肌红蛋白测试标准操作流程

肌红蛋白定量测定1.原理抗原或抗体包被的微粒子，是由多孔高分子粒子制成，具有很好的亲水性，悬浮性极佳，微粒子可与玻璃纤维不可逆结合，从而提高了反应的特异性。

标本与微粒子以一定比例混合，标本中被检物质与微粒子上包被的抗体进行一定时间的反应，以反应终了后，反应液的一部分被移到玻璃纤维上，洗去未反应的被检物质与其它的不要成份，加入基质液，基质液被碱性磷酸所分解生成Methylumbelliferone。

当该物受荧光照射后就产生荧光，测定荧光强度的分化率，从而决定被测物质的浓度。

2.标本采集：2.1标本采集前病人准备：受检者应空腹。

2.2标本种类：血清或血浆。

2.3标本要求：采集血清样本，取被检者静脉血，用无菌取血针抽取病人静脉血3ml，收集干燥试管中，室温放置不超过8小时，2000转/分离心20分钟备用.采集血浆样本，用无菌取血针取被检者静脉血3ml，收集于含有EDTA作抗凝剂的试管中，室温放置不超过8小时，2000转/分离心20分钟备用。

3.标本储存：待测样本室温不超过8小时，4-8℃不超过72小时，-20℃可长期保存，避免反复冻融。

4.标本运输：室温运输。

5.标本拒收标准：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定。

6.试剂：6.1试剂名称：肌红蛋白诊断试剂盒。

6.2试剂生产厂家：美国雅培制药有限公司6.3包装规格：100Test/kit6.4试剂盒组成：肌红蛋白诊断试剂。

6.5试剂储存条件及有效期：试剂盒贮存2-8℃条件，有效期12个月。

7.仪器设备：7.1仪器名称：AXSYM免疫自动分析仪7.2仪器厂家：美国雅培公司7.3仪器型号：AXSYMTm型7.4仪器校准：本仪器校准由厂家工程师负责校准。

8.操作步骤：8.1样本处理：取待测样本血清或血浆置于样本杯中（不能有纤维蛋白，不能有气泡）。

8.2仪器准备：检查纤维杯，反应杯数量满足实验需要，废物桶和废液桶是否连接好，仪器的光路是否正常，环境温度是否符合要求，打印机的连接。

肌红蛋白（Myo）测定试剂（荧光免疫层析法）
性能指标
1 外观检查
外观应平整，材料附着应牢固，各组份应齐全，卡固定紧密。

2 物理检查
膜条宽应不小于2.0mm；液体移行速度应不低于10mm/min。

3 线性范围
取同一批号的试剂分别对五个浓度的肌红蛋白参考品进行检测，其检测范围为2.0ng/mL～400.0ng/mL，每份参考品重复检测3次，计算相关系数r，其中r值应≥0.9900。

4 精密度
4.1 批内精密度
随机抽取同一批号的试剂10份，分别对同一浓度的肌红蛋白参考品进行检测，其变异系数CV（%）值应≤15%。

4.2 批间精密度
随机抽取连续三个批号的试剂，每个批号取3份分别对同一浓度的肌红蛋白参考品进行检测，其变异系数CV（%）值应≤15%。

5 准确度
用同一批号试剂分别测定三个水平浓度的肌红蛋白参考品，计算样本测定结果均值和相对偏差，其中相对偏差（Bias%）应在±15%内。

6 最低检出限
取同一批号的试剂10份，对配制参考品基质进行检测，计算样本测定结果均值X和标准偏差SD，其中（X+2SD）≤2.0ng/mL。

7 分析特异性
选择同一浓度的肌红蛋白参考品分别加入胆固醇、甘油三酯、胆红素，使干扰物最终浓度胆固醇60mg/mL、甘油三酯40mg/mL、胆红素2mg/mL，各干扰样本重复检测3次，计算样本检测结果的均值和相对偏差，其中相对偏差（Bias%）应在±15%内。

肌红蛋白测定测定注意事项1. 肌红蛋白测定的时候啊，你可别不当回事儿。

就像开车得注意交通规则一样，这测定也有它的规矩。

比如说，测定前千万别剧烈运动啊，你要是刚跑完马拉松就去测，那结果就像被搅乱的一潭清水，准不准可就不好说了。

2. 做肌红蛋白测定，采血的时间也很关键呢。

这就好比种庄稼，啥时候播种啥时候收获都是有讲究的。

不能想啥时候采血就啥时候采。

要是不按照规定的时间，那测得的数据可能就像调皮的小孩，完全不按套路出牌。

3. 采血的部位得注意哦。

你想啊，要是在一个不合适的地方采血，就像在一个坑洼不平的地上盖房子，基础就没打好，那测出来的肌红蛋白能靠谱吗？比如有的地方血管太细或者容易受到挤压，这时候采血就可能影响结果。

