血清总蛋白和蛋白检测方法综述

血清总蛋白常规方法
血清总蛋白是指血清中所有蛋白质的总量。

常规方法包括测定血清中总蛋白浓度的方法有比色法、电动脉波谱法、免疫测定法等。

1. 比色法：常用的方法是利用生物杂质的氮原子吸光度的差异来进行测定。

常见的比色法有低里氏法、布拉德福德法和Biuret法。

2. 电动脉波谱法：该方法基于蛋白质在电动力场中迁移速度的差异，利用电泳仪进行测定。

通过测量蛋白质在电泳过程中的迁移距离和时间，可以计算出血清总蛋白浓度。

3. 免疫测定法：包括免疫比浊法、放免法和酶联免疫吸附测定法等。

这些方法利用蛋白质与特定抗体结合的原理，通过测量抗体与蛋白质结合后的信号强度来计算血清总蛋白浓度。

需要注意的是，不同的方法可能会有不同的灵敏度和特异性，选择合适的方法进行测定是很重要的。

同时，在进行实验时应遵守操作规范，注意样品的保存和处理，以确保得到准确可靠的结果。

血清清蛋白和球蛋白测定方法及临床意义血清清蛋白1.测定方法溴甲酚绿法（BCG法）：溴甲酚绿是一种阴离子染料，在pH4.2的缓冲液中，与白蛋白结合成复合物，溶液由未结合前的黄色变成蓝绿色，在628nm波长的吸光度与白蛋白浓度成正比，经与同样处理的白蛋白标准液比较，即可求得白蛋白的含量。

2.临床意义（1）清蛋白浓度增高：除严重脱水，血浆浓缩而使清蛋白增高外，尚未发现单纯清蛋白浓度增高的疾病。

（2）清蛋白浓度降低：同总蛋白浓度降低医`学教育网搜集整理。

球蛋白的含量及白蛋白与球蛋白的比例1.球蛋白的含量是通过血清总蛋白测定值减去血清清蛋白测值计算出的。

2.临床意义（1）球蛋白浓度增高：临床上球蛋白增高多见于炎症、免疫系统疾病和肿瘤。

1）细菌、病毒、寄生虫引起的急慢性感染：结核病、麻风病、疟疾、黑热病、血吸虫病、病毒性肝炎。

2）自身免疫性疾病：系统性红斑狼疮、硬皮病、风湿热、类风湿性关节炎等。

3）多发性骨髓瘤和淋巴瘤：多发性骨髓瘤是一种单克隆疾病，它是由浆细胞恶性增殖造成的异常高的单一Ig（多见于IgA或IgG0）血症。

淋巴瘤也属单克隆疾病。

（2）球蛋白浓度降低：见于血液稀释、严重的营养不良、胃肠道疾病等。

3.清蛋白与球蛋白比值（A／G比值）A／G比值反映了清蛋白与球蛋白浓度变化的关系。

正常A／G比值为1～2／1.临床上常用A／G比值来衡量肝脏疾病的严重程度，当A／G比值小于1时，称比值倒置，为慢性肝炎或肝硬化的特征之一。

白蛋白的作用为：1.增加血容量和维持血浆胶体渗透压：白蛋白占血浆胶体渗透压的80%，主要调节组织与血管之间水分的动态平衡。

由于白蛋白分子量较高，与盐类及水分相比，透过膜内速度较慢，使白蛋白的胶体渗透压与毛细管的静力压抗衡，以此维持正常与恒定的血容量；同时在血循环中，1g白蛋白可保留18ml水，每5g白蛋白保留循环内水分的能力约相当于100ml血浆或200ml全血的功能，从而起到增加循环血容量和维持血浆胶体渗透压的作用。

蛋白质代谢功能检查血清总蛋白和白蛋白球蛋白测定蛋白质是构成我们身体组织和细胞的重要组分，参与许多生理过程，如维持正常免疫功能、携带氧气、运输营养物质、参与代谢反应等。

蛋白质代谢功能检查可以通过测定血清总蛋白和白蛋白球蛋白的水平来评估。

以下是对这两项检查的详细解释。

1.血清总蛋白测定血清总蛋白是指血清中所有蛋白质的总量，包括白蛋白和球蛋白。

测定血清总蛋白的水平可以提供关于全身蛋白质代谢的信息。

正常成年人的血清总蛋白水平通常在6.0-8.3g/dL之间。

高蛋白血症可能与一些情况有关，如饮食蛋白质过多摄入、脱水、肾功能不全、慢性炎症、恶性肿瘤、骨髓增生异常等。

低蛋白血症则可能与饮食蛋白质摄取不足、肝病（肝脏合成蛋白质减少）、肾病（尿蛋白丢失）、营养不良等因素有关。

2.白蛋白测定白蛋白是血清中最丰富的蛋白质，占总蛋白的绝大部分。

它在体内扮演着多种重要角色，如维持胶体渗透压、运输药物和激素、抗体生成等。

正常成年人的血清白蛋白水平通常在3.4-5.4g/dL之间。

低白蛋白血症可能与肝脏合成白蛋白减少（如肝病、肝功能失常）、肾重金属中毒（如自身免疫性肾炎、肾小球肾炎）、消化道吸收障碍（如吸收不良综合征）等因素有关。

高白蛋白血症可能与因为脱水或其他原因而导致的体液浓缩有关。

球蛋白是除白蛋白外的其他成分，主要包括免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）、补体、凝血因子等。

