的污泥脱氢酶活性测定方法，以克服标准曲线制作过程中硫化钠易氧化，样品测试过程中活性污泥强吸附、易悬浮的特点，从而提高活性污泥脱氢酶活性测定的可操作性和准确性。

本发明为解决背景技术中的技术问题，采用的技术方案是一种活性污泥ttc脱氢酶活性测定方法，包括两个部分：标准曲线制作和样品测定；1)标准曲线制作：标准曲线制作包括酶反应、萃取测试和线性回归三个步骤；(1)酶反应：将ttc储备液稀释成一系列不同浓度ttc使用液，在10ml离心管中依次加入ttc使用液1ml，2mltris-hcl 缓冲液(ph8.0)、1ml去离子水和1ml新配的10％的na2s，漩涡振荡混匀后，37℃下暗处振荡反应30min，180r/min，加入0.5ml的甲醛终止酶反应，漩涡振荡混匀；(2)萃取测试：反应混合液在5000r·min-1下离心5min，用滴管弃去上清液，使液面在1ml刻度线以下，加入5ml丙酮，再滴加去离子水使液面至6ml刻度线，37℃下暗处振荡萃取10min，180r/min，在485nm处读取萃取液吸光度a；(3)线性回归：以ttc浓度为横坐标，tf萃取液的a值为纵坐标作图，即得到ttc-a标准曲线，对标准曲线进行线性回归，即得标准方程：y＝kx-b式中，x为反应体系的ttc浓度(mg·l-1)，y是tf萃取液的a 值；2)样品测定：样品测定包括酶反应、萃取测试和定量分析三个步骤；(1)酶反应：在10ml离心管中依次加入1ml活性污泥样品、2mltris-hcl缓冲液(ph8.0)、1ml去离子水和1ml0.4％ttc溶液；对照组依次加入1ml活性污泥样品、2mltris-hcl缓冲液(ph8.0)、1ml去离子水、0.5ml甲醛溶液后和1ml0.4％ttc溶液；漩涡振荡混匀，37℃下暗处振荡反应30min，180r/min，除对照组以外，加入0.5ml的甲醛终止酶反应，漩涡振荡混匀；(2)萃取测试：反应混合液在5000r·min-1下离心5min，用滴管弃去上清液，使液面在1ml刻度线以下，加入5ml丙酮，再滴加去离子水使液面至6ml刻度线，37℃下暗处振荡萃取10min，180r/min，漩涡振荡一分钟，0.22μm有机滤膜过滤，在485nm处读取萃取液吸光度a；(3)定量分析：通过标准曲线计算tf的生成量式中，ui为ttc-比脱氢酶活性(mgttc·g-1·min-1)，v为萃取剂体积(ml)，k为ttc-a标准曲线的斜率，w为污泥样品的干重(mgmlss)，t为酶促反应时间(min)。

植物根系活力检测试剂盒（TTC 法）说明书可见分光光度法货号：BC5270 规格：50T/24S产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称 规格 保存条件 试剂一A 粉剂×2瓶 2-8℃保存 试剂一B 粉剂×2瓶 2-8℃保存 试剂二 液体70 mL×2瓶 2-8℃保存 试剂三 粉剂×3支常温保存 试剂四 液体130 mL×1瓶（自备）2-8℃保存 标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1、 试剂一：临用前取一瓶试剂一B 加入一瓶试剂一A 中，加入30mL 试剂二溶解。

现用现配。

配制好后置于2-8℃保存，一周内使用，若出现红色，则不能使用。

2、 试剂四：乙酸乙酯，自备。

提供一60mL 棕瓶3、 标准品：临用前加入1mL 试剂二，充分震荡混匀, 即10mg/mL TTC 标准液。

2-8℃可以保存1周，若出现红色，则不能使用。

产品说明：根系是植物吸收水分和矿质营养的主要器官，同时又是植物体中重要物质如氨基酸、激素等物质合成、同化、转化的器官，因此根的生长情况和活动能力直接影响植物个体的生长情况、营养水平和产量水平等，根系活力具有重要的实际意义。

TTC 可被氢还原成不溶性的红色三苯基甲臜（TTF ），TTF 在485nm 处有吸收峰。

当TTC 溶液渗入到植物根部组织时，呼吸过程产生的还原物质可将其还原成TTF(红色)，植物根部组织被染成红色。

根系活力强弱可用TTC 的还原量来表示。

此方法检测的根系活力即植物根系的脱氢酶活性。

TTC TTF （485nm ）注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、乙酸乙酯，冰和蒸馏水。