4. 在做肌红蛋白测定之前，一定要告诉医生你的用药情况。

这就如同你去餐厅吃饭，要告诉服务员你有没有忌口一样重要。

有些药物可能会像捣蛋鬼一样，干扰测定结果，要是不告诉医生，那可就糟了。

5. 测定肌红蛋白的时候，样本的保存也不容小觑。

这好比保存珍贵的宝藏，得小心翼翼。

要是样本保存不当，就像把宝贝扔在潮湿的角落里，那结果肯定会受到影响，到时候得出个错误的结论，得多闹心啊。

6. 检测仪器的准确性可是重中之重啊。

这就像厨师做菜得有把好刀一样。

如果仪器不准，那就像用一把钝刀切菜，不管你怎么努力，切出来的东西都不会完美。

那测出来的肌红蛋白数值还能信吗？简直是天方夜谭嘛。

7. 操作人员的专业程度也对肌红蛋白测定有影响呢。

你看，就像一个好的领航员能让船顺利航行，一个专业的操作人员才能准确地进行测定。

要是操作人员不熟练，就像让一个新手开飞机，那结果能不出乱子吗？8. 自身的身体状态在做肌红蛋白测定时也得考虑。

比如说，要是你感冒发烧了，身体就像一个正在打仗的战场，内部情况很混乱。

这时候去测定肌红蛋白，结果可能就像战场上的烟雾弹，让人摸不着头脑。

9. 对于肌红蛋白测定的结果，咱可不能盲目相信。

这就跟听别人说话得动动脑子一样。

检验科免疫室分析项目作业指导书第页，共页版本：A/0生效日期：2008-02-01 35重复性测定采用的是美国临床化学实验室标准委员会修订稿EP5—A标准方法进行评估，使用了Elecsys试剂及人血清池、质控进行测定:连续测定10天，每天测定6次（n＝60次）；E170的批内重复性共测定了21次。

结果如下:分析灵敏度（最低检测限)：< 21ng/ml，分析灵敏度代表了能与零区别的最低的肌红蛋白值10.干扰因素该方法不受黄疸（胆红素<65mg/dl)、溶血(血红蛋白〈1.4g/dl)、脂血（脂质〈2200mg/dl）和生物素〈50ng/ml 干扰。

接受高剂量生物素（〉5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8 小时后才能采血。

不受类风湿因子干扰（1500U/ml）。

50 种常用药物经试验对本测定无干扰作用。

肌红蛋白浓度高到30，000ng/ml 也不出现钩状效应.接受过小鼠单抗治疗或体内诊断的病人可能会出现假阳性反应。

肌红蛋白测定结果应结合病人的病史、临床症状和其他检查结果进行诊断。

11.临床意义肌红蛋白是一种细胞浆蛋白质，存在于心脏和骨骼的横纹肌中，具有转运氧气和贮存氧气的功能，分子量17.8kD，由于分子量较小，当肌细胞受损时,肌红蛋白很快被释放进入血循环中。

检测血清肌红蛋白是诊断急性心肌梗死，早期再度梗死以及观察溶栓治疗后成功再灌注的重要指标。

症状发生后约两小时，肌红蛋白水平即可升高，因此肌红蛋白被认为是心肌梗死很早期的标志物.梗死发生后4-12 小时，肌红蛋白的血浓度达到最高值.24 小时后恢复到正常值水平.肌红蛋白升高也可见于骨骼肌损伤和肾功能极度衰竭的病人。