测定球蛋白的水平可以提供关于机体免疫功能和炎症反应的信息。

球蛋白水平的正常范围因年龄和性别而异。

常用的方法是将总蛋白和白蛋白测定结果相减，计算球蛋白的浓度。

高球蛋白血症可能与多发性骨髓瘤、慢性炎症、肝病等疾病相关。

低球蛋白血症可能与免疫缺陷病、肾病、胃肠道蛋白质大量丢失等因素有关。

总结：血清总蛋白和白蛋白球蛋白是检查蛋白质代谢功能的重要指标。

通过测定其水平，可以评估全身蛋白质代谢的状态，并发现一些与蛋白质代谢异常相关的疾病。

然而，需要注意的是，蛋白质代谢异常并不一定与蛋白质摄入量的变化相关，常常需要结合其他检查结果和临床病史来综合判断。

血清总蛋白和蛋白检测方法综述[摘要](1)阐明了双缩脲法是目前国内外检测血清总蛋白和白蛋白最常用的方法；(2)明确检测血清总蛋白和白蛋白的分析性能要求；(3)强调血清总蛋白和白蛋白检测时的标本采集和保存要求。

[关键词]血清总蛋白白蛋白检测方法综述蛋白质在所有生命活动过程中起着极其重要的作用，据估计，迄今为止，人体内大约有50000多种蛋白质，而一个人体细胞内的蛋白质就达3000～5000种。

目前能识别的蛋白质已超过1400种，就连单细胞的细菌蛋白也多达3000多种。

在诸多蛋白中，被用于样品检测和临床辅助诊断率最高的是血清总蛋白和白蛋白，其主要检测标本有：血液、尿液、脑脊髓液、羊水、唾液、胸腔积液、腹腔积液以及粪便等。

1.血清总蛋白(total protein)检测1.1检测总蛋白的主要方法1.1.1双缩脲法(biuret method)利用蛋白质分子中的肽键(一CONH一)能与双缩脲试剂(biuret teagent)中的CU2+结合产生紫色复合物，在波长540nm处检测吸收峰。

双缩脲法是检测血清蛋白的经典方法，经Doumas改良后的双缩脲试剂被美国临床化学协会标准化委员会和美国标准局(National Bureau of standards，即现在的美国标准计量研究所，NST)选用，作为血清蛋白检测标准化实验试剂，试剂在室内保存一年内不影响检测结果。

1.1.2直接光度检测法(direct photometric method)本法利用血清蛋白在一定紫外光波内有特异吸收峰(uv280nm)这一特点检测样品蛋白，此法常用于脑脊髓液蛋白的测定。

1.1.3染料结合法(dye-binding method)检测样品蛋白本法根据某些特殊染料(氨基黑10B和考马斯蓝Coomassic Br illiant blue CBB)能与多肽链中氨基酸残基的质子化基团结合，在460～595nm处有一光吸收峰的特点检测样品蛋白。

• 待测血清用生理盐水按1:10稀释。
精品文档
生理盐水 双缩脲试剂
蛋白质标准液 待测血清稀释液
实验步骤：
取3支试管，按下表操作。
测定管 标准管 空白管
血清/mL
1.00 —
—
蛋白质标准液/mL — 1.00 —
生理盐水/mL
—
— 1.00
双缩脲试剂/mL
5.0 5.0 5.0
混匀，37度水浴放置10min，以空白管调零点， 在540nm波长处进行比色，分别读取各管的吸光度。 计算:血清总蛋白含量= A—测—定 *蛋白质标准液浓度*稀释倍数（g/L）
（1）血液稀释，导致总蛋白浓度相对降低：如静脉注射过 多低渗溶液或因各种原因引起的钠、水潴留。
（2）摄入不足和消耗增加：食物中长期缺乏蛋白质，慢性 胃肠道疾病引起的消化吸收不良，患消耗性疾病等，均可造 成血清蛋白浓度降低。
（3）合成障碍：主要见于肝脏患疾。血浆清蛋白及大部分 球蛋白均由肝脏合成，肝功能严重损害时，血浆蛋白质的合 成量减少，其中以清蛋白浓度降低最为明显。
精品文档
一、血清总蛋白的测定
实验原理：
1、双缩脲反应：两个尿素分子缩合生成双缩脲（H铜离子作用，生成稳
定的紫红色配合物，即双缩脲反应。CuSO4的碱性溶液称
双缩脲试剂。
碱性溶液
双缩脲+铜离子
紫红色
2、蛋白质的定量测定：蛋白质与双缩脲相似，分子中的 肽键能与双缩脲试剂形成紫色配合物。这种紫色配合物 在540nm处有明显吸收峰。吸光度在一定范围内与蛋白质 含量成正比，常用于蛋白质的定量测定。
精品文档
实验试剂：
• 溴甲酚绿储存液：BCG 419mg溶于10ml 0.1mol/L NaOH，加 NaN3 100mg，定容至1L，储存于棕色瓶中备用。 • 0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH=4.2）：分别配制 0.1mol/L柠 檬酸和柠檬酸钠溶液，按体积比 12.3 : 7.7 混合。每1L混合 液加入NaN3 100mg。 • 30%聚氧化乙烯月桂醚溶液：取Brij-35 30g，加少量水，60 度水浴溶解加水至100ml。 • BCG应用液：BCG储存液 250ml、0.1mol/L柠檬酸缓冲液 (pH=4.2) 750ml、30% Brij-35混合而成。 • 标准蛋白溶液(10mg/ml)：称取人白蛋白 1.00g，用生理盐 水溶解并定容至100ml。

血清总蛋白和白蛋白测定实验方案实验方案：血清总蛋白和白蛋白测定实验引言：材料和试剂：1.血清样本2.0.9%生理盐水3.高纯度白蛋白标准品4.生物碱性溶液5.生物酸性溶液仪器设备：1.比色皿2.分光光度计3.吸光度计实验步骤：1.样本制备：a.收集血液样本，并离心10分钟以去除血细胞。

b.将离心后的血清转移到一个新的离心管中。

c.确保血清无凝块或颗粒，如有则进行过滤处理。

d.将血清储存在-20°C的冰箱中，以防止蛋白质降解。

2.样本稀释：a.取一定数量的血清样本（200µL），加入一个10倍稀释液（1800µL 的0.9%生理盐水），得到被稀释的样本。

b.将稀释液标记为“200μL：1800μL”，并将其储存在试管中。

3.标准曲线制备：a.准备一系列浓度递增的白蛋白标准品：0g/L、2g/L、4g/L、6g/L、8g/L。

b.取一定体积的每个标准品（200µL），分别加入一个10倍稀释液（1800µL的0.9%生理盐水），得到一系列被稀释的标准溶液。

c.根据标准曲线所需白蛋白的浓度，将其标记在曲线上。

4.吸光度测定：a.取一定体积的对照组、血清样本和标准溶液，并分别转移到比色皿中。

b. 使用分光光度计，将比色皿置于光路中并调整至指定波长，通常为546 nm。

c.对每个样本和标准溶液的吸光度进行测量，并记录下读数。

5.计算白蛋白含量：a.根据标准曲线上的吸光度读数，计算每个标准品的白蛋白浓度。

b.根据被稀释的样本的吸光度读数和标准曲线上的浓度，计算样本中的白蛋白含量。

6.计算总蛋白含量：a.根据白蛋白含量和总蛋白与白蛋白的比例，计算总蛋白的含量。

实验注意事项：1.在操作过程中，尽量避免血清样本接触空气，以免影响蛋白质含量。

2.实验中使用的试剂和仪器，应根据实验室的标准操作程序进行操作。

3.保持实验环境的清洁和无菌，以防止外源性污染。

4.对比色皿进行校准，以确保吸光度测量的准确性。

血清总蛋白实验报告血清总蛋白实验报告血清总蛋白是指血液中所有蛋白质的总和，包括白蛋白和球蛋白等多种蛋白质成分。

血清总蛋白的测定可以为临床诊断和疾病监测提供重要的参考依据。

本实验旨在测定血清总蛋白的浓度，并探讨其在健康和疾病状态下的变化。

实验方法：1. 实验材料准备：- 血清样本：从健康志愿者中采集血液样本，离心获得血清。

- 标准品：使用已知浓度的血清总蛋白标准品。

- 试剂：包括染色剂、缓冲液等。

- 仪器：分光光度计、离心机等。

2. 样本处理：- 将采集的血清样本离心，以去除细胞和杂质。

- 取适量血清样本，加入染色剂和缓冲液，混匀后静置一段时间。

3. 光度测定：- 使用分光光度计，设置波长为标定波长。

- 以纯水为零点校准仪器，然后分别测定标准品和样本的吸光度值。

4. 计算浓度：- 根据标准品的吸光度与浓度的线性关系，绘制标准曲线。

- 根据样本的吸光度值，通过标准曲线插值计算出血清总蛋白的浓度。

实验结果：根据实验数据，我们得到了一组血清总蛋白的浓度数据。

通过计算，我们发现血清总蛋白的浓度在正常范围内，符合健康人群的标准。

这表明被检测者在本次实验中没有明显的蛋白质异常。

讨论与分析：血清总蛋白是反映人体蛋白质代谢和营养状况的重要指标。

正常情况下，血清总蛋白的浓度应在一定范围内，过高或过低都可能与某些疾病相关。

高血清总蛋白浓度常见于脱水、感染、炎症等情况下，这是因为在这些情况下，机体会释放更多的蛋白质来应对外界的挑战。

而低血清总蛋白浓度则可能与肝功能不全、营养不良、肾病等疾病有关。

值得注意的是，血清总蛋白的测定结果需要综合考虑患者的临床症状和其他实验指标，才能作出准确的诊断。

因此，在临床应用中，血清总蛋白的测定常与其他指标联合使用，以提高诊断的准确性。

结论：通过本次实验，我们成功测定了血清总蛋白的浓度，并发现被检测者的血清总蛋白浓度处于正常范围内。

血清总蛋白的测定在临床诊断和疾病监测中具有重要意义，可以为医生提供有价值的参考信息。

混合后以空白管校零，立即比色，比色波长为 混合后以空白管校零，立即比色，比色波长为620nm，以光 ， 密度为纵坐标，相应管中的白蛋白浓度为横坐标， 密度为纵坐标，相应管中的白蛋白浓度为横坐标，在坐标 纸上绘制标准曲线。 纸上绘制标准曲线。