Elecsys 肌红蛋白采用双抗夹心法原理和两种不同的抗肌红蛋白单克隆抗体。

12.参考文献。

肌红蛋白检测方法
通常情况下，肌红蛋白可以通过抽血的方式进行检查。

肌红蛋白属于一种含氧结合蛋白，主要存在于心肌、骨骼肌当中，可以用来辅助判断是否存在心肌损伤、骨骼肌损伤等疾病。

通常情况下，进行肌红蛋白检查时，需要对受检者进行抽血，对血液中的肌红蛋白进行检测，可以判断受检者是否存在心肌损伤、骨骼肌损伤等疾病。

如果存在心肌损伤的情况，可能会伴有肌红蛋白偏高的现象。

如果存在骨骼肌损伤的情况，可能会伴有肌红蛋白偏低的现象。

患者可以通过心电图检查、X线检查、超声心动图检查等方式进行判断。

在日常生活中，患者要注意平时的护理工作，避免进行剧烈运动，也要避免从事重体力劳动，否则会增加心肌、骨骼肌的耗氧量，从而加重心肌、骨骼肌损伤的情况。

在日常生活中，如果出现不适的症状，建议患者及时到医院进行检查，然后根据引起的原因对症治疗。

血清肌酐测定操作流程及评分标准血清肌酐测定是一种衡量肾脏功能的常见检测方法。

在临床上，通过检测血清中的肌酐水平来评估肾脏功能是否正常。

本文将介绍血清肌酐测定的操作流程以及评分标准。

一、操作流程1. 准备工作在进行血清肌酐测定前，首先应准备好所需的试剂和设备，包括：- 血清肌酐测定试剂盒- 10ml离心管和离心机- 比色皿或试管- 显微镜（可选）- 多功能生化分析仪2. 采集血样使用采血针和血管采血带，从患者的静脉或手指上采集适量的血液样本，约2-5ml。

注意遵循无菌操作规范，避免任何交叉污染。

3. 分离血清采集的血液样本放入10ml离心管中，并轻轻摇晃几次，确保血液充分混合。

然后将离心管放入离心机中，以3000 rpm的速度离心10分钟。

离心后，血液将被分离成血清和红细胞。

4. 转移血清用吸管小心地将离心管中的血清转移到比色皿或试管中，注意不要和红细胞混合。

将比色皿或试管放置在平台上，以便进行测量和分析。

5. 操作仪器根据试剂盒的说明书，将试剂按照比例加入到血清中，并轻轻混合。

然后使用多功能生化分析仪，根据仪器的使用说明进行操作。

在仪器上选择相关参数，如波长等，然后放入试管或比色皿进行测量。

6. 记录结果根据仪器上的显示结果，记录下测得的血清肌酐浓度。

同时，还可以观察血清的颜色和透明度，以便在有需要时进行进一步的分析。

二、评分标准血清肌酐测定的评分标准主要是基于测得的血清肌酐浓度进行划分。

一般来说，结果的评估可以按照以下标准进行：- 正常范围：男性0.6-1.2 mg/dl，女性0.5-1.1 mg/dl。

- 轻度肾功能异常：男性1.3-1.5 mg/dl，女性1.2-1.4 mg/dl。

- 中度肾功能不全：男性1.6-2.5 mg/dl，女性1.5-2.4 mg/dl。

- 重度肾功能不全：男性＞2.5 mg/dl，女性＞2.4 mg/dl。

需要注意的是，评估结果不仅仅依赖于血清肌酐浓度，还应综合考虑患者的年龄、性别、身体状况等因素，以获得更准确的肾功能评估结果。

肌红蛋白校准品
适用范围：与本公司生产的试剂盒配套使用，用于肌红蛋白检测系统的校准。

1.1包装规格
水平1：1×0.5mL、水平2：1×0.5mL、水平3：1×0.5mL、水平4：1×0.5mL、水平5：1×0.5mL。

1.2主要组成成分
本产品状态为液体，是以人血清为基质，含肌红蛋白。

主要组分见表1：
表1主要组成成分
校准品靶值批特异，详见说明书。

2.1外观和性状
2.1.1各组分应齐全、完整、无渗漏；外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。

2.1.2应为无色或淡黄色澄清液体，无絮状物。

2.2准确度
做样品比对，待测系统与比对系统相关系数（r）应不小于0.975；在[200，500]ng/mL区间内，相对偏差应不超过±15%；在[10，200）ng/mL区间内，绝对偏差应不超过±30ng/mL。

2.3重复性
变异系数（CV）应不超过10%。

2.4批内瓶间差
变异系数（CV）应不超过10%。

2.5量值溯源
根据GB/T 21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，本公司肌红蛋白校准品溯源至公司内部工作校准品，并与已上市产品比对赋值。

2.6稳定性
2.6.1开瓶稳定性
开瓶后的校准品在2℃～8℃条件下密闭保存，可以稳定3天，应符合2.2、2.3之规定。

2.6.2效期稳定性
该产品在2℃～8℃条件下贮存有效期为12个月，取效期末的产品进行检测，应符合2.2、2.3之规定。

肌红蛋白（MYO）测定试剂盒（化学发光免疫分析法）说明书【产品名称】通用名称：肌红蛋白（MYO）测定试剂盒（化学发光免疫分析法）英文名称：Myoglobin（CLIA）【包装规格】2×30 人份/盒、2×50 人份/盒、2×100 人份/盒【预期用途】用于体外定量测定人体血清或（和）血浆中肌红蛋白的含量。

肌红蛋白（MYO）分子量为17.8 kD，由一个多肽链和一个亚铁血红素辅基组成，由人体骨骼肌和心肌细胞合成并贮存，不存在于其它细胞。

实验证明由骨骼肌和心肌来源的两种肌红蛋白无免疫学上的差异。

肌红蛋白的主要生理功能为携带氧气供细胞呼吸。

肌红蛋白是检测急性心肌梗死(AMI) 的早期指标，具有极高的灵敏度但是特异性较差，在AMI 早期心肌细胞受损，由于MYO 的分子量小，可以很快从破损的细胞中释放出来，在AMI 发病1～3 小时后血中浓度迅速上升，6～7 小时达峰值，12 小时内几乎所有AMI 患者MYO 都有升高，升高幅度大于各心肌酶，因此可以作为AMI 的早期诊断标志物。

由于MYO 也存在于骨骼肌中，而且仅从肾脏清除，所以急性肌损伤、急性或慢性肾衰竭、严重的充血性心力衰竭、长时间休克及各种原因引起的肌病患者、肌内注射、剧烈的锻炼、某种毒素和药物摄入后，MYO 都会升高。

因此，采用血清MYO 水平作为诊断AMI 的早期指标，仅限于没有上述相关疾病的患者。

在有急性症状的患者中，4 小时内MYO 水平不升高，AMI 的可能性极低。

由于在AMI 后血中MYO 很快从肾脏清除，发病l8～30 小时内可完全恢复到正常水平。

故MYO 测定有助于在AMI 病程中观察有无再梗塞或者梗塞再扩展。

MYO 频繁出现增高，提示原有心肌梗死仍在延续。

另外，在神经肌肉疾病如肌营养不良、肌萎缩和多肌炎时血清MYO 水平亦升高。

心脏外科手术患者血清MYO 升高，可以作为判断心肌损伤程度及愈合情况的一项客观指标。

至蓝色者为阳性，证明尿中有肌红蛋白存在;若不显色，则为阴性反
应，证明尿中原含色素蛋白为血红蛋白，己被硫酸铵沉淀而滤过除去 。
三、临床意义
肌红蛋白尿常见于马麻痹性肌红蛋白尿病、硒/维生素E 缺乏症。此外，心脏含有丰富的肌红蛋白，当心肌受损时
，肌红蛋白渗出，随血流由肾排出，所以检查尿中肌红蛋
白，有助于诊断心肌受损的疾病。
尿中肌红蛋白的测定
尿中肌红蛋白的测定
一、试剂 二、方法 三、临床意义
一、试剂
1.1%邻联甲苯胺溶液：取邻联甲苯胺1g，加甲醇至 100ml，溶解后装于棕色瓶中，暗处保存备用。
2.3除去尿中存在的红细胞;尿中如 混有血红蛋白应除去血红蛋白，方法是:取尿l0ml，加硫酸铰5.6g(注 意缓慢加入，勿便局部浓度过高，以免肌红蛋白沉淀)，溶解后过滤 ，滤液必须清澈。取滤液再加硫酸铵2.4g达到饱和，使肌红蛋白沉淀 ，离心后弃去上清液，沉渣供试验用。 向处理过的沉渣内加1%邻联甲苯胺溶液2滴，3%双氧水3滴，出现绿色

肌红蛋白测定试剂【方法】颗粒增强免疫透射比浊终点法。

【原理】使用抗肌红蛋白抗体包被的胶乳颗粒和样品中的肌红蛋白进行抗原-抗体反应。

反应完成后，用透射比浊法检测吸光度的变化反映肌红蛋白浓度。

【操作步骤】R1（试剂1）R2（试剂2）S（TruCal Myoglobin校准品）μl，然后在30s内记录吸光度A1〃R1: 160 μlΔA=[(A2－A1) 校准品管或样品管] – [(A2－A1)空白管]【计算】按照公司配套校准品使用要求，用4个不同水平的校准液，并以9 g/L氯化钠溶液为空白，经校准测定，仪器自动对校准品响应量通过合适的数学模型如Logit/Log，拟合成校准曲线。