2. 血清白蛋白测定
用生理盐水按1： 的比例稀释血清 取稀释后的血清0.2ml加入 的比例稀释血清， 用生理盐水按 ：10的比例稀释血清，取稀释后的血清 加入 BCG应用液 应用液 5.0ml混匀后立即同上比色，读取光密度，并从标注曲线上查出相 混匀后立即同上比色，读取光密度， 混匀后立即同上比色 应的白蛋白 浓度。 浓度。 3.白蛋白 球蛋白比值（A/G比值） 白蛋白/球蛋白比值（ 比值） 白蛋白 球蛋白比值 比值 用双缩脲法测定血清标本中的总蛋白浓度， 用双缩脲法测定血清标本中的总蛋白浓度，用总蛋白浓度减 去白蛋白浓度 即得球蛋白浓度， 比值： 即得球蛋白浓度，并可求的A/G比值：
A/G比值 比值= 比值
白蛋白含量 —————————————
总蛋白含量---白蛋白含量 总蛋白含量 白蛋白含量
参考值： 参考值：35~50g/L
【临床意义】 临床意义】
• 1．血清白蛋白浓度增高，常见于严生脱水所致的 ．血清白蛋白浓度增高， 血浆浓缩 • 2．血清白蛋白浓度降低 在临床上比较重要和常 ． 通常与总蛋白降低的原因大致相同。 见，通常与总蛋白降低的原因大致相同。急性降低 主要见于大出血和严重的烧伤； 主要见于大出血和严重的烧伤；慢性降低见于肾病 蛋白尿，肝功能损伤， 蛋白尿，肝功能损伤，肠道肿瘤及结核病伴慢性出 营养不良和恶性肿瘤等。血清白蛋白低于20g/L。 血，营养不良和恶性肿瘤等。血清白蛋白低于 。 临床上出现水肿。 临床上出现水肿。 • 3．A/G 某些病人可同时出现白蛋白减少和球蛋白 ． 升高的现象，严重者比值可＜ 。这种情况称为A/G 升高的现象，严重者比值可＜1。这种情况称为 比值倒置。 比值倒置。 • 4．文献报道还有极少见的因白蛋白合成障碍，血 ．文献报道还有极少见的因白蛋白合成障碍， 清中几乎没有白蛋白的先天性白蛋白缺乏症。 清中几乎没有白蛋白的先天性白蛋白缺乏症。

血清总蛋白及白/球比值的测定
实验目的：
1.混合物中某种物质浓度的测定方法 2.熟悉血清总蛋白和白蛋白的测定方法 3.掌握血清总蛋白和白/球比值的临床意义 4.熟悉721分光光度计的使用
生物化学实验基本技能训练
一、血清总蛋白的测定
（双缩脲法）
二、血清白蛋白的测定
（溴甲酚绿法）
血清总蛋白的测定
双缩脲（
•双缩脲反应示意图
实验试剂 （1）生理盐水（2）双缩脲试剂
： 实（验3）操蛋作白质标准液（4）待测血清
取三支试管按下表加入式样，混匀 37摄氏度水浴放置十 分钟，以空白管调零，540nm波长测定吸光度
血清总蛋白的测定
项目 血清/ml
蛋白质标准液/ml 理生盐水/ml
双缩脲试剂/ ml
测定管
1.00
白蛋白增高：主要由于血液浓缩而致相对性增高，如严重 脱水和休克、严重烧伤、急性出血、慢性肾上腺皮质功能减 低症。
白蛋白减低：见于肝硬变合并腹水及其他肝功能严重损害 （如急性肝坏死、中毒性肝炎等）营养不良、慢性消耗性疾 病、糖尿病、严重出血肾病综合征等。当降低至25g/L以下易 产生腹水。
血清球蛋白是机体免疫器官制造的，球蛋白正常值为20-40 g/L。球蛋白大部分在肝细胞外生成，与人体的免疫力有关系。 球蛋白要保持一定的量，球蛋白检测值超过正常值说明体内
双缩脲法 酚试剂(Follin-酚)法测定蛋白质 紫外吸收法测定蛋白质 凯氏(Kjeldahl)微量定氮法 考马斯亮蓝G—250染色法 如何测定血清中某一种蛋白质的浓度？ 分离后再测定
Folin-酚试剂法测定蛋白质含量是双缩脲法的发民，所用 的试剂是由两部分组成的。第一部分相当于双缩脲试剂， 第二部分为Folin-酚试剂(磷钨酸和磷钼酸混合液)。因此， 反应的程序也是分两步进行的。第一步相当于双缩脲反应， 在碱性条件下蛋白质中的肽键与Cu2+作用生成络合物； 第二步是基于Folin试剂(磷钼酸和磷钨酸试剂)在碱性条件 下极不稳定，易被酚类化合物还原生成钼蓝和钨蓝混合物 (呈蓝色反应)。由于蛋白质中含有带酚羟基的酪氨酸，故 有此呈色反应。而且溶液颜色的深浅与蛋白质的含量成正 比关系。此法也适用于测定酪氨酸和色氨酸的含量。本法 可测定范围是25—250μg蛋白质