校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。

校准稳定期：4周【订货信息】货号试剂盒规格1 7039 99 10 730 试剂1 2×20ml＋试剂2 2×15ml1 7030 99 10 058 4×1 ml TruCal Myoglobin （肌红蛋白校准品）4个不同浓度水平的校准品【参考范围】成人< 70 μg/L（注：各实验室应有自己的参考范围。

）【性能指标】病人结果可报告范围本法的检测范围为3～600 μg/L。

如样品测定值超过600 μg/L 时，应用9 g/L氯化钠溶液将样品作1+ 2稀释，重新测定，结果乘以3。

前带限制血清肌红蛋白值≤ 15000 μg/L时，没有观察到前带效应。

特异性/干扰DiaSys公司提供的肌红蛋白试剂中的抗体只特异地与人肌红蛋白发生免疫反应。

当样品中抗坏血酸浓度≤ 1704 μmol/L，胆红素浓度≤ 684 μmol/L，血红蛋白浓度≤ 4.00 g/L，甘油三酯浓度≤ 11.3 mmol/L时没有观察到干扰。

灵敏度/检测限本试剂的检测限为3 μg/L。

方法学比较本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对62个样品进行MYO检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x+14.1 μg/L；r = 0.995。

检验科免疫室分析项目作业指导书第页，共页版本：A/0生效日期：2008-02-01 111.分析原理采用双抗夹心法原理，整个过程18分钟完成。

·第1步：15μl标本、生物素化的抗肌红蛋白单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗肌红蛋白单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。

·第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。

·第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。

Elecsys自动将标本产生的光电信号与从肌红蛋白定标液得出的Cutoff值相比较。

2.标本要求血清：使用标准取样试管或含分离胶的试管采集。

血浆：肝素（锂、钠、铵）、EDTA-K3 、枸橼酸钠抗凝均可。

标本在2－8 度可稳定1 周，-20 度可稳定3 个月。

只可冻融一次。

含沉淀的标本使用前需离心。

标本和质控品禁用叠氮钠防腐。

标本、定标液和质控品在测定前的温度应与室温平衡；放入仪器后应在2小时内测定以避免蒸发的影响。

3.试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂。

试剂：M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml。

粒子浓度0.72mg/ml，含防腐剂。

R1：生物素化的抗肌红蛋白单克隆抗体（灰盖），1瓶，10ml，浓度1.75mg/l，磷酸缓冲液85mmol/l，pH6.5, 叠氮钠<0.1%,含防腐剂。

R2：Ru(bpy)32+标记的抗肌红蛋白单克隆抗体（黑盖），1瓶，10ml。

浓度1.75mg/l，磷酸缓冲液85mmol/l，pH 8.5, 叠氮钠<0.1%,含防腐剂。

校准品：Cal 1 阴性定标液（白盖），2*1ml血清, 含防腐剂Cal 2 阳性定标液（黑盖），2*1ml血清，含防腐剂质控品：Elecsys 肌红蛋白质控品1和2 （PreciControl Cardica II）货号03530477其他所需材料：Elecsys2010/cobas e 411分析仪需要Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号11662988Elecsys 测量池清洗液（CleanCell）货号11662970Elecsys 添加剂液（SysWash）货号11930346Elecsys 系统清洗液支架（Adapter for SysClean)）货号11933159Elecsys 2010 反应杯（Assay Cup)货号11706802Elecsys 2010 吸样头（Assay Tip)货号11706799E170 /cobas e 601分析仪需要Elecsys 系统缓冲液（ProCell M）货号12135019Elecsys 测量池清洗液（CleanCell M）货号12135027Elecsys 系统缓冲液/测量池清洗液预热杯（PC/CC-Cup）货号03023141探针冲洗液，12x70ml,用于最终保养及完成试剂吸样后冲洗，货号03005712Elecsys 反应杯/吸样头盒(AssayCups/AssayTips Combimagazine M)货号12102137肌红蛋白(Myoglobin)检验科免疫室分析项目作业指导书第页，共页版本：A/0生效日期：2008-02-01 22Elecsys 废物盒(wasteliner)货号03023150Elecsys 系统清洗液支架(SysClean Adapter M))货号03027651各种分析仪均适用的材料Elecsys 系统清洗液（SysClean）货号112985004.仪器和校准使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准：每批肌红蛋白试剂盒必须用新鲜试剂和肌红蛋白 Cal 1,Cal 2定标一次。