总蛋白测定的方法总蛋白(Test for Total Protein) 旨在测定体内所有蛋白质的总量，是一项简单而又广泛应用的生化检测指标。

其结果可作为判断人体内蛋白营养状况，水平测量肝、肾、肠、免疫系统的功能等的参考依据，也可以作为血液等液体的生化检测参数。

总蛋白测定方法有很多种，下面将介绍主要的两种方法。

方法一：生物学法该方法是利用多肽和蛋白质酸碱性的性质，通过起酸沉淀和加碱溶解的方式来测定总蛋白的含量。

下面是详细步骤：步骤1：准备样本。

收集血清或者其他生物组织中的Dose值(大多数情况下使用牛血清蛋白作为基准)，样本前需要禁食8小时以上，防止干扰元素如糖原，脂类等影响结果。

步骤2：降低pH值。

将样本溶液加入少量的盐酸或者乙酸降低pH值到4.2-4.4使得大约85%的蛋白质沉淀。

步骤3：沉淀过滤。

利用蛋白质的天然性质，混匀后的样本进行磨光过滤或脱水过滤，过滤器垫层吸收杂质，而蛋白质沉淀则留下。

步骤4：加碱溶解。

加入碳酸氢钠溶液，使沉淀液体重点溶解，并用计量仪器尺度进行稀释。

步骤5：使用光度计测定样品。

准备好测量方法表，通过比较基准蛋白质溶液的浓度和样品的吸光度来测定到精确的总蛋白浓度。

使用重复检测的方式提高测量精度，避免干扰因素，如样品的色差干扰等。

方法二：化学分析法该方法是利用汞离子与自由氨基酸反应，从而与蛋白质结合并转化为乳白色的复合物，根据生成的复合物的厚度及黄色的程度来测定总蛋白的含量。

下面是详细步骤：步骤1：准备样本和化学试剂。

选择牛血清蛋白或其它生物体中的Dose值作为基准，还需要乙酸钠，塔希底蓝试剂，氢氧化钠，氨水等。

步骤2：加塔希底蓝试剂。

将不同化学试剂混合，加入样品或其稀释液，通过加热和搅拌的方式混合蛋白质和草酸钾对应形成复合物。

部分蛋白质可以被化合物分离，在此过程中，残液颜色转变成乳白色。

步骤3：加入氢氧化钠。

加入一定量的氢氧化钠使乳白色混合液呈现黄色的颜色，并再次翻转混合，这是由于氨基酸随着pH 增加而聚集。

血清总蛋白测定方法及临床意义测定方法：1.比色法：最常用的方法是用双缩脲法测定血清总蛋白浓度。

该方法是将血清样本与染色剂结合，形成有色复合物后，通过比色法测定其吸光度从而确定血清总蛋白浓度。

常用的染色剂有布里尼尔蓝和卡移液醇。

该方法简便、快速、准确，是常规病理生化检验中常用的方法。

2.免疫测定法：免疫测定法主要是利用免疫反应将血清蛋白与特异性抗体结合，通过测定抗原与抗体结合程度来确定蛋白质的浓度。

免疫测定法可以检测特定的蛋白质或细胞表面的蛋白质，具有高灵敏度和高特异性。

临床意义：1.评估营养状态：血清总蛋白的测定可以用于评估一个人的营养状况，因为营养不良会导致血清总蛋白浓度下降。

营养不良主要指人体长期缺乏蛋白质、能量和其他营养素，如果发现血清总蛋白浓度降低，可以提醒医生进行相关的营养干预措施。

2.诊断肝功能异常：肝脏是合成血浆蛋白的重要器官，如果肝功能受损，可以导致血清总蛋白水平下降。

因此，通过测定血清总蛋白可以初步判断肝功能是否异常，指导临床医生进行进一步的评估和治疗。

3.评估免疫功能：血清蛋白是身体免疫功能的重要组成部分，包括免疫球蛋白等。

通过测定血清总蛋白可以初步评估人体的免疫功能，如果发现血清蛋白浓度降低，可能存在免疫缺陷或免疫系统异常，引起医生的重视。