肌红蛋白（Myoglobin ）标准操作规程1.【实验目的】为了保证肌红蛋白测定结果的准确性，以及可靠性。

2.【职责】2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。

2.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。

3.【样品类型及实验前准备】3.1样本类型：不容血的血清、肝素抗凝的血浆或全血。

稳定性：2-8C可保存1天，如需存放大于6天时，请于-20C或更低的温度下保存。

3.2患者准备：实验前正常饮食，晨起空腹，安静状态下抽取静脉血，条件特殊情况下可非空腹抽血检测。

3.3容器，添加剂类型：血清（包括在血清分离器管中采集的血清），血浆（EDTA三钾、肝素锂、肝素钠），使用玻璃管或塑料管分离样本。

3.4仪器设备：中元生物免疫定量分析仪，低速离心机3.5实验试剂：肌钙蛋白I、肌酸激酶同工酶、肌红蛋白联合检测试机卡、干燥剂、铝箔袋、4.【实验原理】本实验采用免疫层析及双抗体夹心原理快速定量检测人血清/血浆/全血样本中的cTNI、CK-MB、Myo的含量。

试机卡检测线（T）处包被有抗cTNI、抗CK-MB、抗Myo的单克隆抗体，质控线处包被多克隆抗体，测试时样本中的待测物于胶体金标记的单克隆抗体形成抗原抗体复合物，借助毛细作用移行至检测线（T）及质控线（C）形成有色条带。

配合免疫定量分析仪使用，通过采集检测线及质控线图像进行分析处理，计算出样本中相应项目的含量。

5.【操作步骤】5.1撕开铝箔袋取出试剂卡，置于平整台面上，请立即使用，避免长时间暴露吸潮。

5.2以血清/血浆为样本时，样本量为70ul ,以全血为样本时，样本量为1ul。

5.3加样后立即置于免疫定量分析仪，选择“孵化检测”，仪器将自动在15 min时读取定量结果；或加样15 min时，选择“快速检测”读取定量结果。

6.【质控程序】同做样本一样，用质控品进行室内质控检测。

7.【结果计算与判断】免疫定量分析仪通过采集检测线及质控线图像进行分析处理，计算出样本中相应项目的含量。

肌钙蛋白/肌红蛋白/肌酸激酶同工酶三合一测定（胶体金法）的标准程序【目的】体外肌钙蛋白/肌红蛋白/肌酸激酶同工酶的检测【适用仪器】干化学法【该SOP变动程序】本标准操作程序的修改可有使用本SOP文件的工作人员提出，并报请专业主管及科主任签字生效。

【检验原理】本法采用胶体金免疫层析技术，将金标抗-Myoglobin（Ab1、金标抗VK-MB和金标抗2nI（Ab1预先包被玻璃纤维上，膜上测试区固定抗-cTnI（Ab2）抗-CK-dM、抗Myoglobin （Ab2和质控区的相应抗体，测试时，标本中如含有肌红蛋白或肌酸激酶同工酶或心肌肌钙蛋白I时，分别与预先包被的金标抗体结合，结合物在毛细效应下向上层析，随后会被固定在膜上相应测试区的抗体捕获，从而在相应测试区出现紫红色条带。

如果是阴性标本，则测试区内无紫红色条带，质控区内所显示条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。