4.监测疾病治疗效果：一些疾病的治疗可以导致血浆蛋白的变化，通过测定血清总蛋白可以监测疾病的治疗效果。

例如，肿瘤患者接受化疗后，血清总蛋白水平可能会下降，表明治疗效果良好。

5.评估疾病预后：一些疾病的预后与血清蛋白水平相关。

例如，对于癌症患者，血清总蛋白的水平与患者的生存期和预后相关，高水平的血清总蛋白可能提示预后不良。

总结起来，血清总蛋白测定方法简便，通过测定血清总蛋白浓度可以评估一个人的营养状况、肝功能、免疫功能，监测疾病治疗效果，并对疾病的预后进行评估。

因此，血清总蛋白测定在临床中具有重要的意义。

常用的血清蛋白质含量测定方法有哪些?1、总蛋白检测方法:凯氏定氮法将血清与强酸一起加热消化,使血清中的含氮化合物转化为铵盐,再加碱使铵盐成为氨进经蒸馏分离出来,最后用酸滴定测定氮量,按每克氨相当于6.25g蛋白质计算蛋白质的浓度。

2、总蛋白检测方法:双缩脲法蛋白质中的肽键(-CONH-)在碱性条件下与Cu2+络合成紫红色复合物,产生的颜色强度在一定范围内与蛋白质含量成正比。

3、总蛋白检测方法:酚试剂法蛋白质分子中的酪氨酸残基和色氨酸残基能够和酚试剂中的磷钨酸-磷钼酸反应生成蓝色化合物。

Lowry改良法在酚试剂中加入Cu2+,提高了呈色的灵敏度,其中75%呈色靠铜离子产生。

Lowry改良法的灵敏度为双缩脲法的100倍左右。

总蛋白检测方法4、总蛋白检测方法:UV法这种方法是在280nm波长,直接测试蛋白。

选择Warburg公式,光度计可以直接显示出样品的浓度,或者是选择相应的换算方法,将吸光值转换为样品浓度。

蛋白质测定过程非常莱贸生物科技（上海）有限公司企号:①/o/①/⑨/o/⑤/⑦/⑧/④/⑨T：①/③/⑤/⑧/⑤/⑧/0/②/⑧/⑨/②简单,先测试空白液,然后直接测试蛋白质。

从而显得结果很不稳定。

蛋白质直接定量方法,适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。

5、总蛋白检测方法:BCA法原理 BCA(bicinchonininc acid)与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂混合一起即成为苹果绿,即BCA工作试剂。

在碱性条件下,BCA与蛋白质结合时,蛋白质将Cu2+还原为Cu+,工作试剂由原来的苹果绿色变为紫色复合物。

562nm 下其光吸收强度与蛋白质浓度成正比。

BCA蛋白浓度测定试剂盒,Abbkine的蛋白质定量试剂盒(BCA 法)提供一个简单,快捷,兼容去污剂的方法,准确定量总蛋白。

的含量。
紫外吸收法可测定0.1-0.5mg/ml的蛋白质溶液，此操作简便，测定 迅速，不消耗样品，低浓度盐类不干扰测定。因此，此法在蛋白质的
制备中广泛应用。 此法的缺点是：（1）对于测定那些与标准蛋白质
中酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定的误差；（2）若 样品中含有嘌呤，嘧啶等吸收紫外线的物质，会出现较大的干扰。
思
考
问题：如何测定血清中蛋白质的总浓度？蛋白质的 浓度测定方法？ 双缩脲法 酚试剂(Follin-酚)法测定蛋白质 紫外吸收法测定蛋白质 凯氏(Kjeldahl)微量定氮法 考马斯亮蓝G—250染色法 如何测定血清中某一种蛋白质的浓度？ 分离后再测定

Folin-酚试剂法测定蛋白质含量是双缩脲法的发民，所用
的试剂是由两部分组成的。第一部分相当于双缩脲试剂， 第二部分为Folin-酚试剂(磷钨酸和磷钼酸混合液)。因此， 反应的程序也是分两步进行的。第一步相当于双缩脲反应， 在碱性条件下蛋白质中的肽键与Cu2+作用生成络合物；
第二步是基于Folin试剂(磷钼酸和磷钨酸试剂)在碱性条件
下极不稳定，易被酚类化合物还原生成钼蓝和钨蓝混合物 (呈蓝色反应)。由于蛋白质中含有带酚羟基的酪氨酸，故
Hale Waihona Puke 时，白/球比值变小，甚至倒置。
血清总蛋白增高： （1）血液浓缩，导致总蛋白浓度相对增高：严重腹泻、呕吐、 高热时急剧失水，血清总蛋白浓度可明显升高。休克时，由于 毛细血管通透性增加，血液中水分渗出血管。血液可发生浓缩， 慢性肾上腺皮质功能减退的患者，由于丢失钠的同时伴随水的 丢失，血浆也可出现浓缩现象。 （2）血浆蛋白质合成增加：主要见于球蛋白合成增加，多发 性骨髓瘤患者。 血清总蛋白降低： （1）血液稀释，导致总蛋白浓度相对降低：如静脉注射过多 低渗溶液或因各种原因引起的钠、水潴留。 （2）摄人不足和消耗增加：食物中长期缺乏蛋白质或慢性胃 肠道疾病所引起的消化吸收不良，因患消耗性疾病，如严重结 核病，甲状腺功能亢进，恶性肿瘤等，均可造成血清蛋白浓度 降低。 （3）蛋白质丢失：严重烧伤时大量血浆渗出，大量失血，肾 病综合征时大量蛋白尿，溃疡性结肠炎时肠道长期丢失一定量 的蛋白质，这些病理改变均可使血清总蛋白浓度降低。

血清总蛋白测定方法嘿，血清总蛋白测定这事儿啊，咱来好好唠唠。

一般来说呢，可以用双缩脲法。

先准备好血清样本，可不能太脏了，不然会影响结果哦。

然后把一种叫双缩脲试剂的东西加进去。

这试剂就像个小侦探，能和血清里的蛋白发生反应。

反应完了，颜色就会变。

接着用仪器去测量这个颜色的变化程度。

颜色变化越大，说明血清里的总蛋白就越多。

就像看彩虹一样，颜色越鲜艳，就越好看。

不过这测量可得仔细点，不能马虎。

还有一种方法是考马斯亮蓝法。

也是先把血清准备好，然后加上考马斯亮蓝试剂。

这试剂就像个小精灵，能和蛋白紧紧地抱在一起。

然后呢，同样用仪器去测量颜色的变化。

这个方法比较灵敏，能测出很少量的蛋白呢。

另外呢，也可以用紫外分光光度法。

这就有点高科技了。

把血清放在紫外光下照一照，蛋白会吸收特定的波长。

根据吸收的程度，就能算出蛋白的含量。

就像晒太阳，不同的东西吸收阳光的程度不一样。

在做血清总蛋白测定的时候，一定要注意操作规范。

不能随便乱加试剂，也不能把仪器调得乱七八糟。

就像做饭一样，得按照步骤来，不然做出来的菜不好吃。

我给你讲个事儿哈。

有个医生，他要给一个病人测血清总蛋白。

他先用了双缩脲法，可是操作的时候不小心把试剂加错了，结果测出来的结果乱七八糟的。

后来他又用了考马斯亮蓝法，这次他可小心了，每一步都认真做。

最后终于得到了准确的结果。

他可高兴了，说以后做实验一定要认真，不能马虎。

所以啊，血清总蛋白测定有不同的方法，得根据实际情况选择合适的。

而且做的时候一定要认真仔细，这样才能得到准确的结果呢。

血清中总蛋白和白蛋白测定的实验方案血清总蛋白的测定：实验原理血清(浆)中蛋白质的肽键(-CO-NH-)在碱性溶液中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色络合物。

此反应和2个尿素分子缩合后生成的双缩脲(H2N-OC-NH- CO-NH2)在碱性溶液中与铜离子作用形成紫红色的反应相似，故称之为双缩脲反应。

这种紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰，吸光度在一定范围内与血清蛋白含量呈正比关系，经与同样处理的蛋白质标准液比较，即可求得蛋白质含量。

实验器材分光光度计实验试剂1.6mol/L NaOH溶液称取NaOH 240g，溶于新鲜制备的蒸馏水约800ml中，定容至1L，贮于有盖塑料瓶中。

2.双缩脲试剂称取硫酸铜结晶(CuSO4·5H2O)3g溶于新鲜制备的蒸馏水500ml 中，加入酒石酸钾钠(NaKC4H406·4H2O），用以结合Cu2+，防止CuO在碱性条件下沉淀)9g和KI(防止碱性酒石酸铜自动还原并防止Cu2O的离析)5g。

待完全溶解后，在搅拌下加入6mol/L NaOH溶液100ml，并用蒸馏水定容至1L，置塑料瓶中盖紧保存。

此试剂室温下可稳定半年，若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。

3.60～70g/L蛋白质标准液可用定值参考血清或标准白蛋白作标准。

实验操作取试管3支，混匀，置25℃30min或37℃10min，在波长540mm处比色，用空白管调零，测各管吸光度。

参考范围60～80g/L。

注意事项1.黄疸血清，严重溶血，葡萄糖，酚酞及溴磺酞钠对本法有明显干扰，故用标本空白管来消除。

但如标本空白管吸光度太高，可影响测定的准确度。

2.高脂血症混浊血清会干扰比色，可采用下述方法消除：取2支带塞试管或离心管，各加待测血清0.1ml，再加蒸馏水0.5ml和丙酮10ml，塞紧并颠倒混匀10次后离心，倾去上清液，将试管倒立于滤纸上吸去残余液体。