【操作步骤】1、使用前将试剂和血样标本恢复至室温。

2、从原包装试剂袋中取出试剂盒，在1小时内应尽快地使用，特别是在室温高于30C，并且在高度潮湿的环境中，打开包装后应立即使用。

3、将试剂盒放在干净的水平的台面上：血清或血浆标本：用滴管垂直滴入3滴血清或血浆标本（约120ul ）于试剂盒样本孔中，开始计时。

静脉血标本：用滴管垂直滴入3滴静脉全血（约120ul ）于试剂盒样本孔中，开始计时。

指尖血标本：用玻璃毛细管吸取或直接滴加3滴指尖血于试剂盒样本孔中，滴加1滴缓冲液，开始计时。

4、等待紫红色条带出现，测试结果应在10-20分钟读取，20分钟后读取的结果无效。

【检验结果的解释】阳性（+ ）:四条紫红色条带出现。

三条位于测试区（T1）、（T2 ）和（T3 ）内，另一条位于质控区（C）。

阳性结果表明：标本中只含有三种心肌标志物。

若只有三条紫红色条带出现。

二条位于测试区（T1）、（T2）和33）任何两个区内，另一条位于质控区（C）。

8生物参考区间
10~92ng/mL。
9临床意义
血清肌红蛋白检测时AMI早期诊断的最有用指标之一。在AMI发作后1~3h血清肌红蛋白开始升高，4
~12h达峰值，72h恢复正常。
肌红蛋白尿常见于急性心肌梗死、肌肉创伤、多发性肌炎、行军性肌红蛋白尿症、进行性肌营养不良、遗传性特发性肌红蛋白尿、海蛇咬伤等。
6.1质控品准备和储存
质控品为液体，可以直接使用。
6.2质控水平和分析批长度
每24小至少进行一批，每批2个浓度水平。
6.3质控操作程序
与4.4标本检测步骤相同，只需要按F4:NEXT PRIORITY将ROUTINE修改成QC状态。
7性能参数
本法线性范围为1~1000ng/mL,对于超过测定线性范围的结果，用样本稀释液进行稀释，输入稀释因子后再重新检测。
2.3注意事项
推荐选用血清。在含有草酸盐的血液可能引起铬颗粒积聚，不应该使用。抗凝剂不足的冷冻血浆样品可能引起铬颗粒积聚，不应该使用。标本应避免乳糜、溶血、黄疸。
3试剂和设备
3.1试剂
采用西门子医学诊断产品（上海）有限公司提供的试剂盒。
3.1.1试剂组成
试剂船1孔为结合物0.09 mg/mL，液体；3孔为抗体-CrO21.8mg/ml，片剂；4 ~ 6孔为CPRG10.3mM，
10参考文献
[1]西门子医学诊断产品（上海）有限公司肌红蛋白（MYO）测定试剂说明书。
[2]叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006：352~353。
编写：审核：批准：
4操作程序
4.1检测过程流程
签收样品→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存。
4.2样品签收

一、实验目的1. 学习肌红蛋白的提取方法；2. 掌握肌红蛋白的鉴定方法；3. 了解肌红蛋白的生物学特性。

二、实验原理肌红蛋白（Myoglobin，Mb）是一种含铁的血红素蛋白，主要存在于肌肉组织中，具有储存氧气和释放氧气的作用。

肌红蛋白分子量为16700道尔顿，由153个氨基酸组成，属于单链蛋白质。

本实验通过提取肌红蛋白，并对其进行鉴定，以了解肌红蛋白的生物学特性。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜猪肉、生理盐水、双缩脲试剂、考马斯亮蓝G-250试剂、蒸馏水、氢氧化钠、盐酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、硫酸铵等。

2. 实验仪器：研钵、离心机、紫外可见分光光度计、移液器、电子天平等。

四、实验方法1. 肌红蛋白的提取（1）取新鲜猪肉约50g，用生理盐水洗净，去除脂肪和筋膜；（2）将猪肉切成小块，放入研钵中，加入适量生理盐水；（3）研磨至肉泥状，加入适量硫酸铵，搅拌均匀；（4）室温下静置30分钟；（5）离心（3000r/min，10分钟），取上清液；（6）用硫酸铵沉淀肌红蛋白，重复步骤（4）和（5）；（7）取沉淀物，用蒸馏水洗涤，离心（3000r/min，10分钟），取上清液；（8）将上清液置于4℃冰箱中保存备用。

2. 肌红蛋白的鉴定（1）紫外可见分光光度法测定肌红蛋白含量①取一定量肌红蛋白溶液，用蒸馏水稀释至适宜浓度；②使用紫外可见分光光度计，在波长540nm处测定吸光度；③根据标准曲线计算肌红蛋白含量。

（2）考马斯亮蓝G-250法测定肌红蛋白含量①取一定量肌红蛋白溶液，用蒸馏水稀释至适宜浓度；②加入考马斯亮蓝G-250试剂，充分振荡；③静置10分钟；④使用紫外可见分光光度计，在波长595nm处测定吸光度；⑤根据标准曲线计算肌红蛋白含量。