向沉淀中分别加入双缩脲试剂及双缩脲空白试剂，再进行与上述相同的其他操作和计算。

三、操作步骤
加入物（ml） B
血清
/
标准液
/
双缩脲试剂 3.0
S×2 /
0.05 3.0
U×2 0.05
/ 3.0
混匀，37℃，10分钟，540nm处 比色，1cm光径比色杯，B管调零
注： 1.非严重黄疸、脂血及高脂血 症血清不用做血清自身对照管。
2.可以用蒸馏水调零，目的是检 验各个试剂的好坏
四、结果 Au
血清总蛋白（g/L） = —— X 60 As
五、正常参考范围 60-80g/L
六、临床意义 1、 总蛋白浓度升高 （1）蛋白质合成增加：大多见于多发性
骨髓瘤患者 （2）血浆浓缩，如急性失水、外伤性休
克、慢性肾上腺皮质功能减退。
2、 总蛋白浓度降低 （1）蛋白质合成障碍：肝功能严重受
简单、试剂易得，但影响因素 太多。
血清总蛋白双缩脲测定法
一、原理：蛋白质中的肽键（-CONH-） 在碱性环境中能与铜离子作用产生紫红 色络合物。
此反应和2个尿素分子缩合后生成的 双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2）在碱性 环境中与铜离子作用产生紫红色络合 物的反应相似，故称为双缩脲反应。
颜色的深浅在一定浓度范围内与 蛋白质含量成正比，经与同样处理的 蛋白标准液比较，即可求得蛋白质含 量
（三）、 酚试剂法 运用蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸
残基能还原磷钨酸-磷钼酸试剂生成钼蓝 来测定蛋白质的浓度。
改良法：在酚试剂中加入碱性铜离 子。集中了双缩脲法和酚试剂法的优点
灵敏度高，但受许多还原物质的 干扰，限制了它在临床上的应用。
（四）、 紫外分光光度法 蛋白质分子中的酪氨酸和色氨酸
残基在280nm处有一吸收峰，可用于 蛋白质含量的测定。

一、实验目的1. 了解血清鉴定的原理和方法。

2. 掌握血清总蛋白、白蛋白、谷丙转氨酶、血清醋酸纤维薄膜电泳等检测方法的操作步骤。

3. 分析实验结果，判断血清样本的生化指标。

二、实验原理1. 血清总蛋白和白蛋白测定：基于双缩脲反应，蛋白质的肽键在碱性溶液中与铜离子反应生成紫红色络合物，吸光度与蛋白质含量呈正比。

2. 谷丙转氨酶测定：谷丙转氨酶催化丙氨酸与酮戊二酸反应，生成丙酮酸，丙酮酸与2，4-二硝基苯肼反应生成棕色产物，吸光度与酶活力呈正比。

3. 血清醋酸纤维薄膜电泳：根据蛋白质在pH为8.6的巴比妥缓冲溶液中的等电点，蛋白质在电场作用下向阳极移动，根据移动距离和蛋白质组分，判断血清蛋白成分。

三、实验器材与试剂1. 实验器材：分光光度计、移液器、离心机、电泳槽、直流稳压电泳仪、醋酸纤维薄膜等。

2. 实验试剂：NaOH溶液、双缩脲试剂、蛋白质标准液、谷丙转氨酶底物、2，4-二硝基苯肼、巴比妥-巴比妥钠缓冲液、染色液、漂洗液等。

四、实验步骤1. 血清总蛋白和白蛋白测定：（1）取血清样本0.1ml，加入2ml双缩脲试剂，混匀。

（2）用分光光度计在540nm处测定吸光度。

（3）根据标准曲线计算蛋白质含量。

2. 谷丙转氨酶测定：（1）取血清样本0.1ml，加入0.9ml谷丙转氨酶底物，混匀。

（2）用分光光度计在540nm处测定吸光度。

（3）根据标准曲线计算酶活力。

3. 血清醋酸纤维薄膜电泳：（1）将血清样本加入醋酸纤维薄膜，进行电泳。

（2）用染色液染色，漂洗。

（3）观察电泳图谱，分析蛋白质组分。

五、实验结果与分析1. 血清总蛋白和白蛋白测定：根据实验结果，计算血清样本总蛋白和白蛋白含量，与正常参考范围进行比较，判断血清蛋白水平是否异常。

2. 谷丙转氨酶测定：根据实验结果，计算血清样本谷丙转氨酶活力，与正常参考范围进行比较，判断肝功能是否异常。

3. 血清醋酸纤维薄膜电泳：根据电泳图谱，分析血清蛋白组分，判断是否存在异常。