五、实验结果与分析1. 肌红蛋白的提取通过硫酸铵沉淀法，成功提取了肌红蛋白，溶液呈红色。

2. 肌红蛋白的鉴定（1）紫外可见分光光度法测定肌红蛋白含量：根据标准曲线，肌红蛋白含量为0.1mg/mL。

3标本准备全血、血浆及血清样本均可用于测试。

全血收集：采用抗凝管采血，或在采血管里先加入抗凝剂（不建议使用EDTA以外的抗凝剂），将采集血样加入并摇匀备用。

样本采集后应尽快使用，若采血后不能在2个小时内检测的，应放在2-8℃保存，不得超过2天。

血浆/血清收集：取血后应尽快分离血浆、血清，以免溶血。

分离后的血浆、血清应尽快进行测试，如不能及时使用，应放在2-8℃保存，超过3天应加入%硫柳汞防腐，置-20℃冷冻保存，测试前注意复温，避免反复冻融。

4检测试剂名称：心肌三项I（cTnI/CK-MB/MYO）代码：cTnI/CK-MB/MYO厂商：广州万孚生物技术股份有限公司组成：试剂卡：心肌肌钙蛋白I单克隆抗体；肌酸激酶同工酶单克隆抗体；肌红蛋白单克隆抗体；鼠抗IgG 多克隆抗体；硝酸纤维素膜、玻璃纤维、吸水纸、PVC板及其他试纸条支持物缓冲液：磷酸盐缓冲液（PBS），内含表面活性剂及防腐剂ID芯片、使用说明书及合格证。

储存条件及有效期：缓冲液28℃保存，试剂卡430℃保存，不得冻存，有效期18个月。

在室温保存可稳定14天。

试剂卡铝箔袋开封后，应在1小时内尽快使用。

5检测仪器飞测免疫荧光检测仪6操作步骤准备：6.1.1打开仪器左面的电源开关，仪器启动并加载检测系统，约30s后进入“万孚免疫荧光层析定量检测系统”初始界面，若需要使用快捷模式测试，选择“快捷测试”；若需使用标准模式测试，选择“标准测试”；随后仪器自检，提示自检成功后，点击“卡出”按钮。

6.1.2将试剂从储存环境中取出，并平衡至室温（25℃）。

6.1.3从试剂盒中取出ID芯片，插入仪器的芯片端口。

注：同项目批次试剂，成功完成一次检测后，该项目批次的芯片数据已储存至仪器系统中，仪器能识别调用，该项目批次可不用插入ID芯片。

6.1.4撕开试剂卡铝箔袋，取出试剂卡。

取样：全血/血浆/血清样本:用移液器吸取75ul样本；混匀：打开离心管盖，将样本加入缓冲液中，充分混匀1min。

肌红蛋白测试标准操作流程一实验组成1 实验仪器及器具：Mini VIDAS全自动分析仪一台、洁净工作台、低速离心机、20~200µl加样器2 试剂盒组成：MYO试剂条说明：试剂条上有 10 个孔，用贴有标签的铝箔密封二实验原理一步免疫分析夹心方法（sandwich）和最后荧光检测（ELFA）样品被吸取到含有用碱性磷酸酶（共扼物）标记的抗肌红蛋白抗体的孔中。

样品/共扼物混合物在运行中进出固相包被针SPR数次。

该操作使抗原结合到固定在固相包被针 SPR内壁的免疫球蛋白上，并结合到共扼物上，以形成“夹心”。

没有结合的组分在冲洗步骤中清除。

在最后检测步骤中，将底物（磷酸4 甲基-伞形烷）循环进出固相包被针 SPR。

共扼物酶催化本底物水解成荧光产物（4-甲基伞形酮）。

该产物的荧光在 450nm下测量。

荧光强度与样品中出现的抗原的浓度成正比。

分析结束的时候，由VIDAS根据储存在存储器中的校正曲线，自动计算结果，然后打印输出三标本1 检测样本：150µl血清或血浆 (肝素锂)由于EDTA或柠檬酸钠引起所测量的数值的下降，所以不可使用在EDTA或柠檬酸钠上采集的血浆2 影响因素没有发现下列因素对分析有显著影响：（1）溶血 (用血红蛋白形成尖峰样品（spiking）之后：0到292 µmol/l 或 0 到 470 mg/dl)（2）脂血症(在用脂质形成尖峰样品（spiking）之后：0到 30 g/ml，等价于在三酸甘油酯中)（3）胆血症(在用胆红素形成尖峰样品（spiking）之后：0到540µmol/l)（4）肝素（最高达 50IU/ml）但无论如何,建议不要使用明显溶血、脂血症、胆血症的样本，如可能的话，重新收集样本。

四操作程序1 标准曲线条码(MLE)输入在每使用新一批试剂前，必须用每一试剂盒中都有的MLE卡（规格单）将规格（或工厂主校正曲线数据）输入仪器。

步骤如下：（1）按Master Lot Menu（2）放入MLE卡片（3）按Read Master Lot（4）按A或B读取完成后，仪器会自动打印相应信息2 校准曲线当新一批试剂开启时，在主批次数据 (MLE卡片)输入后，应用试剂盒中的两种校准液执行校准，然后每 14 天应重新校正一次。